Kvalitetskontroll av resistensbestemmelse. Iren Høyland Löhr Avd. for medisinsk mikrobiologi, Stavanger Universitetssjukehus AFA-kurs, november 2015

Størrelse: px
Begynne med side:

Download "Kvalitetskontroll av resistensbestemmelse. Iren Høyland Löhr Avd. for medisinsk mikrobiologi, Stavanger Universitetssjukehus AFA-kurs, november 2015"

Transkript

1 Kvalitetskontroll av resistensbestemmelse Iren Høyland Löhr Avd. for medisinsk mikrobiologi, Stavanger Universitetssjukehus AFA-kurs, november 2015

2 Disposisjon EUCASTs lappediffusjonsmetode Resistensbestemmelse og faktorer som påvirker resultatet (kontrollstasjoner) Kvalitetskontroll

3 EUCASTs lappediffusjonsmetode EUCAST: Disk diffusion Manual v. 5.0 Disk diffusion Slide Show v. 5.0 Disk diffusion Reading guide v. 4.0 QC table v. 5.0 NordicAST: Metodbeskrivning bildspel v. 5.0 Avläsningsguide v. 4.0 AFA: «Resistensbestemmelse av bakterier. Metodebeskrivelse» «Kvalitetskontroll av reistensbestemmelse av bakterier»

4 Faktorer som påvirker resultatet av resistensbestemmelsen (kontrollstasjoner) Medium Antibiotikadepot (lapper og gradienttester) Praktisk gjennomføring: Inokulum Applikasjon av lapper Inkubering Avlesning

5 Medium (I) Mueller Hinton(MH) Mueller Hinton Fastidious(MH-F) 5% defibrinert hesteblod; 20 mg/l β-nad ph: 7,2 7,4 Lav ph kan gi både for små og for store soner Agardybde: 4 ± 0,5 mm

6 Medium (II) Divalente kationer (Ca 2+, Mg 2+ ) For høye nivåer gir små soner (f. eks. aminoglykosider) Thymin og thymidin For høye nivåer gir små soner (f. eks. trimetoprim og sulfa) Forurensning? Oppbevaring / holdbarhet (8-10 C; en uke )

7 Antibiotikadepot Oppbevaring av antibiotikadepoter (= lapper og gradienttester) Følg produsentens anvisninger nøye Obs: lys, temperatur, fuktighet og holdbarhetsdato Både antibiotikadepoter og medier skal ha værelsestemperatur når de brukes

8 Inokulum (I) Standardisert inokulum: 0,5 McFarland Konfluerende og jevn vekst Tykkelse på inokulum og bløt/tørr pensel påvirker sonediameter mest!

9 Inokulum (II) E. coli riktig S. aureus - riktig H. influenzae - riktig E. coli for tynn S. aureus feil teknikk H. influenzae feil teknikk og for tynn

10 Applikasjon av lapper og inkubering minutters regelen Max 6 lapper på en vanlig skål (90 mm) Skålene inkuberes med bunnen opp ved 35±1 o C i timer MH-F i atmosfære med 5±1% CO skåler i en stabel

11 Avlesning Avlesning ved full hemningssone 100% Avles mot mørk bakgrunn og med påfallende lys (ca. 30 cm avstand) MH: fra baksiden MH-F: fra forsiden (uten lokk) Bruk linjal, skyvelær eller automatisk sonemåler

12 Avlesning unntak Bakterie Antibiotika Avlesning Proteus spp. Alle Overse sverming. Streptococcus spp. Alle Avles vekstsone, ikke β- hemolyse (det er ofte vekst i områder med α- hemolyse). Alle bakterier Stenotrophomonas maltophilia Trimetoprim, trimetoprimsulfamethoxazol Trimetoprimsulfamethoxazol Mål den indre sonen ved tydelig dobbelsone, men overse svak vekst i den indre hemningsonen. Se bort fra innvekst og mål den ytre sonen Enterococcus spp. Vancomycin Hold skålen opp mot lyset og undersøk sonen. Utydelig sonekant og enkeltkolonier i sonen indikerer vancomycin resistens.

13 Bakterie Antibiotika Avlesning Enterobacteriaceae Ampicillin Overse svak vekst som kan opptre som en indre sone. E. coli Mecillinam Overse enkeltkolonier inne i sonen. S. aureus Bensylpenicillin Hold skålen opp mot lyset og undersøk sonekanten. Dersom sonekanten er skarp (og 26 mm), rapporter som R. Staphylococcus spp. Linezolid Hold skålen opp mot lyset og undersøk sonen. Staphylococcus spp. Cefoxitin Undersøk sonen nøye for å detektere evt. kolonier inne i sonen.

14 Avlesning unntak (bilder) For eksempler vist på kurset se: Metodbeskrivning bildspel v. 5.0 Avläsningsguide v. 4.0

15 Kvalitetskontroll Standardprogram Kontroll av medium Kontroll av nøyaktighet og presisjon Kontroll av evne til å påvise spesifikke resistensmekanismer Utvidet program

16 Standardprogram Kontroll av medium (medieproduksjon) Forurensning, vannkvalitet, autoklavering, ph, agartykkelse, innhold av divalente kationer, thymin og thymidin etc. Kontroll av nøyaktighet og presisjon Praktisk utføring av resistensbestemmelse og avlesning Referansestammer testes daglig mot et representativt utvalg av antibiotika (target/range finnes i QC-tabellen) Kontroll av evne til å påvise spesifikke resistensmekanismer Referansestammer med aktuelle mekanismer (MRSA, VRE, ESBL, BLNAR ) testes mot relevante antibiotika

17 Referansestammer - standard Mikrobe Referansestamme Egenskaper E. coli ATCC 25922; NCTC 12241; CIP 7624; DSM1103; CCUG 17620; CECT 434 Følsom villtype E. coli ATCC 35218; NCTC 11954; CIP ; DSM 5923; CCUG 30600; CECT 943 TEM-1 β-lactamase produserende (ampicillin resistent) P. aeruginosa ATCC 27853; NCTC 12903; CIP 76110; DSM 1117; CCUG 17619; CECT 108 Følsom villtype S. aureus ATCC 29213; NCTC 12973; CIP ; DSM 2569; CCUG 15915; CECT 794 Svaktβ-lactamase produserende E. faecalis ATCC 29212; NCTC 12697; CIP ; DSM 2570; CCUG 9997; CECT 795 Følsom villtype S. pneumoniae ATCC 49619; NCTC 12977; CIP ; DSM 11967; CCUG Nedsatt følsomhet for bensylpenicillin H. influenzae ATCC 49766; NCTC 12975; CIP ; DSM 11970; CCUG Campylobacter jejuni ATCC 33560; NCTC 11351; CIP 702; DSM 4688; CCUG Følsom villtype Følsom villtype

18 Referansestammer - spesifikke resistensmekanismer Mikrobe Referansestamme Egenskaper K. pneumoniae ATCC ; NCTC 13368; CCUG 45421; CECT ESBL A produserende (SHV-18) 7787 S. aureus NCTC Meticillin heteroresistent (MRSA); meca positiv H. influenzae ATCC 49247; NCTC 12699; CIP ; DSM 9999; CCUG β-lactamase negativ, ampicillin resistent (BLNAR) E. faecalis ATCC 51299; NCTC 13379; CIP ; DSM 12956; CCUG Høygradig aminoglycosid resistent (HLAR) og vankomycin resistent (VRE); vanb positiv; vankomycin MIC 8-16 mg/l

19 Referansestammer En referansestamme er genetisk stabil og skal ha en MIC-verdi som ligger innenfor det konsentrasjonsområdet som er aktuelt ved bruk av disk diffusjonsmetoden Leverandører ATCC: American Type Culture Collection NCTC: National Collection of Type Cultures CCUG: The Culture Collection University of Gothenburg CIP: Collection de Institut Pasteur DSMZ: Deutche Stammensammlung für Mikroorganismen und Zellkulturen CECT: Colection Espanola de Cultivos Tipo Referansestammer krever spesiell pleie og oppbevaring

20 Utvidet program kliniske isolater testes fortløpende en gang i året mot spesifikke antibiotika Medianverdien av sonediameter skal ikke avvike mer enn ± 2 mm fra EUCASTs medianverdi

21 Ampicillin / E. coli

22 Cefotaxime / K. pneumoniae

23 Takk for oppmerksomheten!