2 BIO HØST GENERELL IMMUNOLOGI OG MEDISINSK MIKROBIOLOGI HBIO2003

Transkript

1 2 BIO HØST GENERELL IMMUNOLOGI OG MEDISINSK MIKROBIOLOGI HBIO2003 Delemne: MIKROBIOLOGI LABORATORIEKURS I MIKROBIOLOGI MÅL: Holdninger Studentene skal ta ansvar for å: - gi beskjed når vedkommende ikke kan møte ved obligatorisk undervisning, eller ikke kan møte opp til avtalt tid - følge retningslinjer for bruk av laboratorieantrekk - være teoretisk forberedt til laboratoriekurs - møte med aktuelle laboratoriehefter og metodehefter - delta aktivt i arbeidet med gruppeoppgaver - holde orden i laboratoriearealene - utøve respekt for biologisk materiale - være ærlig overfor oppnådd laboratorieresultat - være ærlig og kritisk til eget arbeid - være orientert om og følge retningslinjer som er gitt i henhold helse, miljø og sikkerhet i laboratoriene. - vurdere og utvikle egen evne til kommunikasjon og samarbeid Kunnskap Ferdighet Studentene skal; - vite hvordan biologisk materiale transporteres til laboratoriet for at ulike bakteriearter holdes intakt - vite hvilke vekstbetingelser de ulike bakterieartene krever - hvilke egenskaper hos gram negative staver som utnyttes ved identifikasjon - hvilke markører hos stafylokokker og streptokokker som kan brukes i diagnostikk - forstå betydningen av mikrobiologisk diagnostisk arbeid - vite hvilke infeksjoner de ulike bakteriene kan være årsak til Studentene skal: - kunne håndtere infisert biologisk materiale - kunne utsåing og dyrkning av biologisk materiale på riktig dyrkningsmedier og utøve riktig spredningsteknikk - kunne vurdere bakterier i mikroskop - kunne skille ulike bakteriearter fra hverandre ut fra vekst og utseende som kan vurderes på de forskjellige dyrkningsmediene - vite hvilke bakterier som vanligst isoleres fra urin, hals og sårsekret - kunne utføre ulike tester i diagnostisk mikrobiologi: API, Pastorex Strep, Pastorex Staph-plus, pneumokit, katalase, oxidase - kunne bruke metodehefte - kunne føre sikker og oversiktelig logg over utført arbeid Teoretisk grunnlag: Se studieplan

2 Delemne MIKROBIOLOGI, Labkurs M, Innhold og fremdriftsplan: Kurslærer holder en kort introduksjon av oppgavene i starten av kursdagen. Se forøvrig vedlagt ukeplan og prosedyrehefte Tabell 1: Organisering og framdriftsplan for arbeidet med oppgavene. Oppgavene er nærmere beskrevet i undervisningsdokumentet. Benytt metodehefte i mikrobiologi og oppskrifter som finnes i laboratoriet Dag 1 Oppgave 1 Oppgave 2: urin Vurdering av bakteriekulturer av streptokokker og stafylokokker Oppgave 3: hals Oppgave 4: sårsekret Dag 2 Oppgave 2 Oppgave 3 Oppgave 4 Identifikasjon og resistenstesting Identifikasjon (utføres evt. dag 3) Identifikasjon og resistenstesting Dag 3 Oppgave 2 Oppgave 3 Oppgave 4 Avlesning av tester Evt. vurdering og identifikasjon Avlesning av tester Oppsummering 2

3 OPPGAVE 1 VURDERING OG TESTING AV BAKTERIEKULTURER Oppgaven utføres gruppevis Gruppene får utdelt demonstrasjonskulturer Aerobe bakteriekulturer på blodagar: Streptokokker -hemolytiske streptokokker -hemolytiske streptokokker non-hemolytiske streptokokker Stafylokokker: Gule stafylokokker (Staphylococcus aureus) Hvite stafylokokker 1. Observer og karakteriser bakteriestammene ut fra koloniutseende, lukt, hemolyse og eventuelt andre egenskaper som visualiseres på agaren 2. Det lages gram-preparat av en streptokokk-kultur og en stafylokokk-kultur 3. Det utføres katalase-test av en streptokokk-kultur og en stafylokokk-kultur 4. Videre utføres følgende tester på de ulike bakteriekulturene: -hemolytiske streptokokker Pneumokit -hemolytiske streptokokker Pastorex strep non-hemolytiske streptokokker Pyrtest Gule stafylokokker (Staphylococcus aureus) Pastorex Staph- plus Hvite stafylokokker Pastorex Staph- plus 3

4 OPPGAVE 2 KVANTITATIV UTSÅING OG DYRKNING AV URINPRØVE; VURDERING, IDENTIFIKASJON OG ANTIBIOTIKATESTING Oppgaven utføres enkeltvis. Hver student får egen nummerert prøve Urinprøve såes ut på blodagar og MacConkey-agar. Kvantitativ utsåing ved bruk av 10-3 ml øse utføres. Agarene inkuberes i vanlig atmosfære 35 o C (+ - 2), i timer Dag 2: Dyrkningsagarer vurderes etter timer, og oppvekst vurderes med henblikk på bakterietall og bakterietype. Ved oppvekst av ulike bakterietyper, benevnes hver bakterietype med begrepene: A, B osv. eventuelt I, II osv. Bakterietypene identifiseres vha av gram-preparat og ulike biokjemiske tester. Det utføres en antibiotikatesting. Sekundærspredninger og antibiotikatest inkuberes i vanlig atmosfære, 35 o C (+ - 2), i timer. Preparat og agarskåler, som tilhører prøven, skal tas vare på til alle resultat foreligger. Underveisvurderinger, utførte tester og konklusjoner beskrives nøye i prøveloggskjema OPPGAVE 3 UTSÅING OG DYRKNING AV HALSPRØVE; VURDERING OG IDENTIFIKASJON Oppgaven utføres enkeltvis. Hver student får egen nummerert prøve Halsprøve såes ut på blodagar og gentianaviolett-agar, med henholdvis stafylokokkstripe/ bacitrasin-lapp og optochin-lapp. Se metodehefte Dag 2: Dyrkningsagarene vurderes etter timers inkubasjon i CO 2 atmosfære/35 (+ - 2) o C, og oppbevares deretter på kjølerom til prøvesvar foreligger. Hvis prøven ikke blir vurdert/identifisert dag 2, settes agarskålene på kjølerom til dag 3. Bakterievekst graderes: rikelig/moderat/sparsom vekst. Bakterietypene identifiseres vha gram-preparat og aktuelle biokjemiske tester. Underveisvurderinger, utførte tester og konklusjoner beskrives etter mal i prøveloggskjema 4

5 OPPGAVE 4 UTSÅING OG DYRKNING AV SÅRSEKRET-PRØVE; VURDERING, IDENTIFIKASJON OG ANTIBIOTIKATESTING Oppgaven utføres enkeltvis, hver student får egen nummerert prøve Sårsekret såes ut på sjokoladeagar, blodagar m/stafylokokkstripe og MacConkey-agar. I tillegg lages et gram-preparat av prøvematerialet som farges og mikroskopieres umiddelbart Dag 2/3: Agarskålene inkuberes i timer i CO 2 atmosfære 35 o C (+- 2 ), men vurderes og diagnostiseres etter timer. Bakterieoppvekst graderes: rikelig/moderat/sparsom vekst. Bakterietypene identifiseres vha gram-preparater og aktuelle biokjemiske tester. Bakteriestammene antibiotikatestes. Underveisvurderinger, utførte tester og konklusjoner beskrives etter mal i prøveloggskjema Beskrivelse av metode: se metodehefte og oppskrifter i laboratoriet 5