Kvalitetskontroll av resistensbestemmelse. Olav B. Natås Stavanger 2013

Transkript

1 Kvalitetskontroll av resistensbestemmelse Olav B. Natås Stavanger 2013

2 Viktige kontrollstasjoner 1. Resistensmedium 2. Inokulum 3. Antibiotikadepoter 4. Avlesning

3 Resistensmedium Tillages etter produsentens retningslinjer [Mueller Hinton (MH) og Mueller Hinton Fastidious (MH-F)] ph 7,2 7,4 Agardybde 4 ± 0,5 mm

4 Resistensmedium, forts. Divalente kationer(ca 2+, Mg 2+ ) Obs! aminoglycosider Ref. stamme P. aeruginosa ATCC Thymin og Thymidin Obs! trimetoprim og sulfa Ref. stamme E. faecalis ATCC Kontroll av vekst Sterilitetskontroll inkubasjon 3 døgn

5 Resistensmedium Obs! batch variasjon

6 Inokulum Konfluerende Tykkelse vekst på inokulum påvirker sonediameter mest Blandingskultur - obs heteroresistens

7 Konfluerende vekst og riktig tykkelse E. coli riktig Staph. aureus - riktig H. influenzae - riktig E. coli for tynn Staph. aureus feil teknikk H. influenzae feil teknikk og for tynn

8 Antibiotikadepoter Følg produsentens anvisninger nøye oppbevaring, applikasjon Antibiotikalapper og medier skal ha værelsestemperatur når de brukes Skålene inkuberes ved konstant temperatur 35 ± 1 o C

9 Avlesning Avlesning ved full hemningssone 100% Avles med påfallende lys MH, avles fra baksiden MH-F, avles fra forsiden

10 Avlesning av funn som krever spesiell oppmerksomhet Bakterieart Antibiotika Avlesning Proteus spp. Alle Overse sverming Streptokokker Alle Avles sone, ikke hemolyse Alle bakterier Trimetoprim, Trimetoprim-sulfamethoxazol Overse svak vekst i hemningssonen når denne har tydelig rand Staphylococcus aureus Linezolid Undersøk med gjennomfallende lys (hold skålen opp mot lyset) benzylpenicillin cefoxitin Skarp kant tyder på penicillinaseproduksjon Obs kolonier inne i hemningssonen, meticillin heteroresistens Enterobacteriaceae Ampicillin Overse svak vekst som kan opptre som en indre sone på enkelte batcher av MH agar E. coli Mecillinam Overse enkeltkolonier i hemningssonen

11 Kvalitetskontroll A Standardprogram Kontroll av nøyaktighet og presisjon Referansestammer testes daglig mot et representativt utvalg av antibiotika F. eks. S. aureus ATCC testes mot klindamycin, erytromycin, gentamicin og trim-sulfa Kontroll ved påvisning av spesifikke resistensmekanismer Referansestamme med aktuelle resistensmekanisme testes ved undersøkelse på denne resistensmekanismen, f.eks. MRSA, VRE

12 Kvalitetskontroll ved påvisning av spesielle resistensfaktorer VRE vankomycin resistente enterokokker MRSA meticillin resistente Staph. aureus ESBL ekstendert spektrum β-laktamase MLS B - resistens, streptokokker og stafylokokker Penicillin-resistente pneumokokker

13 Referansestammer En referansestamme er genetisk stabil og skal ha en MIC-verdi som ligger innenfor det konsentrasjonsområdet som er aktuelt ved bruk av disk diffusjonsmetoden Der finnes flere leverandører ATCC American Type Culture Collection NCTC National Culture Type Collection CCUG Culture Collection University of Gothenburg CIP Collection de Institut Pasteur DSMZ Deutche Sammlung für Microorganismen und Zellkulturen Referansestammer krever spesiell oppbevaring

14 Referansestammer brukt ved kontroll av nøyaktighet og presisjon Mikrobe Referansestamme Egenskaper E. coli ATCC 25922*; NCTC 12241; CIP 7624; DSM1103; CCUG Følsom villtype P. aeruginosa ATCC 27853*; NCTC 12903; CIP 76110; DSM 1117; CCUG Følsom villtype S. aureus ATCC 29213*; NCTC 12973; CIP ; DSM 2569; CCUG Svak β-lactamase produksjon E. faecalis ATCC 29212*; NCTC 12697; CIP ; DSM 2570; CCUG 9997 Følsom villtype S. pneumoniae ATCC 49619*; NCTC 12977; CIP ; DSM 11967; CCUG Penicillin intermediær H. influenzae NCTC 8468*; CIP 5494; CCUG Følsom villtype C. jejuni ATCC 33560; NCTC 11351; CIP 702; DSM 4688; CCUG Følsom villtype * Anbefalte kontrollstammer fra EUCAST med oppgitte referanseverdier

15 Referansestammer brukt ved påvisning av spesifikke resistensmekanismer Mikrobe Referansestamme Egenskaper E. coli ATCC 35218; NCTC 11954; DSM 5923; CECT 943; CIP ; DSM 5564; CCUG TEM-1 β-lactamase produksjon, ampicillin resistent K. pneumoniae ATCC ; NCTC 13368; CCUG 45421; CECT ESBL A positiv 7787 S. aureus NCTC 12493; ATCC Meticillin hetero resistent, meca positiv H. influenzae ATCC 49247; NCTC 12699; DSM 9999; CIP ; CCUG β-lactamase negative, ampicillin resistant (BLNAR) E. faecalis ATCC 51299; NCTC 13379; CIP ; DSM 12956; CCUG Van B; vankomycin MIC 8-16 mg/l

16 Kvalitetskontroll B Utvidet program 100 stammer testes fortløpende en gang i året mot spesifikke antibiotika Medianverdien av sonediameter skal ikke avvike mer enn ± 2 mm fra EUCAST

17 Takk for oppmerksomheten