BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base)

Transkript

1 BRUKSANVISNING - FERDIGLAGDE AGARSKÅLER PA Rev.: Sep 2011 BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) BRUKSOMRÅDE BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) og BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) er ikke-selektive medier for isolering og kultivering av mikroorganismer med kravstore næringsbehov, spesielt artene Neisseria og Haemophilus, fra et mangfold av kliniske prøver. PROSEDYRENS PRINSIPPER OG FORKLARING Mikrobiologisk metode. Carpenter og Morton beskrev et forbedret medium for isolering av gonokokker på 24 t. 1 Effektiviteten for dette mediet, GC Agar tilsatt hemoglobin og gjærkonsentrat, ble demonstrert i en undersøkelse av tolv medier som ble brukt for isolering av denne organismen. 2 Senere ble det gjort flere forbedringer av mediet. 3-5 I BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) tilføres næringsstoffer fra GC II-basen som inneholder kasein og utvalgte kjøttpeptoner som nitrogenkilder for å opprettholde ph, og kornstivelse for å nøytralisere giftige fettsyrer som kan være tilstede i agaren. Hemoglobin står for X-faktoren (hemin). BD IsoVitaleX Enrichment er en definert tilsetning som gir V-faktor (nicotinamid adenin dinucleotid, NAD), som er vesentlig for Haemophilus-arter, og vitaminer, aminosyrer, koenzymer, glukose, jernioner og andre faktorer som forbedrer veksten av patogene Neisseria og andre organismer med kravstore næringsbehov. Pyridoksal og bestemte vekstfaktorer er tilsatt for å forbedre veksten av Gram-positive bakterier, og pyridoksal er tilsatt for å støtte veksten av artene Granulicatella og Abiotrophia (=ernæringsmessig variant av streptokokk). 6-9 Chocolate Agar (blodagar nr 2-base) er et alternativt medium for isolering av organismer med kravstore næringsbehov fra kliniske prøver. 7 inneholder proteose-pepton, leverfordøyelse og gjærekstrakt som kilde til nitrogen og vitaminer. Natriumklorid opprettholder den osmotiske stabiliteten. Oppvarmet (varmedenaturert) hesteblod gir både X-faktoren (heme), og, siden det ikke inneholder NAD-ase, den nødvendige V-faktoren (nicotinamid adenin dinucleotid, NAD) for veksten av Haemophilus influenzae og gir ekstra næringsstoffer. REAGENSER Sammensetninger* per liter renset vann BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) Fordøyelse av kasein i pankreas 7,5 g Proteose-pepton nr 3 15,0 g Utvalgt kjøtt-pepton 7,5 Leverfordøyelse 2,5 Kornstivelse 1,0 Gjærekstrakt 5,0 Dikaliumfosfat 4,0 Natriumklorid 5,0 Monokaliumfosfat 1,0 Hesteblod (varmebehandlet) 7 % Natriumklorid 5,0 ph 7,4 +/- 0,2 Agar 12,0 Hemoglobin 10,0 IsoVitaleX Enrichment 12,0 ml Pyridoksal 0,01 g Vekstfaktorer 0,5 ph 7,2 +/- 0,2 *Justert og/eller tilsatt som påkrevd for å oppfylle funksjonskriteriene. PA

2 BD IsoVitalex-tilsetning inneholder følgende vekstfaktorer (sammensetning* per liter renset vann): Vitamin B 12 0,01 g L-glutamin 10,0 Adenin 1,0 Guanin hydroklorid 0,03 p-aminobenzosyre 0,013 Nicotinamid adenin dinucleotid (NAD) 0,25 Tiamin pyrofosfat 0,1 Jernnitrat 0,02 Tiamin hydroklorid 0,003 Cystein hydroklorid 25,9 L-cystin 1,1 Glukose 100,0 *Justert og/eller tilsatt som påkrevd for å oppfylle funksjonskriteriene. FORHOLDSREGLER. Kun til profesjonelt bruk. Agarskålene må ikke anvendes dersom de viser tegn til mikrobiell kontaminering, misfarging, uttørking, sprekkdannelse eller andre tegn til svekkelse. Se dokumentet GENERELLE BRUKSANVISNINGER for aseptiske håndteringsprosedyrer, biologiske farer og avhending av brukte produkter. OPPBEVARING OG HOLDBARHET Agarskålene oppbevares etter mottak i originalinnpakningen på et mørkt sted med temperatur fra 2 til 8 C, inntil de skal brukes. Unngå frost og overopphetning. Agarskålene kan inokuleres frem til utløpsdatoen (se etiketten på pakken) og inkuberes i de anbefalte inkubasjonstider. Agarskåler fra åpnede stabler på 10 skåler kan brukes i én uke når de oppbevares på et rent sted med temperatur på 2 til 8 C. BRUKERKVALITETSKONTROLL Prøver, representative for inokulatet, med følgende stammer (se dokumentet GENERELLE BRUKSANVISNINGER for detaljer). Inkuber skålene ved 35 ± 2 C i en aerob atmosfære med karbondioksid. Les av skålene etter 18 til 24 og etter 42 til 48 timers inkubering. Stammer* Haemophilus influenzae ATCC Neisseria gonorrhoeae ATCC Neisseria meningitidis ATCC Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 Ikke-inokulert BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) og Ganske god til fremragende vekst Sjokoladebrun, gjennomskinnelig, kan være noe uensartet * I tillegg kan BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) testes med Granulicatella (Abiotrophia) adiacens DSM 9848 for å avdekke vekst av næringsvariasjoner av streptokokker. 8,9 PROSEDYRE Materialer som følger med BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) eller BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base), begge leveres som 90 mm Stacker-skåler. Mikrobiologisk kontrollert. PA

3 Materialer som ikke følger med Supplerende vekstmedier, reagenser og laboratorieutstyr etter behov. Prøvetyper Disse mediene kan prinsipielt sett brukes for alle typer prøver fra infeksjoner som mistenkes å inneholde organismer med kravstore næringsbehov, spesielt, men ikke bare, for prøver fra primært kroppssteder som er sterile (f.eks. cerebrospinalvæske, abscesser). Hovedformålet for disse er ikke-selektiv isolering av Neisseria, Haemophilus, og andre bakterier som ikke kan vokse på blodagarmedia som brukes rutinemessig, som Columbia Agar med 5 % saueblod. I tillegg kan BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) brukes for isolering av artene Abiotrophia og Globicatella (=næringsvariasjoner av streptokokker). 8,9 Mediene brukes også som subkulturmedia fra blodkulturer. (Se også FUNKSJONSDATA OG PROSEDYRENS BEGRENSNINGER). Prøvesamling og transport Neisseria gonorrhoeae, N. meningitidis, Haemophilus og andre organismer med kravstore næringsbehov er sensitive overfor negative forhold i omgivelsesmiljøet. Det må derfor brukes egnede transportmedia for alle prøver. Prøvene må sendes til laboratoriet så raskt som mulig, og må ikke være eldre enn 24 timer, selv om det brukes transportmedia. Den optimale transporttemperaturen er 20 til 25 C. Må ikke nedkjøles! 10,11 Testprosedyre Så ut prøven så snart som mulig etter at den er mottatt i laboratoriet på BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) eller. Primærskålen brukes først og fremst til å isolere renkulturer fra prøver som inneholder blandet flora. Hvis materialet kultiveres direkte fra en bomullspinne, kan den som alternativ rulles over et lite område ved kanten av overflaten, og deretter spres fra dette inokulerte området. Hvis prøven er samlet fra et sted på kroppen med normal flora, bør den også inokuleres på passende selektive media, avhengig av patogenet som skal isoleres. For Neisseria gonorrhoeae skal det brukes en BD Martin-Lewis Agar, modified eller BD GC-Lect Agar-skål, og for Haemophilus skal det brukes BD Chocolate Agar with IsoVitaleX and Bacitracin-skål i tillegg. Inkuber platene ved 35 ± 2 C i en aerob atmosfære med karbondioksid. Les av skålene etter 18 til 24 og etter 42 til 48 timers inkubering. Resultater Typisk kolonimorfologi er som følger: Organismer BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) og Haemophilus influenzae Liten (1 mm), fuktig, perlende med en karakteristisk mousy lukt Neisseria gonorrhoeae Liten, gråhvit til fargeløs, mukoid Neisseria meningitidis Middels til stor, blågrå, mukoid Streptococcus pneumoniae Små, flate eller større, mukoide, grønnaktige kolonier, middels omliggende kolonier kan være grønnaktige Granulicatella (Abiotrophia) Små, grågrønne kolonier, middels omliggende kolonier kan adiacens* være grønnaktige FUNKSJONSDATA OG PROSEDYRENS BEGRENSNINGER BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) og BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) er berikede, ikke-selektive medier, der bakterier med og uten kravstore næringsbehov, inkludert normal flora, vil vokse. Det anbefales derfor også å inokulere prøver fra kroppssteder som inneholder normal flora på egnede, selektive medier. Uttrykket bakterie med kravstore næringsbehov viser til bakterier som ikke vokser eller ikke vokser godt på vanligvis brukte, primære isoleringsmedia som inneholder saueblod, f.eks. Haemophilus, patogene Neisseria, og flere andre organismer. For detaljerte beskrivelser av PA

4 prøvetypene som må inokuleres på disse mediene, og typen organismer disse mediene brukes for isolering av, se referansene. 8,9,11,12 Antall og typer bakteriearter som forekommer som smittefarlige, er svært store. Før disse mediene tas i rutinemessig bruk for sjeldent isolerte, eller nylig beskrevne mikroorganismer, må egnetheten derfor først testes av brukeren ved å kultivere renkulturer av organismen det gjelder. er ikke testet for støtte av vekst av artene Abiotrophia og andre næringsvarianter av streptokokker. Se referansene for diskusjon av næringsvarianter av streptokokker. 6,8,9,13 REFERANSER 1. Carpenter, C.M., and H.E. Morton An improved medium for isolation of the gonococcus in 24 hours. Proc. N.Y. State Assoc. Public Health Labs. 27: Carpenter, C.M., M.A. Bucca, T.C. Buck, E.P. Casman, C.W. Christensen, E. Crowe, R. Drew, J. Hill, C.E. Lankford, H.E. Morton, L.R. Peizer, C.I. Shaw, and J.D. Thayer Evaluation of twelve media for the isolation of the gonococcus. Am. J. Syphil. Gonorrh. Venereal Diseases 33: Power, D.A. (ed.), and P.J. McCuen Manual of BBL products and laboratory procedures, 6th ed. Becton Dickinson Microbiology Systems, Cockeysville, MD, USA. 4. Martin, J.E., T.E. Billings, J.F. Hackney, and J.D. Thayer Primary isolation of N. gonorrhoeae with a new commercial medium. Public Health Rep. 82: Vastine, D.W., C.R. Dawson, I. Hoshiwara, C. Yonega, T. Daghfous, and M. Messadi Comparison of media for the isolation of Haemophilus species from cases of seasonal conjunctivitis associated with severe endemic trachoma. Appl. Microbiol. 28: Ruoff, L.R Aerococcus, Abiotrophia, and other infrequently isolated aerobic catalasenegative, gram-positive cocci. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Anonymous DIFCO Manual, 11th edition. DIFCO Laboratories, Division of Becton Dickinson and Co. Sparks, MD, USA. 8. Reimer, L.G., and L.B. Reller Growth of nutritionally variant streptococci on common laboratory and 10 commercial blood culture media. J. Clin. Microbiol. 14: Collins, M.D., and P.A. Lawson The genus Abiotrophia (Kawamura et al.) is not monophyletic: proposal of Granulicatella gen. nov., Granulicatella adiacens comb. nov., Granulicatella elegans comb. nov. and Granulicatella balaenopterae comb. nov. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 50: Thomson, R.B., and J.M. Miller Specimen collection, transport, and processing: bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 11. Forbes, B.A., and P.A. Granato Processing specimens for bacteria. In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 12. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.) Manual of clinical microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 13. Ruoff, K.L Aerococcus, Abiotrophia, and other infrequently isolated aerobic catalasenegative, gram-positive cocci. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. EMBALLASJE/BESTILLING BD Chocolate Agar (GC II Agar med IsoVitaleX) Kat. nr Ferdiglagde agarskåler, 20 stk. Kat. nr Ferdiglagde agarskåler, 120 stk. BD Chocolate Agar (blodagar nr 2-base) Kat. nr Ferdiglagde agarskåler, 20 stk. Kat. nr Ferdiglagde agarskåler, 120 stk. PA

5 YTTERLIGERE INFORMASJON Kontakt din lokale BD-representant for ytterligere informasjon. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company BD PA