Mikrobiologisk prøvetaking i. akuttmottaket

Transkript

1 Mikrobiologisk prøvetaking i Laktoseskål (G-) akuttmottaket Frank O. Pettersen Overlege, Phd Infeksjonsavdelingen, OUS Sjokoladeskål Blodskål

2 Rekvisisjonen FOPettersen/OUS/2016 2

3 Rekvisisjonen Legehenvisning til spesialistundersøkelse Jo bedre rekvisisjon, jo bedre undersøkelse Symptomer, varighet og TD NB Pågående/nylig antibiotika Avsender gjerne med tlf.-/callingnr. FOPettersen/OUS/2016 3

4 Luftveisprøver Dyp nese/nasofarynxaspirat Pneumoni og sinusitt/øli Virustransportmedium for luftveisvirus, Pertussis, Legionella og Mycoplasma/Chlamydophila Amie s gel («Stuart s medium») til bakterier og sopp Halsprøve Tonsillitt/faryngitt Ekspektoratprøve Intuberte og trakeostomerte pas. Blod- og sjokoladeskål + laktoseskål hvis fra tube Prøvemateriale til dyrkning på Mykobakterier på steril beholder uten tilsetning FOPettersen/OUS/2016 Pinne til alt annet UTM virustransportmedium Amie s gel transportmedium Pinne til dyp neseprøve Flytende Amie s 4 transportmedium

5 Urinprøvetaking Midtstråleprøve Kateterprøve Blærepunksjon Clean catch Vask av urethralåpning (?), forhud trekkes tilbake el. kjønnlepper til side Engangskateterisering Permanent urinkateter e. avstengning av slangen (blir «alltid» kolonisert og stix pos!) Suprapubiske katetere koloniseres over tid Poseprøve Høy negativ prediktiv verdi, meget lav positiv prediktiv verdi FOPettersen/OUS/2016 5

6 Urin 1 µl Sås ut 1 µl (liten øse) på blod- og laktoseskål Gram av supernatanten hvis residiv under antibiotikabeh. Evt. antigentester (pneumokokker, Legionella) Grønn FOPettersen/OUS/2016 6

7 Patogene tarmbakterier På transportmedium (grønn kork), dyrkning og PCR Parasitter Tilsatt fikseringsmiddel eller uten til PCR (Entamoeba histolytica, Giardia lamblia, Dientamoeba fragilis) Clostridium difficile toksin Uten tilsetning Hurtigtest på KIS Mykobakterier Uten tilsetninger Virus Norovirus, Adenovirus og Rotavirus Uten tilsetning Fæces FOPettersen/OUS/2016 7

8 Sår β-hemolytiske streptokokker MRSA-transportmedium Bortkasta uten grundig mekansisk rensing med NaCL-tupfer Helst «dyp prøve» (biopsi fra sårbunn) Biposi gjennom intakt hud ved osteomyelitt Blod- og sjokoladeskål Gram-farging FOPettersen/OUS/2016 8

9 Blodkulturer Feber > 38 eller < 36 og frostanfall (SIRS + infeksjon) 1 sett = 1 aerob + 1 anaerob flaske eller 1 barneflaske 1 stikk per sett, 3 ml per barneflaske Evt. også fra intravasale katetere 2-3 sett ved endokarditt Egne flasker for sopp og Mykobakterier FOPettersen/OUS/2016 9

10 Spinalvæske Så ut på blod- og sjokoladeskåler! 20 dråper til bakt.us dråper til virus dråper til kliniskkjemisk (gluk, protein, hvite) 20 dråper, ekstraglass dråper + 1 dråpe fargevæske til direkte mikroskopi Farge, klarhet, type og antall celler per μl (mm 3 ) Gram-preparat av nedspunnet spinalvæske Dekkglass Fuchs-Rosenthal tellekammer FOPettersen/OUS/ Fargevæske

11 Leddvæske Bakteriologisk og klin.kjemisk us. 5 ml på aerob blodkulturflaske Blod- og sjokoladeskål, 1 dråpe = 20 µl Mikroskopi Evt. fortynnes 1:20; 25μL + 475μL NaCl Gram-farging Celletelling (glass m antikoagulasjonsmiddel) Polarisert lys FOPettersen/OUS/

12 Serøse væsker Pleuravæske Bakterielt: Blakket/puss, ph < 7,0, glukose < 3,0, LD > 1000 Gram- og Ziehl- Neelsen-/Auramin- Rhodamin-farging Blod- og sjokoladeskål og anaerobt Sendes vanlig bakt.- og sopp.us. på Amie s gel og uten tilsetning til PCR og dyrkning på Mykobakterier. Ascites-/PD-væske Gram-farge supernatant Celletelling (> 300/µL) 10 ml på aerob blodkulturflaske Så ut minst 1 dråpe på blod-, sjokolade- og laktoseskåler og anaerobt. FOPettersen/OUS/

13 MaldiTOF Identifikasjon av mikrober vha massespektometri Direkte på materiale Kolonier fra skåler Direkte fra blodkulturflasker som «flagger ut» FOPettersen/OUS/

14 PCR direkte på prøvematerialet Spesifikke PCR-oppsett Spinalvæske GBS, gule staf, meningokokker, pneumokokker, legionella Leddvæske Kingella M. tuberculosis -og rifampicin-resistensgen Parasitter toxoplasma, malaria SSI eller Folkhälsomyndighäten Generell PCR Bakteriell PCR (16S rdna) Sopp-PCR (ITS) Aktuelt i alle presumtivt sterile materialer FOPettersen/OUS/

15 Celletelling i Fuchs-Rosenthal-kammer - spinalvæske, leddvæske eller ascites/pd-væske Spinalvæske: 9 dråper + 1 dr fargevæske Ascites-/PD-væske: 9 dråper + 1 dr fargevæske Leddvæske: Fortynnes 20 X 25 µl leddvæske og 475 µl fargevæske FOPettersen/OUS/

16 Celletelling i tellekammer 11/3 celler/µl Hvite eller røde? Mononukleære eller polynukleære? FOPettersen/OUS/2016 NB! x 20 hvis leddvæske 16

17 Tolkning av celletelling - Leddvæske Utseende Klar, blakket og purulent Viskositet (dryppes fra sprøytespissen): Lang eller kort Ekvilibrering mellom blod leddvæske tar 6 t. Celler pr. mm3 % granuloc. % gluk. /blod Normalt < /-10 Ikke inflammatorisk (osteoartritt, traumatisk artritt) Mild/moderat ( reaktiv art.,giktfeber, SLE,Tbc, sopparthritt) < / Urinsyregikt/chondrocalcinose Alvorlig inflammasjon (Gc- /septisk art.) FOPettersen/OUS/

18 Utsæd på skåler Evt. grønn FOPettersen/OUS/

19 Mikroskopi Gram-farging (bakterier) Acridin Orangefarging (mikrober) Nyttig hvis få mikrober Polarisert lys (P3-lab) Krystaller FOPettersen/OUS/

20 Hurtigtester Raskt Får resultatet behandlingsmesige konsekvenser? Pneumokokker, Legionella, malaria (alle typer), Dengue feber, (influensa), gruppe A streptokokker, nephropathia epidemica (Puumala), hiv FOPettersen/OUS/

21 Influensa hurtigtester Sofia (fluorescensbasert) lav sensitivitet (57%) høy spesifisitet (97%) høy NPV og lav PPV GeneXpert (hurtig-pcr) høy sens (~95%) og spes (99%) => høy NPV og bedre PPV FOPettersen/OUS/

22 Oppsummering Vaktgående C-vaktsleger skal kunne mikroskopere spinalvæsker Trening KIS-lab tirsdager fra kl 13:30 Resultatet av den mirkobiologiske undersøkelsen er avhengig av kvalitet på prøven og henvisningen Tenk på mulighet for utsæd i forbindelse med helg/langfri Hurtigtester nyttig om resultatet får behandlingsmessige konsekvenser (malaria!) FOPettersen/OUS/

23 Analyse Materiale Metode Kommentarer Fargemetode Utføres, reagensene plassert hvor Amøber Varm fæces, 37 0 C Mikroskopi Må avtales på forhånd Atypiske mycobacterier Bakterie identifisering Bakterier, dyrking og direkte farging Heparinblod Fæces, 4 % formalin Kolonier fra skåler Halsprøve Alt materiale, sterile beholdere Urin Expectorat BAL Trachealsekret Neseprøve Halsprøve Sårsekret Biopsier Spinalvæske Mikroskopi Sentrifugeres i 20 min etter 2 timers henstand Konsentrering Strep-test Staph.aurex Streptokokk A- direkte Inkuberes til neste dag Blå og blodskål, gul øse 1 mikroliter. Blod,brun og blåskål Blod,brun og blåskål Blod,brun og blåskål Blod og brunskål Blod,brun og evt blåskål (ved mistanke om gram neg) Blod og brunskål, evt også anaerobt Blod og brunskål, dryppe 1 dr. rett på skål, ikke spre Kliniske opplysninger Farging: Gram, acridineorange Gram Gram Gram, acridineorange Gram Gram Gram, acridineorange Gram, acridineorange Gram, acridineorange, Løffler Varm opp saltvann,mikroskop etc Farge Buffy coat med ZN/AR. Farge med mod ZN Hurtigtester Kan også så ut anaerobt.. Poser til anaerob dyrking på toppen av varmeskapet. FOPettersen/OUS/

24 Analyse Materiale Metode Kommentarer Fargemetode Utføres, reagensene plassert hvor Barnemark (enterobius vermicularis) Blodparasitter: Tryphanosoma Filaria Loa-Loa - Bancrofti - Malayi -Onc.volvulus Clostridium difficile Toxin A/B i fæces Tape-prøve Mikroskopi Se etter egg /mark EDTA-blod, evt.37 0 C (se etter levende) Hudbiopsi Mikroskopi Prøven tas ca 12.(dag) Prøven tas ca 24.(natt) Prøven tas ca 24.(natt) Må avtales med laboratoriet. May-Grunwäld/ Giemsa 4% Formalin Toxinpåvisning Hurtigtest. Cryptococcer Spinalvæske ca ½ ml Mikroskopi Sentrifugeres, tusjpreparat Cryptosporidier Fæces, 4%formalin Mikroskopi Konsentreres Ukonsentrert Farges med mod. ZN Immuno Stat,hurtigtest Cyclosporidier Fæces, 4% formalin Mikroskopi Konsentreres Farges med mod. ZN Dengue Serum,Plasma, fullblod, ½ ml Antigen/Antistoff påvisning. IgG og IgM Hurtigtest HIV Hurtigtest Serum,EDTA-blod Antistoff påvisning Hurtigtest, ikke rutine FOPettersen/OUS/

25 Analyse Materiale Metode Kommentarer Fargemetode Utføres, reagensene plassert hvor Influensa hurtigtest Neseprøve Fluorescens på SOFIA Hurtigtest Isospora belli Fæces,4% formalin Mikroskopi Konsentreres Farges med mod. ZN Legionella Urin,1ml Antigenpåvisning Hurtigtest Leishmania Hudavskrap EDTA-blod Mikroskopi Giemsa Malaria EDTA-blod Mikroskopi, tykk&tynn dråpe. Antistoffpåvisning Blodprøven bør tas ved feberanfall May-Grünwald/ Giemsa Malaria hurtigtest Mikrosporidier Fæces, 4% formalin Mikroskopi Konsentreres Farges med trikromfarging Parasitter i fæces 4% Formalin Mikroskopi Konsentrering Parasitter i urin 4 timers samling av dagurin Mikroskopi Sedimentere i 2 timer, Sentrifugeres Pneumocystis jirovecii Indusert sputum/ BAL, 5 ml Mikroskopi Immunfluorescens Giemsa Pneumokokker Urin, 1ml Spinalvæske, ½ ml Antigenpåvisning Hurtigtest FOPettersen/OUS/

26 Analyse Materiale Metode Kommentarer Fargemetode Utføres, reagensene plassert hvor Puumala, Nefropatia epidemica. Serum, ½ ml Antistoffpåvisning Hurtigtest Spinalvæske 9 dråper spinalvæske Telling i Fuchs Rosenthal Vurdere type celler I tillegg til telling Tilsette 1 dr fargevæske Tuberkulose Ekspektorat Indusert sputum BAL Urin Annet materiale Mikroskopi Urinen må sentrifugeres ned i 20 minutter Farges med Auramin/Rhodamin FOPettersen/OUS/

27 Oppfølging av infeksiøse gastroenteritter Agens Salm. Typhi / Salm. Paratyphi Shig. dysenteriae 1 EHEC Antall negative prøver Smittefaregruppe * Andre 5 3 Gruppe 1: Personer i næringsmiddelindustri (inkl. serveringssteder) som kommer i direkte eller indirekte kontakt med næringsmidler som skal spises rå eller uten ytterligere oppvarming. Gruppe 2: Helsepersonell som har direkte kontakt (inkl. servering av mat) med pasienter som er særlig utsatt for infeksjonssykdommer eller for hvem infeksjoner vil kunne ha særlig alvorlige konsekvenser f.eks. premature barn, pasienter ved intensivavd o.l. Gruppe 3: Barn i førskolealder som er i institusjoner (inkl. barnehager). Gruppe 4: Personer som av ulike grunner vil ha problemer med å kunne ivareta en tilfredsstillende personlig hygiene. Shigella sp. (andre enn Shig.dys.1) EIEC Salmonella sp. (andre enn tyfoidog paratyfoidgruppen) Vibrio cholerae Campylobacter spp. Yersinia enterocolitica EPEC / ETEC Vibrio sp.(andre enn V. cholerae) Aeromonas spp. Plesiomonas sp. Virale agens 3 3 Ikke nødvendig ** 2 Ikke nødvendig ** Ikke nødvendig Intestinale parasitter (f. eks E. histolytica, G. lamblia) 1 (tatt 14 dager etter behandlingsslutt) MSIS-rapport 52B/ FOPettersen/OUS/2016 Tabellen angir hvor mange negative prøver som anbefales, for å erklære en person for smittefri. Prøvene skal ikke tas fra samme tarmtømming, men for eksempel fra tømminger på påfølgende dager. 27

28 Oppfølging av infeksiøse gastroenteritter Agens Salm. Typhi / Salm. Paratyphi Shig. dysenteriae 1 EHEC Antall negative prøver Smittefaregruppe * Andre 5 3 Gruppe 1: Personer i næringsmiddelindustri (inkl. serveringssteder) som kommer i direkte eller indirekte kontakt med næringsmidler som skal spises rå eller uten ytterligere oppvarming. Gruppe 2: Helsepersonell som har direkte kontakt (inkl. servering av mat) med pasienter som er særlig utsatt for infeksjonssykdommer eller for hvem infeksjoner vil kunne ha særlig alvorlige konsekvenser f.eks. premature barn, pasienter ved intensivavd o.l. Gruppe 3: Barn i førskolealder som er i institusjoner (inkl. barnehager). Gruppe 4: Personer som av ulike grunner vil ha problemer med å kunne ivareta en tilfredsstillende personlig hygiene. Shigella sp. (andre enn Shig.dys.1) EIEC Salmonella sp. (andre enn tyfoidog paratyfoidgruppen) Vibrio cholerae Campylobacter spp. Yersinia enterocolitica EPEC / ETEC Vibrio sp.(andre enn V. cholerae) Aeromonas spp. Plesiomonas sp. Virale agens 3 3 Ikke nødvendig ** 2 Ikke nødvendig ** Ikke nødvendig Intestinale parasitter (f. eks E. histolytica, G. lamblia) 1 (tatt 14 dager etter behandlingsslutt) MSIS-rapport 52B/ Tabellen angir hvor mange negative prøver som anbefales, for å erklære en person for smittefri. Prøvene skal ikke tas fra samme tarmtømming, men for eksempel fra tømminger på påfølgende dager. FOPettersen/OUS/