Auto/alloadsorbering. Linda Skordal Stavanger universitetssykehus Avdeling for immunologi og transfusjonsmedisin Nasjonal blodbankkonferanse 2018

Transkript

1 Auto/alloadsorbering Linda Skordal Stavanger universitetssykehus Avdeling for immunologi og transfusjonsmedisin Nasjonal blodbankkonferanse 2018

2 Disposisjon Autoantistoff av varmetypen PEG adsorbering Case

3 AutoImmun Hemolytisk Anemi (AIHA) AIHA-autoimmun hemolytisk anemi er karakterisert av produksjon av antistoff mot et høyfrekvent antigen. AIHA kan deles i varm eller kald type avhengig av om antistoffet binder best ved kroppstemperatur (37 o ) eller ved lavere temperatur (0-4 o C). Varm: ca 75 % av tilfeller Kald: ca 25 % Technical Manual 18th edition

4 Varm type IgG antistoff dominerer ved varm type Pos DAT: Kun IgG (20%) IgG og komplement (67%) Komplement alene (13%). Varm AIHA kan være primær, idiopatisk (ukjent årsak) De sekundære AIHA skyldes gjerne autoimmune sykdommer som reumatoid artritt (leddgikt), SLE (systemisk lupus erytematosis), lymfoide maligniteter eller visse medikament. Ved varm AIHA må man som regel gi blod med biologisk forlik Technical Manual 18th edition

5 Autoantistoff av varmetypen IgG antistoff: reagerer ved IAT Forsterkes med papain og PEG Alt antistoff kan være bundet til egne celler Overskudd av antistoff: fritt antistoff i plasma.

6 Autoantistoff av varmetypen Antistoff kan være av IgM typen (uvanlig) Hvis reaktiv ved 37 grader: alvorlig hemolyse og prognosen for pasient er dårlig. Spontanagglutinerende celler: DAT blir positiv, inkludert kontrollen. Kan gi problem med ABO typing.

7 Spesifisitet på autoantistoff I de fleste tilfeller : Ingen spesifisitet Panagglutinerende Rh spesifisitet ikke så uvanlig Autoanti-e D, C, E, c sees også Andre spesifisiteter har blitt rapportert LW, Kell, KIDD, Duffy og Diego Midlertidig svekkelse av antigen (tilsynelatende K neg) Antigenstyrken tiltar når sykdom bedres Technical Manual 18th edition

8 Problem ved autoantistoff av varmetypen Dekker autoantistoff over tilstedeværelsen av alloantistoff i plasma? Multiple rapporter indikerer at pasienter med autoantistoff har større sjanse for alloimmunisering %, gjennomsnitt 32 % Anti-E og anti-k Technical Manual 18th edition

9 Hva gjør vi? Rh fenotyping ofte problematisk pga nylige transfusjoner og positiv DAT Rh genotyping Gi så typelikt blod som mulig Biologisk forlik PEG adsorbering

10 PEG - PolyEtylene Glykol Vannløselig lineær polymer C2nH4n+2On+1 Sigmaaldrich

11 PEG adsorbering-hensikt Ved å inkubere celler og plasma vil autoantistoff binde til antigen og fjernes fra plasma. Eventuelle alloantistoff kan påvises i adsorbat. PEG øker opptak av antistoff til cellen.

12 PEG adsorbering 2 stategier/fremgangsmåter 1: Autoadsorbering Egne celler 2: Alloadsorbering /Differensialadsorbering Giver celler

13 Autoadsorbering 1 del plasma fra pasient, 1 del celler fra pasient og 1 del PEG Inkuber 15 min v 37 grader, sentrifuger av adsorbat -> fortynning av plasma 1:2 Setter alltid opp fortynning 1:2 med isoton Enkelt Utførsel + valg av celler. Pasient bør ikke ha fått blod siste 3 måneder Transfunderte celler kan adsorbere alloantistoff DAT sterk pos: ikke mulig å ta opp mer antistoff Varmebehandling (56 o ) eller enzymbehandling

14 Adsorbering med allogene celler Mer utfordrenede Vet vi fenotype? Hvis ikke, velge 3 celler (minimum) R 1 R 1, R 2 R 2 og rr (CDe/CDe) (cde/cde) (cde/cde)

15 Adsorbering med allogene celler Til sammen må cellene være negative for minst: Jka, Jkb, Fya, Fyb, K, S og s og Rh Givere som er uttypet Helst ABO typelike Hvis O celler: husk vask for å fjerne anti-a/b

16 Sammensetting av celler til PEG adsorbering D C c E e K Fya Fyb Jka Jkb S s R1R R2R rr

17 Illustrasjon PEG adsorbering

18 Adsorbering med allogene celler Hvis vi vet pasientens fenotype, ta hensyn til negative antigen. Kan klare oss med en til to givere. Samme fremgangsmåte 1 del plasma + 1 del celler fra giver + 1 del PEG Har vi 4 givere gir det 4 adsorbat. Forliker/ID mot alle 4 adsorbat

19 PEG adsorbering/identifisering Hvis identifisering på adsorbat gir noen pos/neg reaksjoner: se etter mønster til alloantistoff. Hvis positiv reaksjon på kun ett adsorbat, husk å sjekke hva den cellen er negativ på. Kan være rest av autoantistoff

20 Dobbeladsorbering Adsorbat kan adsorberes på nytt 1 del adsorbat (1 del plasma + 1 del PEG) + 1 del celler (samme kilde som første gang) Inkuber 15 min, sentrifuger og pipetter av NB: IKKE TILSETT MER PEG!!!

21 Casus Mann født 1928 Typet til A Rh (D) positiv Fikk 2 erytrocyttkonsentrat i Lungeavd/kardiologisk Fikk 4 erytrocyttkonsentrat juni 2017 på dataforlik på nyreavdeling innlagt pga FCF, nyresvikt med anemi, pankreatitt og atrieflimmer. Ny screening : Positiv

22

23

24

25 Oppsummering funn Blodtype: A+ SCR gel: pos alle celler, forsterket med PAP SCR rør: pos alle celler (pengeruller) ID: pos alle celler, forsterkes med papain Kuldescr:neg DAT: Sterk pos IgG Problem med fenotyping (humant kort) Alle utvidet forlik positive Konklusjon: autoantistoff av varmetypen

26 Ny prøve ( )

27 Fenotyping rør: R 1 R 1, Cw og K neg Pos M, Jka og Jkb

28 Merk forskjell i styrkegrad scr

29 Det ble utført en autoadsorbering 1 del plasma + 1 del egne celler + 1 del PEG Celle I negativ etter adsorbering (også v fortynning)

30 Identifisering Anti-E Anti-K Anti-c

31 ID autoadsorbering med 6 cellerspanel

32 Autoadsorbering 11 cellerspanel Sterk pos på celle 3 og 5: anti-e Neg på celle 1 og 4 Celle 1 er c neg og celle 4 er c i enkel dose: anti-c Celle 2 er positiv: er det anti-k?

33 Rørteknikk uabs plasma

34 Det ble valgt å utføre en alloadsorbering med c positiv celle Tappenummer Fenotyping J003317xxxxx C- c+ E- K- D- Cw- M- Fya- S- Lea- og Kpa-

35 Adsorbering med c pos celle

36 Adsorbering med c pos celle Påviser anti-e i adsorbat. Celle 6 blir neg når adsorberer med c pos giver: tyder på anti-c i plasma til pasient

37 Autoadsorbert plasma mot utvalgte givere

38 Autoadsorbert plasma 3 K positive celler gir pos reaksjon 5 av 6 forlik positive når c positive 3 av 3 forlik negative med E-, c- og K-

39 Vår konklusjon fra prøve Autoantistoff av varmetypen I adsorbat er det påvist anti-k, anti-c og anti-e 2 av posene pasient fikk på dataforlik var c+e+k+ Prøve sendt Oslo : De påviser anti-e + uidentifisert antistoff Mener å utelukke anti-c og K

40

41 Ny prøve I prøve er autoantistoffet svekket Scr pos kun på celle II og III

42 IAT identifisering gelkort, vanlig plasma Nytt cellepanel

43 Påviser anti-c + E + K 4 av 4 forlik (c,-e-,k-) er negative uten adsorbering, egne celler 2+. DAT: 3+

44 PEG adsorbering Pasient genotypet I Oslo R 1 R 1, K og Fyb neg Utførte PEG adsorbering med c+c-, E, K og Fyb neg celle

45 Identifisering etter PEG adsorbering

46 Oppsummering Autoantistoff av varmetypen er tidkrevende Det kan skjule seg alloantistoff under autoantistoff. Man bør utføre adsorpsjon (PEG ) i tillegg til biologisk forlik/fenotypelikt blod. Alloadsorbering kan også brukes ved multiple antistoff Man må ha god dialog med hematolog på behandlende avdeling

47 Takk for oppmerksomheten