NOVA Lite ANCA An t i -neutrophil Cytoplasmic Autoantibody Reagents For In Vitro-diagnostikk

Transkript

1 NOVA Lite ANCA An t i -neutrophil Cytoplasmic Autoantibody Reagents For In Vitro-diagnostikk ProdutKode: , , , , , , CLIA-klassifisering: Høy kompleksitet Anvendelsesområde NOVA Lite ANCA er en indirekte immunfluorescensanalyse for screenings- og semikvantitativ bestemmelse av antinøytrofile-cytoplasmatiske-antistoffer (ANCA) i humant serum. Forekomsten av antinøytrofile-cytoplasmatiske-antistoffer kan brukes sammen med andre serologiske tester og kliniske fun til hjelp i vurderingen av flere systemiske vaskulitter. Sammendrag og forklaring av testen Antinøytrofil-cytoplasmatisk-antistoff (ANCA) -testing har revolusjonert diagnosen og behandlingen av forskjellige autoimmune formidlede vaskulitter. 1-4 Perinukleære eller panca og cytoplasmatiske eller canca-autoantistoffene har vist seg å være nyttige for påvisning av sykdommer slik som Wegeners granulomatose (WG) og crescentic glomerulonefritt. Det er identifisert minst seks ANCA-antigener, men mange er fremdeles ikke identifisert. 1,5 Flesteparten av disse antigenene synes å være enzymer som holder sted i de primære nøytrofilgranulene. Disse enzymene inkluderer myeloperoksidase (MPO), serin protease 3 (PR3), elastase, laktoferrin, cathepsin G og kationisk protein 57 (CAP-57). ELISA-tester har blitt utviklet for påvisning av mange av de viktigere nøytrofile antistoffene, selv om flesteparten av ekspertene på feltet autoimmun vaskulitt fortsatt anbefaler å bruke immunfluorescensanalyse (IFA) metoden for innledende screening. To ANCA-mønstre er påvisbare ved hjelp av standard ANCA IFA-prosedyren. Det tradisjonelle ANCAmønsteret fremstår som en kornet, cytoplasmafluorescens. Dette mønsteret, som antyder Wegeners granulomatose og, i mindre grad, mikroskopisk polyarteritt, har blitt betegnet canca. 6 Et annet ANCAmønster har blitt beskrevet og dette fargelegger den perinukleære regionen til alkohol-fikserte nøytrofile celler. Dette mønsteret har blitt betegnet panca. panca-mønsteret har blitt assosiert med en mer organbegrenset vaskulitt, nærmere bestemt, crescentic eller hurtig utviklende glomerulonefritt. 9 Korrelasjonen til canca og Wegeners granulomatose er veletablert. 3,10 Wegeners granulomatose er karakterisert av en nekrotiserende betennelsesprosess med granulomdannelse og vaskulitt som hovedsakelig involverer det øvre og nedre del av respirasjonssystemet og nyrene. Disse tre kliniske forhold betraktes som kjennetegnet på Wegeners granulomatose. canca forekommer hos opp til 96% av pasienter med Wegeners granulomatose med generalisert aktiv sykdom, men minker til 65% hos pasienter med begrenset utslag av sykdommen og forekommer hos 30-40% av pasienter med tilbakegående sykdom. Titrert til canca vil også følge sykdomsforløpet med minkende titere når sykdommen går tilbake og økende titere ved tilbakefall. 4,12 I motsetning til canca og dets assosiasjon med den dominerende systemiske sykdommen Wegeners granulomatose, har panca ofte blitt assosiert med nekrotiserende glomerulonefritt. panca er typisk ikke sett hos pasienter med systemiske syndromer. Det mest vanlige målantigenet assosiert med panca er myeloperoksidase, men reaktivitet mot elastase og laktoferrin er også påvist. Nesten 90% av panca-positive sera fra pasienter med glomerulonefritt er reaktive med myeloperoksidase. Hos pasienter med sykdommer andre enn glomerulonefritt som også har panca, er imidlertid en mye lavere prosentandel reaktiv med myeloperoksidase. 11,13 Dette kunne indikere at flere antigener er påvisbare som perinukleær fargelegging av etanol-fikserte nøytrofile celler, inkludert sera som inneholder antinukleære antistoffer. Det er mulig å bekrefte perinukleære mønstre påvist med etanol-fikserte nøytrofile celler som panca ved å utføre IFA-testen på formalin-fikserte nøytrofiler. Primært målantigen til panca, myeloperoksidase, forblir i cytoplasmaet av formalin-fikserte celler, mens i etanol-fikserte celler migrerer antigenet til kjernen og forårsaker det perinukleære mønsteret. Prosedyreprinsipper I den indirekte immunfluorescerende teknikken, inkuberes prøver med et antigensubstrat og antistoffer som ikke reagerer, vaskes bort. Substratet inkuberes med spesifikk fluorescein-merket løsning og reagenter som ikke bindes, vaskes bort. Ved å se gjennom et fluorescensmikroskop vil positive prøver for autoantistoff utvise en eplegrønn fluorescens tilsvarende de områdene av cellen eller kjerner hvor autoantistoffer har bundet seg. Reagenser 1. ANCA Slides, etanol-fikserte human nøytrofil substrat slides, 6 eller 12 brønner/slide med tørkemiddel - 1 -

2 Kitet Bare 2. Antihumant IgG-løsning (geit), fluorscein-merket i buffer som inneholder Evans blue og 0,09% natriumazid 3. canca Positive, en ampulle med buffer som inneholder 0,09% natriumazid og humant serumantistoffer mot canca antigenet, forhåndsfortynnet 4. panca Positive, en ampulle med buffer som inneholder 0,09% natriumazid og humant serumantistoffer mot panca antigenet, forhåndsfortynnet 5. IFA System Negative Control, en ampulle med buffer som inneholder 0,09% natriumazid og humant serum-antistoffer mot ANCA, forhåndsfortynnet 6. PBS II-konsentrat (40x) 7. Mounting medium, 0,09% natriumazid 8. Dekkglass Advarsler 1. Alt materiale fra menneskekilder brukt i preparatet til kontroller for dette produktet har blitt testet og funnet negativ for antistoff mot HIV, HBsAg og HCV av metoder klarert av det amerikanske helsetilsynet (FDA). Imidlertid kan ingen testmetode gi fullstendig sikkerhet om at HIV, HBV, HCV eller andre smittsomme agens er fraværende. Derfor skal panca Positive, canca Positive og IFA System Negative Control behandles på samme måte som potensielt smittsomt materiale Natriumazid brukes som konserveringsmiddel. Natriumazid er en gift og kan være giftig ved svelging eller ved opptak gjennom huden eller via øynene. Natriumazid kan reagere med blyeller kobberrør og danne potensielt eksplosive metallazider. Bruk rikelig med vann i vaskene, hvis de brukes for avfallshåndtering av reagenser, for å forhindre oppsamling av azider. 3. Bruk egnet personlig verneutstyr når du arbeider med reagensene som er levert. 4. Dersom du søler reagenser skal disse straks vaskes bort. Du skal være oppmerksom på alle kommunale, statlige og lokale miljøbestemmelser ved avfallsbehandling. Forholdsregler 1. Dette produktet brukes for in vitro-diagnostikk. 2. Utbytting av komponenter andre enn de som leveres med dette systemet kan føre til inkonsistente resultater. 3. Ufullstendig eller ineffektiv vasking og IFA brønners kan forårsake en høy bakgrunn. 4. Tilpassing av denne analysen for bruk sammen med, helt eller delvis, automatiske prøveprosessorer eller andre væskebehandlingsapparater, kan gi avvikende testresultater i forhold til de som utføres ved hjelp av manuell prosedyre. Det er hvert enkelt laboratoriums ansvar å stadfeste at deres automatiske prosedyre gir testresultater innenfor akseptable grenser. 5. En rekke faktorer påvirker analyseprestasjonene. Herunder inkluderes starttemperaturen til reagensene, styrken av mikroskopet pæren brukte, pipetteteknikkens nøyaktighet og reproduserbarhet, hvor grundig det er vasket og fjernet væske og inkubasjonstidenes varighet under analysen. Det er nødvendig med konsistens for å oppnå nøyaktige og reproduserbare resultater. 6. Over tid kan den antihumane IgG-løsningen muligens forandre fargen på grunn av lyseksponering. 7. Streng fastholdelse til denne protokollen er anbefalt. Oppbevaringsbetingelser 1. Lagre alle reagensene i kitet ved 2-8 C. Ikke frys. Reagensene er stabile helt til de går ut på dato hvis de oppbevares og behandles på foreskriftsmessig vis. 2. Fortynnet PBS II for 4 uker ved 2-8 C. Innhenting av prøver Denne prosedyren skal utføres med en serumprøve. Tilsetting av azid eller andre konserveringsmidler til testprøvene kan påvirke resultatene. Mikrobielt kontaminerte, varmebehandlede prøver eller prøver som inneholder synlige partikler skal ikke brukes. Sterkt hemolysert eller lipemisk serum eller prøver skal unngås. Etter innhenting skal serumet skilles fra blodklumpen. CLSI (en gang var NCCLS) dokument H18-A3 anbefaler følgende oppbevaringsbetingelser for prøver: 1) Ikke oppbevar prøver i romtemperatur lenger enn i 8 timer. 2) Hvis analysen ikke fullføres innen 8 timer, kjøl prøven ned til 2-8 C. 3) Hvis analysen ikke fullføres innen 48 timer, eller ved forsendelse av prøven, frys den ned til -20 C eller lavere. Nedfryste prøver må blandes godt etter tining og før testing

3 Prosedyre Leverte materialer (Kitet) brønners ANCA etanol-fikserte human nøytrofil substrat slide 1 4mL FITC Anti-human IgG-konjugat 1 0.5mL canca Positive 1 0,5mL panca Positive 1 0,5mL IFA System Negative kontroll 1 25mL PBS II-konsentrat (40x) 1 7mL Mounting medium 1 10 Dekkglass brønners ANCA etanol-fikserte human nøytrofil substrat slide 1 15mL FITC Anti-human IgG-konjugat 1 0,5mL canca Positive 1 0,5mL panca Positive 1 0,5mL IFA System Negative kontroll 2 25mL PBS II-konsentrat (40x) 1 7mL Mounting medium 1 20 Dekkglass brønners ANCA etanol-fikserte human nøytrofil substrat slide 1 15mL FITC Anti-human IgG-konjugat 1 0,5mL canca Positive 1 0,5mL panca Positive 1 0,5mL IFA System Negative kontroll 2 25mL PBS II-konsentrat (40x) 1 7mL Mounting medium 1 20 Dekkglass brønners ANCA etanol-fikserte human nøytrofil substrat slide 1 4mL FITC Anti-human IgG-konjugat 1 0.5mL canca Positive 1 0,5mL panca Positive 1 0,5mL IFA System Negative kontroll 1 25mL PBS II-konsentrat (40x) 1 7mL Mounting medium 1 10 Dekkglass Leverte materialer (slide) x 6 brønners ANCA etanol-fikserte human nøytrofil substrat slide x 12 brønners ANCA etanol-fikserte human nøytrofil substrat slide x 12 brønners ANCA etanol-fikserte human nøytrofil substrat slide x 6 brønners ANCA etanol-fikserte human nøytrofil substrat slide Påkrevd tilleggsutstyr (ikke levert) Mikropipetter for å forsyne µL volum Destillert eller deionisert vann Plastflasker eller Pasteurpipetter Fuktighetskammer 1L beholder (for å løse opp PBS II) Skål coplin Fluorescensmikroskop med 495nm eksitasjonsbølgelengde og 515nm barrierefilter Tilleggsutstyr Materialer Tilgjengelig separat ANCA Formalin-fiksert human nøytrofil slide -6 brønner INOVA Katalog # ANCA Formalin-fiksert human nøytrofil slide -12 brønner INOVA Katalog #

4 Metode Før du starter 1. Bring alle reagenser og prøver opp til romtemperatur (20-26 o C) og bland godt. 2. Tynn PBS II-konsentratet ut: VIKTIG: Tynn PBS II-konsentratet ut (1:40) ved å blande innholdet av PBS II-konsentratflasken med 975mL destillert eller deionisert vann. Bland grundig. PBS IIbufferen brukes for å fortynne pasientprøver og som en vaskebuffer. Fortynnet buffer kan lagres opp til fire uker ved 2-8 C. 3. Tynn ut pasientprøver: a. Innledende screening: Tynn ut pasientprøver (1:20) med fortynnet PBS II-buffer (dvs. bland 50µL serum med 950µL PBS II-buffer). b. Titrering: Lag serielle totrinns løsninger fra den innledende screeningsløsningen for alle positive prøvene med fortynnet PBS II-buffer (dvs. 1:40, 1:80,... 1:5120). Analyseprosedyre 1. Forbered substratslidene: La substratslidene varmes opp til romtemperatur før du fjerner dem fra posen. Merk det med blyant og plasser det i et passende fuktighetskammer. Tilsett 1 dråpe (20-25µL) av ufortynnet positiv og negativ kontroll til henholdsvis brønn 1 og 2. Tilsett 1 dråpe (20-25µL) av ufortynnet pasientprøve til resterende brønner. 2. Inkubasjon av slide: Inkuber sliden i 30 (±5 minutter) i et fuktighetskammer (et fuktig kjøkkenpapir plassert vannrett på bunnen av en lukket plastikk-eller glassbeholder) vil opprettholde de riktige fuktighetsbetingelsene. Ikke la substratet tørke ut under analyseprosedyren. 3. Vask sliden: Etter inkubasjon, bruk en plastikkflaske eller pipette for å vaske serum forsiktig av med fortynnet PBS II-buffer. Innrett sliden og sprøyt PBS II-bufferen slik at vaskeavfall av prøver minimeres mellom brønnene. Unngå å rette strålen direkte på brønnene for å forhindre at substratet skades. Hvis ønsket, plasser slidene i en Coplin skål med fortynnet PBS II-buffer i opp til 5 minutter. 4. Tilsetting av fluorescensløsning: Rist av overskytende PBS II-buffer. Plassersliden tilbake i fuktigheteskammeret og dekk umiddelbart hver brønn med en dråpe fluorescensløsning. Inkuber diapositivene i ytterligere 30 (±5) minutter. 5. Vask sliden: Gjenta trinn Dekkglass: Dekkglassprosedyrer kan variere fra laboratorium til laboratorium. Imidlertid anbefales følgende prosedyre: a. Plasser et dekkglass på et kjøkkenpapir. b. Påfør mounting medium i en kontinuerlig linje til nedre kant av dekkglasset. c. Rist av overskytende PBS II-buffer og ta på nedre kant av sliden og før det til kanten av dekkglasset. Senk forsiktig sliden på dekkglasset på en slik måte at mounting mediet flyter til øvre kant av sliden uten at det dannes luftbobler eller trykk. Kvalitetskontroll canca Positive og IFA System Negative kontroll skal kjøres på hvert diapositiv for å sikre at alle reagenser og prosedyrer fungerer riktig. Egnede tilleggskontrollsera kan forberedes ved å aliquotere innsamlede humane serumprøver som oppbevares ved < -70 o C. Alle kriteriene oppgitt nedenfor må oppfylles for å betrakte testresultatene som gyldige. Hvis noen av disse kravene ikke oppfylles, skal testresultatene betraktes som ugyldige og analysen må gjentas. 1. Ufortynnede canca-positive prøver må være > IFA System Negative kontroll må være negativ. Tolkning av resultater Negativ reaksjon. En prøve betraktes som negativ hvis spesifikk nukleær og cytoplasma fargelegging er lik eller mindre enn IFA System Negative kontroll. Prøver kan utvise varierende grader av bakgrunnsfargelegging på grunn av heterofile antistoffer eller lavnivå autoantistoffer mot cytoplasmiske bestanddeler slik som kontraktile proteiner. Positiv reaksjon. En prøve betraktes som positiv hvis spesifikk nukleær og/eller cytoplasma fargelegging som beskrevet under observeres som sterkere enn negativ kontroll og intensiteten på fargeleggingen er 1+ eller sterkere. Bestem fluorescensgrad eller intensitet ved hjelp av disse kriteriene: 4+ Skarp eplegrønn fluorescens 3+ Klar eplegrønn fluorescens 2+ Helt tydelig positiv fluorescens 1+ Svakest spesifikk fluorescens som gjør det mulig å skille nukleær og/eller cytoplasmisk fargelegging fra bakgrunnsfluorescens Mønstertolkning. En rekke mønstre av nukleær og cytoplasmisk fargelegging kan utvises avhengig av typer og relative mengder av autoantistoffer som forekommer i prøven. Følgende typer av fargeleggingsmønstre kan observeres: - 4 -

5 canca eller cytoplasma fargelegging: Dette mønsteret fremstiller generelt en grovkornet, flekket cytoplasma fluorescens, ofte med fremhevet fluorescens inne i og rundt de nukleære lappene. Dette mønsteret viser seg normalt å være produsert av antistoffer som reagerer med det primære granulaenzymet serin protease 3 (PR3). panca eller perinukleær fargelegging: Dette mønsteret vises generelt som en homogen fargelegging av de nukleære lapper, ofte med perinukleær fremhevelse. Da noen antinukleære antistoffer (ANA) også kan reagere med kjerner av etanol-fikserte humane nøytrofile celler er det å anbefale at disse prøvene også blir testet for ANA. Disse testen kan testes i tillegg på humane nøytrofile celler fiksert i formalin istedenfor etanol. Formalin, da det er et kryssbindende fikseringsmiddel, ødelegger de fleste nukleære antigenene og endrer fargeleggingsmønsteret fra perinukleære til cytoplasmatisk hvis prøven inneholder panca. Formalin-fikserte slides for dette formålet er tilgjengelig separat. Prosedyrebegrensninger 1. Varmeinaktiverte, hemolyserte, mikrobielt kontaminerte eller ufullstendig defibrinerte prøver kan forårsake sterk bakgrunnsfargelegging og gjøre tolkning vanskelig. Skaff en fersk prøve og gjenta testen. Tilsetting av 2% bovint eller serum albumin til PBS II-bufferen brukt til å fortynne prøvene kan redusere bakgrunnsfargeleggingen av problematiske prøver. 2. ANA-positive prøver kan reagere med etanol-fikserte nøytrofiler. Nukleære positive prøver skal testes for ANA og/eller testes på formalin-fikserte nøytrofile slides. 3. Da etanol-fikserte human nøytrofiler celler er kjent for å inneholde flere primære granulaantigener slik som elastase, laktoferrin, katepsin G, kationinsk protein 57 og muligvis andre, enda ikke identifiserte nøytrofil-antigener, er det mulig at prøver som fremstår som p- eller cancapositive ikke alltid tester positivt for spesifikke myeloperoksidase (MPO) eller serin protease 3 (PR3) antistoffer. 4. Utenom ANA kan visse andre autoantistoffer også reagere med etanol-fikserte humane nøytrofiler celler. Disse antistoffene inkluderer anti-glattmuskel (aktin) og bestemte allo-antistoffer slik som Mart eller NB1. Aktin eller glattmuskel-antistoffer reagerer med nøytrofil cytoplasma, men da med et homogent heller enn et kornet, flekket mønster, slik som en vanlig canca. Alloantistoffer fremstår også som et cytoplasmatisk mønster, men med et mye finere flekker sammenliknet med canca og bare en liten prosentandel av celler (typisk 40% eller mindre) vil fluorescere. 5. I noen tilfeller kan prøver observeres med mer enn et antistoff. For eksempel, c- og panca eller ANCA pluss ANA. 6. Noen pasienter med tarmbetennelser eller ulcerøs kolitt har nøytrofile reaktive antistoffer. 16 Disse prøvene fremstår som et panca-type mønster på etanol-fikserte nøytrofile celler med sterkt fremhevet perinukleær fargelegging. Disse prøvene fremstår vanligvis som negative eller med en svak homogen, cytoplasmatisk fluorescens på formalin-fikserte nøytrofil slides. 7. Feilbehandling av slides under fargeleggingsprosedyren, spesielt hvis du lar sliden tørke mellom de forskjellige trinnene, kan resultere i et utvasket mønster og sterk bakgrunnsfargelegging. 8. Bruk av reagenser fra andre typer av fluorescerende antistoff-sett (spesielt konjugat) kan påvirke sensitiviteten og spesifisiteten til de etanol-fikserte nøytrofile substratslidene negativt. 9. En rekke eksterne faktorer påvirker testsensitiviteten inkludert type fluorescensmikroskop brukt, lampestyrken og alder, brukt forstørrelse, filtersystemet og observatøren. 10. Hvis et båndpassfilter brukes istedenfor en 515 barrierefilter, er det mulig å observere økt kunstig fargelegging. 11. Bare blyant skal brukes for å merke slidene. Bruk av annet skrivemateriale kan forårsake kunstig fargelegging. 12. Alle coplin skålene som brukes for slidene skal være fri for fargestoffavfall. Bruk av coplin skåler som inneholder fargestoffavfall kan forårsake kunstig fargelegging. 13. Resultatene til denne analysen bør brukes sammen med kliniske resultater og andre serologiske tester. 14. Prestasjonsegenskapene til analysen har ikke blitt etablert for annet prøvemateriale enn serum. 15. Slides som selges separate er klassifisert som analysespesifikke reagenser. Det er bare som en komponent i NOVA Lite ANCA kitet at analytiske data er etablert

6 Forventede verdier 115 tilfeldig utvalgte normalprøver ble testet på etanol-fikserte NOVA Lite ANCA slides. Disse prøvene ble avlagt som legekontrollprøver av ansatte eller kandidater og derfor er sannsynligheten for at de inkluderer gamle eller barn lav. Disse prøvene var en tilfeldig blanding av menn og kvinner. Alle 115 prøvene var negative med 1:20 screeningsortynnningen. 45 Wegener-, 39 mikroskopisk polyarteritt- og 20 crescentic glomerulonefritt-pasienter og pasienter med en rekke bindevevssykdommer ble også testet. Resultatene vises under: Pasientgruppe Antall av pasient % Positive Tilfeldige normalprøver Wegeners (all canca) Mikroskopisk polyarteritt (all panca) Crescent glomerulonefritt (all panca) SLE 27 7 (begge panca og canca) Sjögrens syndrom 21 0 Sklerodermi 15 0 Polymyositt 6 0 NOVA Lite ANCA slides ble sammenliknet side ved side med cytosentrifugert nøytrofile preparater brukt rutinemessig ved et universitetsbasert ANCA-referansesenter. 55 positive sera (23 canca, 28 panca, 4 atypiske) og 14 ANCA-negative prøver ble testet. Av de 55 positive prøvene, 54 produserte identisk fargeleggingsmønster på NOVA Lite ANCA slide. En lav titer canca-prøve produserte et negativt resultat på INOVA slides. Alle 14 ANCA-negative prøvene var tilsvarende negative på NOVA Lite ANCA diapositivene. Titreringer av de 55 positive prøvene på begge substratene produserte det samme resultatet eller én forskjell på et titer av 53 av prøvene som ble testet. De to andre prøvene varierte med todobling av titert. 48 tilfeldig utvalgte serumprøver avlagt hos et stort amerikansk referanselaboratorium for ANCA-testing ble testet for ANCA ved bruk av NOVA Lite ANCA slides simultant med testing for spesifikk MPO og PR-3- antistoffer ved bruk av INOVA QUANTA Lite ELISA-sett. Resultatene oppsummeres i den følgende tabellen. IFA Resultat Antall Prøver % ELISA Positive MPO PR3 negative panca canca c og panca Atypiske Åtte prøver var ANCA-negative ved immunfluorescens. Alle åtte prøvene var negative for både MPO og PR-3 med ELISA. MPO og PR-3-resultater varierte fra 1-5 enheter, godt under grensen på 20 enheter. 13 prøver ble registrerte som panca-positive med IFA. 11 av disse var MPO-positive og ingen var PR-3-positive. 21 prøver var canca-positive med immunfluorescens. Ingen av disse prøvene var MPO-positive, mens 20 av de 21 prøvene var PR-3-positive. Fem prøver fremstod som å ha både p- og canca-type mønstre med IFA. Fire av disse var MPO-positive og ingen PR3-positive. En prøve ble registrert som en atypisk panca. Denne atypiske panca-prøven var negativ på både MPO og PR3-settene. Overensstemmelse av ANCA-resultater ELISA vs. IFA Da MPO og PR3 er hovedantigener som innebefatter det vi kan identifisere som p- og canca, bør brukeren være klar over at antistoffer mot flere andre nøytrofile primær granulaenzymer kan også produsere c- og panca-mønstre ved immunfluorescens på etanol-fikserte nøytrofile celler. Dette er spesielt tilfellet med panca-antistoffer hvor minst tre andre autoantistoffer mot antigener forskjellig fra MPO kan produsere et panca-type IFA-mønster. For å illustrere dette punktet, ble prøver fra gruppene nevnt ovenfor (Wegeners, mikroskopisk polyarteritt og crescenttic glomerulonefritt) og de 48 prøvene avlagt for serologisk rutinetesting av vaskulitter gruppert. Både etanol-fiksert human nøytrofil immunfluorescens og ELISA-resultatene vises under. QUANTA Lite PR-3 IgG Relativ sensitivitet 90,9% canca IFA Relativ specificity 98,0% Overensstemmelse 95,4% QUANTA Lite MPO IgG Relativ sensitivitet 61,0% panca IFA Relativ specificity 100% Overensstemmelse 80,3% Av 66 canca IFA-positive prøver, var seks negative for PR3 og én prøve var ELISA-positiv, men negativ med IFA. Av 77 panca IFA-positive prøver var 30 negative med spesifikk MPO ELISA. Ingen panca, IFAnegative prøver viste seg å være positive med MPO ELISA

7 Referanser 1. Goeken JA, Antineutrophil cytoplasmic antibody - a useful serological marker for vasculitis. J Clin Immunol 11: , Specks U, et. al., Anticytoplasmic autoantibodies in the diagnosis and follow-up of Wegener s granulomatosis. May Clin Proc 64:28-36, van der Woude FJ, et. al., Autoantibodies against neutrophils and monocytes: tools for diagnosis and marker of disease activity in Wegener s granulomatosis. Lancet , Cohen-Tervaert JW, et. al., Association between active Wegener s granulomatosis and anticytoplasmic antibodies. Arch Intern Med 149: , Cambridge, et. al., Antineutrophil antibodies in inflammatory bowel disease: prevalence and diagnostic role. Gut 33: , Nolle B, et. al., Anticytoplasmic autoantibodies: their immunodiagnostic value in Wegener s granulomatosis. Ann Int Med 111:28-40, Charles LA, Falk RJ, Jennette JC, Clin Immunol Immunopathol 53: , Falk RJ, Jennette JC, Anti neutrophil cytoplasmic autoantibodies with specificity for myeloperoxidase in patients with systemic vasculitis and idiopathic necrotizing and crescentic glomerulonephritis. N Engl J Med 318: , Jennette JC, Wilkman AS, Falk RJ, Am J Path 135: , Gross WL, Ludemann G, et. al., Lancet 1:806, Cohen-Tervaert JW, et. al., Association of autoantibodies to myeloperoxidase with different forms of vasculitis. Arth and Rheum 33(8): , Cohen-Tervaert JW, et. al., Autoantibodies against myeloid lysosomal enzymes in crescentic glomerulonephritis. Kidney Int 37: , Cohen-Tervaert JW, et. al., Detection of autoantibodies against myeloid lysosomal enzymes: a useful adjunct to classification of patients with biopsy proven necrotizing arteritis. Am J Med 91:59-66, Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (BMBL) 5 th Edition. Centers for Disease Control/National Institute of Health, Stroncek DF, et. al., Neutrophil alloantibodies react with cytoplasmic antigens: a possible cause of falsepositive indirect immunofluorescence assays for antibodies to neutrophil cytoplasmic antigens. Am J Kidney Dis 21: , Hardarson S, et. al., Antineutrophil cytoplasmic antibody in inflammatory bowel and hepatobiliary diseases. Clinical Microbiology and Immunology 99: No. 3,

8 Fabrikkert av: INOVA Diagnostics, Inc Old Grove Road San Diego, CA United States of America Technical Service (U.S. & Canada Only) : Technical Service (Outside the U.S.) : support@inovadx.com Autorisert representant i EU: Medical Technology Promedt Consulting GmbH Altenhofstrasse 80 D St. Ingbert, Germany Tel.: Fax.: NOR Desember 2012 Rev