Riktig bruk av bakteriologiske laboratorieprøver med mer

Transkript

1 Riktig bruk av bakteriologiske laboratorieprøver med mer Klinisk emnekurs i laboratoriemedisin Karianne Wiger Gammelsrud, kst overlege, førsteamanuensis Avd. for mikrobiologi, OUS, Ullevål

2 Disposisjon Grunnprinsipper innen bakteriologi Rekvisisjonen Mikrobiologiske metoder Bakteriologiske Serologiske/molekylære Prøvetakning Huskelapper

3 Grunnprinsipper innen bakteriologi: - Hovedinndeling av bakteriene - Resistenstesting og MIC-verdier - PK/PD prinsipper

4 Hovedinndeling av bakterier

5 Aerobe vs. Anaerobe Stafylokokker = haugkokker: (gule (S. aureus) og hvite stafylokokker (S. epidermidis m/m) Streptokokker = kjedekokker: β-hemolytiske, α-hemolytiske (grønne), Enterokokker Diplokokker = kjedekokker som ligger 2&2: pneumokokker, meningokokker, gonokokker Staver (basiller): Gram-neg: Enterobacteriaceae (E. coli m/m), Pseudomonas, Haemophilus Gram-pos::Listeria, Bacillus, Difteroider, Propionebakterier, Clostridier Karianne W. Gammelsrud 2015

6 Normalflora 10 x flere bakterier enn celler i kroppen! Reelle funn vs. kontaminasjon Svært viktig med god klinisk informasjon og korrekt angivelse av prøvematerialet

7 Antibiotikafølsomhet: metoder

8 Antibiotikafølsomhet: metoder Antibiotikaresistens / nedsatt følsomhet Hvordan måler vi dette in vitro? Lappediffusjon S Sonediameter (mm) 35 o C, t. R

9 Antibiotikafølsomhet: metoder Gradienttester (eks: Etest) Automatisert testing MIC-verdi: Minimum Inhibitory Concentration (minste inhibitoriske konsentrasjon) MIC mg/l = S MIC 32 mg/l = R

10 MIC vs. dosering: PK/PD-prinsipper Lånt av Truls Leegaard, AHUS Karianne W. Gammelsrud 2015

11

12 FLEMING: But I would like to sound one note of warning. Penicillin is to all intents and purposes non-poisonous so there is no need to worry about giving anoverdose and poisoning the patient. There may be a danger, though, in underdosage. It is not difficult to make microbes resistant to penicillin in the laboratory by exposing them to concentrations not sufficient to kill them, and the same thing has occasionally happened in the body. The time may come when penicillin can be bought by anyone in the shops. Then there is the danger that the ignorant man may easily underdose himself and by exposing his microbes to non-lethal quantities of the drug make them resistant. Here is a hypothetical illustration. Mr. X. has a sore throat. He buys some penicillin and gives himself, not enough to kill the streptococci but enough to educate them to resist penicillin. He then infects his wife. Mrs. X gets pneumonia and is treated with penicillin. As the streptococci are now resistant to penicillin the treatment fails. Mrs. X dies. Who is primarily responsible for Mrs. X s death? Why Mr. X whose negligent use of penicillin changed the nature of the microbe. Moral: If you use penicillin, use enough.

13 Utfylling av rekvisisjonen

14 Lege (-kontor) Evt kopi rekv. Evt. telefonr. Prøvetakningstidspunkt: Dato Klokkeslett Kliniske opplysninger:

15 Er kliniske opplysninger så viktige da? JA!!!! Prøvene blir behandlet ulikt avhengig av klinisk bakgrunn både det vi ser etter og hva vi vurderer som relevant MINIMUM av klinisk informasjon: IMMUNSTATUS er pasienten immunsupprimert? Hovedsymptomer og VARIGHET Jo mer nøyaktig beskrivelse av prøvematerialet (fra HVOR og HVA), jo bedre behandling på laben All ANTIMIKROBIELL behandling som pas får m/dato for oppstart Kliniske opplysninger mangler kan faktisk føre til manglende mikrobiologisk diagnose og dermed suboptimal behandling!

16 Lege (kontor) Evt kopi rekv. Evt. telefonr. Prøvetakningstidspunkt: Dato Klokkeslett Prøvemateriale: HUSK å krysse av! Nøyaktig (puss sårsekret) Flere parallelle prøver: husk å merke nøyaktig! Kliniske opplysninger: Aktuelt, varighet Mistenkt agens? Grunnlidelse? LEGEJOBB! Antibiotika? Hvilken type? Når og hvor lenge? Aktuell sykdom eller immunstatus? Aerob/anaerob dyrkning Flere aktuelle agens? - Bakt/virus/sopp/tb Forsendelse: Skru korken godt på unngå søl!

17 Vi er glade i å prate med og hjelpe klinikere! Bakteriologisk avd: Virologisk avd: Serologisk avd:

18

19

20 Mikrobiologiske metoder (bakt) Mikroskopi Aerob dyrkning Anaerob dyrkning Sopp-dyrkning (muggsopp, gjærsopp) Antigen (Pneumokokker, Legionella i urin m/m) Serologi (Kikhoste, Francicella, div parasitter m/m) PCR

21 Mikrobiologiske metoder (bakt) Mikroskopi Aerob dyrkning Anaerob dyrkning Sopp-dyrkning (muggsopp, gjærsopp) Antigen (Pneumokokker, Legionella i urin m/m) Serologi (Kikhoste, Francicella, div parasitter m/m) PCR

22 Mikroskopi

23 Mikroskopi Acridin og Gram-farging Akutte tilstander (normalt sterile materialer) Meningitt Positive blodkulturer Septisk artritt Hjerneabscess, etmoiditt m/m Andre: Pneumocystis, muggsopp, tbc, parasitter mm.

24 Dyrkning Aerob dyrkning: Rike medier samt selektive skåler Vanlige prøver: 2 døgn Sterile væsker: 3 døgn (m/anrikningsbuljong) Biopsier: 5-7+ døgn (m/anrikningsbuljong) Anaerob dyrkning: Vanligvis 3 døgn

25 PCR (OUS) Generelle 16sRNA (bakterier), ITS (sopp) Spesifikke (mer sensitive) Pneumokokk, meningokokk, Haemophilus (meningitt) GBS, Listeria, E. coli (meningitt nyfødte m/m) S. aureus, Tbc, Aspergillus, parasitter, dermatofytter m/m Veneria (Chlamydia, Mycoplasma, gonokokker) I tillegg mulighet for å sende til andre laber, f.eks. tularemi (St. Olav)

26 Mikrobiologiske metoder (virus) Serologi Aktuell sykdom eller immunstatus? Symptomer? Varighet? Antigen Eks: Rota-/adenovirus i avføring PCR Luftveier (egen forelesn.) Spinalvæske (OBS! Tidsaspektet avgjørende) Blod (spes. indikasjoner) Sterile væsker, biopsier Vesikkel, sårsekret Avføring

27 Ad underlivsprøver Vi undersøker SOS: Lite forskjell på selvtester (vaginalprøve med swab) vs. GU Flytende amies: PCR Chlamydia, Mycoplasma, gonokokk + gonokokkdyrkn. Evt andre ved spesielle problemstillinger. SÅR (=sårprøve): Kjønnslepper, penis, post op., post partum: Dette er ENESTE indikasjon for allmen-bakt. (Unntak: alder < 15 år) SOPP: Dyrkning kun ved komplisert sopp-vaginitt (dvs. residiverende x4/ett år) & immunsuppr (Candida +/-). For øvrig våtpreparat på legekontoret (eller klinisk diagnose). Bakteriell vaginose: IKKE SEND TIL LAB gjør det selv! (Amsels kriterier - mikroskopi). Avvises alltid. Evt. Trichomonas pcr (evt mikroskopi). Lite i norsk befolkning.

28 Mikrobiologisk prøvetakning Hva slags materiale? Hva skal undersøkes? Hvilken type transportmedium?

29 Mikrobiologisk prøvetakning Egnede prøveglass og transportmedier

30 Mikrobiologisk prøvetakning Husk å merke prøven med både fullstendig pasientidentifikasjon og prøvemateriale!???

31 Mikrobiologisk prøvetakning Skru korken godt igjen unngå søl!

32 Mikrobiologisk prøvetakning Penselprøver: Overfladiske prøver: Aerob dyrkning Anaerob dyrkning Ikke egnet: Mikroskopi PCR

33 Mikrobiologisk prøvetakning Penselprøver: VIRUS/PCR

34 Mikrobiologisk prøvetakning Penselprøver: BAKT/VIRUS/PCR? På vei ut: sjekk med ditt laboratorie! Flytende amies

35 Mikrobiologisk prøvetakning Væsker Sterile væsker (leddvæske) Purulente væsker Abscessmateriale

36 Mikrobiologisk prøvetakning Biopsier Saltvann (minst mulig) Ikke alt for store biter Unngå klin!

37 Huskelapper Vær nøye med klinisk informasjon! Aktuelt, varighet, antibiotikabruk, immunstatus Vær nøye med prøvetakning! Egnet materiale og egnet prøveglass/transp.medie Vær nøye med merking av prøve og rekvisisjon! Fullstendig pasientidentifikasjon Nøyaktig prøvemateriale

38