QUANTA Lite TM CCP IgG ELISA For In Vitro-diagnostikk CLIA-klassifisering: Høy kompleksitet

Transkript

1 QUANTA Lite TM CCP IgG ELISA For In Vitro-diagnostikk CLIA-klassifisering: Høy kompleksitet Anvendelsesområde QUANTA Lite TM CCP IgG ELISA semikvantitativ enzymkoblet immunsorbent analysefor påvisning av IgG anti-ccp IgG (Syklisk Citrullinert Peptid) i pasient serum. Forekomsten av disse antistoffene når betraktet i sammen med andre laboratorie- og kliniske resultater er en støtte i diagnosen av revmatoid artritt. Sammendrag og forklaring av testen Revmatoid artritt (RA) er én av de vanligste systemiske autoimmune sykdommene. Etiologien til denne sykdommen er ukjent. Cirka 0,5% av verdens befolkning rammes og dobbelt så mange kvinner i forhold til menn får denne sykdommen. 1 Diagnosen av RA er primært avhengig av sykdommens kliniske manifestasjoner. Helt inntil nylig var den eneste serologiske testen som ble brukt rutinemessig, bestemmelsen av forekomst av revmatoid faktor (RF) i serumet. RF er antistoff rettet mot Fc-regionen til immunglobuliner av IgG-klassen. RF kan være av IgM, IgG og IgA-immunglobulinklassene. Forekomsten av IgM RF er et kjennetegn på RA som finnes hos cirka 50-90% av disse pasientene. 1,2 IgM RF finnes imidlertid hos mennesker med infeksjoner, andre autoimmune sykdommer og hos relativt friske individer. 1,2 IgG RF er mindre sensitiv, men mer spesifikk for RA enn IgM RF. 2 Det er viktig for sykdomsbehandlingen å diagnostisere og behandle mennesker med RA så tidlig som mulig. 3 Det har vært kjent i en årrekke nå at anti-perinukleære autoantistoffer, også kalt antikeratin, finnes hos mennesker med RA. 4,5 Det ble nylig oppdaget at disse autoantistoffene gjenkjenner en epitop som inneholder den deiminerte formen av arginin, kalt citrullin. 6 Et syntetisk sirkulær peptid som inneholder citrullin kalt CCP IgG (syklisk citrullinert peptid) viste seg å være bedre for å skille RApasienter fra andre pasienter enn både den perinukleære autoantistofftesten og testen for revmatoid faktor I utgitt faglitteratur er cirka 70% av pasientene med RA positive for anti-ccp IgG, mens bare rundt 2% av tilfeldige blodgivere og individer som avlegger prøve for sykdomskontroll er positive. En nylig studie fant citrullinerte proteiner i leddene til pasientene med RA, men ikke i leddene til mennesker med andre former for leddsykdommer. 12 Disse resultatene gir en teoretisk basis for forekomsten av anti- CCP IgG hos RA-pasienter og en mulig patogenisk rolle for disse antistoffene. Prosedyreprinsipper Antigenet brukt i QUANTA Lite CCP IgG ELISA-testen er et syntetisk syklisk citrullinert peptid som viste seg å ha høy sensitivitet og spesifisitet ved påvisning av antistoffer hos pasienter med RA. Dette antigenet bindes til overflaten på en mikrotiterplate. Forhåndsfortynnede kontroller og fortynnet pasientserum blandes i separate brønner slik at tilstedeværende CCP IgG-antistoff bindes til det immobiliserte antigenet. Ubundet prøve vaskes vekk og et enzym-merket anti-human IgG-konjugat tilsettes hver brønn. En andre inkubasjon gjør det mulig for det enzym-merkede anti-humane IgGantistoffet å binde seg til pasientens antistoff som har festet seg på mikrobrønnene. Etter å ha vasket bort enzym-merket anti-humant IgG-antistoff som ikke har festet seg, måles gjenværende enzymaktivtet ved å tilsette et substrat og fargeutviklingen måles. Analysen kan avleses spektrofotometrisk ved å måle og sammenlikne fargeintensiteten som utvikles i pasientbrønnene med fargen i kontrollbrønnene. Reagenser 1. Mikrotiter ELISA-plate av polystyren dekket med renset syntetiskccp IgG-antigen (12-1 x 8 brønner), med holder i foliepakning inneholdende tørkemidler 2. ELISA negativ kontroll, 1 bufret ampulle som inneholder konserveringsmiddel og humant serum uten ikke-humane antistoffer mot CCP IgG, forhåndsfortynnet, 1,2mL 3. CCP IgG ELISA lav positiv, 1 bufret ampulle som inneholder konserveringsmiddel og humant serum med ikke-humane antistoff mot CCP IgG, forhåndsfortynnet, 1,2mL - 1 -

2 4. CCP IgG ELISA høy positiv (Kalibrator A), 1 bufret ampulle som inneholder konserveringsmiddel og humant serum med antistoff mot CCP IgG, forhåndsfortynnet, 1,2mL 5. CCP IgG ELISA Kalibrator B, 1 bufret ampulle som inneholder konserveringsmiddel og humant serum antistoff mot CCP IgG, forhåndsfortynnet, 1,2mL 6. CCP IgG ELISA Kalibrator C, 1 bufret ampulle som inneholder konserveringsmiddel og humant serum antistoff mot t CCP IgG, forhåndsfortynnet, 1,2mL 7. CCP IgG ELISA Kalibrator D, 1 bufret ampulle som inneholder konserveringsmiddel og humant serum antistoff mot CCP IgG, forhåndsfortynnet, 1,2mL 8. CCP IgG ELISA Kalibrator E, 1 bufret ampulle som inneholder konserveringsmiddel og humant serum antistoff mot CCP IgG, forhåndsfortynnet, 1,2mL 9. HRP prøve prøvediluent, 1 ampulle rosafarget som inneholder fosfatbufret saltvann, Tween 20, proteinstabilisatorer og konserveringsmiddel, 50mL 10. HRP vaskekonsentrat, 1 ampulle med 40x konsentrat rødfarget som inneholder fosfatbufret saltvann og Tween 20, 25mL Se metodeavsnittet for veiledning om fortynning. 11. HRP IgG-konjugat, (geit), anti-humant IgG, 1 ampulle blåfarget som inneholder buffer, proteinstabilisatorer og konserveringsmiddel, 10mL 12. TMB-kromogen, 1 ampulle som inneholder stabilisatorer, 10mL 13. HRP stoppløsning, 0,344M svovelsyre, 1 ampulle fargeløs, 10mL Advarsler 1. ADVARSEL: Dette produktet inneholder et kjemikalie (0,02% kloramfenikol) i prøvediluenten, kontrollene og konjugat antatt som kreftfremkallende i staten California. 2. Alt materiale fra menneskekilder brukt i preparatet til kontroller for dette produktet har blitt testet og funnet negativ for antistoff mot HIV, HBsAg og HCV av metoder klarert av det amerikanske helsetilsynet (FDA). Imidlertid kan ingen testmetode gi fullstendig sikkerhet om at HIV, HBV, HCV eller andre agens er fraværende. Derfor skal CCP IgG ELISA lav positiv, CCP IgG ELISA høy positiv og ELISA negativ kontroll behandles på samme måte som potensielt smittefarlig materiale Natriumazid brukes som konserveringsmiddel. Natriumazid er en gift og kan være giftig ved svelging eller ved opptak gjennom huden eller via øynene. Natriumazid kan reagere med blyeller kobberrør og danne potensielt eksplosive metallazider. Bruk rikelig med vann i vaskene, hvis de brukes for avfallshåndtering av reagenser, for å forhindre oppsamling av azider. 4. HRP-konjugatet inneholder et fortynnet giftig/korrosivt kjemikalie som kan være giftig ved svelging av store mengder. Unngå hud- og øyenkontakt for å forhindre mulig kjemisk forbrenning. 5. TMB-kromogenet inneholder et kjemikalie som kan være skadelig ved inhalering, svelging eller opptak gjennom huden. Unngå inhalering, svelging eller hud- og øyenkontakt for å forhindre skader. 6. HRP-stoppløsningen inneholder en fortynnet svovelsyreoppløsning. Unngå eksponering av baser, metaller eller andre forbindelser som kan reagere med syrer. Svovelsyre er giftig og korrosiv og kan være giftig ved svelging. Unngå hud- og øyenkontakt for å forhindre mulig kjemisk forbrenning. 7. Bruk egnet personlig verneutstyr når du arbeider med reagensene som er levert. 8. Dersom du søler reagenser skal disse straks vaskes bort. Du skal være oppmerksom på alle kommunale, statlige og lokale miljøbestemmelser ved avfallsbehandling. Forholdsregler 1. Dette produktet brukes for in vitro-diagnostikk. 2. Utbytting av komponenter andre enn de som leveres med dette systemet kan føre til inkonsistente resultater. 3. Ufullstendig eller ineffektiv vasking og utilstrekkelig væskefjerning fra ELISA-brønnremsene vil forårsake dårlig presisjon og/eller høy bakgrunn. 4. Tilpassing av denne analysen for bruk sammen med, helt eller delvis, automatiske prøveprosessorer eller andre væskebehandlingsapparater, kan gi avvikende testresultater i forhold til de som utføres ved hjelp av manuell prosedyre. Det er hvert enkelt laboratoriums ansvar å stadfeste at deres automatiske prosedyre gir testresultater innenfor akseptable grenser

3 5. En rekke faktorer påvirker analyseprestasjonene. Herunder inkluderes starttemperaturen til reagensene, lufttemperaturen, pipetteteknikkens nøyaktighet og reproduserbarhet, hvor grundig det er vasket og fjernet væske fra brønnen til ELISA-remsen, fotometeret som er brukt til å måle resultatene og inkubasjonstidenes varighet under analysen. Det er nødvendig med konsistens for å oppnå nøyaktige og reproduserbare resultater. 6. Det anbefales at man holder seg strengt innenfor rammene til protokollen. 7. Ufullstendig forsegling av glidelåsen til posen som inneholder mikrobrønnremsene og tørkemidlene vil resultere i degradasjon av antigen og dårlig presisjon. 8. Uakseptabelt lave sbsorbanser kan observeres etter to eller flere bruk fra én enkel flaske med HRP-konjugat over en tidsperiode. Det er viktig å følge alle anbefalte behandlingsprosedyrer for HRP-konjugatet for å forhindre at dette oppstår. 9. Kjemisk kontaminasjon av HRP-konjugatet kan forårsakes av ufullstendig rengjøring eller skylling av utstyr eller instrumenter. Avfall fra vanlige laboratoriekjemikalier slik som formalin, blekemiddel, etanol eller vaskemiddel vil forårsake degradasjon av HRP-konjugatet over tid. Skyll alt utstyret og alle instrumentene grundig etter bruk av kjemiske rengjørings- og desinfeksjonsmidler. Oppbevaringsbetingelser 1. Lagre alle reagensene i kitet ved 2-8 C. Ikke frys. Reagensene er stabile helt til de går ut på dato hvis de oppbevares og behandles på foreskriftsmessig vis. 2. Ubrukte antigen-dekkede mikrobrønnremser skal forsvarlig forsegles på ny i folieposen som inneholder tørkemidlene og oppbevares ved 2-8 C. 3. Fortynnet vaskebuffer er stabil i én uke ved 2-8 C. Innhenting av prøver Denne prosedyren skal utføres med en serumprøve. Tilsetting av azid eller andre konserveringsmidler til testprøvene kan påvirke resultatene negativt. Mikrobielt kontaminerte, varmebehandlede prøver eller prøver som inneholder synlige partikler skal ikke brukes. Sterkt hemolysert eller lipemisk serum eller prøver skal unngås. Etter innhenting skal serumet skilles fra blodklumpen. CLSI (NCCLS) dokument H18-A3 anbefaler følgende oppbevaringsbetingelser for prøver: 1) Ikke oppbevar prøver i romtemperatur lenger enn i 8 timer. 2) Hvis analysen ikke fullføres innen 8 timer, kjøl prøven ned til 2-8 C. 3) Hvis analysen ikke fullføres innen 48 timer, eller ved forsendelse av prøven, frys den ned til -20 C eller lavere. Nedfryste prøver må blandes godt etter tining og før testing. Prosedyre Leverte materialer 1 CCP IgG ELISA-mikrotiterplate (12-1 x 8 brønner), med holder 1 1,2mL forhåndsfortynnet ELISA negativ kontroll 1 1,2mL forhåndsfortynnet CCP IgG ELISA lav positiv 1 1,2mL forhåndsfortynnet CCP IgG ELISA høy positiv (Kalibrator A) 1 1,2mL forhåndsfortynnet CCP IgG ELISA Kalibrator B 1 1,2mL forhåndsfortynnet CCP IgG ELISA Kalibrator C 1 1,2mL forhåndsfortynnet CCP IgG ELISA Kalibrator D 1 1,2mL forhåndsfortynnet CCP IgG ELISA Kalibrator E 1 50mL HRP-prøvediluent 1 25mL HRP-vaskekonsentrat, 40x konsentrat 1 10mL HRP IgG-konjugat, (geit), anti-humant IgG 1 10mL TMB-kromogen 1 10mL HRP-stoppløsning, 0,334M svovelsyre - 3 -

4 Påkrevd tilleggsutstyr (ikke levert) Mikropipetter for å forsyne 5, 100, og 500µL Engangs mikropipettetips Testrør for pasientprøvefortynninger, 4mL volum Destillert eller deionisert vann 1L beholder for fortynnet HRP-vaskekonsentrat Mikrotiterplateleser som er i stand til å måle OD ved 450nm (og 620nm for dobbel bølgelengdeavlesninger) Metode Før du starter 1. Bring alle reagenser og prøver opp til romtemperatur (20-26 o C) og bland godt. 2. Fortynn HRP-vaskekonsentratet ut (1:40) ved å blande innholdet av HRP-vaskekonsentratflasken med 975mL destillert eller deionisert vann. Hvis hele platen ikke skal kjøres i denne perioden, kan du forberede en mindre mengde ved å blande 2,0mL av konsentratet med 78mL destillert eller deionisert vann for hver 16 brønner som skal brukes. Den fortynnede bufferen er stabil i én uke ved 2-8 o C. 3. Gjør klar en oppløsning (1:101) for hver pasientprøve ved å blande 5µL fra prøven med 500µL av HRP-prøvediluent. Fortynnede prøver må brukes innen 8 timer etter klargjøring. IKKE FORTYNN CCP IgG ELISA lav positiv, CCP IgG ELISA høy positiv, og ELISA negativ kontroll. 4. Bestemmelse av forekomst eller fravær av anti-ccp IgG antisoffer ved hjelp av arbitrære enheter krever to brønner for hver av de tre kontrollene og én eller to brønner for hver pasientprøve. Det anbefales at prøvene kjøres i duplikat. 5. Hvis ønsket, kan resultatene utgis i kvantifiserte bruk et fempunktsstandardkurve. For peker A gjennom E av det en fempunktsstandardkurve, bruk FORHÅNDSFORTYNNET CCP IgG Kalibratorene A til E direkte fra ampullen. Fempunktsstandardkurven har følgende verdier: Punkt Enheter A Forhåndsfortynnet CCP IgG Kalibrator A 250,0 B Forhåndsfortynnet CCP IgG Kalibrator B 125,0 C Forhåndsfortynnet CCP IgG Kalibrator C 62,5 D Forhåndsfortynnet CCP IgG Kalibrator D 31,25 E Forhåndsfortynnet CCP IgG Kalibrator E 15,62 Analyseprosedyre 1. ALLE REAGENSER MÅ BRINGES OPP TIL ROMTEMPERATUR (20-26 C) FØR DU BEGYNNER ANALYSEN. Plasser påkrevd antall av mikrobrønner/remser i holderen. Legg straks tilbake remser som du ikke skal bruke tilbake i posen med tørkemidler og forsegl forsvarlig for å minimalisere eksponering for vanndamp. 2. Tilsett 100µL av forhåndsfortynnet CCP IgG ELISA lav positiv, CCP IgG ELISA høy positiv, Kalibratorene fra B til E hvis ønsket, ELISA negativ kontroll og fortynnet pasientprøve til brønnene. Dekk brønnene og sørg for 30 minutters inkubasjon ved romtemperatur på en vannrett overflate. Inkubasjonstiden begynner etter at siste prøve tilsettes. 3. Vasketrinn: Aspirer innholdet av hver brønn grundig. Tilsett µL av fortynnet HRPvaskebuffer til alle brønnene og deretter aspirer. Gjenta denne sekvensen to ganger til (totalt tre vasker). Inverter platen og bank på absorberende materiale for å fjerne resterende væske etter siste vask. Det er viktig å tømme hver brønn fullstendig etter hvert vasketrinn. Du opprettholder den samme sekvensen for aspirasjon som den som ble brukt for prøvetilsetning. 4. Tilsett 100μl av HRP-IgG-konjugatet til hver brønn. Konjugatet skal fjernes fra flaskene under standard aseptiske forhold og gode laboratorieteknikker. Bare fjern den koblingsmengden fra flasken som er nødvendig for analysen. DU SKAL ALDRI RETURNERE UBRUKT KONJUGAT TIL FLASKEN FOR Å UNNGÅ POTENSIELL MIKROBIELL OG/ELLER KJEMISK KONTAMINERING. Som i trinn 2, sørg for 30 minutters inkubasjon av brønnene. 5. Vasketrinn: Gjenta trinn

5 6. Tilsett 100µL av TMB-kromogenet til hver brønn og sørg for 30 minutters inkubasjon i mørke ved romtemperatur. 7. Tilsett 100µL av HRP-stoppløsningen til hver brønn. Du opprettholder den samme sekvensen og timing ved tilsetting av HRP-stoppløsning som den som ble brukt for TMB-kromogenet. Bank forsiktig på platen med en finger for å blande brønnene grundig. 8. Avles absorbans (OD) fra hver brønn ved 450nm innen én time etter å ha stoppet reaksjonen. Hvis du ønsker bikromatiske målinger, kan du bruke 620nm som referansebølgelengde. Kvalitetskontroll 1. CCP IgG ELISA lav positiv, CCP IgG ELISA høy positiv og ELISA negativ kontroll skal kjøres med hvert oppsetti for å sikre at alle reagenser og prosedyrer fungerer som de skal. 2. Merk at da CCP IgG ELISA lav positiv, CCP IgG ELISA høy positiv og ELISA negativ kontroll er forhåndsfortynnet, kontrollerer de ikke for prosedyremessige metoder tilknyttet fortynning av prøver. 3. Tilleggskontroller kan utføres i henhold til veiledninger eller krav fra lokale, statlige og/eller kommunale myndigheter eller akkrediterte organisasjoner. Egnet tilleggskontrollsera kan forberedes ved å aliquotere innsamlede humane serumprøver og oppbevaring ved < -20 C. 4. Alle kriteriene oppgitt nedenfor må oppfylles for å betrakte testresultatene som gyldige. Hvis noen av disse kravene ikke oppfylles, skal testen betraktes som ugyldig og analysen må gjentas. a. Absorbansen av forhåndsfortynnet CCP IgG ELISA høy positiv må være høyere enn absorbansen til forhåndsfortynnet CCP IgG ELISA lav positiv, og denne må være høyere enn absorbansen til forhåndsfortynnet ELISA negativ kontroll. b. Forhåndsfortynnet CCP IgG ELISA høy positiv må ha en høyere OD-middelverdi enn 1,0 mens absorbansen til forhåndsfortynnet ELISA negativ kontroll ikke kan være over 0,2. c. Absorbansen til CCP IgG ELISA lav positiv må være mer enn doble av ELISA negativ kontroll eller over 0,25. d. ELISA negativ kontroll og CCP IgG ELISA høy positiv er ment for å kontrollere for substansiell reagensfeiling. CCP IgG ELISA høy positiv vil ikke sikre presisjon ved analysens cut-off. e. Bruker henvises til CLSI (NCCLS) dokument C24-A3 for videre veiledning for egnet kvalitetskontrollpraksis. Beregning av semikvantitative resultater - forholdsmetoden OD-middelverdien for hvert sett av duplikater bestemmes først. Reaksjonen for hver prøve kan deretter beregnes ved å dele prøvens OD-middelverdi med OD-middelverdien for CCP IgG ELISA lav positiv. Resultatet multipliseres med antall tildelte CCP IgG ELISA lav positive enheter som står på etiketten. Prøve OD Prøveresultat = x CCP IgG ELISA lav positiv (enheter) CCP IgG ELISA lav positiv OD (enheter) Reaksjon er relatert til antistoffmengde fremstilt på ikke-lineært vis. Selv om økninger og minskinger av pasientens antistoffkonsentrasjoner vil gjenspeiles i form av tilsvarende stigning eller fall i reaksjon, er endringen ikke proporsjonal (dvs. en fordobling av antistoffkonsentrasjon vil ikke fordoble reaksjonen). Alternativ metode for beregning: semikvantitative resultater ved bruk av en standardkurve Beregning av resultater med den alternative standardkurven 1. Bestem en gjennomsnittsverdi for alle duplikatavlesningene. 2. Plott gjennomsnittsabsorbansen (OD) til prøvene i standardkurven mot verdiene deres i enheter. Bruk en lineær/lineær tredimensjonal spline (tredjegrads eller polynom) eller punkt til punkttilpasning av linjen for å trekke kurven. 3. Bestem den ukjente CCP IgG-konsentrasjonen i enheter fra Y-aksen ved å avlese tilsvarende absorbans på X-aksen. Beregn de ukjente enhetene

6 4. Merknad: Verdiene beregnet med forholdsmetoden vil være forskjellige fra de som beregnes ved hjelp av standardkurven. Høye verdier vil variere mer enn lavere verdier. CCP IgG sterkt positiv vil ikke produsere en verdi på 250 enheter med forholdsmetoden. Tolkning av resultater ELISA-analysen er meget følsom for teknikk og er i stand til å påvise selv små forskjeller i pasientpopulasjonen. Verdiene som vises nedenfor er bare foreslåtte verdier. Hvert laboratorium bør etablere eget referanseområde basert på egne teknikker, kontroller, utstyr og pasientpopulasjoner i henhold til deres etablerte prosedyrer. Prøven kan da klassifiseres som negativ, svakt positiv, moderat positiv eller sterkt positiv i henhold til tabellen nedenfor. Enheter Negative <20 Svakt positiv Moderat positiv Sterkt positiv > Et positivt resultat indikerer forekomst av CCP IgG-antistoffer og antyder muligheten av RA. 2. Et negativt resultat indikerer ingen forekomst av CCP IgG-antistoff eller nivåer under analysens cut-off. 3. Det foreslås at resultatene som rapporteres av laboratoriet skal inneholde uttalelsen: Følgende resultater ble fremstilt med INOVA QUANTA Lite TM CCP IgG ELISA. CCP IgG-verdier fremstilt med forskjellige fabrikanters analysemetoder kan ikke brukes om hverandre. Størrelsen av rapporterte IgG-nivåer kan ikke korreleres til et endepunkttiter. Prosedyrebegrensninger 1. Forekomsten av immunkomplekser eller andre immunglobulinaggregater i pasientprøven kan forårsake et forhøyet nivå av ikke-spesifikk binding og produsere feilaktige positive analyseresultater. 2. Ikke alle RA-pasienter er positive for CCP IgG-antistoffer. 3. Resultatene til denne analysen bør brukes sammen med kliniske resultater og andre serologiske tester. 4. Prestasjonsegenskapene til analysen har ikke blitt etablert for annet prøvemateriale enn serum. 5. Den diagnostiske verdien av anti-ccp IgG hos unge revmatoid artrittpasienter er ikke fastlagt. Forventede verdier Even til QUANTA Lite TM CCP IgG ELISA for å påvise IgG CCP IgG-antistoffer ble evaluert ved sammenlikning av en ELISA som måler IgG RF i tillegg til å måle anti-ccp IgG hos pasienter med klinisk diagnose av RA eller andre systemiske autoimmune sykdommer i to eksterne kliniske vurderinger og en omfattende intern studie. Normalområde Totalt 216 prøver (118 kvinner og 98 menn, gjennomsnittsalder 39) fra tilfeldig utvalgte blodgivere med testet. To (1%) av prøvene var positive for anti-ccp IgG. En var sterkt anti-ccp IgG-positiv og også sterkt positiv for IgG RF, en spesifikk markør for RA. Den andre var en svak positiv prøve på bare 21 enheter. Kliniske sensitivitet og spesifisitet Følgende tabell oppsummerer resultatene til alle våre kliniske studier. RA-pasienter ble diagnostisert basert på ARA-kriteriene 14 og etter beste skjønn til behandlende revmatolog. Oppsummering av kliniske resultater - 6 -

7 Pasientgrupper CCP IgG ELISA CCP IgG ELISA No. No. >20 Enheter (%) No. >40 Enheter (%) Tilfeldig utvalgte blodgivere 216 2* (1%) 1 (0,5%) Revmatoid Artritt (76%) 158 (63%) Revmatoid Artritt RF (90%) 142 (78%) Revmatoid Artritt RF (40%) 16 (23%) Revmatiske Sykdommer (9%) 16 (5%) SLE *(10%) 3 (3%) Skleroderma 86 10* (12%) 7 (8%) Sjøgren's Syndrom 38 0 (0%) 0 (0%) Annen revmatiske sykdommer 109 9* (8%) 6 (6%) Kryoglobulinemi 29 2 (7%) 1 (3%) Infeksjonssykdommer 87 2 (2%) 1 (1%) Annen pasientene 29 1 (3%) 0 (0%) * Noen av prøvene som var positive for CCP IgG-antistoffer var også positive for IgG RF, en annen antistoffmarkør for RA. Disse inkluderte én blodgiver, to SLE-pasienter, fire sklerodermi-pasienter og tre av pasientene med andre revmatiske sykdommer. Kryssreaksjoner QUANTA Lite CCP IgG ELISA ble evaluert med 22 prøver som alle hadde høye nivåer av forskjellige andre autoantistoffer for å vurdere potensiell kryssreaktivitet til CCP IgG-antigenet mot andre autoantistoffer. Inkludert i denne gruppen var 2 prøver som hver hadde reagert med SS-A, SS-B, Sm, RNP, Scl-70, Jo-1, TPO, Ribo-P, M2, kromatin og DNA. Alle prøvene var negative for anti-ccp IgG. Studien ovenfor viser ingen signifikant kryssreaktivitet for QUANTA Lite CCP IgG ELISA mot en hel rekke andre autoantistoffer. Presisjon og reproduserbarhet Mellom-serie variasjonen ble målt av å kjøre duplikater av negavite, lav positiv, moderat positiv og sterkt positiv prøver i 6 seperate assays på 6 forskjellige dager. Variasjon innenfor serien ble målt ved å kjøre 5 prøver 9 ganger hver på den samme ELISA-platen. Representative resultater vises under. Variasjon mellom seriene Neg. 1 Neg. 2 Lav 1 Lav 2 Mod. 1 Mod. 2 Høy 1 Høy 2 Middel 2,5 U 2,1 U 21 U 31 U 42 U 47 U 103 U 168 U SD 0,3 0,1 1,2 1,7 2,6 3,1 5,6 12 CV% 11% 7% 6% 6% 6% 7% 5% 7% Variasjon Innen seriene Neg. 1 Mod. 1 Høy 1 Høy 2 Høy 3 Middel 2 U 52 U 107 U 109 U 175 U SD 25 4,5 5,4 4,2 4,9 CV% 11% 9% 5% 4% 3% Når en svak positiv prøve ble kjørt 45 ganger på en enkel plate varcv 6%

8 Referanser 1. Wener MH: Rheumatoid Factors. Manual of Clinical Laboratory Immunology, Rose NR et al, eds, American Society for Microbiology Press, (2002). 2. Borretzen M, et al: Rheumatoid Factors. Autoantibodies, Peter JB and Y Shoenfeld, eds, Elsevier Science B.V., (1996). 3. Kim JK and MH Weisman: When does rheumatoid arthritis begin and why do we need to know? Arthritis Rheum 43: (2000). 4. Vincent C, et al: Immunoblotting detection of autoantibodies to human epidermis filaggrin: a new diagnostic test for rheumatoid arthritis. J Rheumatol 25: (1998). 5. Serre G, et al: Filaggrin (keratin) autoantibodies. Autoantibodies, Peter JB and Y Shoenfeld, eds, Elsevier Science B.V., (1996). 6. Van Venrooj WJ: Citrullination: a small change for a protein with great consequences for rheumatoid arthritis. Arthritis Res 2: (2000). 7. Schellekens GA, et al: The diagnostic properties of rheumatoid arthritis antibodies recognizing a cyclic citrullinated peptide. Arthritis Rheum 43: (2000). 8. van Jaarsveld CHM, et al: The prognostic value of the antiperinuclear factor, anti-citrullinated peptide antibodies and rheumatoid factor in early arthritis. Clin Exp Rheum 17: (1999). 9. Bizzaro N, et al: Diagnostic accuracy of the anti-citrulline antibody assay for rheumatoid arthritis. Clin Chem 47: (2001). 10. Kroot E-JJA, et al: The prognostic value of anti-cyclic citrullinated peptide antibody in patients with recent-onset rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum 43: (2000). 11. Combe B, et al: Prognostic factors for radiographic damage in early rheumatoid arthritis: a multiparameter prospective study. Arthritis Rheum 44: (2001). 12. Baeten D, et al: Specific presence of intracellular citrullinated proteins in rheumatoid arthritis synovium. Arthritis Rheum 44: (2001). 13. Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories: Centers for Disease Control/National Institutes of Health, Fifth Edition, Arnett FC, et al: The American Rheumatism Association 1987 revised criteria for the classification of rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum 31: (1988). Fabrikkert av: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA United States of America Autorisert representant i EU: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Germany Tel.: Fax.: Technical Service NOR November 2007 Rev