QUANTA Lite dsdna ELISA dobbel hyssing DNA ELISA For In Vitro-diagnostikk CLIA-klassifisering: Høy kompleksitet

Transkript

1 QUANTA Lite dsdna ELISA dobbel hyssing DNA ELISA For In Vitro-diagnostikk CLIA-klassifisering: Høy kompleksitet Anvendelsesområde QUANTA Lite dsdna er en enzymkoblet immunsorbent analyse (ELISA) for semikvantitativ påvisning av dsdna-antistoffer i humant serum. Forekomsten av dsdna-antistoffer kan brukes sammen med kliniske resultater og andre laboratorietester som støtte i diagnosen av systemisk lupus erythematosus (SLE) og relaterte bindevevssykdommer. Sammendrag og forklaring av testen Antinukleære antistoffer (ANA) finnes i en hel rekke bindevevssykdommer og er en sensitiv screeningsanalyse. 1 Selv om ANA-testen er en fremragende screeningstest for SLE (et negativt resultat utelukker praktisk talt aktiv SLE) 2, er det ikke på noen måte en spesifikk test. Antistoffer mot dsdna forekommer nesten eksklusivt hos pasienter med SLE og betraktes som en antistoffmarkør for denne sykdommen. Forekomsten av antistoffer mot dsdna er en sterk indikasjon på SLE, men fraværet av disse antistoffene utelukker ikke SLE i alle tilfellene. Autoantistoffer mot dsdna har blitt inkludert i Reviderte kriterier for klassifisering av SLE av 1982 av en underkomité for foreningen for artritt og reumatisme. 3 En rekke metoder, inkludert immunfluorescerende analyser, 4 radioimmunanalyser, 5 passiv agglutinasjon 6 og komplement binding 7 har alle blitt brukt til å påvise antistoffer mot dsdna. Klinisk nyttige ELISAanalyser for å påvise anti-dsdna-antistoffer har også blitt utviklet. 8,9,10,11 ELISA-teknikken brukt i denne analysen er objektiv, semikvantitativ og kan enkelt brukes til å teste et stort antall pasienter. I tillegg, ved å bruke renset dsdna som substrat, elimineres feilaktige positive resultater som skyldes forekomsten av antistoffer mot en enkelttråd i DNAet, histoner eller deoksynukleo-protein. Prosedyreprinsipper Et høyt renset kalvethymus dsdna er bundet til brønnene til en mikrotiterplate av polystyren under betingelsene som vil konservere antigenet i naturlig tilstand. Forhåndsfortynnede kontroller og fortynnet pasientserum blandes i separate brønner slik at tilstedeværende dsdna-antistoff bindes til det immobiliserte antigenet. Ubundet prøve vaskes vekk og et enzym-merket anti-human IgG-konjugat tilsettes hver brønn. En andre inkubasjon gjør det mulig for det enzym-merkede anti-humane IgGantistoffet å binde seg til pasientens antistoff som har festet seg på mikrobrønnene. Etter å ha vasket bort enzym-merket anti-humant IgG-antistoff som ikke har festet seg, måles gjenværende enzymaktivtet ved å tilsette et substrat og fargeutviklingen måles. Analysen kan avleses spektrofotometrisk ved å måle og sammenlikne fargeintensiteten som utvikles i pasientbrønnene med fargen i kontrollbrønnene. Reagenser 1. En ELISA mikrotiterplate av polystyren dekket med et høyt renset kalvethymus dsdna-antigen. (12-1 x 8 brønner), med holder i foliepakning inneholdende tørkemidler. 2. ELISA negativ kontroll, 1 bufret ampulle som inneholder konserveringsmiddel og humant serum uten humane antistoffer mot dsdna, forhåndsfortynnet, 1,2mL. 3. dsdna ELISA lav positiv, 1 bufret ampulle som inneholder konserveringsmiddel og humant serum med ikke-humane antistoff mot dsdna, forhåndsfortynnet, 1,2mL. 4. dsdna ELISA høy positiv, 1 bufret ampulle som inneholder konserveringsmiddel og humant serum med antistoff mot dsdna, forhåndsfortynnet, 1,2mL. 5. HRP prøvediluent prøve, 1 ampulle rosafarget som inneholder fosfatbufret saltvann, Tween 20, proteinstabilisatorer og konserveringsmiddel, 50mL. 6. HRP vaskekonsentrat, 1 ampulle med 40x konsentrat rødfarget som inneholder fosfatbufret saltvann og Tween 20, 25mL. Se metodeavsnittet for veiledning om fortynning

2 7. HRP IgG-kobling, (goat), anti-humant IgG, 1 ampulle blåfarget som inneholder buffer, proteinstabilisatorer og konserveringsmiddel, 10mL. 8. TMB-kromogen, 1 ampulle som inneholder stabilisatorer, 10mL. 9. HRP stoppløsning, 0,344M svovelsyre, 1 ampulle fargeløs, 10mL. Advarsler 1. ADVARSEL: Dette produktet inneholder et kjemikalie (0,02% kloramfenikol) i prøvediluenten, kontrollene og konjugat antatt som kreftfremkallende i staten California. 2. Alt materiale fra menneskekilder brukt i preparatet til kontroller for dette produktet har blitt testet og funnet negativ for antistoff mot HIV, HBsAg og HCV av metoder klarert av det amerikanske helsetilsynet (FDA). Imidlertid kan ingen testmetode gi fullstendig sikkerhet om at HIV, HBV, HCV eller andre smittsomme agens er fraværende. Derfor skal dsdna kalibrator, dsdna ELISA positiv og ELISA negativ kontroll behandles på samme måte som potensielt smittefarlig materiale Natriumazid brukes som konserveringsmiddel. Natriumazid er en gift og kan være giftig ved svelging eller ved opptak gjennom huden eller via øynene. Natriumazid kan reagere med blyeller kobberrør og danne potensielt eksplosive metallazider. Bruk rikelig med vann i vaskene, hvis de brukes for avfallshåndtering av reagenser, for å forhindre oppsamling av azider. 4. HRP-konjugatet inneholder et fortynnet giftig/korrosivt kjemikalie som kan være giftig ved svelging av store mengder. Unngå hud- og øyenkontakt for å forhindre mulig kjemisk forbrenning. 5. TMB-kromogenet inneholder et kjemikalie som kan være skadelig ved inhalering, svelging eller opptak gjennom huden. Unngå inhalering, svelging eller hud- og øyenkontakt for å forhindre skader. 6. HRP-stoppløsningen inneholder en fortynnet svovelsyreoppløsning. Unngå eksponering av baser, metaller eller andre forbindelser som kan reagere med syrer. Svovelsyre er giftig og korrosiv og kan være giftig ved svelging. Unngå hud- og øyenkontakt for å forhindre mulig kjemisk forbrenning. 7. Bruk egnet personlig verneutstyr når du arbeider med reagensene som er levert. 8. Dersom du søler reagenser skal disse straks vaskes bort. Du skal være oppmerksom på alle kommunale, statlige og lokale miljøbestemmelser ved avfallsbehandling. Forholdsregler 1. Dette produktet brukes for in vitro-diagnostikk. 2. Utbytting av komponenter andre enn de som leveres med dette systemet kan føre til inkonsistente resultater. 3. Ufullstendig eller ineffektiv vasking og utilstrekkelig væskefjerning fra ELISA-brønnremsene vil forårsake dårlig presisjon og/eller høy bakgrunn. 4. Tilpassing av denne analysen for bruk sammen med, helt eller delvis, automatiske prøveprosessorer eller andre væskebehandlingsapparater, kan gi avvikende testresultater i forhold til de som utføres ved hjelp av manuell prosedyre. Det er hvert enkelt laboratoriums ansvar å stadfeste at deres automatiske prosedyre gir testresultater innenfor akseptable grenser. 5. En rekke faktorer påvirker analyseprestasjonene. Herunder inkluderes starttemperaturen til reagensene, lufttemperaturen, pipetteteknikkens nøyaktighet og reproduserbarhet, hvor grundig det er vasket og fjernet væske fra brønnen til ELISA-remsen, fotometeret som er brukt til å måle resultatene og inkubasjonstidenes varighet under analysen. Det er nødvendig med konsistens for å oppnå nøyaktige og reproduserbare resultater. 6. Det anbefales at man holder seg strengt innenfor rammene til protokollen. 7. Ufullstendig forsegling av glidelåsen til posen som inneholder mikrobrønnremsene og tørkemidlene vil resultere i degradasjon av antigen og dårlig presisjon. 8. Uakseptabelt lave sbsorbanser kan observeres etter to eller flere bruk fra én enkel flaske med HRP-konjugat over en tidsperiode. Det er viktig å følge alle anbefalte behandlingsprosedyrer for HRP-konjugatet for å forhindre at dette oppstår

3 9. Kjemisk kontaminasjon av HRP-konjugatet, dsdna ELISA-kalibrator eller dsdna ELISA positiv kan forårsakes av ufullstendig rengjøring eller skylling av utstyr eller instrumenter. Avfall fra vanlige laboratoriekjemikalier slik som formalin, blekemiddel, etanol eller vaskemiddel vil forårsake degradasjon av HRP-konjugatet over tid. Skyll alt utstyret og alle instrumentene grundig etter bruk av kjemiske rengjørings- og desinfeksjonsmidler. Oppbevaringsbetingelser 1. Lagre alle reagensene i kitet ved 2-8 C. Ikke frys. Reagensene er stabile helt til de går ut på dato hvis de oppbevares og behandles på foreskriftsmessig vis. 2. Ubrukte antigen-dekkede mikrobrønnremser skal forsvarlig forsegles på ny i folieposen som inneholder tørkemidlene og oppbevares ved 2-8 C. 3. Fortynnet vaskebuffer er stabil i én uke ved 2-8 C. Innhenting av prøver Denne prosedyren skal utføres med en serumprøve. Tilsetting av azid eller andre konserveringsmidler til testprøvene kan påvirke resultatene negativt. Mikrobielt kontaminerte, varmebehandlede prøver eller prøver som inneholder synlige partikler skal ikke brukes. Sterkt hemolysert eller lipemisk serum eller prøver skal unngås. Etter innhenting skal serumet skilles fra blodklumpen. CLSI (en gang var NCCLS) dokument H18-A2 anbefaler følgende oppbevaringsbetingelser for prøver: 1) Ikke oppbevar prøver i romtemperatur lenger enn i 8 timer. 2) Hvis analysen ikke fullføres innen 8 timer, kjøl prøven ned til 2-8 C. 3) Hvis analysen ikke fullføres innen 48 timer, eller ved forsendelse av prøven, frys den ned til -20 C eller lavere. Nedfryste prøver må blandes godt etter tining og før testing. Prosedyre Leverte materialer 1 dsdna ELISA-mikrotiterplate (12-1 x 8 brønner), med holder 1 1,2mL forhåndsfortynnet ELISA negativ kontroll 1 1,2mL forhåndsfortynnet dsdna ELISA lav positiv 1 1,2mL forhåndsfortynnet dsdna ELISA høy positiv 1 50mL HRP-prøvediluent 1 25mL HRP-vaskekonsentrat, 40x konsentrat 1 10mL HRP IgG-konjugat, (goat), anti-humant IgG 1 10mL TMB-kromogen 1 10mL HRP-stoppløsning, 0,334M svovelsyre Påkrevd tilleggsutstyr (ikke levert) Mikropipetter for å forsyne 5, 100, og 500µL Engangs mikropipettetips Testrør for pasientprøvefortynninger, 4mL volum Destillert eller deionisert vann 1L beholder for fortynnet HRP-vaskekonsentrat Mikrotiterplateleser som er i stand til å måle OD ved 450nm (og 620nm for dobbel bølgelengdeavlesninger)

4 Metode Før du starter 1. Bring alle reagenser og prøver opp til romtemperatur (20-26 o C) og bland godt. 2. Fortynn HRP-vaskekonsentratet ut (1:40) ved å blande innholdet av HRP-vaskekonsentratflasken med 975mL destillert eller deionisert vann. Hvis hele platen ikke skal kjøres i denne perioden, kan du forberede en mindre mengde ved å blande 2,0mL av konsentratet med 78mL destillert eller deionisert vann for hver 16 brønner som skal brukes. Den fortynnede bufferen er stabil i én uke ved 2-8 o C. 3. Gjør klar en oppløsning (1:101) for hver pasientprøve ved å blande 5µL fra prøven med 500µL av HRP-prøvediluent. Fortynnede prøver må brukes innen 8 timer etter klargjøring. IKKE FORTYNN dsdna ELISA kalibrator, dsdna ELISA positiv og ELISA negativ kontroll. 4. Bestemmelse av forekomst eller fravær av dsdna-autoantistoff krever to brønner for hver av de tre kontrollene og én eller to brønner for hver pasientprøve. Det anbefales at prøvene kjøres i duplikat. Analyseprosedyre 1. ALLE REAGENSER MÅ BRINGES OPP TIL ROMTEMPERATUR (20-26 C) FØR DU BEGYNNER ANALYSEN. Plasser påkrevd antall av mikrobrønner/remser i holderen. Legg straks tilbake remser som du ikke skal bruke tilbake i posen med tørkemidler og forsegl forsvarlig for å minimalisere eksponering for vanndamp. 2. dsdna ELISA-kalibrator og dsdna ELISA positiv skal tas fra flaskene under standard aseptiske forhold og gode laboratorieteknikker. Bare ta nødvendig mengde av dsdna ELISA-kalibrator eller dsdna ELISA positiv fra flasken for å utføre analysen. DU SKAL ALDRI RETURNERE UBRUKT dsdna ELISA-kalibrator eller dsdna ELISA positiv TIL FLASKEN FOR Å UNNGÅ POTENSIELL MIKROBIELL OG/ELLER KJEMISK KONTAMINERING. Bland 100µL av forhåndsfortynnet dsdna ELISA-kalibrator, dsdna ELISA positiv, ELISA negativ kontroll og de fortynnede pasientprøvene i brønnene. Dekk brønnene og sørg for 30 minutters inkubasjon ved romtemperatur på en vannrett overflate. Inkubasjonstiden begynner etter at siste prøve tilsettes. 3. Vasketrinn: Aspirer innholdet av hver brønn grundig. Tilsett µL av fortynnet HRPvaskebuffer til alle brønnene og deretter aspirer. Gjenta denne sekvensen to ganger til (totalt tre vasker). Inverter platen og bank på absorberende materiale for å fjerne resterende væske etter siste vask. Det er viktig å tømme hver brønn fullstendig etter hvert vasketrinn. Du opprettholder den samme sekvensen for aspirasjon som den som ble brukt for prøvetilsetning. 4. Tilsett 100μl av HRP-IgG-konjugatet til hver brønn. Konjugatet skal fjernes fra flaskene under standard aseptiske forhold og gode laboratorieteknikker. Bare fjern den koblingsmengden fra flasken som er nødvendig for analysen. DU SKAL ALDRI RETURNERE UBRUKT KONJUGAT TIL FLASKEN FOR Å UNNGÅ POTENSIELL MIKROBIELL OG/ELLER KJEMISK KONTAMINERING. Som i trinn 2, sørg for 30 minutters inkubasjon av brønnene. 5. Vasketrinn: Gjenta trinn Tilsett 100µL av TMB-kromogenet til hver brønn og sørg for 30 minutters inkubasjon i mørke ved romtemperatur. 7. Tilsett 100µL av HRP-stoppløsningen til hver brønn. Du opprettholder den samme sekvensen og timing ved tilsetting av HRP-stoppløsning som den som ble brukt for TMB-kromogenet. Bank forsiktig på platen med en finger for å blande brønnene grundig. 8. Avles absorbans (OD) fra hver brønn ved 450nm innen én time etter å ha stoppet reaksjonen. Hvis du ønsker bikromatiske målinger, kan du bruke 620nm som referansebølgelengde. Kvalitetskontroll 1. dsdna ELISA kalibrator, dsdna ELISA positiv og ELISA negativ kontroll skal kjøres med hvert oppsetti for å sikre at alle reagenser og prosedyrer fungerer som de skal. 2. Merk at da dsdna ELISA kalibrator, dsdna ELISA positiv og ELISA negativ kontroll er forhåndsfortynnet, kontrollerer de ikke for prosedyremessige metoder tilknyttet fortynning av prøver

5 3. Tilleggskontroller kan utføres i henhold til veiledninger eller krav fra lokale, statlige og/eller kommunale myndigheter eller akkrediterte organisasjoner. Egnet tilleggskontrollsera kan forberedes ved å aliquotere innsamlede humane serumprøver og oppbevaring ved < -20 C. 4. Beregnet positiv kontroll IU/mL eller WHO-enheter/mL-verdier må være innenfor området som fremgår av ampullen. 5. Alle kriteriene oppgitt nedenfor må oppfylles for å betrakte testresultatene som gyldige. Hvis noen av disse kravene ikke oppfylles, skal testen betraktes som ugyldig og analysen må gjentas. a. Absorbansen av forhåndsfortynnet dsdna ELISA positiv må være høyere enn absorbansen til forhåndsfortynnet dsdna kalibrator, og denne må være høyere enn absorbansen til forhåndsfortynnet ELISA negativ kontroll. b. Forhåndsfortynnet dsdna ELISA positiv må ha en høyere absorbans enn 1,0, mens absorbansen til forhåndsfortynnet ELISA negativ kontroll ikke kan være over 0,2. c. dsdna ELISA-kalibrator absorbans må være mer enn det dobbelte av ELISA negativ kontroll eller over 0,25. d. ELISA negativ kontroll og dsdna ELISA positiv er ment for å kontrollere for substansiell reagensfeiling. dsdna ELISA positiv vil ikke sikre presisjon ved analysens cut-off. e. Bruker henvises til CLSI (en gang var NCCLS) dokument C24-A3 for videre veiledning for egnet kvalitetskontrollpraksis. Beregning av resultater OD-middelverdien for hvert sett av duplikater bestemmes først. Reaksjonen for hver prøve kan deretter beregnes ved å dele prøvens OD-middelverdi med OD-middelverdien for dsdna ELISA-kalibrator og multiplisere resultatet med IU/mL eller WHO-enheter/mL-verdi for dsdna ELISA-kalibrator. Enhetene som tildeles dsdna ELISA-kalibrator finnes på ampullen. Prøve OD Prøveresultat = x dsdna ELISA kalibrator (enheter) dsdna ELISA kalibrator OD (enheter) Reaksjon er relatert til antistoffmengde fremstilt på ikke-lineært vis. Selv om økninger og minskinger av pasientens antistoffkonsentrasjoner vil gjenspeiles i form av tilsvarende stigning eller fall i reaksjon, er endringen ikke proporsjonal (dvs. en fordobling av antistoffkonsentrasjon vil ikke fordoble reaksjonen). Hvis det påkreves en nøyaktigere kvantifisering av pasientens antistoff, skal serielle fortynninger av pasientprøven kjøres og den siste fortynningen som måles positiv i analysen, skal rapporteres som pasientens antistofftiter. Tolkning av resultater ELISA-analysen er meget følsom for teknikk og er i stand til å påvise selv små forskjeller i pasientpopulasjonen. Verdiene som vises nedenfor er bare foreslåtte verdier. Hvert laboratorium bør etablere eget referanseområde basert på egne teknikker, kontroller, utstyr og pasientpopulasjoner i henhold til deres etablerte prosedyrer. Prøven kan da klassifiseres som negativ, tvetydig, moderat positiv eller sterkt positiv i henhold til tabellen nedenfor. IU/mL WHO Enheter/mL Negative ,6 Tvetydig ,7-138,9 Moderat positiv ,4 Sterkt positiv >801 >370,5-5 -

6 Tvetydige prøver skal testes en gang til før resultatene rapporteres. 1. Et positivt resultat indikerer forekomst av dsdna-antistoffer og antyder muligheten for systemisk lupus erythematosus (SLE) eller beslektede bindevevssykdommer. 2. En prøve med tvetydige nivåer av dsdna-antistoffer kan ikke bedømmes for antistoffstatus. Hvis resultatene forblir tvetydige etter gjentatt testing, bør resultatet rapporteres som tvetydig og/eller bør det tas ny prøve for testing. 3. Et negativt resultat indikerer ingen forekomst av dsdna-antistoff eller nivåer under analysens cutoff. 4. Det foreslås at resultatene som rapporteres av laboratoriet skal inneholde uttalelsen: Følgende resultater ble fremstilt med INOVA QUANTA Lite dsdna ELISA. dsdna-verdier fremstilt med forskjellige fabrikanters analysemetoder kan ikke brukes om hverandre. Størrelsen av rapportert IgG-nivåer kan ikke korreleres til et endepunkttiter. Prosedyrebegrensninger 1. Antistoffer mot en enkelttråd i DNAet, DNA-bunde histoner eller andre nukleo-proteinkomplekser skal ikke reagere signifikant med dsdna-antigenet brukt i denne analysen. Disse antistoffene kan påvises i større eller mindre grad ved hjelp av andre analysemetoder. Sammenlikninger mellom forskjellige metoder kan derfor gi forskjellige resultater. 2. Da IgG-antistoffer betraktes som å være mer klinisk signifikant, 13,14,15 bruker denne analysen en IgG-spesikt konjugat. IgM dsdna-antistoffer som ikke måles ved hjelp av denne analysen kan konkurrere med IgG-antistoffer for tilgjengelige bindesteder. Hvis det er mistanke om interferens fra IgM-antistoffer, analyser prøven på ny med høyere fortynning. En kraftig økning i verdien til prøven indikerer forekomst av konkurrerende IgM-antistoff. Denne nye verdien vil gi en nøyaktigere bestemmelse av mengden dsdna IgG-antistoff i pasientprøven. 3. Forekomsten av immunkomplekser eller andre immunglobulinaggregater i pasientprøven kan forårsake et forhøyet nivå av ikke-spesifikk binding og produsere feilaktige positive analyseresultater. 4. Resultatene til denne analysen bør brukes sammen med kliniske resultater og andre serologiske tester. 5. Et negativt dsdna-resultat utelukker ikke forekomsten av SLE. 6. Et positiv testresultat indikerer forekomsten av antistoff mot dsdna og indikerer nødvendigvis ikke en SLE-diagnose. 7. Prestasjonsegenskapene til analysen har ikke blitt etablert for annet prøvemateriale enn serum. Forventede verdier Evnen til QUANTA Lite dsdna ELISA til å påvise dsdna-antistoffer ble evaluert ved sammenlikning av en kommersielt tilgjengelig dobbeltdiffusjonstest fra INOVA Diagnostics, Inc. Normalområde Normalområdet for dette assay ble fastsatt ved å analysere prøver fra 175 tilfeldige blod donorer. Av dette hadde alle utenom to (1,1%) anti-dsdna verdier mindre enn 200 IU/mL (92,6 WHO enheter/ml)

7 Relativ sensitivitet og spesifisitet Kryssreaksjonen til analysen ble testet ved å analysere 50 pasienter med forskjellige autoimmunsykdommer som hadde en eller annen type antinukleær antistoff (ANA), men ikke signifikant antistoff mot dsdna ved hjelp av en referansemetode. Av disse pasientene hadde alle bortsett fra én (2,0%) anti-dsdna-verdier under 200 IU/mL (92,6 WHO-enheter/mL). En sammenlikning side ved side med et annet kommersielt tilgjengelig dsdna-antistoff ELISAtestsystem ble utført på 64 pasienter utvalgt fra en populasjon som inneholdt både positive og negative prøver. Resultatene av disse studiene er vist i tabellen nedenfor. Referansemetode P E N P 16** 0 0 P = Positiv INOVA E 0 1* 1 E = Tvetydig N 0 7* 39 N = Negative *Testet negativt ved hjelp av IFA på Crithidia luciliae. ** 12 av 16 også positive ved hjelp av IFA på Crithidia luciliae

8 Referanser 1. Tan E: Autoantibodies to nuclear antigens (ANA): Their immunobiology and medicine. Advances in Immunology 33: 167, Casalo SP, Friou GJ, Myers LL: Significance of antibodies to DNA is systemic lupus erythematosus. Arthritis and Rheumatism 7: 379, Tan EM, et al.: The 1982 Revised Criteria for the Classification of Systemic Lupus Erythematosus. Arthritis and Rheumatism 25: 1271, Crowe W, Kusher I: An immunofluorescent method using Crithidia luciliae to detect antibodies to double-stranded DNA. Arthritis and Rheumatism 20: 811, Fish F, Ziff M: A sensitive solid phase microradioimmunoassy for anti double-stranded DNA antibodies. Arthritis and Rheumatism 24: 534, Inami YH, Nakamura RM, Tan EM: Microhemagglutination test for the detection of native and single-stranded DNA antibodies and circulating DNA antigen. Journal Immunol Methods 3: 287, Arana RK, Seligmann M: Antibodies to native and denatured deoxyribonucleic acid in systemic lupus erythematosus. Journal Clinical Investitgation 46: 1867, Kavai M, et al.: Enzyme-linked immunosorbent assay for antibodies to native DNA in sera of patients with SLE. Journal Immunol Methods 48: 169, Rubin RL, et al.: An improved ELISA for anti-native DNA by elimination of interference by anti-histone antibodies. Journal Immunol Methods 63: 359, Pisetsky DS, Peters DV: A simple enzyme-linked immunosorbent assay for antibodies to native DNA. Journal Immunol Methods 41: 187, Klotz JL: Enzyme-linked Immunosorbent Assay for antibodies to native and denatured DNA. Methods in Enzymology 84: 194, Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Center for Disease Control/National Institute of Health, Fifth Edition, Sontheimer RD, Gilliam JN: DNA antibody class, subclass, and complement fixation in systemic lupus erythematosus with and without nephritis. Clinical Immunolgy and Immunopatholgy 10: 459, Talal N, et al.: Biological significance of IgM and IgG antibodies to DNA and RNA in autoimmune disease. American Journal of Clinical Pathology 68: 643, Gonzalez EN, Rothfield NF. Immunoglobulin class and pattern of nuclear fluorescence in systemic lupus erythematosus. New England Journal of Medicine 274: 133, Fabrikkert av: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA United States of America Technical Service (U.S. & Canada Only) : Technical Service (Outside the U.S.) info@inovadx.com Autorisert representant i EU: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Germany Tel.: Fax.: NOR May 2010 Rev