Nøyaktig og presis? Er vi skikket til å utføre resistensbestemmelse? Årlig kvalitetskontroll av bioingeniører.

Transkript

1 Nøyaktig og presis? Er vi skikket til å utføre resistensbestemmelse? Årlig kvalitetskontroll av bioingeniører. Astrid Lia Fagansvarlig for resistensbestemmelse Mikrobiologisk avdeling, Sykehuset i Vestfold AstridA

2 Hvorfor er resistens så viktig da?

3

4

5 Innholdsfortegnelse: 1 Innledning 2 Lappediffusjon 2.1 Medier 2.2 Tillaging av inokulum 2.3 Inokulering av skåler 2.4 Antibiotikalapper 2.5 Inkubering 2.6 Avlesning 3 Agar gradientdiffusjon 3.1 Medium 3.2 Tillaging av inokulum 3.3 Inokulering av skåler 3.4 Antibiotikastrimler 3.4 Inkubering av skåler 3.5 Avlesning av strimler 4 Referanser Versjon 1.1 oktober 2012 Ansvarlig: Anita Løvås Brekken og Olav B. Natås Foto: Christian Lidstedt 1

6 1 Innledning Resistensbestemmelse av bakterier er en av de viktigste testene som blir utført ved en klinisk mikrobiologisk avdeling. Hurtig og riktig svar til rekvirent kan være livreddende for pasienten. De vanligst brukte fenotypiske metoder brukt i rutinediagnostikken er lappediffusjonsmetoden som angir bakteriens følsomhet i kategoriene S, I, R, samt agar gradientdiffusjon som angir følsomheten i MIC. EUCAST har laget en standardisert lappediffusjonsmetode for Europa. Med en felles metode vil en kunne sammenlikne resultater mellom ulike laboratorier og land. Det er derfor viktig at prosedyrene følges nøye.

7 Avlesningsguide Ta hensyn til all vekst som ses med blotte øyet! Unntak E. coli Ciprofloxacin S. aureus Linezolid S. aureus Erytromycin Koliformer Ampicillin Observer at det ofte er vekst i områder med α-hemolyse! S. pneumoniae Kloramfenikol S. pneumoniae Tetracyklin S. pneumoniae Cefaklor

8 Innholdsfortegnelse: 1 Innledning 2 Kort beskrivelse av systemet for kvalitetskontroll 3 Faktorer som påvirker resultatet av resistensbestemmelse 4 Kvalitetssikring av resistensbestemmelse 5 Program for rutinemessig kvalitetskontroll 6 Avviksbehandling 7 Referanser Versjon 3.2 Oktober 2012 Ansvarlig: Olav B. Natås og Anita Løvås Brekken Foto: Christian Lidsted

9 2 Kort beskrivelse av systemet for kvalitetskontroll Kvalitetskontrollen er delt i tre elementer: 2.1 Kontroll av agarskåler til resistensbestemmelse 2.2 Kontroll av nøyaktighet og presisjon Nøyaktighet (accuracy) er evne til å treffe den sanne verdien. Presisjon (precision) er evne til å få samme resultat ved ulike oppsett. 2.3 Kontroll av evne til å påvise spesielle resistensegenskaper

10 Et hav av prosedyrer

11 Enn så lenge hovedsakelig manuell metode.. Avhengig av: Bioingeniørens kunnskap om resistens og resistensmekanismer Bioingeniørens vurderingsevne / tolkning Bioingeniørens syn Derfor viktig med kvalitetskontroll av bioingeniørene!

12 Program for kvalitetskontroll av resistensbestemmelse, SiV. 1. Brytningspunkter og sonegrenser: Årlig revidering av tabeller og metoder 2. Antibiotikalapper: Fortløpende kontroll av utskiftingsfrekvens 3. Medier: Kontroll ved produksjon av ny batch 4. Disk-diffusjon: Ukentlig kontroll av nøyaktighet og presisjon 5. Disk-diffusjon: Årlig individuell avlesning av hemningssoner 6. Disk-diffusjon: Årlig individuell utførelse av resistensbestemmelse 7. Resistensmekanismer: Kontroll av evne til påvisning 8. Kliniske isolater: Sammenligning med nasjonale distribusjonsdata 9. Ekstern kvalitetskontroll: Deltagelse i SLP 10.Kvalitetskontroll av resistensdata i MLX historikk 11.Vitek 2 (Biomerieux): Kontroll av kort ved ny lot 12.Ukentlig kontroll av MIC-verdier

13 Årlig individuell avlesning og utførelse Startet i 2005 Til å begynne med syntes deltagerne det var litt skummelt, noen følte seg overvåket Nå en naturlig del av kvalitetssikringen. Alle ser nytten av en personlig tilbakemelding / justering Alle deltagere får utdelt et nummer slik at resultatene blir anonymisert ved presentasjonen på avdelingsmøtet.

14 Historikk resistensmetoder Mikrobiologisk avd., SiV 2005: Rosco-tabletter 2006: Oxoid-lapper på ISA / ISA blod 1/ : EUCAST-metoden; Oxoid-lapper på MHA / MHF

15 Årlig individuell avlesning av hemningssoner Ved denne kontrollen sjekkes personavhengig variasjon i avlesning av resistens. Utføres årlig av alle bioingeniører som utfører res.best. og samtlige leger. Avlesning av størrelse på hemningssoner på ferdig utførte resistensbestemmelser; 6 stammer med 3-5 midler. Både MHA og MHF inngår.

16 Årlig individuell utførelse av resistensbestemmelse Ved denne kontrollen sjekkes personavhengig variasjon i utførelse av resistens. Utføres årlig av 10 utvalgte bioingeniører og samtlige assistentleger. Individuelle resistensoppsett. Man res.er 6 forskjellige ATCC-stammer med 3-5 midler. Både MHA og MHF inngår.

17 Evaluering Individuell samtale med hver deltager. Avvikende avlesningsresultat leses av på nytt for å skille mellom avlesningsfeil og registreringsfeil. For hver mikrobe/middel-kombinasjon gis poeng på en skala fra 0 til 2 for begge parametre (se tabell). Total poengscore skal være >50 % og bør være >75 % av oppnåelige poeng. Resultatene sammenlignes med resultater fra tidligere år og presenteres på avdelingsmøte. Tiltak vurderes i forhold til avvikende resultater. Ved avvikende resultater diskuteres riktig avlesning i henhold til prosedyre.

18 Poengscore

19 2006: Avlesning - S.Aureus Klindamycin Erytromycin

20 2006: Avlesning - P.aeruginosa Aztreonam og Meropenem AT MP

21 2006: Utførelse - E.coli Aztreonam og Meropenem AT MP

22 2006: Utførelse H.influenzae HINF Presisjon Nøyaktighet Ampicillin 1 Middels 1 Middels Penicillin V 2 God 1 Middels G Tetracyclin 0 Dårlig 2 God Trim-sulfa 1 Middels 2 God Lorakarbef 0 Dårlig 1 - Middels Poeng / oppnåelig 4 / 10 7 / 10 Totalt / oppnåelig 11 / 20 % av oppnåelig 55

23 2006: Utførelse E.coli ECOL Presisjon Nøyaktighet Ampicillin 2 God 1 Middels Ciprofloxacin 1 Middels 2 God Nalidiksin 1 Middels 1 Middels Cefotaxim 1 Middels 2 God Ceftazidim 0 Dårlig 1 Middels Trim-sulfa 2 God 2 God Aztreonam 2 God 2 God Cefuroxim 1 Middels 2 God Gentamicin 2 God 2 God Meropenem 0 Dårlig 1 Middels Pip-tazo 2 God 2 God Mecillinam 1 Middels 2 God Nitrofurantoin 2 God 2 God Trimetoprim 1 - Middels 2 God Poeng /oppnåelig 18 / / 28 Totalt /oppnåelig 42 / 56 % av oppnåelig 75 Mg

24 Årlig individuell utførelse av resistensbestemmelse Revidert 2010 Ved denne kontrollen sjekkes personavhengig variasjon i utførelse av resistens. Utføres årlig av 10 utvalgte bioingeniører og samtlige assistentleger Individuelle resistensoppsett (ett oppsett per person) som deretter avleses av bioingeniør med fagansvar for resistensbestemmelse. Man res.er 6 forskjellige ATCC-stammer med 3-5 midler. Både MHA og MHF inngår.

25 2010: Avlesning

26 2010: Utførelse

27 2011; Utførelse og avlesning

28 2012; Utførelse og avlesning

29 Kvalitetskontroll av bioingeniører

30 Moden for revidering?

31 Er vi skikket til å utføre resistensbestemmelse? Konklusjon: JA! Vi er ganske gode, men må stadig jobbe for å bli enda bedre!

32 Takk for oppmerksomheten! Noen spørsmål??