REF A - no /03

Transkript

1 REF A - no /03 chromid CPS agar/columbia CNA + 5 % saueblod (CPS3/CNA) MULTIMEDIA Kromogent medium for kvantifisering av organismer i urinprøver og direkte identifisering av Escherichia coli, Enterococcus, KESC og Proteae. Selektiv isolering av krevende bakterier. Påvisning av hemolyse. IVD SAMMENDRAG OG FORKLARING Dette produktet består av to dyrkningsmedier, fordelt i en Petri-skål med separate inndelinger. Det er beregnet på bruk av urinprøver. Isolasjons- og identifikasjonsmedium for: Mikrobiell antallsbestemmelse av prøven ved hjelp av en standardisert inokulasjonsmetode. Identifisering av følgende bakteriegrupper: - Escherichia coli - Enterococcus, - Klebsiella, Enterobacter, Serratia, Citrobacter (KESC), - Proteus, Providencia, Morganella (Proteae). (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) Columbia CNA agar + 5 % saueblod: Selektivt isolasjonsmedium til dyrking av Gram-positive bakterier (11). PRINSIPP chromid TM CPS agar består av en rik næringsbase som kombinerer forskjellige peptoner og 2 kromogene substrat som gjør det mulig å påvise aktiviteter til spesifikke enzymer. Indolpåvisning forbedres ved å inkludere tryptofan i agaren. Den høye konsentrasjonen av agar forebygger sverming av Proteus. Direkte identifikasjon av bakterien som isoleres hyppigst isoleres ved urinveisinfeksjoner er basert på følgende prinsipp: E.coli: spontan farging (rosa til burgunder) av stammer som produserer ß-glukuronidase (ß-GUR) (12, 13, 14). Enterococcus, spontan turkis farging av stammer som produserer ß-glukosidase (ß-GLU) (15). KESC: spontan grønn til brungrønn farging av stammer som produserer ß-glukosidase (ß-GLU). Proteeae: spontan lysebrun til mørkebrun farging av stammer som produserer deaminase. Columbia CNA agar + 5 % saueblod: Denne agaren inneholder en peptonblanding som er spesielt tilpasset dyrkning av krevende mikroorganismer (streptokokker, etc.) (16). Hemolyse kan avdekkes i saueblod. Dette er et grunnleggende vilkår for en orienterende bakterieidentifikasjon (17). De fleste Gram-negative bakterier og Bacillus hemmes av nalidixinsyren og colimycinet i agaren (17). SETTETS INNHOLD Bruksklart medium. REF Pakning med 20 plater (90 mm) CPS3/CNA * * merket på hver plate - CPS3-delen av skålen innholder chromid TM CPS agar. - CAN-delen av skålen innholder Columbia CNA agar + 5% saueblod. SAMMENSETNING Teoretisk formel. Dette medium kan justeres og/eller suppleres i henhold til de nødvendige ytelseskriteriene: chromid TM CPS agar Peptoner (svin eller storfe)...17,2 g L. tryptofan...0,9 g Hepes-buffer...0,4 g Kromogen blanding...6,87 g Agar...18 g Renset vann...1 l ph 7,3 Columbia CNA agar + 5 % saueblod Kasein og kjøttpepton (storfe og svin)...10 g Hydrolysert animalsk protein (storfe eller svin)...10 g Hjertepepton (storfe eller svin)...3 g Maisstivelse...1 g Natriumklorid...5 g Agar...13,5 g Blod (sau) ml Nalidixinsyre...0,015 g Colimycin...0,010 g Renset vann...1 l ph 7,3 NØDVENDIG REAGENS OG MATERIELL SOM IKKE ER INKLUDERT Reagens: ID Indol-TDA (Ref ). JAMES (Ref ). Materiale: 10 µl kalibrerte øser. Bakteriologiinkubator. Papirskiver. ADVARSLER OG FORSIKTIGHETSREGLER Kun til in vitro- diagnostisk bruk Kun til yrkesbruk. Dette settet inneholder produkter av animalsk opprinnelse. Sertifisert viten om opprinnelsen og/eller helsemessig status for dyrene kan ikke gi noen fullstendig garanti for at overførbare patogene agens ikke er tilstede. Derfor anbefales det at disse produktene behandles som potensielt smittefarlige og håndteres i henhold til vanlige forsiktighetsregler for sikkerhet (skal ikke inntas eller inhaleres). biomérieux SA norsk - 1

2 Alle prøver, mikrobielle kulturer og inokulerte produkter skal anses som smittefarlige og håndteres deretter. Det skal anvendes sterile teknikker og normale forsiktighetsregler for håndtering av den undersøkte bakteriegruppen gjennom hele denne prosedyren. Se " CLSI M29-A, Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline; Approved Guideline gjeldende revisjon". se "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, CDC/NIH siste utgave", for mer informasjon om forsiktighetsregler ved håndtering.eller de gjeldende bestemmelsene i landet hvor prosedyren blir utført. Dyrkningsmedier må ikke brukes som produksjonsmaterialer eller komponenter. Reagensene må ikke brukes etter utløpsdatoen. Reagensene må ikke brukes om emballasjen er skadet. Plater som er kontaminerte, hemolyserte, eller som avgir fukt, må ikke brukes. Ytelsesdata som er presentert ble funnet ved hjelp av prosedyren som er angitt i dette pakningsvedlegget. Endringer og/eller modifiseringer av prosedyren kan påvirke testresultatene. Under tolkning av testresultatene bør pasientens sykehistorie, kolonimessig og mikroskopisk morfologi tas i betraktning. Resultatene av eventuelle andre tester som er utført tidligere kan også brukes.. Bruk av dette mediet kan være vanskelig for personer som har problemer med å gjenkjenne farger. Det anbefales ikke å utføre indoltesten direkte på kolonien, da fargeendringer kan bli vanskelige å observere. OPPBEVARINGSBETINGELSER Platene kan oppbevares i esken ved 2-8 C inntil utløpsdatoen. Må beskyttes mot lys. Hvis platene ikke oppbevares i esken, kan de oppbevares i 2 uker ved 2-8 C i cellofanposen. PRØVER Mediet skal inokuleres direkte med urin. Vis hensyn til god laboratoriepraksis for prøveinnsamling og transport. BRUKSANVISNING 1. La platene nå romtemperatur. 2. Om nødvendig, tørk agaroverflaten ved å legge platene i inkubatoren ved 37 C. 3. Inokuler prøven så snart den ankommer laboratoriet, ved hjelp av en 10 µl kalibrert øse som, følger: - Senk øsen ned i urinen og hold den loddrett,, - Start inokulasjon med chromid TM CPS -agaren: (a) Lag en strek på platens radius for å spre urinen på øsen. (b), Lag deretter tette, tverrgående streker over hele mediets overflate, uten å tilsette mer urin, ved å arbeide ut fra midten til platens sider. - Inokuler deretter Columbia CNA agar + 5 % saueblod uten å tilsette mer urin. 4. Inkuber med bunnen opp ved 37 C under aerobe forhold. Riktig temperatur skal holdes med hensyn til aktuelle standarder. Kulturene undersøkes som regel etter 24 timers inkubasjonstid. AVLESNING OG TOLKNING Etter inkubasjonen må bakterieveksten observeres. Kvantifisering: Bestem konsentrasjonen av bakterier i prøven ved å sammenligne tettheten av koloniene på chromid TM CPS - agaren med diagrammet nedenfor (18) : SANNSYNLIG SANDSYNLIG KONTAMINERING TVIVLSOMT RESULTAT USIKKER SANNSYNLIG SANDSYNLIG INFEKTION TEST INFEKSJON Identifikasjon: Rosa til burgunderfargede kolonier eller gjennomsiktige med et rosa til burgunderfarget sentrum: E. coli-arter. Turkise kolonier og observasjon av Gram-positive kokker ved direkte undersøkelse: slekten Enterococcus. Hvis et av disse kjennetegnene ikke blir observert, må den isolerte mikroorganismen identifiseres ved hjelp av supplerende tester. biomérieux SA norsk - 2

3 Grønne til brungrønne kolonier og observasjon av Gram-positive staver ved direkte undersøkelse: KESC-gruppe. Identifiseringen av den isolerte mikroorganismen må bli etterfulgt av biokjemiske tester. Lysebrun til mørkebrun farging av kolonier eller bakterievekst: Utfør indolpåvisning ved hjelp av ID Indol-TDAreagensen eller JAMES-reagensen. Plasser en koloni på en papirskive, fuktet med en dråpe av R1-reagensen fra ID Indol-TDA-settet eller en dråpe av JAMES-reagensen. Etter få sekunder kan den oppnådde fargen bli observert: Farge oppnådd med JAMESreagens Tolkning Rosa til rød Blå Indol (+) Fravær av rosa til rød farge Fravær av blå farge Indol (-) Identifikasjon Farge opnådd med ID Indol- TDAreagens Indolproduserende Proteus, Providencia eller Morganella Proteus mirabilis Bekreft med oksidasetesten, som er negativ for Proteus Andre tilfeller: Lilla kolonier: Mistanke om Streptococcus agalactiae. Identifikasjon av den isolerte mikroorganismen må etterfølges av andre tester. Andre farger: Identifikasjon av den isolerte mikroorganismen må etterfølges av andre tester. Resultater: Rosa til burgunderfargede (β-glukuronidase) Turkise kolonier (β-glukokidase) Grønne til brungrønne kolonier (β-glukosidase) Lysebrun til mørkebrun farging (deaminase) E. coli Enterococcus, KESC-gruppe Indolproduserende Proteus Providencia Morganella Påvisning av indol P. mirabilis Observer bakterieveksten etter inkubasjonen. Registrer tilstedeværelsen av eventuelle særpregede hemolyser - α hemolyse: grønnlig farge rundt kolonien. - β hemolyse: klar sone rundt eller under kolonien. Identifisering av de isolerte mikroorganismene må etterfølges av biokjemiske eller immunologiske tester. KVALITETSKONTROLL Protokoll: Mediets næringskapasitet kan testes med følgende stammer: Escherichia coli ATCC Enterococcus faecalis ATCC Proteus vulgaris ATCC 6380 Område for forventede verdier: Stamme Resultater ved C Escherichia coli ATCC Enterococcus faecalis ATCC Proteus vulgaris ATCC 6380 Vekst innen 24 timer Rosa til burgunderfargede kolonier (ß-GUR (+)). Turkise kolonier (ß-GLU (+)). Brune kolonier Indol + Streptococcus pyogenes ATCC Streptococcus pneumoniae ATCC Område for forventede verdier: Stamme Resultater ved C Streptococcus pyogenes ATCC Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 Vekst innen 24 timer β hemolyse α hemolyse Merk: Det er brukerens ansvar å utføre kvalitetskontroll i henhold til den tiltenkte medieanvendelsen, og i overensstemmelse med eventuelle lokalt gjedende bestemmelser (frekvens, antall stammer, inkubasjonstemperatur ). METODENS BEGRENSNINGER Veksten er avhengig av den enkelte mikroorganismens krav. Det er derfor mulig at visse stammer med spesifikke krav (substrat, temperatur, inkubasjonsbetingelser ) ikke utvikler seg. Ca. 5 % av E. coli inneholder ikke ß-glukuronidase (fargeløse kolonier) (9). Andre arter enn E. coli kan produsere små rosa kolonier: f.eks. Staphylococcus (10, 19). biomérieux SA norsk - 3

4 Andre arter enn Enterococcus kan produsere turkise kolonier: f.eks. Staphylococcus, Streptococcus (spesielt S. agalactiae) eller bestemte gjærarter (10, 19, 20). Hvis andelen enterokokker i en blandingskultur er mindre enn andelen i andre mikroorganismer, er det mulig at forekomsten av disse ikke påvises. En positiv deaminasereaksjon forbundet med en negativ indoltest kan inntreffe med ulike arter av Proteus mirabilis (P. penneri og 2-3 % av P. vulgaris-stammer). Visse Pseudomonas-stammer kan produsere en brun pigmentering. Oksidasetesten gjør at de kan skilles fra Proteae. Visse Citrobacter-stammer kan produsere fargeløse til brune kolonier. Noen, hovedsakelig atypiske, stammer av visse enterobakteriearter i tillegg til E. coli (Citrobacter freundii, Enterobacter cloacae, Salmonella spp...) kan produsere en rosa til burgunder farge. Hvis den lokale fordelingen er spesiell med en høy forekomst av denne bakterietypen, kan en indoltest utføres på de rosa til burgunderfargede koloniene: - Hvis indoltesten er positiv (blå med ID Indol-TDAreagensen eller rosa til rød med JAMES-reagensen), er identifiseringen av E. coli bekreftet - Hvis indoltesten er negativ, er ytterligere identifisering nødvendig. I en polymikrobiell kultur må indoltesten bekreftes på en subkultur. Noen Gram-negative stammer kan vokse på dette mediet. UTFØRELSE Utførelse ble etablert ut ifra data av 90mm skål (Ref chromid TM CPS agar og Ref Columbia CAN + 5% saue blod). chromid TM CPS agar ble sammenlignet med CPS ID 2 agar. 495 urinprøver ble inkubert i timer ved 37 C. 359 mikroorganismer ble isolert på minst ett av de to mediene. Næringskapasitet: Den prosentvise fordelingen av stammer som produserer kolonier av samme størrelse eller større på chromid TM CPS -mediet enn på CPS ID 2-mediet blir vist i tabellen nedenfor: Antal stammer chromid TM CPS agar = CPS ID 2 chromid TM CPS agar > CPS ID 2 Gram-negativ ,4 10,2 Enterokokker 66 89,4 4,5 Koagulase-negative stafylokokker 10 80,0 20,0 Staphylococcus aureus 17 76,5 23,5 Andre Gram (+) og gjær 20 90,0 10,0 Alle mikroorganismer samlet ,2 10,0 Koloniene var større på chromid TM CPS i 10 % av tilfellene, spesielt for stafylokokker og gjær, og mindre i 2,8 % av tilfellene, hovedsakelig for enterokokker. Kvantifisering: Antallet oppnådd på chromid TM CPS og CPS ID 2 stemte overens (innenfor en kraft på 10) for 96,4 % av prøvene. Identifikasjon: Påvisningssensitiviteten og fargespesifisiteten til mikroorganismene på chromid TM CPS og CPS ID vises i tabellen nedenfor: Media CPS ID 2 ChromID TM CPS Arter gruppe eller Antall isolerte stammer Påvisnings følsomhet Fargespesifisitet E. coli / /124 KESC 53 48/53 48/48 Proteae 29 28/29 28/28 Enterokokker 66 65/66 65/65 Andre Gram (-) 23 Andre Gram (+) 44 og gjær E. coli /140 (1) 125/125 KESC 53 48/53 (2) 48/48 Proteae 29 29/29 29/29 Enterokokker 62 61/66 (3) 61/61 Andre Gram (-) 23 Andre Gram (+) og gjær 47 (4) Resultatene ble oppnådd innenfor grensene til den utførte studien (495 prøver). Begrensningene som ble angitt tidligere må bli tatt med i betraktning. (1) De uidentifiserte E. coli-stammene var ß- glukuronidase-negative og produserte hvite kolonier. (2) KESC-stammene som ikke ble identifisert, hørte hovedsakelig til arten Citrobacter freundii og produserte fargeløse til beige kolonier. (3) De 4 enterokokkstammene, som ikke ble identifisert med chromid TM CPS agar alene, var tilstede i en liten mengde i en blandet kultur med én eller flere andre mikroorganismer. Disse var ikke ansvarlig for urinveisinfeksjonen. For rene kulturer var påvisnings sensitiviteten for enterokokker identiske på de to mediene. (4) Én Corynebacterium-stamme, én coagulase-negativ staphylococcus-stamme og én Streptococcus agalactiae-stamme ble isolert på chromid TM CPS alene. Ytelsen ble evaluert ved 37 C ved hjelp av 108 bakteriestammer (Streptococcus pyogenes, Streptococcus agalactiae, gruppe D- streptokokker/enterokokker, Streptococcus pneumoniae, staphylococci, Listeria, Gram-negative og Gram-positive staver og anaerobe bakterier). biomérieux SA norsk - 4

5 Næringskapasitet Alle Gram-positive stammer med unntak av Bacillus, formerte seg innen 24 timer. Selektivitet: Tjuetre av de 26 Gram-negative stammene ble hemmet innen 48 timer. De 2 Bacillus-stammene ble hemmet. Hemolyse: Følgende hemolysetyper ble observert med stammer som ble testet etter 24 timers inkubasjonstid: β hemolyse for de 14 Streptococcus pyogenesstammene og for de 3 Listeria monocytogenesstammene. Merk: β hemolyse er ikke karakteristisk for disse artene: Visse stafylokokker og Streptococcus agalactiae har også produsert β hemolyse. α hemolyse for de 9 Streptococcus pneumoniaestammene og de 2 Erysipelothrix rusiopathiaestammene. AVFALLSHÅNDTERING Både brukte og ubrukte reagenser, samt annet smittefarlig engangsutstyr skal kasseres i samsvar med prosedyrer for håndtering av smittefarlige eller potensielt smittefarlige produkter. Det er hvert enkelt laboratoriums ansvar å håndtere avfall og avløpsvann i henhold til type og smitterisiko, og å destruere det (eller få det behandlet og destruert) i samsvar med alle gjeldende regelverk. REFERANSELISTE 1. CARRICAJO A., BOISTE S., THORE J. and al. - Comparative evaluation of five chromogenic media for detection, enumeration and identification of urinary tract pathogens. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis., 1999, vol. 18, p CHAUX C., CREPY M., XUEREF S. et al. Comparison of three chromogenic agar plates for isolation and identification of urinary tract pathogens. - Clin. Microbiol. Infect., 2002, vol. 8, p CIRAGIL P., GUL M., ARAL M. (Kahramanmaras, TR) - CPS ID 3 - a new chromogenic media used in detection of urinary infection agents R2150, Praha 2004, 14 th ECCMID. 4. CLARRIDGE J. E., JOHNSON J. R., PEZZLO M. T. - Laboratory diagnosis of urinary tract infections. In: Weissfeld A. S., ed. Cumitech 2B. Washington, DC: American Society for Microbiology FANJAT N., GARCIA N., ORENGA S. et al. (La Balme les Grottes, F) - Compatibility of CPS ID 3, a new chromogenic medium, with the Vitek 2 system. P484, Praha 2004, 14 th ECCMID. 6. MAILLER S., ORENGA S., PILLON E. et al. (La Balme les Grottes, F) - Impact of CPS ID 3, a new chromogenic medium, on identification and susceptibility results. R2161, Praha 2004, 14 th ECCMID. 7. MAZOYER M.A., ORENGA S., DOLEANS F. and al. Evaluation of CPS ID2 medium for detection of urinary tract bacterial isolates in specimens from a rehabilitation center. J. Clin. Microbiol., 1995, vol. 33, p MELEY R., ORENGA S., ROGER-DALBERT C. (Saint Etienne, La Balme les Grottes, F) - Evaluation of a new chromogenic culture medium CPS ID 3 for urinary tract infections. R2169, Praha 2004, 14 th ECCMID. 9. SAMRA Z., HEIFETZ M., TALMOR J. et al. Evaluation of use of a new chromogenic agar in detection of urinary tract pathogens. J. Clin. Microbiol., 1998, vol. 36, p SCARPARO C., PICCOLI P., RICORDI P. and al. Comparative evaluation of two commercial chromogenic media for detection and presumptive identification of urinary tract pathogens. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis., 2002, vol. 21, p FLANDROIS J.P., CHOMARAT M. Bactériologie médicale pratique - MEDSI / Mac GRAW-HILL, 1989 ISBN KILIAN M., BULOW P. - Rapid identification of Enterobacteriaceae - II. Use of a β-glucuronidase detecting agar medium (PGUA Agar) for the identification of E. coli in primary cultures of urine samples. - Acta Path. Microb. Scand., 1979, vol. 87, p HARREWYN L., BISSARDON O., MOUNIER M. et al. Identification et numération rapide des germes urinaires sur boîte contenant des substrats chromogènes et fluorogènes - Revue Française des Laboratoires, 1990, vol. 212, p RALOVICH B., IBRAHIM G.A.M., FABIAN A. and al. Beta- D-Glucuronidase (BDG) activity of Gram-negative bacteria" - Acta Microbiol. Hung., 1991, vol. 38, p SAVARINO A., PRATTICHIZZO F.A., MATTEI R. et al. - Importance of Streptococci and in particular of the Enterococci in urinary tract infections. Quad. Sclavo. Diagn., 1987 sept, vol. 23, n 3, p ELLNER P.D., STOESSEL C.J., DRAKENFORD E. et al. A new culture medium for medical bacteriology Am. J. Clin. Pathol., 1966, vol. 45, p DELMAS P., FRENEY J. Les streptocoques. Lyon Pharm., 1989, vol. 40, n 5, p REMIC : Référentiel en microbiologie médicale (bactériologie et mycologie) SFM 2 Edition KUMARI N., RAI A., JAISWAL C.P. et al. - Coagulase negative Staphylococci as causative agents of urinary tract infections-prevalence and resistance status in IGIMS. - Patna. Indian J. Pathol. Microbiol., 2001 oct., vol. 44, n 4, p AL-HEDAITHY S.S., FOTEDAR R. - Prevalence of Candida tropicalis in clinical specimens from patients with variable clinical syndromes over a 5-year period. Mycoses, 1997 sept., vol. 40, n 3-4, p biomérieux SA norsk - 5

6 OVERSIKT OVER SYMBOLER Symbol Betydning Katalognummer In Vitro-Diagnostisk medisinsk utstyr Produsent Temperaturbegrensning Brukes før Batchkode Beskytt mot lys. Se Bruksanvisningen Inneholder tilstrekkelig til <n> tester biomérieux, den blå logoen, chromid og CPS er brukte, avventende og/eller registrerte varemerker som tilhører biomérieux SA eller et av datterselskapene. ATCC er et brukt, avventende og/eller registrert varemerke som tilhører American Type Culture Collection. Alle andre varemerker tilhører sine respektive eiere. biomérieux SA au capital de RCS LYON Marcy-l'Etoile / France Tlf. 33 (0) Faks 33 (0)