BACTEC Peds Plus/F Culture Vials Vekstmedium framstilt av soyabønne-kasein med resiner

Transkript

1 BACTEC Peds Plus/F Culture Vials Vekstmedium framstilt av soyabønne-kasein med resiner PP091JAA 2008/01 Norsk *Amerikansk patentnr BRUKSOMRÅDE BACTEC Peds Plus/F Culture Vials (blodkulturflasker) (beriket vekstmedium framstilt av soyabønne-kasein med CO 2) for aerob dyrking. Brukes hovedsaklig med BACTEC-blodkulturinstrumenter for kvalitativ dyrkning og påvisning av aerobe mikroorganismer (hovedsaklig bakterier og gjærsopper) hos barn, og fra andre blodprøver som generelt har volum på under 3 ml. SAMMENDRAG OG FORKLARING Prøven som skal undersøkes, inokuleres i flasken som settes inn i BACTEC-blodkulturinstrumentet for inkubering og jevnlig avlesning. Hver flaske inneholder en sensor som kan påvise økning av CO 2 som produseres ved vekst av mikroorganismer. Sensoren overvåkes av instrumentet hvert tiende minutt, for økning av fluorescens, som er proporsjonal med mengden av CO 2 som er til stede. En positiv avlesning indikerer at det sannsynligvis er levedyktige organismer i flasken. Påvisningen er begrenset til mikroorganismer som vil vokse i en bestemt type medium. Det er blitt beskrevet resiner for behandling av blodprøver, både før og etter at de er inokulert på blodkulturmedier. Det er inkorporert resiner i BACTEC-blodkulturmedier for å øke påvisningen av organismer uten behov for spesiell behandling. 1-3 PRINSIPPER FOR PROSEDYREN Hvis det finnes mikroorganismer i prøven som inokuleres i BACTEC-flasken, vil det dannes CO 2 når mikroorganismene metaboliserer substratet som finnes i flasken. Økning av fluorescens i sensoren fra flasken forårsaket av større mengde CO 2, monitoreres av BACTEC-blodkulturinstrumentet. Analyse av rate og størrelse på CO 2-økningen gjør at BACTECblodkulturinstrumentet kan avgjøre om flasken er positiv, dvs. at prøven inneholder levedyktige organismer. REAGENSER BACTEC Peds Plus/F-blodkulturflasker inneholder følgende aktive ingredienser før prøven kjøres: Liste over ingredienser Sterilt vann...40 ml Vekstmedium framstilt av soyabønne-kasein... 2,75 % w/v Gjærekstrakt... 0,25 % w/v Ekstrakt av animalsk vev... 0,10 % w/v Natriumpyruvat... 0,10 % w/v Dekstrose... 0,06 % w/v Sukrose... 0,08 % w/v Hemin... 0,0005 % w/v Menadion... 0,00005 % w/v Natrium polyanetholsulfonat (SPS)...0,020 % w/v Pyridoxal HCl (Vitamin B 6)...0,001 % w/v Nonionisk adsorberende resin... 10,0 % w/v Kationisk Exchange Resin... 0,6 % w/v Alle BACTEC medier leveres med tilsatt CO 2. Advarsler og forsiktighetsregler Til in vitro-diagnostisk bruk. Dette produktet inneholder tørr naturgummi. Patogene mikroorganismer, blant annet hepatittvirus og humant immunsviktvirus, kan forekomme i kliniske prøver. Standard forsiktighetsregler 4-7 og institusjonelle retningslinjer skal følges ved håndtering av alle materialer som er kontaminert med blod og andre kroppsvæsker. Før bruk, må brukeren undersøke flaskene for spor av skade, kontaminering eller nedbryting. Flasker som viser tegn til skade eller kontaminering, som lekkasje, uklarhet, misfarging (mørkning), bulende eller inntrykt propp, skal ikke brukes. En kontaminert flaske kan inneha positivt trykk. Hvis en kontaminert flaske brukes til direkte prøvetakning, kan kontaminert blodkulturmedium komme inn i pasientens vene. Kontaminering av flaskene trenger ikke å være åpenbart. Når det brukes en prosedyre med direkte prøvetaking, overvåk prosessen nøye for å unngå refluks av materialer inn i pasienten. I sjeldne tilfelle kan det være sprekker i flaskehalsen, eller halsen kan brekke når kapselen tas av, eller ved håndtering. I tillegg kan det forekomme i sjeldne tilfeller at en flaske ikke er tilstrekkelig forseglet. I begge tilfeller kan innholdet i flaskene lekke eller søles. Hvis flasken er inokulert, må søl eller lekkasje håndteres med varsomhet, da patogene organismer eller agens kan være til stede. Før de kastes skal alle inokulerte flasker steriliseres ved autoklavering. = 1

2 Positive blodkulturflasker for subkultivering eller farging, osv: Før subkultivering er det nødvendig å slippe ut gass som ofte bygger seg opp på grunn av mikrobiell metabolisme. Subkultivering skal gjøres i et biologisk sikkerhetskabinett hvis mulig, og passende personlig verneutstyr, inkludert hansker og maske, skal brukes. Se Prosedyre-avsnittet for mer informasjon om subkultivering. For å minimere muligheten for lekkasje under inokulering av prøven i blodkulturflaskene, bruk sprøyter med permanent festede nåler eller Luer-Lok-spisser. Oppbevaringsinstruksjoner BACTEC-flaskene er ferdig til bruk ved mottak og trenger ingen rekonstituering eller fortynning. Lagres ved 2 25 C, på et tørt sted, borte fra direkte sollys. PRØVETAKING Prøvene må samles inn med steril teknikk for å redusere risikoen for kontaminering. Blodvolum fra 0,5 til 5,0 ml kan dyrkes. Optimale resultater oppnås med 1,0 til 3,0 ml. Hvis blodvolumet som skal dyrkes er mindre enn 0,5 ml, kan påvisning av noen krevende organismer, som Haemophilus-arter, kreve tilsetning av et passende supplement, som beskrevet senere i dette pakningsvedlegget. Det anbefales at prøvene inokuleres i BACTEC-flaskene ved sengekanten. Vanligvis brukes en sprøyte med Luer-Lok-spiss til å ta prøven. Hvis det passer, kan en Vacutainer Needle Holder og en Vacutainer Blood Collection Set, Vacutainer Safety-Lok Blood Collection Set eller annet butterfly -slangesett brukes. Hvis det brukes et sett med nål og slange (direkte prøvetaking), observer nøye retningen av blodstrømmen når du starter prøvetakingen. Vakuumet i flasken overgår vanligvis 5 ml, så brukeren skal overvåke det innsamlede volum ved å se på 5 ml graderingsmerkene på etiketten på flasken. Når de ønskede 1 3 ml er samlet inn, skal blodstrømmen stoppes ved å knipe i slangen og fjerne slangesettet fra BACTEC-flasken. Den inokulerte BACTEC-flasken skal transporteres til laboratoriet så raskt som mulig. FRAMGANGSMÅTE Fjern kapselen fra toppen på BACTEC-flasken og inspiser flasken for sprekker, kontaminering, uklarhet og bulende eller nedtrukne korker. SKAL IKKE BRUKES hvis det sees noen defekter. Tørk proppen med alkohol før inokulering (jod er ikke å anbefale). Injiser eller trekk opp maksimalt 5 ml prøve i hver flaske, med aseptisk teknikk (se avsnittet om Begrensninger for prosedyren). Inokulerte aerobe flasker må plasseres i BACTEC-blodkulturinstrumentet så snart som mulig for inkubering og overvåkning. Hvis plassering av en inokulert flaske i instrumentet er blitt forsinket, og det sees synlig vekst, skal den ikke testes i BACTEC-blodkulturinstrumentet, men heller subkultiveres, gramfarges og behandles som en presumptivt positiv flaske. Flasker som settes i instrumentet vil automatisk testes hvert tiende minutt gjennom hele varigheten av testprotokollen. Positive flasker fastslås av BACTEC-blodkulturinstrumentet og identifiseres som dette (se den aktuelle brukerhåndboken for BACTEC-blodkulturinstrumentet). Sensoren inne i flasken vil ikke være synlig forskjellige i positive og negative flasker, men BACTEC-blodkulturinstrumentet kan bestemme en forskjell i fluorescens. Hvis en negativ flaske ser ut til å være synlig positiv (dvs. sjokoladefarget blod, bulende propp, lysert og/eller svært mørknet blod), skal den subkultiveres og gramfarges og behandles som presumptivt positivt. Positive flasker skal subkultiveres og en gramfarget flaske gjøres i stand. I de aller fleste tilfeller vil organismer sees, og en preliminær rapport kan sendes til legen. Subkulturer på selektive media og en foreløpig direkte antimikrobiell resistenstest kan gjøres på væsken i BACTEC-flaskene. Subkultivering: Før subkultivering, sett flasken i en opprett posisjon og legg en spritserviett over proppen. For å frigjøre trykket i flasken, sett inn en steril nål med passende filter eller tupfer gjennom spritservietten og propp. Nålen skal fjernes etter at trykket er utløst og før det tas prøver til subkultivering fra flasken. Innføring og tilbaketrekning av nålen skal gjøres med en rettlinjet bevegelse, unngå å vri på den. For maksimal oppvekst av isolater, kan negative kulturer kontrolleres ved farging og/eller subkultiveres før de kastes som negative. KVALITETSKONTROLL Kvalitetskontroll må utføres i henhold til lokale og/eller nasjonale retningslinjer eller akkrediteringskrav og ditt laboratoriums standard kvalitetskontrollprosedyrer. Det anbefales at brukeren refererer til aktuelle CLSI (tidligere NCCLS)-retningslinjer og CLIA-regler for egnete kvalitetskontrollprosedyrer. Flaskene må ikke brukes etter utløpsdato. Bruk ikke flasker som har synlige sprekker eller feil, avfallsbehandle flasken på korrekt måte. Kvalitetskontrollsertifikat leveres med hver kartong av medier. Kvalitetskontrollsertifikatene lister opp testorganismer, inkludert ATCC-kulturer spesifisert i CLSI standard, Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media (kvalitetskontroll for kommersielt tillagde blodkulturmedier). 8 Tidsområdet for tid-til-påvisning i timer var 72 timer for hver av organismene listet opp i kvalitetskontrollsertifikatet for dette mediet: = 2

3 Organisme Streptococcus pyogenes ATCC Escherichia coli ATCC Streptococcus pneumoniae* ATCC 6305 Pseudomonas aeruginosa ATCC Candida albicans ATCC Neisseria meningitidis ATCC Alcaligenes faecalis ATCC 8750 Haemophilus influenzae ATCC Staphylococcus aureus ATCC *CLSI Strain Se i den aktuelle brukerhåndboken for BACTEC-blodkulturinstrumentet for informasjon om kvalitetskontroll for BACTECblodkulturinstrumentet. PROSEDYRENS BEGRENSNINGER Kontaminering Vær nøye med å unngå kontaminering av prøven ved innsamling og ved inokuleringen i BACTEC-flasken. En kontaminert prøve vil gi en positiv avlesning, men vil ikke indikere et relevant, klinisk resultat. Vurderingen av dette må gjøres av brukeren på basis av slike faktorer som hvilken type organisme som finnes, forekomst av samme organisme i flere kulturer, pasienthistorikk, korrekt kontroll av utstyret osv. Påvisning av SPS-sensitive og krevende organismer fra blodprøver Fordi blod kan nøytralisere den toksiske virkningen av SPS mot organismer som er sensitive for SPS (slik som Neisseria species), kan tilstedeværelsen av optimale blodmengder (1 3 ml) være gagnlig for påvisning av disse organismene. Noen krevende organismer, som visse Haemophilus species, trenger vekstfaktorer som NAD eller faktor V, som blodprøven vil gi. Hvis blodprøvevolumet er svært lite (0,5 ml eller mindre), kan et passende supplement være nødvendig for å påvise disse organismene. BACTEC FOS-supplementet for krevende organismer kan brukes som næringssupplement. Ikke-levedyktige organismer Et gramfarget utstryk fra et blodkulturmedium kan inneholde et lite antall ikke-levedyktige organismer fra innholdsstoffene i mediet, fargestoffer, immersjonsolje, objektglass og prøver brukt til inokulering. I tillegg kan pasientprøven inneholde organismer som ikke vil vokse i blodkulturmediet eller i dyrkningsmedier som brukes til subkultur. Slike prøver skal subkultiveres på spesialmedier som passer. 9 Antimikrobiell aktivitet Nøytralisering av antimikrobiell aktivitet på grunn av resiner varierer med dosenivået og tidspunktet for prøvetaking. Studier har vist at resinene som er til stede i dette mediet ikke nøytraliserer imipenem-cilastatin antimikrobielle midler tilstrekkelig. Påvisning av Streptococcus pneumoniae I aerobe medier vil S. pneumoniae typisk være visuelt og instrumentelt positiv, men i noen tilfeller vil ingen organismer sees med gramfarging eller påvises ved rutinemessing subkultivering. Hvis en anaerob flaske også ble inokulert, kan organismen vanligvis påvises ved å gjøre en aerob subkultur på den anaerobe flasken, siden det er rapportert at organismen vokser godt under anaerobe forhold. 10 Generelle betraktninger Optimal påvisning av isolater vil bli oppnådd ved å tilsette 1 3 ml blod. Bruk av mindre eller større volum kan påvirke påvisningsraten og/eller påvisningstiden negativt. Blod kan inneholde antimikrobielle midler eller andre inhibitorer som kan hindre veksten av mikroorganismer eller gjøre den langsommere. Dersom det er organismer til stede som ikke produserer tilstrekkelig CO 2 for påvisning, eller det har vært signifikant vekst før flasken er plassert i systemet, kan det føre til falsk negative avlesninger. Falsk positive kan forekomme ved høyt antall hvite blodlegemer. = 3

4 FORVENTEDE RESULTATER Inokulerte dyrkningsstudier ble utført med inokulasjonsnivåer beregnet til 10 til 50 cfu pr blodkulturflaske av både ATCC og ville mikrobestammer. Følgende er en liste over de organismene som ble påvist som positive i BACTEC Peds Plus/Fblodkulturmedium innen en periode på fem (5) dager. Acinetobacter baumanii Acinetobacter lwoffii Alcaligenes faecalis Candida albicans Candida (Torulopsis) glabrata Corynebacterium J-K Cryptococcus neoformans Enterobacter cloacae Escherichia coli Haemophilus influenzae Haemophilus parainfluenzae Klebsiella pneumoniae Neisseria gonorrhoeae Neisseria meningitidis Proteus mirabilis Providencia stuartii Pseudomonas aeruginosa Salmonella typhimurium Serratia marcescens Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Stenotrophomonas (Xanthomonas) maltophilia Streptococcus pneumoniae Streptococcus Gruppe A Streptococcus Gruppe D Interne studer har vist at antimikrobielle midler blir effektivt nøytralisert av resinene som brukes i BACTEC-resinmedier. I disse testene ble antimikrobielle midler tilsatt i klinisk relevante konsentrasjoner, direkte i resinmediene før inokulering med følsomme stammer. Disse testene ble utført parallelt med bruk av ikke-resin medier som kontroller. Antimikrobielle midler i følgende kategorier ble nøytralisert av resinene i disse studiene: penicilliner, cephalosporiner, (1., 2. og 3. generasjon), makrolider, aminoglykosider, fluorokinoloner, lincomyciner, tetracyklin og kloramfenikol. EGENSKAPER VED UTFØRELSEN I en ekstern, klinisk studie ved to sentra, sammenlignet man BACTEC Peds Plus/F-blodkulturmedium med BACTEC NR Peds Plus -blodkulturmedium, totalt godkjente, parede prøver ble undersøkt. Totalt 430 organismer ble påvist. Av disse var 342 (80 %) ansett for klinisk signifikante og 88 (20 %) ble ansett ikke klinisk signifikante. Av de klinisk signifikante isolatene var det 219 (64 %) som ble påvist i begge medier, 63 (18 %) ble påvist bare i BACTEC Peds Plus/Fblodkulturmedium, og 60 (18 %) ble påvist bare i BACTEC NR Peds Plus -blodkulturmedium. Tabell 1 viser isolatene som ble påvist etter mediumtype. Fire falsk positive blodkulturflasker og ingen falsk negative blodkulturflasker ble identifisert i BACTEC Peds Plus/F-blodkulturmedium under denne studien. Gjennomsnittlig tid-til-påvisning for BACTEC Peds Plus/F-blodkulturmedium var 25 timer, mens gjennomsnittlig tid-tilpåvisning for BACTEC NR Peds Plus -blodkulturmedium var 33 timer. Tabell 1: Påvisning av isolat i klinisk studie mediumtype Organisme Påvist bare i Peds Plus/F Kun påvist i NR Peds Plus Påvist i begge Gramnegative Grampositive Gjærsopp Liste over organismer påvist i BACTEC Peds Plus/F under kliniske forsøk: Actinobacillus lignieresi Burkholderia (Pseudomonas) cepacia Candida albicans Candida tropicalis Citrobacter freundii Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Enterococcus spp. Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Neisseria meningitidis Pseudomonas fluorescens Salmonella spp. Serratia liquefaciens Staphylococcus aureus Staphylococcus spp. koag. neg. Streptococcus Gruppe B Streptococcus constellatus Streptococcus pneumoniae Streptococcus salivarius Streptococcus intermedius TILGJENGELIGHET Kat. nr. Beskrivelse BACTEC Peds Plus/F Culture Vials, eske med 50 flasker REFERANSER: 1. Wallis, C. et al. Rapid isolation of bacteria from septicemic patients by use of an antimicrobial removal device. J. Clin. Microbiol. 1980, 11: Applebaum, P.C. et al. Enhanced detection of bacteremia with a new BACTEC resin blood culture medium. J. Clin Microbiol. 1983, 17: Jungkind, D.L. et al. Evidence for a second mechanism of action of resin in BACTEC NR16A aerobic blood culture medium. Abstracts of the Annual Meeting of Amer. Soc. for Microbiol Clinical and Laboratory Standards Institute Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, Pa. = 4

5 5. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 7. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Clinical and Laboratory Standards Institute Approved Standard M22-A3. Quality control for commercially prepared microbiological culture media, 3rd ed., CLSI, Wayne, Pa. 9. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.L. Landry and M.A. Pfaller Manual of clinical microbiology, 9th ed., American Society for Microbiology, Washington, D.C. 10. Howden, R.J. J. Clin. Path. 1976, 29: = 5

6 = = == _bkbu=iáãáíéç= ==_ÉÅíçåI=aáÅâáåëçå=~åÇ=`çãé~åó= T=içîÉíçå=`áêÅäÉ= = _~ó=h=n~lçi=pü~ååçå=fåçìëíêá~ä=bëí~íé= pé~êâëi=ja=onnro= = pü~ååçåi=`çìåíó=`ä~êéi=fêéä~åç= EUMMF=SPUJUSSP= = qéäw=prpjsnjqtjovjom= = = c~ñw=prpjsnjqtjorjqs= = ^q``=áë=~=íê~çéã~êâ=çñ=íüé=^ãéêáå~å=qóéé=`ìäíìêé=`çääéåíáçåk= _ai=_a=içöçi=_^`qb`i=méçë=mäìëi=s~åìí~áåéêi=p~ñéíójiçâi=clp=~åç=iìéêjiçâ=~êé=íê~çéã~êâë=çñ=_éåíçåi=aáåâáåëçå=~åç= `çãé~åók=«=ommu=_a== = 6