BRUKSANVISNING FOR FERDIGLAGDE AGARSKÅLER

Transkript

1 BRUKSANVISNING FOR FERDIGLAGDE AGARSKÅLER PA Rev.: April 2013 Glucose Agar Agar with Chloramphenicol Agar with Gentamicin and Chloramphenicol Agar with Penicillin and Streptomycin BRUKSOMRÅDE Glucose Agar brukes for isolering og kultivering av fungi (gjærsopp, muggsopp og dermatofytter) fra kliniske prøver. Agar med kloramfenikol, Agar med gentamicin og kloramfenikol, og Agar med penicillin og streptomycin er selektive medier for isolering av fungi fra kliniske prøver.. PROSEDYRENS PRINSIPPER FORKLARING Mikrobiologisk metode. Sabouraud Glucose Agar er et medium for generelt bruk, opprinnelig utviklet for kultivering av dermatofytter. 1,2 I dag brukes det for isolering og kultivering av alle fungi. 3-5 Peptonene i Sabouraud Glucose Agar er kilder til nitrogenholdige vekstfaktorer. Glukose er en energikilde for vekst av mikroorganismer. Den høye glukosekonsentrasjonen er en fordel for veksten av (osmotisk stabile) fungi, mens de fleste bakterier ikke tolererer den høye sukkerkonsentrasjonen. I tillegg er den lave ph-verdien optimal for fungi, men ikke for mange bakterier. 3 Sabouraud Glucose Agar er bare lett selektiv mot bakterier. Agar with Chloramphenicol, Agar with Gentamicin and Chloramphenicol, og Agar with Penicillin and Streptomycin er selektive medier, basert på Sabouraud Glucose Agar. Det er tilsatt selektive midler for å hemme bakterier. Kloramfenikol er et bredspektret antibiotikum som hemmer et vidt spekter av gram-negative og gram-positive bakterier, men kan ha en hemmende effekt på flere patogene fungi. 4 Antimikrobielle midler som penicillin, gentamicin og streptomycin, eller en kombinasjon av disse, har vist seg å være effektive når det gjelder å hemme bakterier uten å påvirke veksten av fungi. 2-5 Disse mediene brukes for isolering av fungi fra kliniske prøver eller materialer som mistenkes for å inneholde bakteriell forurensning. Sabouraud Glucose Agar er ett av mediene som brukes i de mikrobielle grensetestene i USP og EP. 6,12 REAGENSER Tilsettinger: se tabell 1 FORHOLDSREGLER. Kun til profesjonelt bruk. Agarskålene må ikke anvendes dersom de viser tegn til mikrobiell kontaminering, misfarging, uttørking, sprekkdannelse eller andre tegn til svekkelse. Se dokumentet GENERELLE BRUKSANVISNINGER for aseptiske håndteringsprosedyrer, biologiske farer og avhending av brukte produkter. OPPBEVARING OG HOLDBARHET Agarskålene oppbevares etter mottak i originalinnpakningen på et mørkt sted med temperatur fra 2 til 8 C, inntil de skal brukes. Unngå frost og overopphetning. Agarskålene kan inokuleres frem til utløpsdatoen (se etiketten på pakken) og inkuberes i de anbefalte inkubasjonstider. Agarskåler fra åpnede stabler på 10 skåler kan brukes i én uke når de oppbevares på et rent sted med temperatur på 2 til 8 C. PA

2 Tabell 1: REAGENSER Sammensetninger* per liter renset vann Produktnavn Glucose Agar Agar with Penicillin and Streptomycin Agar Agar with Gentamicin and with Chloramphenicol Chloramphenicol Ingredienser Fordøyelse av 5,0 g 5,0 g 5,0 g 5,0 g kasein i pankreas Peptisk fordøyelse 5,0 5,0 5,0 5,0 av dyrevev Glukose 40,0 40,0 40,0 40,0 Agar 15,0 15,0 15,0 15,0 Penicillin G IU - - Streptomycin - 0,6 g - - Gentamicin - - 0,04 - Kloramfenikol - - 0,4 0,4 ph ph 5,6 +/- 0,2 5,6 +/- 0,2 5,6 +/- 0,2 5,6 +/- 0,2 *Justert og/eller tilsatt som påkrevd for å oppfylle funksjonskriteriene. BRUKERKVALITETSKONTROLL Prøver, representative for inokulatet, med følgende stammer (se dokumentet GENERELLE BRUKSANVISNINGER for detaljer). Se fotnoten for inkubering. Produktnavn Glucose Agar Agar with Penicillin and Streptomycin Teststammer **Candida albicans ATCC **Saccharomyces cerevisiae DSM 1333 ** Aspergillus brasiliensis ATCC16404 ** Penicillium roquefortii ATCC 9295 ***Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 *Staphylococcus Ingen hemming aureus ATCC *Escherichia coli Ingen hemming ATCC Ikke-inokulert Inkubering: *48 h C / **</= 5 days, C, aerob Agar with Agar with Gentamicin and Chloramphenicol Chloramphenicol Fullstendig hemming Fullstendig hemming Lys ravgul PROSEDYRE Materialer som følger med Glucose Agar, Agar with Chloramphenicol, Agar with Gentamicin and Chloramphenicol eller Agar with Penicillin and Streptomycin, alle levert i Stacker-skåler på 90 mm. Mikrobiologisk kontrollert. Materialer som ikke følger med Supplerende vekstmedier, reagenser og laboratorieutstyr etter behov. PA

3 Prøvetyper Produktene som er beskrevet i dette dokumentet er isolasjonsmedier for fungi og kan brukes (som alternativ eller som en kombinasjon med to av disse mediene) for alle kliniske prøver (se også FUNKSJONSDATA OG PROSEDYRENS BEGRENSNINGER). Mediene brukes også i mange områder av industriell mikrobiologi, og i hygieneovervåkning. Testprosedyre Så ut prøven så snart som mulig etter at den er mottatt i laboratoriet. Primærskålen brukes først og fremst til å isolere renkulturer fra prøver som inneholder blandet flora. Hvis materialet kultiveres direkte fra en bomullspinne, kan den som alternativ rulles over et lite område ved kanten av overflaten, og deretter spres fra dette inokulerte området. Hvis prøven består av hudavskrapninger, hår eller negler, skal materialet plasseres i midten av medieoverflaten. Større partikler skal, om mulig, presses lett ned på overflaten med en steril tang, for å sørge for kontakt med mediet. For deteksjon av dermatofytter skal BD Dermatophyte Agar eller BD Mycosel Agar også inkluderes. Dersom Agar with Chloramphenicol, Agar with Gentamicin and Chloramphenicol, eller Agar with Penicillin and Streptomycin brukes, inkluder også en skål Glucose Agar. Etter hvert skal også et ikke-selektivt medium, som BD Columbia Agar with 5% Sheep Blood også inokuleres for å gi en indikasjon på om det finnes bakterielle patogener i prøven. Dersom hensikten er å oppdage gjærsopper (f.eks. Candida-arter) i kliniske prøver, skal den inkuberes i 48 timer ved 30 til 35 C. Dersom det mistenkes filament-fungi, inkludert dermatofytter, skal den inkuberes i opptil én uke ved 25 til 30 C. Dermatofytter vil av og til trenge 3 uker eller mer for å produsere vekst. Dersom hensikten er hygieneovervåking, skal den inkuberes i opptil 7 dager ved 20 til 25 C. Hvis inkuberingen varer i mer enn 3 dager, må det tilføres tilstrekkelig fuktighet. Platene kan forsegles med selvklebende plasttape for å unngå uttørking. Se referansene 5,7-10 for detaljer om veksttemperaturer og inkubering. Resultater Etter tilstrekkelig inkubering kan skålene inneholde isolerte kolonier i de bestrøkne områdene, og konfluerende vekst i områder med tung inokulering. Undersøk skålene for soppkolonier, som viser typisk farge og morfologi. Det skal utføres biokjemiske tester og mikroskopiske og serologiske prosedyrer for å bekrefte funnene. 6-9 Siden antallet patogeniske fungi er stort, gis det ingen detaljer om utseendet for disse her. Se 2,3, 5-9 referansene. FUNKSJONSDATA OG PROSEDYRENS BEGRENSNINGER Mediene som presenteres i dette dokumentet er standardmedia for isolering og kultivering av fungi fra alle typer kliniske og ikke-kliniske prøver På grunn av det store temperaturområdet for vekst av fungi, kan det være nødvendig å inokulere flere skåler med samme medium og inkubere dem ved ulike temperaturer. Se avsnittet 5, 7-10 Testprosedyre og de tilhørende referansene. Siden Glucose Agar bare er lett selektiv, vil det vokse bakterier på mediet, spesielt etter en lang inkuberingsperiode. Hvis prøvene, materialene eller områdene som er under etterforsking mistenkes for bakterieforurensing, må medier med høyere grad av selektivitet, f.eks. Agar with Chloramphenicol, Agar with Gentamicin and Chloramphenicol, eller Agar with Penicillin and Streptomycin brukes for kultiveringen av prøven. Nocardia og Actinomyces er filamentbakterier (ikke fungi!) og vokser derfor ikke på alle Sabouraud-medier som inneholder bakteriehemmere. PA

4 REFERANSER 1. Sabouraud, R Contribution a l'etude de la trichophytie humaine. Etude clinique, microscopique et bacterioloqique sur la pluralité des trichophytons de l'homme. Ann. Dermatol. Syphil. 3: Haley, L.D., J. Trandel, and M.B. Coyle Cumitech 11, Practical methods for culture and identification of fungi in the clinical microbiology laboratory. Coordinating ed., J.C. Sherris. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 3. Ajello, L., L.K. Georg, W. Kaplan, and L. Kaufman CDC laboratory manual for medical mycology. PHS Publication No. 994, U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 4. MacFaddin, J.F Media for isolation-cultivation- identification-maintenance of medical bacteria. vol. I. Williams & Wilkins, Baltimore. 5. Sutton, D.A Specimen Collection, transport, and processing: mycology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. U.S. Pharmacopeial Convention, Inc The U.S. Pharmacopeia 32/The national formulary U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, Md. USA 7. Larone, D.H Medically important fungi: a guide to identification. 4 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 8. Summerbell, R.C Trichophyton, Microsporum, Epidermophyton, and agents of superficial mycoses. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 9. Kwon-Chung, K.J., and J.E. Bennett Medical mycology. Lea & Febiger, Philadelphia. 10. Pfaller, M.A., and R.A. Fromtling (section ed.) Mycology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 11. Brun, S., et al Evaluation of five commercial Sabouraud gentamicin-chloramphenicol agar media. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 20: Council of Europe, European Pharmacopoeia, 6.1. European Pharmacopoeia Secretariat. Strasbourg/France. EMBALLASJE/BESTILLING Glucose Agar Kat. nr Kat. nr Ferdiglagde agarskåler, 120 plater Agar med kloramfenikol Kat. nr Agar med gentamicin og kloramfenikol Kat. nr Kat. nr Ferdiglagde agarskåler, 120 plater Agar med penicillin og streptomycin Kat. nr YTTERLIGERE INFORMASJONS Kontakt din lokale BD-representant for ytterligere informasjon: PA

5 Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company BD PA