QUANTA Lite TPO ELISA For In Vitro-diagnostikk CLIA-klassifisering: Høy kompleksitet

Transkript

1 QUANTA Lite TPO ELISA For In Vitro-diagnostikk CLIA-klassifisering: Høy kompleksitet Anvendelsesområde QUANTA Lite TPO er en enzymkoblet immunsorbent analyse (ELISA) for semikvantitativ påvisning av tyroid peroxidase (TPO) autoantistoffer i humant serum. Forekomsten av antistoffer mot humant peroksidase-antigen kan brukes sammen med kliniske resultater og andre laboratorietester for å hjelpe i diagnosen av autoimmune tyroideasykdommer slik som Hashimotos tyroiditt og Graves sykdom. Sammendrag og forklaring av testen Tyroid-autoantistoffer i omløp har vært mye innblandet i etiologien av autoimmun tyroideasykdom og både tyroglobulin og mikrosomale antistoffer måles i rutinemessig klinisk praksis. 1,2 Serumantistoffer mot tyroid mikrosomale antigen(er) er ofte funnet hos pasienter med autoimmune tyroideasysykdommer og deres forekomst korrelerer godt med histologiske endringer i Hashimotos tyroiditt. 3 Antistoffer mot tyriode mikrosomale antigener er positive hos 70-90% av pasientene med kronisk tyroiditt. Disse antistoffene er også funnet hos 64% av pasientene med hypotyroidisme type 1, 50% med thyrotoxicose, 10% med et lite struma og 17% med tyroidtumorer. 4 Tyroglobulin-antistoffer er påvist ved høye titere, hovedsakelige i autoimmun tyroiditt og Graves sykdom. Serumantistoffer mot tyroglobulin/kolloid har blitt funnet hos 40-70% av pasienter med kronisk tyroiditt og i mindre prosentandeler hos pasienter med thyrotoxicose og ikke-toksisk struma. 5,6 Det er blitt klart at hovedantigenet funnet i tyroid mikrosomer er enzymet tyroid peroksidase eller TPO. 7 Analyser konstruert med renset TPO har flere fordeler under utførelsen i forhold til analyser som bruker de relativt grovere helmikrosom-preparater som kan inneholde tyroglobulin og andre antigener som enda ikke er identifisert. 8 En ny studie har vist at autoantistoffer reagerer på samme måte som rekombinant human tyroidperoksidase og naturlig TPO renset fra vev. 9 Tyroide autoantistoffer har tradisjonelt blitt undersøkt ved hjelp av presipitasjonsreaksjoner, 10 lateksbinding, 11 hemagglutinasjon 12 og immunfluorescens. 13,14 I senere tid er nyere ELISA-teknikker blitt utviklet Disse ELISA-prosedyrene har blitt funnet å være mer sensitive enn både hemagglutinasjon og immunfluorescens 15,17 og samtidig er de mer objektive og ikke utsatt for forstyrrelser av agglutinasjonsinhibitorfaktorer 18 eller heterofile antistoffer. ELISA-teknikken som er brukt i denne testen er sensitiv, spesifikk og objektiv. Den kan lett brukes til å teste både store og små antall prøver. Prosedyreprinsipper Renset rekombinant human TPO antigen er bundet til brønnene til en mikrotiterplate av polystyren under betingelsene som vil konservere antigenet i reaktiv tilstand. Forhåndsfortynnede kontroller og fortynnet pasientserum blandes i separate brønner slik at tilstedeværende microsomal-antistoff bindes til det immobiliserte antigenet. Ubundet prøve vaskes vekk og et enzym-merket anti-human IgG-konjugat tilsettes hver brønn. En andre inkubasjon gjør det mulig for det enzym-merkede anti-humane IgGantistoffet å binde seg til pasientens antistoff som har festet seg på mikrobrønnene. Etter å ha vasket bort enzym-merket anti-humant IgG-antistoff som ikke har festet seg, måles gjenværende enzymaktivtet ved å tilsette et substrat og fargeutviklingen måles. Analysen kan avleses spektrofotometrisk ved å måle og sammenlikne fargeintensiteten som utvikles i pasientbrønnene med fargen i kontrollbrønnene. Reagenser 1. Mikrotiter ELISA-plate av polystyren dekket med renset rekombinant TPO-antigen (12-1 x 8 brønner), med holder i foliepakning inneholdende tørkemidler 2. ELISA negativ kontroll, 1 bufret ampulle som inneholder konserveringsmiddel og humant serum uten ikke-humane antistoffer mot thyroid peroxidase, forhåndsfortynnet, 1,2mL 3. TPO ELISA kontroll, 1 bufret ampulle som inneholder konserveringsmiddel og humant serum humane antistoffer mot thyroid peroxidase, forhåndsfortynnet, 1,2mL 4. TPO ELISA Kalibrator A, 1 bufret ampulle som inneholder konserveringsmiddel og humant serum antistoff mot thyroid peroxidase, forhåndsfortynnet, 1,2mL 5. TPO ELISA Kalibrator B, 1 bufret ampulle som inneholder konserveringsmiddel og humant serum antistoff mot thyroid peroxidase, forhåndsfortynnet, 1,2mL 6. TPO ELISA Kalibrator C, 1 bufret ampulle som inneholder konserveringsmiddel og humant serum antistoff mot thyroid peroxidase, forhåndsfortynnet, 1,2mL 7. TPO ELISA Kalibrator D, 1 bufret ampulle som inneholder konserveringsmiddel og humant serum antistoff mot thyroid peroxidase, forhåndsfortynnet, 1,2mL 8. TPO T ELISA Kalibrator E, 1 bufret ampulle som inneholder konserveringsmiddel og humant serum antistoff mot thyroid peroxidase, forhåndsfortynnet, 1,2mL - 1 -

2 9. HRP prøve prøvediluent, 1 ampulle rosafarget som inneholder fosfatbufret saltvann, Tween 20, proteinstabilisatorer og konserveringsmiddel, 50mL 10. HRP vaskekonsentrat, 1 ampulle med 40x konsentrat rødfarget som inneholder fosfatbufret saltvann og Tween 20, 25mL. Se metodeavsnittet for veiledning om fortynning 11. HRP IgG-konjugat, (geit), anti-humant IgG, 1 ampulle blåfarget som inneholder buffer, proteinstabilisatorer og konserveringsmiddel, 10mL 12. TMB-kromogen, 1 ampulle som inneholder stabilisatorer, 10mL. 13. HRP stoppløsning, 0,344M svovelsyre, 1 ampulle fargeløs, 10mL Advarsler 1. ADVARSEL: Dette produktet inneholder et kjemikalie (0,02% kloramfenikol) i prøvediluenten, kontrollene og konjugat antatt som kreftfremkallende i staten California. 2. Alt materiale fra menneskekilder brukt i preparatet til kontroller for dette produktet har blitt testet og funnet negativ for antistoff mot HIV, HBsAg og HCV av metoder klarert av det amerikanske helsetilsynet (FDA). Imidlertid kan ingen testmetode gi fullstendig sikkerhet om at HIV, HBV, HCV eller andre agens er fraværende. Derfor skal TPO ELISA kontroll, TPO ELISA kalibrators og ELISA negativ kontroll behandles på samme måte som potensielt smittefarlig materiale Natriumazid brukes som konserveringsmiddel. Natriumazid er en gift og kan være giftig ved svelging eller ved opptak gjennom huden eller via øynene. Natriumazid kan reagere med blyeller kobberrør og danne potensielt eksplosive metallazider. Bruk rikelig med vann i vaskene, hvis de brukes for avfallshåndtering av reagenser, for å forhindre oppsamling av azider. 4. HRP-konjugatet inneholder et fortynnet giftig/korrosivt kjemikalie som kan være giftig ved svelging av store mengder. Unngå hud- og øyenkontakt for å forhindre mulig kjemisk forbrenning. 5. TMB-kromogenet inneholder et kjemikalie som kan være skadelig ved inhalering, svelging eller opptak gjennom huden. Unngå inhalering, svelging eller hud- og øyenkontakt for å forhindre skader. 6. HRP-stoppløsningen inneholder en fortynnet svovelsyreoppløsning. Unngå eksponering av baser, metaller eller andre forbindelser som kan reagere med syrer. Svovelsyre er giftig og korrosiv og kan være giftig ved svelging. Unngå hud- og øyenkontakt for å forhindre mulig kjemisk forbrenning. 7. Bruk egnet personlig verneutstyr når du arbeider med reagensene som er levert. 8. Dersom du søler reagenser skal disse straks vaskes bort. Du skal være oppmerksom på alle kommunale, statlige og lokale miljøbestemmelser ved avfallsbehandling. Forholdsregler 1. Dette produktet brukes for in vitro-diagnostikk. 2. Utbytting av komponenter andre enn de som leveres med dette systemet kan føre til inkonsistente resultater. 3. Ufullstendig eller ineffektiv vasking og utilstrekkelig væskefjerning fra ELISA-brønnremsene vil forårsake dårlig presisjon og/eller høy bakgrunn. 4. Tilpassing av denne analysen for bruk sammen med, helt eller delvis, automatiske prøveprosessorer eller andre væskebehandlingsapparater, kan gi avvikende testresultater i forhold til de som utføres ved hjelp av manuell prosedyre. Det er hvert enkelt laboratoriums ansvar å stadfeste at deres automatiske prosedyre gir testresultater innenfor akseptable grenser. 5. En rekke faktorer påvirker analyseprestasjonene. Herunder inkluderes starttemperaturen til reagensene, lufttemperaturen, pipetteteknikkens nøyaktighet og reproduserbarhet, hvor grundig det er vasket og fjernet væske fra brønnen til ELISA-remsen, fotometeret som er brukt til å måle resultatene og inkubasjonstidenes varighet under analysen. Det er nødvendig med konsistens for å oppnå nøyaktige og reproduserbare resultater. 6. Det anbefales at man holder seg strengt innenfor rammene til protokollen. 7. Ufullstendig forsegling av glidelåsen til posen som inneholder mikrobrønnremsene og tørkemidlene vil resultere i degradasjon av antigen og dårlig presisjon. 8. Uakseptabelt lave sbsorbanser kan observeres etter to eller flere bruk fra én enkel flaske med HRP-konjugat over en tidsperiode. Det er viktig å følge alle anbefalte behandlingsprosedyrer for HRP-konjugatet for å forhindre at dette oppstår. 9. Kjemisk kontaminasjon av HRP-konjugatet kan forårsakes av ufullstendig rengjøring eller skylling av utstyr eller instrumenter. Avfall fra vanlige laboratoriekjemikalier slik som formalin, blekemiddel, etanol eller vaskemiddel vil forårsake degradasjon av HRP-konjugatet over tid. Skyll alt utstyret og alle instrumentene grundig etter bruk av kjemiske rengjørings- og desinfeksjonsmidler. Oppbevaringsbetingelser 1. Lagre alle reagensene i kitet ved 2-8 C. Ikke frys. Reagensene er stabile helt til de går ut på dato hvis de oppbevares og behandles på foreskriftsmessig vis. 2. Ubrukte antigen-dekkede mikrobrønnremser skal forsvarlig forsegles på ny i folieposen som inneholder tørkemidlene og oppbevares ved 2-8 C. 3. Fortynnet vaskebuffer er stabil i én uke ved 2-8 C

3 Innhenting av prøver Denne prosedyren skal utføres med en serumprøve. Tilsetting av azid eller andre konserveringsmidler til testprøvene kan påvirke resultatene negativt. Mikrobielt kontaminerte, varmebehandlede prøver eller prøver som inneholder synlige partikler skal ikke brukes. Sterkt hemolysert eller lipemisk serum eller prøver skal unngås. Etter innhenting skal serumet skilles fra blodklumpen. CLSI (en gang var NCCLS) dokument H18-A3 anbefaler følgende oppbevaringsbetingelser for prøver: 1) Ikke oppbevar prøver i romtemperatur lenger enn i 8 timer. 2) Hvis analysen ikke fullføres innen 8 timer, kjøl prøven ned til 2-8 C. 3) Hvis analysen ikke fullføres innen 48 timer, eller ved forsendelse av prøven, frys den ned til -20 C eller lavere. Nedfryste prøver må blandes godt etter tining og før testing. Prosedyre Leverte materialer 1 TPO ELISA-mikrotiterplate (12-1 x 8 brønner), med holder 1 1,2mL forhåndsfortynnet ELISA negativ kontroll 1 1,2mL forhåndsfortynnet TPO ELISA kontroll 1 1,2mL forhåndsfortynnet TPO ELISA Kalibrator A 1 1,2mL forhåndsfortynnet TPO ELISA Kalibrator B 1 1,2mL forhåndsfortynnet TPO ELISA Kalibrator C 1 1,2mL forhåndsfortynnet TPO ELISA Kalibrator D 1 1,2mL forhåndsfortynnet TPO ELISA Kalibrator E 1 50mL HRP-prøvediluent 1 25mL HRP-vaskekonsentrat, 40x konsentrat 1 10mL HRP IgG-konjugat, (geit), anti-humant IgG 1 10mL TMB-kromogen 1 10mL HRP-stoppløsning, 0,334M svovelsyre Påkrevd tilleggsutstyr (ikke levert) Mikropipetter for å forsyne 5, 100, og 500µL Engangs mikropipettetips Testrør for pasientprøvefortynninger, 4mL volum Destillert eller deionisert vann 1L beholder for fortynnet HRP-vaskekonsentrat Mikrotiterplateleser som er i stand til å måle OD ved 450nm (og 620nm for dobbel bølgelengdeavlesninger) Metode Før du starter 1. Bring alle reagenser og prøver opp til romtemperatur (20-26 o C) og bland godt. 2. Fortynn HRP-vaskekonsentratet ut (1:40) ved å blande innholdet av HRP-vaskekonsentratflasken med 975mL destillert eller deionisert vann. Hvis hele platen ikke skal kjøres i denne perioden, kan du forberede en mindre mengde ved å blande 2,0mL av konsentratet med 78mL destillert eller deionisert vann for hver 16 brønner som skal brukes. Den fortynnede bufferen er stabil i én uke ved 2-8 o C. 3. Gjør klar en oppløsning (1:101) for hver pasientprøve ved å blande 5µL fra prøven med 500µL av HRP-prøvediluent. Fortynnede prøver må brukes innen 8 timer etter klargjøring. IKKE FORTYNN TPO ELISA ELISA kontroll, TPO ELISA Kalibrators og ELISA negativ kontroll. 4. Målbevisstheten av nærværelsen eller fravær av TPO antistoffene behøver to frisk for hver av det kalibrerator og kontroller og en eller to frisk for hver pasient eksemplar. Det anbefales at prøvene kjøres i duplikat. 5. For en fempunktsstandardkurve, bruk FORHÅNDSFORTYNNET TPO ELISA kalibratorene fra A til E direkte fra ampullen. Fempunktsstandardkurven har følgende verdier: Punkt TPO WHO Enheter A Forhåndsfortynnet TPO ELISA Kalibrator A 1000,0 B Forhåndsfortynnet TPO ELISA Kalibrator B 500,0 C Forhåndsfortynnet TPO ELISA Kalibrator C 250,0 D Forhåndsfortynnet TPO ELISA Kalibrator D 125,0 E Forhåndsfortynnet TPO ELISA Kalibrator E 62,5-3 -

4 Analyseprosedyre 1. ALLE REAGENSER MÅ BRINGES OPP TIL ROMTEMPERATUR (20-26 C) FØR DU BEGYNNER ANALYSEN. Plasser påkrevd antall av mikrobrønner/remser i holderen. Legg straks tilbake remser som du ikke skal bruke tilbake i posen med tørkemidler og forsegl forsvarlig for å minimalisere eksponering for vanndamp. 2. Tilsett 100µL av forhåndsfortynnet TPO ELISA konroll, TPO ELISA-kalibratorene fra A til E hvis ønsket, ELISA negativ kontroll og fortynnet pasientprøve til brønnene. Dekk brønnene og sørg for 30 minutters inkubasjon ved romtemperatur på en vannrett overflate. Inkubasjonstiden begynner etter at siste prøve tilsettes. 3. Vasketrinn: Aspirer innholdet av hver brønn grundig. Tilsett µL av fortynnet HRPvaskebuffer til alle brønnene og deretter aspirer. Gjenta denne sekvensen to ganger til (totalt tre vasker). Inverter platen og bank på absorberende materiale for å fjerne resterende væske etter siste vask. Det er viktig å tømme hver brønn fullstendig etter hvert vasketrinn. Du opprettholder den samme sekvensen for aspirasjon som den som ble brukt for prøvetilsetning. 4. Tilsett 100μl av HRP-IgG-konjugatet til hver brønn. Konjugatet skal fjernes fra flaskene under standard aseptiske forhold og gode laboratorieteknikker. Bare fjern den koblingsmengden fra flasken som er nødvendig for analysen. DU SKAL ALDRI RETURNERE UBRUKT KONJUGAT TIL FLASKEN FOR Å UNNGÅ POTENSIELL MIKROBIELL OG/ELLER KJEMISK KONTAMINERING. Som i trinn 2, sørg for 30 minutters inkubasjon av brønnene. 5. Vasketrinn: Gjenta trinn Tilsett 100µL av TMB-kromogenet til hver brønn og sørg for 30 minutters inkubasjon i mørke ved romtemperatur. 7. Tilsett 100µL av HRP-stoppløsningen til hver brønn. Du opprettholder den samme sekvensen og timing ved tilsetting av HRP-stoppløsning som den som ble brukt for TMB-kromogenet. Bank forsiktig på platen med en finger for å blande brønnene grundig. 8. Avles absorbans (OD) fra hver brønn ved 450nm innen én time etter å ha stoppet reaksjonen. Hvis du ønsker bikromatiske målinger, kan du bruke 620nm som referansebølgelengde. Kvalitetskontroll 1. TPO ELISA kontroll, TPO ELISA-kalibratorene fra A til E og ELISA negativ kontroll skal kjøres med hvert oppsetti for å sikre at alle reagenser og prosedyrer fungerer som de skal. 2. Merk at da TPO ELISA kontroll, TPO ELISA-kalibratorene fra A til E og ELISA negativ kontroll er forhåndsfortynnet, kontrollerer de ikke for prosedyremessige metoder tilknyttet fortynning av prøver. 3. Tilleggskontroller kan utføres i henhold til veiledninger eller krav fra lokale, statlige og/eller kommunale myndigheter eller akkrediterte organisasjoner. Egnet tilleggskontrollsera kan forberedes ved å aliquotere innsamlede humane serumprøver og oppbevaring ved < -20 C. 4. Alle kriteriene oppgitt nedenfor må oppfylles for å betrakte testresultatene som gyldige. Hvis noen av disse kravene ikke oppfylles, skal testen betraktes som ugyldig og analysen må gjentas. a. Absorbansen av forhåndsfortynnet TPO ELISA kalibrator A må være høyere enn absorbansen til forhåndsfortynnet TPO ELISA kontroll, og denne må være høyere enn absorbansen til forhåndsfortynnet ELISA negativ kontroll. b. Forhåndsfortynnet TPO ELISA kalibrator A må ha en høyere absorbans enn 1,0 mens absorbansen til forhåndsfortynnet ELISA negativ kontroll ikke kan være over 0,2. c. Absorbansen til TPO ELISA kontroll må være mer enn doble av ELISA negativ kontroll eller over 0,25. d. TPO ELISA kontroll konsentrasjon må være innenfor rekkevidden blir angitt på merket. e. Bruker henvises til CLSI (en gang var NCCLS) dokument C24-A3 for videre veiledning for egnet kvalitetskontrollpraksis. Beregning av resultater 1. Bestem gjennomsnittsverdien for alle duplikatavlesningene. 2. Plott gjennomsnittsabsorbansen til kalibratorkurven for mot logaritmen til konsentrasjonene deres. Bruk en linje som best tilpasses kurveplottet. Du kan alternativt bruke et log/log plot. 3. Bestem den ukjente TPO-konsentrasjonen i enheter (WHO) fra X-aksen ved å lese av tilhørende absorbans på Y-aksen. Kalibratorer og kontroll for dette settet viser til verdenshelseorganisasjonens referansestandarder som er tilgjengelige hos dem, referansepreparat MRC 66/ Negative verdier strekker seg fra enheter. Positive resultater er høyere enn 100 enheter. 5. Prøver over testområdet med OD over S1-standarden kan rapporteres som > 1000 enheter. Alternativt kan prøven fortynnes ytterlig (dvs. 1:2 og 1:4 i HRP-prøveløsning) og testes på ny for å få OD innenfor analyseområdet som standardkurven dekker. Under vises et eksempel av en typisk standardkurve. Punkt Middel OD Konsentrasjon (WHO-enheter) A 1, ,0 B 1, ,0 C 0, ,0 D 0, ,0 E 0,306 62,5-4 -

5 Tolkning av resultater ELISA-analysen er meget følsom for teknikk og er i stand til å påvise selv små forskjeller i pasientpopulasjonen. Verdiene som vises nedenfor er bare foreslåtte verdier. Hvert laboratorium bør etablere eget referanseområde basert på egne teknikker, kontroller, utstyr og pasientpopulasjoner i henhold til deres etablerte prosedyrer. 1. Et positivt resultat indikerer forekomst av tyroid peroxidase-antistoffer og antyder muligheten av Hashimotos tyroiditt og/eller Graves skydom. 2. Et negativt resultat indikerer ingen forekomst av tyroid peroxidase-antistoff eller nivåer under analysens cut-off. 3. Det foreslås at resultatene som rapporteres av laboratoriet skal inneholde uttalelsen: Følgende resultater ble fremstilt med INOVA QUANTA Lite TPO ELISA. Tyroglobulin-verdier fremstilt med forskjellige fabrikanters analysemetoder kan ikke brukes om hverandre. Størrelsen av rapporterte IgG-nivåer kan ikke korreleres til et endepunkttiter. Prosedyrebegrensninger 1. Forekomsten av immunkomplekser eller andre immunglobulinaggregater i pasientprøven kan forårsake et forhøyet nivå av ikke-spesifikk binding og produsere feilaktige positive analyseresultater. 2. Ikke alle Hashimotos tyroiditt-pasienter er positive for mikrosomal eller TPO antistoffer. 3. Resultatene til denne analysen bør brukes sammen med kliniske resultater og andre serologiske tester. 4. Prestasjonsegenskapene til analysen har ikke blitt etablert for annet prøvemateriale enn serum. Forventede verdier Normalområde Total ble det kjørt 198 tilfeldige normalprøver. Denne gruppen inkluderte 104 menn i alderen fra og 94 kvinner i alderen fra prøver, eller 5,5%, ble funnet å være positive. 6 av de 11 positive prøvene var fra kvinner og de 5 resterende var fra menn. 7 av disse 11 positive normalprøvene ble funnet å være positive av en ELISA-metode for tyroid mikrosomale antistoffer og/eller en annen kommersiell TPO ELISA. Middelverdien for den normale mannlige populasjonen var 17 enheter og en verdi på 36 enheter ble registrert for den normale kvinnelige populasjonen. Relativ sensitivitet og spesifisitet Kapasiteten til QUANTA Lite TPO ELISA for å påvise autoantistoffer mot tyroid peroksidase (TPO) ble evaluert ved sammenlikning av en annen kommersielt tilgjengelig TPO ELISA-test. Totalt 88 prøver ble testet. 69 prøver forelagt et referanselaboratorium for tyroid autoantistofftesting og 19 ytterlige normalprøver ble testet. Resultatet er oppsummert i tabellen nedenfor. INOVA TPO * Relativ sensitivitet 90,8% Referanse TPO Relativ spesifisitet 100% Relativ effektivitet 92,6% * En av disse prøvene var fra en normal populasjon og 4 viste seg å være negative med både immunfluorescens og ELISA mot tyroid mikrosomer. I et annet studium, ble QUANTA Lite TPO-testen også sammenliknet med en annen ELISA-metode for påvisning av autoantistoffer mot hele humane tyroide mikrosomer. Resultatene oppsummeres nedenfor. INOVA TPO * Relativ sensitivitet 80,5% Mikrosome ELISA Relativ spesifisitet 92,7% - 17** 200 Relativ effektivitet 89,7% * 13 av disse 15 hadde høye nivåer av tyroglobulin antistoff. ** 16 av disse 17 var også positive ved bruk av en referanse TPO ELISA

6 Et tredje studium sammenliknet QUANTA Lite TPO ELISA med en indirekte immunfluorescerende prosedyre som bruker tyroidsnitt fra primater som substrat. Resultatene oppsummeres nedenfor: INOVA TPO Relativ sensitivitet 100% Indirekte Relativ spesifisitet 81,5% Immunofluorescence - 5* 17 Relativ effektivitet 89% * Alle fem av disse prøvene var også positive ved bruk av en TPO ELISA-referansetest. Presisjon og reproduserbarhet Presisjonen og reproduserbarheten til analysen ble målt ved å kjøre seks duplikater hver av en negativ, moderat positiv og sterk positiv prøve i 6 separate analyser. Middelverdien til den sterkt positive prøven var 815, til den moderat positive prøven, 294 og negativ,53. Standardavviket og variasjonskoeffisienten for hver prøve oppsummeres nedenfor. Negative Sterk positiv Moderat positiv SD CV SD CV SD CV Samlet 6,0 11,1% 44,4 5,4% 28,3 9,6% Innen serien 4,6 8,5% 33,5 4,1% 21,4 7,2% Mellom serier 6,6 12,5% 45,2 5,5% 25,9 8,7% - 6 -

7 Referanser 1. Davies TF and DeBernardo E. Thyroid autoantibodies and disease. In "Autoimmune Endocrine Disease", TF Davies, ed., Wiley, New York, NY, 1983, p Wall JR and Kuroki T. Immunologic factors in thyroid disease. Medical Clinics of North America, 69: 913, Hall R and Evered DC. Autoimmune thyroid disease: thyroiditis. In "Endocrinology", DeGroot LJ, et al., eds., Grune and Stratton, New York, NY, 1979, p Delespesse G, et al. Thyroid autoimmunity. In Thyroiditis and Thyroid Function, Bastenie PA and Evans AM, eds., Pergamon Press, Oxford, 1972, p Balfour BM, et al. Fluorescent antibody studies in human thyroiditis: autoantibodies to an antigen of the thyroid colloid distinct from thyroglobulin. Br J Exp Pathol, 43:307, Tung KSK, et al. Antithyroid antibodies in juvenile lymphocytic thyroiditis. Am J Clin Pathol, 61: 549, Kotani T, et al. Detection of autoantibodies to thyroid peroxidase in autoimmune thyroid diseases by micro- ELISA and immunoblotting. J Clin Endrocrinol Metab, 62: 928, Feldt-Rasmussen U. Analytical and clinical performance goals for testing autoantibodies to thyroperoxidase, thyroglobulin, and thyrotropin receptor. Clinical Chemistry, 42: 160, Maastrict J, et al. Identification of localized autoantibody epitopes in thyroid peroxidase. J Clin Endocrinol Metab, 75: 121, Doniach D and Roitt IM. Autoimmunity in Hashimoto's disease and its implications. J Clin Endocrinol Metab, 17: 1293, Philip JR, et al. A latex particle precipitation test in the diagnosis of thyroid disease. J Clin Pathol, 15: 148, Fulthorpe AJ, et al. A stable sheep cell preparation for detecting thyroglobulin auto-antibodies and its clinical applications. J Clin Pathol, 14: 654, Holborrow J, et al. Cytoplasmic localization of complement-fixing auto-antigen in human thyroid epithelium. Br J Exp Pathol, 40: 583, Doniach D. Thyroid autoimmune disease: symposium on thyroid gland. J Clin Pathol, 20: 385, Ohwovoriole AE, et al. Improved ELISA for thyroid microsomal auto-antibodies, comparison with hemagglutination and immunofluorescent techniques. Int Arch Allergy Appl Immun, 86: 183, Hoshijima Y, et al. A sensitive enzyme immunoassay for anti-thyroglobulin antibody using Fab-horseradish peroxidase conjugate. J Immunl Methods, 96: 121, Roman SH, et al. Enzyme-linked immunosorbent microassay and hemagglutination compared for detection of thyroglobulin and thyroid microsomal autoantibodies. Clin Chem, 30: 246, Wilkin TJ, et al. A passive hemagglutination (TRC) inhibitor in thyrotoxic serum. J Clin Endocrinol, 10: 507, Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories: Centers for Disease Control/National Institutes of Health, Fifth Edition,

8 Fabrikkert av: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA United States of America Technical Service (U.S. & Canada Only) : Technical Service (Outside the U.S.) : info@inovadx.com Autorisert representant i EU: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Germany Tel.: Fax.: NOR November 2010 Rev