BD Mueller Hinton II Agar BD Mueller Hinton II Agar 150 mm BD Mueller Hinton II Agar, Square

Transkript

1 BRUKSANVISNING FOR FERDIGLAGDE AGARSKÅLER PA Rev.: April 2013 BD Mueller Hinton II Agar BD Mueller Hinton II Agar 150 mm BD Mueller Hinton II Agar, Square BRUKSOMRÅDE BD Mueller Hinton II Agar (Mueller-Hinton II-agar) er tilgjengelig i flere ulike skåltyper, brukes i den standardiserte skivediffusjonsprosedyren for å påvise raskt voksende aerobe organismers mottakelighet for antimikrobielle midler som standardisert av Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). 1 PRINSIPPER FOR OG FORKLARING AV PROSEDYREN Mikrobiologisk metode. På grunn av at kliniske mikrobiologilaboratorier tidlig på 1960-tallet brukte et bredt utvalg av prosedyrer for resistenstesting av bakterier overfor antibiotika og kjemoterapeutiske midler, utviklet Bauer, Kirby og andre en standardisert prosedyre, der Mueller Hinton-agar, et medium som opprinnelig var utviklet for isolering av gonokokker, ble valgt som testmedium. 1-4 Senere bekreftet en internasjonal samarbeidsundersøkelse verdien av Mueller Hinton-agar for dette formålet, som er takket være den relativt gode reproduserbarheten av mediet, oppskriftens enkelhet og mengden av eksperimentelle data som hadde blitt samlet inn ved bruk av dette mediet. 5 CLSI har skrevet en prestasjonsstandard for Bauer-Kirby-prosedyren, og dette dokumentet bør konsulteres for ytterligere opplysninger. 6 Andre nasjonale standarder er utviklet for antimikrobiell resistenstesting i henhold til Bauer-Kirby-prosedyren. I disse standardene kan inokulat-tettheten, inokulasjonsmetoden, de resulterende sonestørrelsene og tolkingsmetoden avvike fra CLSI-standarden. Da det ikke eksisterer felles europeiske standarder for resistenstesting, henvises det til lokale, nasjonale standarder der retningslinjene fra CLSI ikke gjelder. Bauer-Kirby-prosedyren er basert på diffusjon gjennom en agargel med antimikrobielle midler som er impregnert på papirskiver. 7 I motsetning til tidligere metoder som brukte skiver med høye og lave antimikrobielle konsentrasjoner og som brukte tilstedeværelsen eller fraværet av hemningssoner for tolkning, bruker denne metoden skiver med en enkelt konsentrasjon av antimikrobielt middel, og sonediametre er korrelert med minimale hemmingskonsentrasjoner (MIC). 1,2,6,7 I testprosedyren strykes en standardisert suspensjon av organismen over hele overflaten på mediet. Papirskriver impregnert med bestemte mengder antibiotika eller andre antimikrobielle midler plasseres så på mediets overflate, skålen inkuberes, og hemningssoner rundt hver skive måles. Beslutningen om en organisme er sensitiv, intermediær eller resistent overfor et middel et middel fattes ved å sammenligne oppnådde sonestørrelser med de i tabell 2A til 2D i CLSI-dokumentet M100 (M2). 6 Ulike faktorer er identifisert som påvirkende på resistenstesting med skivediffusjonsmetoden. Disse omfatter mediet, unødig overflatefuktighet på mediet, agardybde, skivepotens, inokulatkonsentrasjon, ph og produksjon av ß-laktamase av testorganismer. 5-8 BD Mueller Hinton II-agar er produsert for å holde lave nivåer av tymin og tymidin, 9.10 og kontrollerte nivåer av kalsium og magnesium Tymin- og tymidin-nivåene i råmaterialer fastslås ved hjelp av skivediffusjonsprosedyren med skriver med trimetoprim-sulfametoksasol (SXT) og Enterococcus faecalis ATCC og/eller Kalsium- og magnesiumnivåene kontrolleres ved å teste råmaterialer og supplere med kilder av kalsium og/eller magnesium PA

2 etter behov for å produsere riktige sonediametre med aminoglykosid-antibiotika og Pseudomonas aeruginosa ATCC REAGENSER BD Mueller Hinton II Agar Sammensetning* per liter renset vann Storfeekstrakt 2,0 g Syrehydrolysat fra kasein 17,5 Stivelse 1,5 Agar 17,0 ph 7,3 +/ 0,2 *Justert og/eller supplert etter behov for å oppfylle visse ytelseskriterier. FORHOLDSREGLER. Kun til profesjonelt bruk. Skålene må ikke anvendes dersom de viser tegn på mikrobiell kontaminering, misfarging, uttørking, sprekkdannelse eller har andre tegn til forringelse. Overdreven skrumping av dette mediet, som følge av uttørking, kan føre til gale resistensresultater. Se dokumentet GENERELL BRUKSANVISNING for informasjon om aseptiske håndteringsprosedyrer, biologiske farer og avhending av brukte produkter. OPPBEVARING OG HOLDBARHET Agarskålene oppbevares etter mottak i originalinnpakningen på et mørkt sted med temperatur fra 2 til 8 C, inntil de skal brukes. Unngå frost og overoppheting. Agarskålene kan inokuleres frem til utløpsdatoen (se etiketten på pakken) og inkuberes i de anbefalte inkubasjonsperiodene. Agarskåler fra åpnede stabler på 10 skåler kan brukes i én uke når de oppbevares på et rent sted med temperatur på 2 til 8 C. KVALITETSKONTROLL FOR BRUKERE Aktuelle CLSI-standarder 6 eller eventuelt nasjonale standarder skal følges når brukere utfører kvalitetskontroll. Følg prosedyrene beskrevet nedenfor under Testprosedyre, inkludert referansestammene nevnt under Materialer som ikke følger med. Mueller Hinton II-agarskåler og de antimikrobielle skivene som brukes, skal testes minst to ganger i uken med henblikk på riktig funksjon. Utseende av ikke-inokulert medium: fargeløs til lys ravgul. PROSEDYRE Materialer som følger med: BD Mueller Hinton II Agar (leveres i flere ulike skåltyper, se Forpakning/tilgjengelighet). Mikrobiologisk kontrollert. Materialer som ikke følger med 1. Inokulatvekstmedium på rør, som BD Trypticase Soy Broth (vekstmedium fremstilt av soyabønne-kasein) eller Mueller Hinton II-vekstmedium (kation-justert), for tillaging av et standardinokulat, og sterilt vekstmedium eller saltvann til fortynning av inokulat. 2. Bariumsulfat-sammenligningsstandard (0,5 ml med 0,048 M BaCl 2 [1,175 % w/v BaCl 2. 2H 2 O] til 99,5 ml med 0,18 M [0,36 N] H 2 SO 4 [1 % v/v]). 3. Et fotometrisk apparat for justering av turbiditeten i inokulatsuspensjonen, slik at den er i samsvar med 0,5 McFarland-standarden. 4. Som alternativ til materialene nevnt ovenfor (1 3), kan BD Prompt Inoculation System (volumetrisk inokulat-tillagingsutstyr) brukes. 6,18 5. Kontrollkulturene Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922, E. coli ATCC (kun for hemmingskombinasjoner av ß-laktam-ß-laktamase), Pseudomonas aeruginosa ATCC og Enterococcus faecalis ATCC eller ATCC Papirskiver impregnert med angitte mengder antimikrobielle midler, 6 som BD Sensi-Disc-skiver for resistenstesting. PA

3 7. Dispenser, som BD Sensi-Disc 6-, 8- eller 12-hulls dispenser. Det finnes også en dispenser for Mueller Hinton II firkantede agarskåler. 8. Linjal eller annet utstyr for å måle sonestørrelse i millimeter. 9. Supplerende vekstmedier, reagenser og laboratorieutstyr etter behov. Prøvetyper Dette produktet brukes til resistenstesting av renkulturer som har blitt isolert fra kliniske prøver (se også PROSEDYRENS YTELSESEGENSKAPER OG BEGRENSNINGER). Det er foreslått at direkte antimikrobiell resistens kan utføres på blodkulturer og urinkulturer, men tester bør gjentas og bekreftes med renkulturer Testprosedyre Beskrivelse av metoden for direkte kolonisuspensjon: 6 1. Sørg for at en ren, fersk (= over natten) kultur fra et ikke-selektivt medium som blodagar er tilgjengelig. 2. For rutinemessige resistenstester kan inokulatet klargjøres ved å lage en direkte saltvanns- eller vekstmediumsuspensjon av koloniene. 6 Juster med en gang denne suspensjonen i henhold til turbiditeten i bariumsulfat-standarden (0,5 McFarlandstandarden) uten inkubering. Standardens og testinokulatets turbiditet bør sammenlignes ved å holde begge rørene opp foran en hvit bakgrunn med tynne, svarte linjer, eller det kan brukes et fotometrisk apparat. 3. Alternative metoder for tillaging av inokulat omfatter enheter som tillater direkte standardisering av inokulater uten justering av turbiditeten, som BD Prompt Inoculation System. Disse enhetene er funnet å være akseptable for rutinemessige tester Innen 15 min etter justering av inokulatets turbiditet, dyppes en steril prøvepensel ned i det korrekt fortynnede inokulatet og dreies flere ganger kraftig rundt mot rørets øvre innerside for å presse ut overflødig væske. 5. Inokuler hele agaroverflaten i skålen tre ganger. Roter skålen 60 mellom strøkene for å oppnå jevn inokulering. 6. La lokket stå åpent i 3 til 5 minutter og skålen stå i romtemperatur i opptil 15 minutter, slik at eventuell overflatefuktighet absorberes, før du legger på skivene impregnert med antimikrobielt middel. 7. Plasser de antimikrobielle skivene ved hjelp av en dispenser. Følg aseptiske forholdsregler. Legg skivene slik at midtpunktene er minst 24 mm fra hverandre. Etter at skivene er plassert på agaren, skal de trykkes ned med en steril nål eller pinsett for å sørge for fullstendig kontakt med overflaten på mediet. Dette trinnet er ikke nødvendig hvis skivene plasseres med en BD Sensi-Disc selvpakkende dispenser. 8. Innen 15 minutter etter at skivene er plassert, skal skålene vendes og plasseres i en inkubator ved 35 C. Skåler skal ikke inkuberes under økt konsentrasjon av karbondioksid. 9. Inkuber skåler i 16 til 18 timer. En full 24-timers inkubasjon trengs for Staphylococcus aureus med oksacillin for å påvise meticillin-resistent S. aureus (MRSA) 19 og for Enterococcus spp. når testet med vankomycin for å påvise vankomycin-resistente stammer. Vekst innen den synlige hemningssonen er en indikasjon på resistens. 20 Resultater 1. Etter inkuberingen skal en konfluerende plen med vekst være synlig. Hvis det bare er vekst av isolerte kolonier, var inokulatet for tynt og testen må gjentas. 2. Mål diameteren på sonene med fullstendig hemning (som kan sees med det blotte øye), inkludert skivediameteren til nærmeste, hele millimeter ved hjelp av skyvelær, linjal eller en mal laget for dette formålet. Måleverktøyet holdes på bunnen av den vendte skålen over en svart, ikke-reflekterende bakgrunn, med belysning ovenfra. 3. Endepunktet skal være det området som ikke viser tydelig, synlig vekst som kan sees med det blotte øye. Se bort fra svak vekst av små kolonier, som så vidt er synlige nær kanten av den tydelige hemningssonen. Staphylococcus aureus, når testet med oksacillin-skiver, er et unntak. Det samme er enterokokker når testet med vanlomycin. I disse tilfellene skal utstrålt lys brukes til å påvise uklar vekst rundt skiven som vises med "okkult resistente " MRSA-stammer 19 eller vankomycin-resistente enterokokker. 6 Ved Proteus-arter, hvis PA

4 hemningssonen er tydelig nok til å kunne måles, skal du se bort fra eventuell sverming inni sonen. Med trimetoprim og sulfonamidene, kan antagonister i mediet tillate svak vekst. Se derfor bort fra svak vekst (20 % eller mindre av plenen med vekst) og mål den mer tydelige margen for å fastslå sonediameteren. Beregning og tolking av resultater Sonediametre målt rundt skiver skal sammenlignes med de i tabell 2A til 2D i CLSI-dokumentet M100 (M2). 6 Resultater oppnådd med spesifikke organismer kan deretter rapporteres som resistente, intermediære eller sensitive. Merk! Det utgis med jevne mellomrom informasjonstillegg til CLSI-dokumentet M2 eller reviderte versjoner, som inneholder reviderte tabeller for antimikrobielle skiver og tolkningsstandarder. De nyeste tabellene bør konsulteres for gjeldende anbefalinger. Den komplette standarden og tilleggsinformasjon kan bestilles fra Clinical and Laboratory Standards Institute, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA , USA. Telefon: FUNKSJONSDATA OG PROSEDYREBEGRENSNINGER Mueller Hinton-agar er standardmediet for resistenstesting av raskt voksende aerobe eller fakultativt anaerobe bakterier, som stafylokokker, enterokokker, medlemmer av Enterobacteriaceae og aerobt Gram-negative staver (f.eks. Pseudomonas spp). Det er utviklet andre prosedyrer, medier og betingelser for testing av næringskrevende arter, dvs. Haemophilus spp., Neisseria spp., S. pneumoniae og streptokokker. Den standardiserte CLSI-prosedyren brukes ikke til å teste obligat anaerobe organismer, organismer som utviser dårlig eller treg vekst på Mueller Hinton-agar eller organismer som viser markert variasjon mellom stammene når det gjelder vekstrate. 6 Næringskrevende organismer (f.eks. Haemophilus influenzae) skal testes som anvist i CLSI-dokumentet M2. 6 For enkelte kombinasjoner av organismer og antimikrobielt middel kan det hende at hemningssonen ikke har skarpt avgrensede kanter, noe som kan føre til feiltolking. Feil konsentrasjon av inokulat kan føre til ukorrekte resultater. Hemningssonene kan bli for små hvis inokulatet er for tykt, og de kan bli for store og vanskelige å måle hvis inokulatet er for tynt. Feil oppbevaring av antimikrobielle skiver kan føre til svekket konsentrasjon og feil resistensresultat. Overdreven skrumping av mediet som følge av feil oppbevaring kan føre til falskt sensitive resultater. Selv om en organisme er sensitiv overfor et spesifikt antimikrobielt middel in vitro, betyr ikke det nødvendigvis at midlet vil være effektivt in vivo. Les relevant referansemateriale for hjelp til tolkning av resultater. 7,8 Det kan forekomme bakterier som krever tymin eller tymidin. 20,21 Disse organismene kan ha utilfredsstillende vekst på Mueller Hinton-agar som inneholder lave nivåer av tymin eller tymidin. Det er utviklet nye prosedyrer med bruk av skiver med høyt innhold av gentamicin (120 mg) og streptomycin (300 mg) for å screene etter høy resistens mot aminoglykosider som en indikasjon på at et enterokokkisolat ikke påvirkes synergistisk av en kombinasjon av penicillin eller glykopeptid pluss aminoglykosid. 6,21,22 Se CLSI-dokumentene M2 og M7 for fullstendige diskusjoner angående påvisning av MRSA, resistente enterkokokker og ß-laktamase-produserende, Gram-negative basiller med utvidet spektrum samt andre testbegrensninger. 23 Mueller Hinton II-agar er demonstrert å være pålitelig ved påvisning av MRSA som produserer en uklar hemningssone rundt oksacillin-skiver. 19 I tvilstilfeller bør en tilleggsmetode brukes, som BD oksacillin-screeningsagar. Inokuleringsmetoden, tolkningen og grensene for sonestørrelsene som er gitt i gjeldende 6, 24 dokument og NCCLS-standarden, kan være forskjellige fra de nasjonale standardene. REFERANSER 1. Bauer, A.W., W.M.M. Kirby, J.C. Sherris, and M. Turck Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method. Am. J. Clin. Pathol. 45: PA

5 2. Ryan, K.J., F.D. Schoenknecht, and W.M.M. Kirby Disc sensitivity testing. Hospital Practice 5: Barry, A.L., F. Garcia, and L.D. Thrupp An improved single-disk method for testing the antibiotic susceptibility of rapidly-growing pathogens. Am. J. Clin. Pathol. 53: Mueller, J.H., and J. Hinton A protein-free medium for primary isolation of the gonococcus and meningococcus. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 48: Ericsson, H.M., and J.C. Sherris Antibiotic sensitivity testing. Report of an international collaborative study. Acta Pathol. Microbiol. Scand. Sec. B, Suppl Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, formerly NCCLS). Approved standard: M2. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests. CLSI, Wayne, PA, USA.Search for latest version at 7. Woods, G.L., and J.A. Washington Antibacterial susceptibility tests: dilution and disk diffusion methods, p In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.C. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, DC. 8. Thornsberry, C., T.L. Gavan, and E.H. Gerlach Cumitech 6, New developments in antimicrobial agent susceptibility testing. Coordinating ed., J.C. Sherris. American Society of Microbiology, Washington, DC. 9. Koch, A.E., and J.J. Burchall Reversal of the antimicrobial activity of trimethoprim by thymidine in commercially prepared media. Appl. Microbiol. 22: Ferone, R., S.R.M. Bushby, J.J. Burchall, W.D. Moore, and D. Smith Identification of Harper-Cawston factor as thymidine phosphorylase and removal from media of substances interfering with susceptibility testing to sulfonamides and diaminopyrimidines. Antimicrob. Agents Chemother. 7: Reller, L.G., F.D. Schoenknecht, M.A. Kenny, and J.C. Sherris Antibiotic susceptibility testing of Pseudomonas aeruginosa: selection of a control strain and criteria for magnesium and calcium content in media. J. Infect. Dis. 130: Pollock, H.M., B.H. Minshew, M.A. Kenny, and F.D. Schoenknecht Effect of different lots of Mueller-Hinton Agar on the interpretation of the gentamicin susceptibility of Pseudomonas aeruginosa. Antimicrob. Agents Chemother. 14: D'Amato, R.F., and C. Thornsberry Calcium and magnesium in Mueller-Hinton agar and their influence on disk diffusion susceptibility results. Current Microbiol. 2: Wegner, D.L., C.R. Mathis, and T.R. Neblett Direct method to determine the antibiotic susceptibility of rapidly growing blood pathogens. Antimicrob. Agents Chemother. 9: Johnson, J.E., and J.A. Washington II Comparison of direct and standardized antimicrobial susceptibility testing of positive blood cultures. Antimicrob. Agents Chemother. 10: Waterworth, P.M., and M. Del Piano Dependability of sensitivity tests in primary culture. J. Clin. Pathol. 29: Hollick, G.E., and J.A. Washington II Comparison of direct and standardized disk diffusion susceptibility testing of urine cultures. Antimicrob. Agents Chemother. 9: Baker, C.N., C. Thornsberry, and R.W. Hawkinson Inoculum standardization in antimicrobial susceptibility testing: evaluation of overnight agar cultures and the rapid inoculum standardization system. J. Clin. Microbiol. 17: Hindler, J.A., and C.B. Anderbied Effect of the source of Mueller-Hinton agar and resistance frequency on the detection of methicillin-resistant Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol. 21: Maskell, R., O.A. Okubadejo, R.H. Payne, and L. Pead Human infections with thymine-requiring bacteria. J. Med. Microbiol, 11: Haltiner, R.C., P.C. Migneault, and R.G. Robertson Incidence of thymidinedependent enterococci detected on Mueller-Hinton agar with low thymidine content. Antimicrob. Agents Chemother. 18: Murray, B.E The life and times of the Enterococcus. Clin. Microbiol. Rev. 3: Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, formerly NCCLS). Approved standard: M7. Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically. CLSI, Wayne, PA, USA.Search for latest version at PA

6 24. Jorgensen, J.H., and J.D. Turnidge Susceptibility test methods: dilution and disk diffusion methods. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. FORPAKNING/TILGJENGELIGHET BD Mueller Hinton II Agar (90 mm Stacker-skåler [standard størrelse]) Kat.nr Ferdiglagde agarskåler, 20 plater Kat.nr Ferdiglagde agarskåler, 120 plater BD Mueller Hinton II Agar (150 mm) Kat.nr Ferdiglagde agarskåler, 20 plater BD Mueller Hinton II Agar, Square (120 x 120 mm) Kat.nr Ferdiglagde agarskåler, 20 plater FLERE OPPLYSNINGER Ta kontakt med din lokale BD-representant for mer informasjon. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com Prompt is a trademark of 3M. ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection. BD, BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company BD PA