QUANTA Lite TM Gliadin IgG II For In Vitro-diagnostikk CLIA-klassifisering: Høy kompleksitet

Transkript

1 QUANTA Lite TM Gliadin IgG II For In Vitro-diagnostikk CLIA-klassifisering: Høy kompleksitet Anvendelsesområde QUANTA Lite TM Gliadin IgG II er en enzymkoblet immunsorbent analyse (ELISA) for semikvantitativ påvisning av gliadin IgG-antistoffer i humant serum. Forekomsten av gliadinantistoffer kan brukes sammen med kliniske resultater og andre laboratorietester som støtte i diagnosen av Cøliaki. Sammendrag og forklaring av testen Cøliaki eller glutensensitiv enteropati er en kronisk tilstand hvis hovedsymptomer inkluderer betennelse og karakteristisk histologisk utflating av intestinal mukosa som resulterer i et malabsorpsjonssyndrom. Den nøyaktige etiologien til sykdommer er fortsatt ukjent, men gliadin eller den alkoholoppløselige delen av hvetegluten er klart det tokiske agens. 1 En serie med intestinale biopsier ble opprinnelig brukt til å diagnostikere cøliaki og beslektede forstyrrelser. I den senere tid har serologisk testing blitt foreslått for å screene pasienter mistenkt for glutensensitiv enteropati og for å overvåke diettoverholdelse. 2-5 Den europeiske barnelegeorganisasjonen innen pediatri, gastroenterologi og ernæring (ESPAGAN) har anbefalt bruken av serologiske markører slik som gliadin og retikulin og endomysium-antistoffer for å redusere antall intestinale biopsier nødvendige for å stille diagnose. 6 Nylig arbeid har klarlagt at gliadin reaktive antistoffer fra cøliakipasienter binder et meget begrenset antall spesifikke epitoper på gliadin-molekylet. 7,8 De samme studiene har videre vist at deamidering av gliadin av det cøliakisassosierte enzymet, vevstransglutaminase, resulterer i forbedret binding av antigliadin-antistoffer. Basert på observasjonene ovenfor har analyser som bruker deamiderte og definerte peptider vist seg å ha høyere diagnostisk nøyaktighet for cøliaki sammenliknet med standard antigliadinanalyser. 9 Både gliadin IgA og IgG-antistoffer påvises i sera til pasienter med glutensensitiv enteropati. 2,3 Gliadin IgG-antistoffer synes å være mer sensitive, men er mindre spesifikke markører for sykdommen i forhold til IgA-klasse antistoffer. Gliadin IgA-antistoffer er mindre sensitive, men mer spesifikke. En sensitiv screeningsstrategi for risikopopulasjoner inkluderer testing for både IgG og IgA-antistoffer, da en signifikant del av cøliakipasienter har IgA-mangler. 10 Gliadin IgAantistoffer er interessante for å følge sykdomsaktivitet over tid og for å overvåke overholdelse av glutenfri diett. 5 Prosedyreprinsipper Renset gliadinpeptider er bundet til brønnene til en mikrotiterplate av polystyren under betingelsene som vil konservere antigenet i naturlig tilstand. Forhåndsfortynnede kontroller og fortynnet pasientserum blandes i separate brønner slik at tilstedeværende gliadin IgG-antistoff bindes til det immobiliserte antigenet. Ubundet prøve vaskes vekk og et enzym-merket antihuman IgG-konjugat tilsettes hver brønn. En andre inkubasjon gjør det mulig for det enzymmerkede anti-humane IgG-antistoffet å binde seg til pasientens antistoff som har festet seg på mikrobrønnene. Etter å ha vasket bort enzym-merket anti-humant IgG-antistoff som ikke har festet seg, måles gjenværende enzymaktivtet ved å tilsette et substrat og fargeutviklingen måles. Analysen kan avleses spektrofotometrisk ved å måle og sammenlikne fargeintensiteten som utvikles i pasientbrønnene med fargen i kontrollbrønnene. Reagenser 1. Mikrotiter ELISA-plate av polystyren dekket med renset gliadinpeptider (12-1 x 8 brønner), med holder i foliepakning inneholdende tørkemidler - 1 -

2 2. ELISA negativ kontroll, 1 bufret ampulle som inneholder konserveringsmiddel og humant serum uten humane antistoffer mot Gliadin IgG, forhåndsfortynnet, 1,2mL 3. Gliadin IgG II ELISA lav positiv, 1 bufret ampulle som inneholder konserveringsmiddel og humant serum med ikke-humane antistoff mot Gliadin IgG, forhåndsfortynnet, 1,2 ml 4. Gliadin IgG II ELISA høy positiv, 1 bufret ampulle som inneholder konserveringsmiddel og humant serum med antistoff mot Gliadin IgG, forhåndsfortynnet, 1,2 ml 5. HRP prøvediluent prøve, 1 ampulle rosafarget som inneholder fosfatbufret saltvann, Tween 20, proteinstabilisatorer og konserveringsmiddel, 50 ml 6. HRP vaskekonsentrat, 1 ampulle med 40x konsentrat rødfarget som inneholder fosfatbufret saltvann og Tween 20, 25 ml Se metodeavsnittet for veiledning om fortynning 7. HRP IgG-konjugat, (geit), anti-humant IgG, 1 ampulle blåfarget som inneholder buffer, proteinstabilisatorer og konserveringsmiddel, 10 ml 8. TMB-kromogen, 1 ampulle som inneholder stabilisatorer, 10 ml 9. HRP stoppløsning, 0,344M svovelsyre, 1 ampulle fargeløs, 10 ml Advarsler 1. ADVARSEL: Dette produktet inneholder et kjemikalie (0,02% kloramfenikol) i prøvediluenten, kontrollene og konjugat antatt som kreftfremkallende i staten California. 2. Alt materiale fra menneskekilder brukt i preparatet til kontroller for dette produktet har blitt testet og funnet negativ for antistoff mot HIV, HBsAg og HCV av metoder klarert av det amerikanske helsetilsynet (FDA). Imidlertid kan ingen testmetode gi fullstendig sikkerhet om at HIV, HBV, HCV eller andre smittsomme agens er fraværende. Derfor skal Gliadin IgG II ELISA lav positiv, Gliadin IgG II ELISA høy positiv og ELISA negativ kontroll behandles på samme måte som potensielt smittefarlig materiale Natriumazid brukes som konserveringsmiddel. Natriumazid er en gift og kan være giftig ved svelging eller ved opptak gjennom huden eller via øynene. Natriumazid kan reagere med bly- eller kobberrør og danne potensielt eksplosive metallazider. Bruk rikelig med vann i vaskene, hvis de brukes for avfallshåndtering av reagenser, for å forhindre oppsamling av azider. 4. HRP-konjugatet inneholder et fortynnet giftig/korrosivt kjemikalie som kan være giftig ved svelging av store mengder. Unngå hud- og øyenkontakt for å forhindre mulig kjemisk forbrenning. 5. TMB-kromogenet inneholder et kjemikalie som kan være skadelig ved inhalering, svelging eller opptak gjennom huden. Unngå inhalering, svelging eller hud- og øyenkontakt for å forhindre skader. 6. HRP-stoppløsningen inneholder en fortynnet svovelsyreoppløsning. Unngå eksponering av baser, metaller eller andre forbindelser som kan reagere med syrer. Svovelsyre er giftig og korrosiv og kan være giftig ved svelging. Unngå hud- og øyenkontakt for å forhindre mulig kjemisk forbrenning. 7. Bruk egnet personlig verneutstyr når du arbeider med reagensene som er levert. 8. Dersom du søler reagenser skal disse straks vaskes bort. Du skal være oppmerksom på alle kommunale, statlige og lokale miljøbestemmelser ved avfallsbehandling. Forholdsregler 1. Dette produktet brukes for in vitro-diagnostikk. 2. Utbytting av komponenter andre enn de som leveres med dette systemet kan føre til inkonsistente resultater. 3. Ufullstendig eller ineffektiv vasking og utilstrekkelig væskefjerning fra ELISAbrønnremsene vil forårsake dårlig presisjon og/eller høy bakgrunn

3 4. Tilpassing av denne analysen for bruk sammen med, helt eller delvis, automatiske prøveprosessorer eller andre væskebehandlingsapparater, kan gi avvikende testresultater i forhold til de som utføres ved hjelp av manuell prosedyre. Det er hvert enkelt laboratoriums ansvar å stadfeste at deres automatiske prosedyre gir testresultater innenfor akseptable grenser. 5. En rekke faktorer påvirker analyseprestasjonene. Herunder inkluderes starttemperaturen til reagensene, lufttemperaturen, pipetteteknikkens nøyaktighet og reproduserbarhet, hvor grundig det er vasket og fjernet væske fra brønnen til ELISA-remsen, fotometeret som er brukt til å måle resultatene og inkubasjonstidenes varighet under analysen. Det er nødvendig med konsistens konsistens for å oppnå nøyaktige og reproduserbare resultater. 6. Det anbefales at man holder seg strengt innenfor rammene til protokollen. 7. Ufullstendig forsegling av glidelåsen til posen som inneholder mikrobrønnremsene og tørkemidlene vil resultere i degradasjon av antigen og dårlig presisjon. 8. Uakseptabelt lave sbsorbanser kan observeres etter to eller flere bruk fra én enkel flaske med HRP-konjugat over en tidsperiode. Det er viktig å følge alle anbefalte behandlingsprosedyrer for HRP-konjugatet for å forhindre at dette oppstår. 9. Kjemisk kontaminasjon av HRP-konjugatet kan forårsakes av ufullstendig rengjøring eller skylling av utstyr eller instrumenter. Avfall fra vanlige laboratoriekjemikalier slik som formalin, blekemiddel, etanol eller vaskemiddel vil forårsake degradasjon av HRPkonjugatet over tid. Skyll alt utstyret og alle instrumentene grundig etter bruk av kjemiske rengjørings- og desinfeksjonsmidler. Oppbevaringsbetingelser 1. Lagre alle reagensene i kitet ved 2-8 C. Ikke frys. Reagensene er stabile helt til de går ut på dato hvis de oppbevares og behandles på foreskriftsmessig vis. 2. Ubrukte antigen-dekkede mikrobrønnremser skal forsvarlig forsegles på ny i folieposen som inneholder tørkemidlene og oppbevares ved 2-8 C. 3. Fortynnet vaskebuffer er stabil i én uke ved 2-8 C. Innhenting av prøver Denne prosedyren skal utføres med en serumprøve. Tilsetting av azid eller andre konserveringsmidler til testprøvene kan påvirke resultatene. Mikrobielt kontaminerte, varmebehandlede prøver eller prøver som inneholder synlige partikler skal ikke brukes. Sterkt hemolysert eller lipemisk serum eller prøver skal unngås. Etter innhenting skal serumet skilles fra blodklumpen. CLSI (NCCLS) dokument H18-A3 anbefaler følgende oppbevaringsbetingelser for prøver: 1) Ikke oppbevar prøver i romtemperatur lenger enn i 8 timer. 2) Hvis analysen ikke fullføres innen 8 timer, kjøl prøven ned til 2-8 C. 3) Hvis analysen ikke fullføres innen 48 timer, eller ved forsendelse av prøven, frys den ned til -20 C eller lavere. Nedfryste prøver må blandes godt etter tining og før testing. Prosedyre Leverte materialer 1 Gliadin IgG II ELISA-mikrotiter (12-1 x 8 brønner), med holder 1 1,2mL forhåndsfortynnet ELISA negativ kontroll 1 1,2mL forhåndsfortynnet Gliadin IgG II ELISA lav positiv 1 1,2mL forhåndsfortynnet Gliadin IgG II ELISA høy positiv 1 50mL HRP-prøvediluent 1 25mL HRP-vaskekonsentrat, 40x konsentrat 1 10mL HRP IgG-konjugat, (geit), anti-humant IgG - 3 -

4 1 10mL TMB-kromogen 1 10mL HRP-stoppløsning, 0,334M svovelsyre Påkrevd tilleggsutstyr (ikke levert) Mikropipetter for å forsyne 5, 100, og 500µL Engangs mikropipettetips Testrør for pasientprøvefortynninger, 4mL volum Destillert eller deionisert vann 1L beholder for fortynnet HRP-vaskekonsentrat Mikrotiterplateleser som er i stand til å måle OD ved 450nm (og 620nm for dobbel bølgelengdeavlesninger). Metode Før du starter 1. Bring alle reagenser og prøver opp til romtemperatur (20-26 o C) og bland godt. 2. Fortynn HRP-vaskekonsentratet ut (1:40) ved å blande innholdet av HRPvaskekonsentratflasken med 975mL destillert eller deionisert vann. Hvis hele platen ikke skal kjøres i denne perioden, kan du forberede en mindre mengde ved å blande 2,0mL av konsentratet med 78mL destillert eller deionisert vann for hver 16 brønner som skal brukes. Den fortynnede bufferen er stabil i én uke ved 2-8 o C. 3. Gjør klar en oppløsning (1:101) for hver pasientprøve ved å blande 5µL fra prøven med 500µL av HRP-prøvediluent. Fortynnede prøver må brukes innen 8 timer etter klargjøring. IKKE FORTYNN Gliadin IgG II ELISA lav positiv, Gliadin IgG II ELISA høy positiv og ELISA negativ kontroll. 4. Bestemmelse av forekomst eller fravær av gliadin IgG ved hjelp av arbitrære enheter krever to brønner for hver av de tre kontrollene og én eller to brønner for hver pasientprøve. Det anbefales at prøvene kjøres i duplikat. Analyseprosedyre 1. ALLE REAGENSER MÅ BRINGES TIL ROMTEMPERATUR (20-26 C) FØR DU BEGYNNER ANALYSEN. Plasser påkrevd antall av mikrobrønner/remser i holderen. Legg straks tilbake remser som du ikke skal bruke tilbake i posen med tørkemidler og forsegl forsvarlig for å minimalisere eksponering for vanndamp. 2. Tilsett 100µL av forhåndsfortynnet Gliadin IgG II ELISA lav positiv, Gliadin IgG II ELISA høy positiv, ELISA negativ kontroll og de fortynnede pasientprøvene til brønnene. Dekk brønnene og sørg for 30 minutters inkubasjon ved romtemperatur på en vannrett overflate. Inkubasjonstiden begynner etter at siste prøve tilsettes. 3. Vasketrinn: Aspirer innholdet av hver brønn grundig. Tilsett µL av fortynnet HRP-vaskebuffer til alle brønnene og deretter aspirer. Gjenta denne sekvensen to ganger til (totalt tre vasker). Inverter platen og bank på absorberende materiale for å fjerne resterende væske etter siste vask. Det er viktig å tømme hver brønn fullstendig etter hvert vasketrinn. Du opprettholder den samme sekvensen for aspirasjon som den som ble brukt for prøvetilsetning. 4. Tilsett 100μL av HRP-IgG-konjugatet til hver brønn. Konjugatet skal fjernes fra flaskene under standard aseptiske forhold og gode laboratorieteknikker. Bare fjern den koblingsmengden fra flasken som er nødvendig for analysen. DU SKAL ALDRI RETURNERE UBRUKT KONJUGAT TIL FLASKEN FOR Å UNNGÅ POTENSIELL MIKROBIELL OG/ELLER KJEMISK KONTAMINERING. Som i trinn 2, sørg for 30 minutters inkubasjon av brønnene. 5. Vasketrinn: Gjenta trinn

5 6. Tilsett 100µL av TMB-kromogenet til hver brønn og sørg for 30 minutters inkubasjon i mørke ved romtemperatur. 7. Tilsett 100µL av HRP-stoppløsningen til hver brønn. Du opprettholder den samme sekvensen og timing ved tilsetting av HRP-stoppløsning som den som ble brukt for TMBkromogenet. Bank forsiktig på platen med en finger for å blande brønnene grundig. 8. Avles absorbans (OD) fra hver brønn ved 450nm innen én time etter å ha stoppet reaksjonen. Hvis du ønsker bikromatiske målinger, kan du bruke 620nm som referansebølgelengde. Kvalitetskontroll 1. Gliadin IgG II ELISA lav positiv, Gliadin IgG II ELISA høy positiv og ELISA negativ kontroll skal kjøres med hvert oppsetti for å sikre at alle reagenser og prosedyrer fungerer som de skal. 2. Merk at da Gliadin IgG II ELISA lav positiv, Gliadin IgG II ELISA høy positiv og ELISA negativ kontroll er forhåndsfortynnet, kontrollerer de ikke for prosedyremessige metoder tilknyttet fortynning av prøver. 3. Tilleggskontroller kan utføres i henhold til veiledninger eller krav fra lokale, statlige og/eller kommunale myndigheter eller akkrediterte organisasjoner. Egnet tilleggskontrollsera kan forberedes ved å aliquotere innsamlede humane serumprøver og oppbevaring ved < -20 C. 4. Alle kriteriene oppgitt nedenfor må oppfylles for å betrakte testresultatene som gyldige. Hvis noen av disse kravene ikke oppfylles, skal testen betraktes som ugyldig og analysen må gjentas. a. Absorbansen av forhåndsfortynnet Gliadin IgG II ELISA høy positiv må være høyere enn absorbansen til forhåndsfortynnet Gliadin IgG II ELISA lav positiv, og denne må være høyere enn absorbansen til forhåndsfortynnet ELISA negativ kontroll. b. Forhåndsfortynnet Gliadin IgG II ELISA høy positiv må ha en høyere absorbans enn 1,0, mens absorbansen til forhåndsfortynnet ELISA negativ kontroll ikke kan være over 0,2. c. Absorbansen til Gliadin IgG II ELISA lav positiv må være mer enn doble av ELISA negativ kontroll eller over 0,25. d. ELISA negativ kontroll og Gliadin IgG II ELISA høy positiv er ment for å kontrollere for substansiell reagensfeiling. Gliadin IgG II ELISA høy positiv vil ikke sikre presisjon ved analysens cut-off. e. Bruker henvises til CLSI (NCCLS) dokument C24-A3 for videre veiledning for egnet kvalitetskontrollpraksis. Beregning av resultater OD-middelverdien for hvert sett av duplikater bestemmes først. Reaksjonen for hver prøve kan deretter beregnes ved å dele prøvens OD-middelverdi med OD-middelverdien for Gliadin IgG II ELISA lav positiv. Resultatet multipliseres med antall tildelte Gliadin IgG II ELISA lav positiv enheter som står oppgitt på etiketten. Prøve OD Prøveresultat = x Gliadin IgG II ELISA lav positiv (enheter) Gliadin IgG II ELISA lav positiv OD (enheter) Reaksjon er relatert til antistoffmengde fremstilt på ikke-lineært vis. Selv om økninger og minskinger av pasientens antistoffkonsentrasjoner vil gjenspeiles i form av tilsvarende stigning eller fall i reaksjon, er endringen ikke proporsjonal (dvs. en fordobling av antistoffkonsentrasjon - 5 -

6 vil ikke fordoble reaksjonen). Hvis det påkreves en nøyaktigere kvantifisering av pasientens antistoff, skal serielle fortynninger av pasientprøven kjøres og den siste fortynningen som måles positiv i analysen, skal rapporteres som pasientens antistofftiter. Tolkning av resultater ELISA-analysen er meget følsom for teknikk og er i stand til å påvise selv små forskjeller i pasientpopulasjonen. Verdiene som vises nedenfor er bare foreslåtte verdier. Hvert laboratorium bør etablere eget referanseområde basert på egne teknikker, kontroller, utstyr og pasientpopulasjoner i henhold til deres etablerte prosedyrer. Prøven kan da klassifiseres som negativ, svakt positiv, moderat positiv eller sterkt positiv i henhold til tabellen nedenfor. Enheter Negative <20 Svakt positiv Moderat positiv til Sterkt Positiv >30 1. Et positivt resultat indikerer forekomst av gliadin IgG-antistoffer og antyder muligheten for av bestemte glutensensitive enteropatier slik som cøliakisykdommer og dermatitis herpetiformis. 2. Et negativt resultat indikerer ingen forekomst av gliadin IgG-antistoff eller nivåer under analysens cut-off. 3. Det foreslås at resultatene som rapporteres av laboratoriet skal inneholde uttalelsen: Følgende resultater ble fremstilt med INOVA QUANTA Lite TM Gliadin IgG II ELISA. Gliadin IgG-verdier fremstilt med forskjellige fabrikanters analysemetoder kan ikke brukes om hverandre. Størrelsen av rapportert IgG-nivåer kan ikke korreleres til et endepunkttiter. Prosedyrebegrensninger 1. Et negativt gliadin IgA-resultat hos en ubehandlet pasient utelukker ikke glutensensitiv enteropati, spesielt når assosiert med høye nivåer av gliadin IgG-antistoffer. Resultatene kan ofte forklares ved selektiv IgA-mangel, en relativt hyppig forekomst hos cøliakipasienter. 2. Hos behandlede pasienter som er kjent for å ha IgA-antistoffer, gliadin IgA-antistoffnivåer representerer en bedre indikator på diettoverholdelse enn gliadin IgG-antistoffkonsentrasjoner Falsk positive resultater (høye antistoffnivåer uten karakteristiske histologiske resultater) er mulige. Andre gastrointestinale forstyrrelser er kjent for å fremkalle gliadinantistoff i omløp, hovedsakelig Crohns sykdom, matproteinintoleranse (kumelk) og malabsorpsjon etter infeksjon Assosiasjonen mellom deratitis herpetiformis og glutensensitiv enteropati er så sterk at det er blitt foreslått at begge sykdommene har den samme etiologien. Hos disse pasientene, er bestemmelse av gliadinantistoff nyttig for å påvise asymptomatiske cøliaki og estimere alvorlighetsgraden av det gastrointestinale forholdet. 12,13 5. Resultatene til denne analysen bør brukes sammen med kliniske resultater og andre serologiske tester. 6. Prestasjonsegenskapene til analysen har ikke blitt etablert for annet prøvemateriale enn serum

7 Forventede verdier Evnen til QUANTA Lite TM Gliadin IgG II for å påvise gliadin IgG-antistoffer ble evaluert ved sammenlikning med en ELISA-teknikk som brukte hel, naturlig gliadin i faststoffasen istedenfor syntetisk peptid. Normalområde 500 tilfeldige blodgivere ble testet for gliadin IgG-antistoffer. Av disse var 300 av blodgiverne i aldersgruppen 14 til 78 år med lik kjønnfordeling. Tre prøver (0,6%) var over grensen på 20 enheter. Den høyste av disse tre positive prøvene var på 38 enheter. Gjennomsnittsverdien til disse 500 prøvene var 4,5 enheter med standardavvik på 2,6 enheter. Gjennomsnittsverdien er 5 standardavvik under grensen på 20 enheter. Sammenlikningsstudier 113 prøver fra tre cøliakireferanselaboratorier ble testet både på QUANTA Lite TM Gliadin IgG II og et standard gliadin IgG-sett. Disse resultatene pluss de 500 normalprøvene er oppsummert under. Gliadin IgG + - Total Gliadin IgG II - 142* Total Positiv prosent ensstemmelse: 29/171 (17,0%) Negative prosent ensstemmelse: 434/442 (98,2%) Overensstemmelse: 463/613 (75,5%) * 114 av disse 142 ga et falskt som er positiv på den normale gliadin IgG utstyr da de var fra den normale befolkningen gruppen Klinisk sensitivitet og spesifisitet Prøver klinisk definert som enten positive cøliakipasienter, positive cøliakipasienter på glutenfri diett, positive cøliakipasienter på glutenfri diett som er fortsatt endomysium-positive, eller førstegradsslektning til en cøliakipasient ble testet ved hjelp av QUANTA Lite TM Gliadin IgG II og et standard gliadin IgG ELISA-testsett. En oppsummering av de kliniske definerte prøvene pluss normalgruppeprøvene er gitt under. Antall Positive (%) Pasientgrupper (# av pasient) Gliadin IgG (Strøm) Gliadin IgG II Peptide Cøliaki positive (32) 25 (78%) 21 (66%) Cøliaki positive, Glutenfri diett (30) 12 (40%) 5 (17%) Cøliaki positive (5) 4 (80%) 3 (60%) Glutenfri diett EMA positive Førstegradsslektningene (20)* 11 (55%) 0 Cøliaki IgA Mangelfull (5) 5 (100%) 5 (100%) Normalt friske (521) 114 (22%) 3 (0,6%) * Alle 20 av disse førstegradsslektningene var endomysium-negative. Kryssreaksjon - 7 -

8 For å evaluere mulig kryssreaktivitetsproblemer med andre autoantistoffer, ble en rekke sterkt positive prøver med titerautoantistoff kjørt på QUANTA Lite TM Gliadin IgG II-settet. Totalt 45 prøver ble kjørt. Spesifisitetene inkluderte aktin (5), PCNA (1), AMA (1), fibrillerin (1), kromatin (1), histon (4), LKM (4), SS-B (4), Scl-70 (4), RNP (4), RF IgM (4), centromer (4), β2 IgG (2), β2 IgM (1), β2 IgA (1) and GBM (4). Gjennomsnittsverdien av disse 45 prøvene var 5,0 enheter. Den sterkeste prøven, en av aktin-prøvene, var 51 enheter. Denne prøven var også positiv på referansesettet for gliadin IgG. Gjennomsnittsverdien er fire standardavvik under grensen på 20 enheter. Presisjon og reproduserbarhet Intra-analyseprestasjon for QUANTA Lite Gliadin IgG II ble evaluert ved å teste 9 prøver totalt 5 ganger hver. Resultatene er sammenfattet i Tabell 1 under. Tabell 1: Intra-analyseprestasjon av QUANTA Lite Gliadin IgG II Middelenheter 22,4 28,3 52,5 55,5 35,7 59,7 3,7 4,0 3,8 SD 0,9 1,4 2,0 1,7 1,0 2,0 0,3 0,4 0,3 CV % 3,9 5,1 3,9 3,1 2,9 3,4 8,1 10,0 8,4 Inter-analyseprestasjon ble bestemt ved å prøve, i duplikat, et panel av 5 prøver og høy positiv kontroll (HPC) to ganger daglig (en gang om morgenen og en gang om ettermiddagen) i 3 dager. Resultatene er sammenfattet i Tabell 2 under. Tabell 2: Inter-analyseprestasjon av QUANTA Lite Gliadin IgG II HPC A B C D E Middelenheter 110,6 57,0 89,0 113,8 5,2 5,7 SD 4,1 1,9 3,0 3,4 0,3 0,6 CV % 3,7 3,3 3,4 3,0 5,2 9,8-8 -

9 Referanser 1. Trier JS: Celiac Sprue. N Engl J Med 325: , Troncone R and Ferguson A: Antigliadin antibodies. J Pediatr Gastroenterol Nutr 12: , McMillan SA, Haughton DJ, et al.: Predictive value for coeliac disease of antibodies to gliadin, endomysium and jejunum in patients attending for jejunal biopsy. BMJ 303: Lindh E, Ljunghall S, et al.: Screening for antibodies against gliadin in patients with osteoporosis. J Intern Med 241: , Burgin-Wolff A, Gaze H, et al.: Antigliadin and antiendomysium antibody determination for coeliac disease. Arch Dis Child 66: , Working Group of European Society of Paediatric Gastroenterology and Nutrition. Revised criteria for diagnosis of coeliac disease. Arch Dis Child 65: , Osman AA, et al.: B-Cell epitopes of gliadin. Clin Exp Immunol 121: , Aleanzi M, et al.: Celiac disease: Antibody recognition against native and selectively deamidaion gliadin peptides. Clin Chem 47: , Schwertz E, et al.: Serologic assay based on gliadin-related nonapeptides as a highly sensitive and specific diagnostic aid in celiac disease. Clin Chem 50: , Collin P, et al.: Selective IgA deficiency and coeliac disease. Scand J Gastroenterol 27: , Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories: Centers for Disease Control/National Institutes of Health, Fifth Edition, Stober W: Gluten-sensitive enterophy: A nonallergic immune hypersensitivity of the gastrointestinal tract. J. Allergy Clin. Immunol. July , Smecuol E, et al.: Permeability, Zonulin Production, and Enteropathy in Dermatitis Herpetiformis. Clincial Gastroenerology and Hepatology 3: ,2005. Fabrikkert av: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA United States of America Autorisert representant i EU: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Germany Tel.: Fax.: Technical Service NOR November 2007 Rev