Nyttig mikrobiologi med en praktisk vri

Transkript

1 Nyttig mikrobiologi med en praktisk vri Undervisning for legene på Diakonhjemmet Karianne Wiger Gammelsrud, overlege, førsteamanuensis Avd. for mikrobiologi, OUS, Ullevål

2 Disposisjon Grunnprinsipper innen bakteriologi Rekvisisjonen Mikrobiologiske metoder Bakteriologiske Virologiske Prøvetakning Huskelapper

3 Grunnprinsipper innen bakteriologi: - Hovedinndeling av bakteriene - Resistenstesting og MIC-verdier - PK/PD prinsipper

4 Hovedinndeling av bakterier

5 Hovedinndeling av bakterier

6 Aerobe vs. Anaerobe Stafylokokker = haugkokker: (gule (S. aureus) og hvite stafylokokker (S. epidermidis m/m) Streptokokker = kjedekokker: β-hemolytiske, α-hemolytiske (grønne), enterokokker Diplokokker = kjedekokker som ligger 2&2: pneumokokker, meningokokker, gonokokker Staver (basiller): Gram-neg: Enterobacteriaceae (E. coli m/m), Pseudomonas, Haemophilus Gram-pos::Listeria, Bacillus, Difteroider, Propionebakterier, Clostridier Karianne W. Gammelsrud 2015 KWG 2016

7 Normalflora 10 x flere bakterier enn celler i kroppen! Reelle funn vs. kontaminasjon Svært viktig med god klinisk informasjon og korrekt angivelse av prøvematerialet Hals Hud Avføring

8 Antibiotikafølsomhet: metoder

9 Antibiotikafølsomhet: metoder Antibiotikaresistens / nedsatt følsomhet Hvordan måler vi dette in vitro? Lappediffusjon S Sonediameter (mm) 35 o C, t. R

10 Antibiotikafølsomhet: metoder Gradienttester (eks: Etest) Automatisert testing MIC-verdi: Minimum Inhibitory Concentration (minste inhibitoriske konsentrasjon) MIC mg/l = S MIC 32 mg/l = R

11 MIC vs. dosering: PK/PD-prinsipper Varigheten av eksponering for konsentrasjoner over MIC Total eksponering for konsentrasjoner over MIC Maksimal konsentrasjon over MIC Lånt av Truls Leegaard, AHUS Snakk med mikrobiolog, infeksjonsmedisiner, farmasøyt Karianne W. Gammelsrud 2015 KWG 2016

12 KWG 2016

13 FLEMING: But I would like to sound one note of warning. Penicillin is to all intents and purposes non-poisonous so there is no need to worry about giving anoverdose and poisoning the patient. There may be a danger, though, in underdosage. It is not difficult to make microbes resistant to penicillin in the laboratory by exposing them to concentrations not sufficient to kill them, and the same thing has occasionally happened in the body. The time may come when penicillin can be bought by anyone in the shops. Then there is the danger that the ignorant man may easily underdose himself and by exposing his microbes to non-lethal quantities of the drug make them resistant. Here is a hypothetical illustration. Mr. X. has a sore throat. He buys some penicillin and gives himself, not enough to kill the streptococci but enough to educate them to resist penicillin. He then infects his wife. Mrs. X gets pneumonia and is treated with penicillin. As the streptococci are now resistant to penicillin the treatment fails. Mrs. X dies. Who is primarily responsible for Mrs. X s death? Why Mr. X whose negligent use of penicillin changed the nature of the microbe. Moral: If you use penicillin, use enough. KWG 2016

14 Utfylling av rekvisisjonen Elektronisk rekvirering rundt hjørnet (i løpet av 2016)! KWG 2016

15 Forlenget åpningstid F.o.m Hverdager: kl Lø/Sø (samt de fleste helligdager): kl. 8-15:30

16 Lege Evt. telefonr. Evt kopi rekv. Prøvetakningstidspunkt: Dato Klokkeslett Kliniske opplysninger: KWG 2016

17 Er kliniske opplysninger så viktige da? JA!!!! Prøvene blir behandlet ulikt avhengig av klinisk bakgrunn både det vi ser etter og hva vi vurderer som relevant MINIMUM av klinisk informasjon: IMMUNSTATUS er pasienten immunsupprimert? TX? Hovedsymptomer og VARIGHET Jo mer nøyaktig beskrivelse av prøvematerialet (fra HVOR og HVA), jo bedre behandling på laben All ANTIMIKROBIELL behandling som pas får m/dato for oppstart Kliniske opplysninger mangler kan faktisk føre til manglende mikrobiologisk diagnose og dermed suboptimal behandling!

18 Lege (kontor) Evt kopi rekv. Evt. telefonr. Prøvetakningstidspunkt: Dato Klokkeslett Prøvemateriale: HUSK å krysse av! Nøyaktig (puss sårsekret) Flere parallelle prøver: husk å merke nøyaktig! Kliniske opplysninger: Aktuelt, varighet Mistenkt agens? Grunnlidelse? LEGEJOBB! Antibiotika? Hvilken type? Når og hvor lenge? Aktuell sykdom eller immunstatus? Aerob/anaerob dyrkning Flere aktuelle agens? - Bakt/virus/sopp/tb Forsendelse: Skru korken godt på unngå søl! KWG 2016

19 Vi er glade i å prate med og hjelpe klinikere! Bakteriologisk avd: Virologisk avd: Serologisk avd:

20 KWG 2016

21 Urin? Puss? Men hva feiler det egentlig pasienten? Ofte lite klinisk info. ved serologiske prøver fra Diakonhjemmet KWG 2016

22 KWG 2016

23 Mikrobiologiske metoder (bakt) Mikroskopi Aerob dyrkning Anaerob dyrkning Sopp-dyrkning (muggsopp, gjærsopp) Antigen (Pneumokokker, Legionella i urin m/m) Serologi (Kikhoste, Francicella, div parasitter m/m) PCR

24 Mikroskopi

25 Mikroskopi Acridin og Gram-farging

26

27 Mikroskopi Acridin og Gram-farging Akutte tilstander (normalt sterile materialer) Meningitt Positive blodkulturer Septisk artritt Hjerneabscess, etmoiditt m/m Andre: Pneumocystis, muggsopp, tbc, parasitter mm.

28 Noen ord om blodkulturerne Dag 1: 1) Vi mottar positive flasker fra Diakonhjemmet (dere får beskjed om positiv blk i Dips). (Sendes oss flere ganger i løpet av dagen/kvelden etter hvert?) 2) Rask identifikasjon (mikroskopi & Maldi-TOF) 3) Lege ringer ut alle nye positive blodkulturer til kliniker 4) Utsæd på ulike agaskåler 5) Gram-negative: direkte til resistens 5 dagers inkubasjon før negativ. KW Gammelsrud 2016

29 Dyrkning Aerob dyrkning: Rike medier samt selektive skåler Vanlige prøver: 2 døgn Sterile væsker: 3 døgn (m/anrikningsbuljong) Biopsier: 5-7+ døgn (m/anrikningsbuljong) Anaerob dyrkning: Vanligvis 3 døgn

30 P. acnes KWG 2016

31 PCR (OUS) Generelle 16sRNA (bakterier), ITS (sopp) Spesifikke (mer sensitive) Pneumokokk, meningokokk, Haemophilus (meningitt) GBS, Listeria, E. coli (meningitt nyfødte m/m) S. aureus, Tbc, Aspergillus, parasitter, dermatofytter m/m Veneria (Chlamydia, Mycoplasma, gonokokker) I tillegg mulighet for å sende til andre laber, f.eks. Tularemi (St. Olav)

32 Mikrobiologiske metoder (virus) Serologi Aktuell sykdom eller immunstatus? Symptomer? Varighet? Antigen Rota-/adenovirus i avføring m/m PCR Luftveier (egen forelesn.) Spinalvæske (OBS! Tidsaspektet avgjørende) Blod (spes. indikasjoner) Sterile væsker, biopsier Vesikkel, sårsekret Avføring KWG 2016

33 Mikrobiologisk prøvetakning Hva slags materiale? Hva skal undersøkes? Hvilken type transportmedium?

34 Mikrobiologisk prøvetakning Egnede prøveglass og transportmedier

35 Mikrobiologisk prøvetakning Husk å merke prøven med både fullstendig pasientidentifikasjon og prøvemateriale!???

36 Mikrobiologisk prøvetakning Skru korken godt igjen unngå søl!

37 Mikrobiologisk prøvetakning Penselprøver: BAKT (& PCR) Flytende amies

38 Mikrobiologisk prøvetakning Penselprøver: Overfladiske prøver: Aerob dyrkning Anaerob dyrkning Ikke egnet: Mikroskopi PCR

39 Mikrobiologisk prøvetakning Penselprøver: VIRUS/PCR

40 Mikrobiologisk prøvetakning Væsker Sterile væsker (leddvæske) Purulente væsker Abscessmateriale Dersom det kun er noen få dråper med væske, er kanskje peneslprøve eneste mulighet. Lurt å skrive dette på rekvisisjonen slik at vi forstår hvorfor dere bruker pensel. Vurdere flytende amies.

41 Mikrobiologisk prøvetakning Væsker Sterile væsker (leddvæske) Purulente væsker Abscessmateriale Blodkulturflasker: Pågående antibiotika Prioriter anaerob Ikke egnet: PCR Antibiotikaeffekt

42 Mikrobiologisk prøvetakning Biopsier Saltvann (minst mulig, ellers blir det STOR fortynningseffekt) Ikke alt for store biter Unngå klin!

43 Huskelapper Vær nøye med klinisk informasjon! Aktuelt, varighet, antibiotikabruk, immunstatus Vær nøye med prøvetakning! Egnet materiale og egnet prøveglass/transp.medie Vær nøye med merking av prøve og rekvisisjon! Fullstendig pasientidentifikasjon Nøyaktig prøvemateriale

44 KWG 2016