BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood (150 mm) BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep blood, Square

Transkript

1 BRUKSANVISNING FERDIGLAGDE AGARSKÅLER PA Rev.:April 2013 BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood (150 mm) BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep blood, Square BRUKSOMRÅDE BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood (Mueller-Hinton-agar med 5 % saueblod) fås i flere skåltyper, brukes til resistenstesting ved agardiffusjonsmetoden av kliniske isolater av Streptococcus pneumoniae og andre streptokokker som standardisert av Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). 1 PROSEDYRENS PRINSIPPER OG FORKLARING Mikrobiologisk metode. Bauer-Kirby-prosedyren er basert på diffusjon gjennom en agargele med antimikrobielle midler som er impregnert på papirlapper. 2 I testprosedyren vil en standardisert suspensjon av organismen bli penslet over hele medieoverflaten. Papirlappene, som er impregnert med angitte mengder av antibiotika eller andre antimikrobielle midler, plasseres deretter på overflaten av mediet, agarskålen inkuberes og hemningssonene måles rundt hver papirlapp. CLSI har skrevet en prestasjonsstandard for Bauer-Kirby-prosedyren, og dette dokumentet bør konsulteres for ytterligere opplysninger. 1 Andre nasjonale standarder er utviklet for antimikrobiell resistenstesting i henhold til Bauer-Kirby-prosedyren. I disse standardene kan inokulat-tettheten, inokulasjonsmetoden, sonestørrelsen og tolkingsmetoden avvike fra CLSIstandarden. Da det ikke eksisterer felles, europeiske standarder for resistenstesting, bør det refereres til lokale, nasjonale standarder der retningslinjene fra CLSI ikke gjelder. Mueller Hinton-agar uten supplement er ikke tilstrekkelig for organismer med mer komplekse næringskrav, som Streptococcus pneumoniae, selv om de er tilstrekkelig for resistenstesting av hurtigvoksende, aerobe patogener. CLSI-dokumentet M2 anbefaler Mueller Hinton-agar som er tilsatt 5 % defibrinert saueblod, og beskriver både kvalitetskontrollprosedyrene og fortolkingskriteriene som skal brukes for S. pneumoniae og andre streptokokker. 1 REAGENSER BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood Sammensetning* per liter renset vann Storfeekstrakt 2,0 g Syrehydrolysat fra kasein 17,5 Stivelse 1,5 Agar 17,0 g Saueblod, defibrinert 5 % ph 7,3 +/- 0,2 *Justert og/eller tilsatt som påkrevd for å oppfylle funksjonskriteriene. FORHOLDSREGLER Til in vitro-diagnostikk. Kun til profesjonelt bruk. Agarskålene må ikke anvendes dersom de viser tegn til mikrobiell kontaminering, misfarging, uttørking, sprekkdannelse eller andre tegn til svekkelse. Overdreven skrumping av dette mediet som følge av uttørking, kan føre til gale resistensresultater. Se dokumentet GENERELLE BRUKSANVISNINGER for aseptiske håndteringsprosedyrer, biologiske farer og avhending av brukte produkter. PA

2 OPPBEVARING OG HOLDBARHET Agarskålene oppbevares etter mottak i originalinnpakningen på et mørkt sted med temperatur fra 2 til 8 C, inntil de skal brukes. Unngå frost og overopphetning. Agarskålene kan inokuleres frem til utløpsdatoen (se etiketten på pakken) og inkuberes i de anbefalte inkubasjonstider. Agarskåler fra åpnede stabler på 10 skåler kan brukes i én uke når de oppbevares på et rent sted med temperatur på 2 til 8 C. BRUKERKVALITETSKONTROLL De tilhørende CLSI 1 -standardene eller, hvis det er relevant, de nasjonale standardene skal følges ved brukerkvalitetskontroll. I prinsippet skal prosedyrene som er beskrevet nedenfor i Testprosedyre følges, inkludert kontrollstammen S. pneumoniae ATCC 49619, og de antimikrobielle lappene som vanligvis brukes av laboratoriet, skal testes minst to ganger i uken for å sikre akseptabel ytelse. Korrekte sonediametre kan finnes i tabell 3A i CLSI-dokumentet M100, som er vedlagt CLSIdokumentet M2. 1 Utseende av ikke-inokulert medium: rødt (blodfarget), gjennomskinnelig. PROSEDYRE Materialer som følger med BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood (leveres i flere ulike skåltyper, se Pakker/tilgjengelighet). Mikrobiologisk kontrollert. Materialer som ikke følger med 1. Inokulatbuljong i mengder på 5 ml, som Mueller Hinton II Broth (BBL Kat. nr , 16 x 102 mm rør) eller 0,9 % saltvann, for klargjøring av standard-inokulat. 2. Bariumsulfat sammenligningsstandard (0,5 ml av 0,048 M BaCl 2 [1,175 % w/v BaCl 2 2H 2 O] til 99,5 ml av 0,18 M [0,36 N] H 2 SO 4 [1 % v/v]). 3. Et fotometrisk apparat for justering av turbiditeten for inokulatsuspensjonen, slik at den er i samsvar med 0,5 McFarland-standarden. 4. Som alternativ til materialene nevnt ovenfor (1 3), kan BD Prompt Inoculation System (volumetrisk inokulat-klargjøringsutstyr) brukes. 1,3 5. Kontrollkultur - Streptococcus pneumoniae ATCC Papirlapper som er impregnert med angitte mengder av antimikrobielle midler, som BD Sensi-Disc-lapper for resistenstesting. 7. Lappedispensere, som BD Sensi-Disc Self-Tamping 6-, 8- eller 12-hulls dispenser. 8. Verktøy for måling eller tolking av sonediametre, som skyvelær eller linjal. 9. En inkubator som skaper en atmosfære inneholdende 5 % CO 2, eller annet utstyr som skaper en lignende CO 2 -rik atmosfære. 10. Supplerende vekstmedier, reagenser og laboratorieutstyr etter behov. Prøvetyper Dette produktet brukes til resistenstesting av renkulturer som har blitt isolert fra kliniske prøver (se også PROSEDYRENS YTELSESEGENSKAPER OG BEGRENSNINGER). Testprosedyre Metoden for direkte kolonisuspensjon bør brukes når S. pneumoniae 1 testes. Bruk aseptiske teknikker. 1. Sørg for at en ren, fersk (=over natten) kultur fra et ikke-selektivt blodagarmedium er tilgjengelig. 2. Overfør veksten til et flytende medium som Mueller Hinton II Broth eller sterilt 0,9 % saltvann. Juster turbiditeten slik at den tilsvarer standarden for bariumsulfat (0,5 McFarland-standarden). Standardens og test-inokulatets turbiditet bør sammenlignes ved å holde begge rørene opp foran en hvit bakgrunn med tynne, svarte linjer, eller det kan brukes et fotometrisk apparat. 3. Alternative metoder for tillaging av inokulat omfatter enheter som tillater direkte standardisering av inokulater uten justering av turbiditeten, som BD Prompt Inoculation System. Disse enheter er funnet å være akseptable for rutinemessige analyser. 1,3 PA

3 4. Innen 15 min. etter justering av inokulatets turbiditet dyppes en steril bomullspinne ned det korrekt fortynnede inokulatet og dreies flere ganger kraftig rundt mot rørets øvre innerside for å presse ut overflødig væske. 5. Inokuler på BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood ved å stryke ut på hele agaroverflaten tre ganger, og rotere skålen 60 mellom strykingene, for å oppnå jevn inokulering. 6. Sett lokket tilbake på agarskålen og oppbevar den i romtemperatur i minst 3 min., men ikke lenger enn 15 min., for å la overflatefuktigheten absorberes før lappene som er impregnert med antibiotika tilføres. Bruk ikke mer enn ni lapper per 150 mm skål, eller fire lapper per 90 og 100 mm skål. For penicillintesting av S. pneumoniae, brukes en 1 µg oxacillin-lapp Inkubér i 20 til 24 t ved 35 C i en atmosfære med 5 % CO 2. Resultater Etter inkuberingen skal en konfluerende vekst være synlig. Hvis det bare er vekst av isolerte kolonier, var inokulatet for tynt og testen må gjentas. Mål sonediameteren med fullstendig hemning (som kan sees med det bare øyne), inkludert lappediameteren til nærmeste, hele millimeter vhj.. skyvelær eller linjal, fra øverst på agarskålen med lokket av. 5 Endepunktet skal være det området som ikke viser tydelig, synlig vekst som kan sees med det blotte øye. Se bort fra svak vekst av små kolonier, som så vidt er synlige nær kanten av den tydelige hemningssonen. Med BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood er det veksthemningssonen som skal måles, ikke hemolysehemningssonen. Beregning og tolking av resultater Sonediameterne sammenlignes med diameterne i tabell 2G for S. pneumoniae og 2H for andre streptokokker i CLSI-dokumentet M100 (M2), som gir brytningspunktene. 1 Resultatene kan deretter rapporteres som resistente, intermediære eller følsomme. Anvend spesielle tolkingskriterier for isolater av S. pneumoniae med oxacillinsonediametre på 19 mm, som nevnt i denne standarden (se også FUNKSJONSDATA OG PROSEDYRENS BEGRENSNINGER). Merk: Informasjonstillegg til CLSI-dokumentet M2, eller reviderte versjoner, som inneholder reviderte tabeller for antimikrobielle lapper og brytningspunkter, utgis med jevne mellomrom. De nyeste tabellene bør konsulteres for gjeldende anbefalinger. Den komplette standarden og tilleggsinformasjon kan bestilles fra Clinical and Laboratory Standards Institute, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA , USA. Telefon: FUNKSJONSDATA OG PROSEDYRENS BEGRENSNINGER Agardiffusjonstesten er kun ment for bruk med rene kulturer. Det anbefales å utføre en Gramfarging og forløpig identifisering av isolatet før resistenstesten utføres. 1 Dette mediet brukes for resistenstesting av S. pneumoniae og andre streptokokker mot utvalgte antimikrobielle midler. 1,2,5 Legg merke til at for amoxycillin, ampicillin, cefepime, cefotaxime, ceftriaxone, cefuroxime, imipenem og meropenem finnes det ikke pålitelige agardiffusjonstestkriterier for S. pneumoniae. In vitro-aktiviteten for disse antimikrobielle midlene kan best bestemmes med MIC-metoder. 1 For fastsetting av følsomhet overfor penicillin for S. pneumoniae, skal det brukes en oxacillin-lapp. Isolater av S. pneumoniae med oxacillin-sonediametre på 20 mm er følsomme (MIC 0,06 mg/ml) for penicillin. På grunn av at soner på 19 mm med oxacillin-screening lapp oppstår med penicillinresistente, intermediære og enkelte følsomme stammer, skal en penicillin-, meropenem-, og cefotaxim- eller ceftriaxon-mic bestemmes for alle isolater av S. pneumoniae med oxacillinsoner på 19 mm. 1 For andre streptokokker enn S. pneumoniae, anbefales ikke oxacillin-testen for bestemmelse av følsomhet for penicillin. For beta-hemolytiske streptokokker skal det brukes penicillin- eller ampicillin-lapper. For streptokokker i viridans-gruppen er agardiffusjonstesting med penicillin og oxacillin ikke pålitelig, følsomheten for disse skal fastslås med MIC-testing. 1 PA

4 Antimikrobiell agardiffusjonsresistenstesting hos Streptococcus pneumoniae ATCC ble utført internt med cefaclor, cefprozil, chloramphenicol, erythromycin, ofloxacin, tetracyclin, trimethoprim/sulfamethoxazol og vancomycin. Etter testprosedyrene som er beskrevet i M2-A5, ble det utført tjue tester med kvalitetskontrollstammen og åtte antimikrobielle lapper over en periode på 10 testdager. For alle de åtte antimikrobielle midlene falt 100 % (160/160) av sonestørrelsene innenfor de forventede områdene for sonestørrelser som utgitt i M2-A5 og tabell 3C i NCCLS-dokumentet M100-S6. 6,7 Standardavviket for tetracyclin var mindre enn 1 mm, og for alle andre antimikrobielle midlene var avviket mindre enn 2 mm. 8 Reproduserbarhetsstudier (3 ganger om dagen i 3 dager) ble utført på to steder med de antimikrobielle midlene som er listet opp ovenfor mot S. pneumoniae ATCC og ni ytterligere velkarakteriserte S. pneumoniae-stammer. Brytningspunktene fra tabell 2C i NCCLS-dokumentet M2-A5 og tillegget M100-S6 ble fulgt for hvert av de antimikrobielle midlene. 6,7 Testing med chloramphenicol, erythromycin, ofloxacin, tetracyclin og vancomycin resulterte i over 95 % overensstemmelse i kategori med NCCLS-referansemetoden. Testing med trimethoprim/sulfamethoxazol resulterte i 90 % overensstemmelse i kategori med NCCLSreferansemetoden. Reproduserbarheten kunne ikke bestemmes for cefaclor og cefprozil på grunn av mangelen på brytningspunkter for disse to antimikrobielle midlene. Basert på studiene som er skissert ovenfor, er bruk av cefaclor, ceprozil eller trimethoprim/sulfamethoxazol ikke anbefalt på dette mediet når S. pneumoniae testes. I tillegg rapporterer referansene i litteraturen for mange tolkingsfeil i agardiffusjonstesting med trimethoprim/sulfamethoxazol på Mueller Hinton agarskåler med saueblod. 9 For enkelte kombinasjoner av organismer og antimikrobielt middel kan det hende at hemningssonen ikke har skarpt avgrensede kanter, noe som kan føre til feiltolking. Ulike faktorer er identifisert som påvirkende på resistenstesting med agardiffusjonsmetoden. Disse omfatter mediet, agardybden, konsentrasjonen på lappen, konsentrasjonen av inokulatet, alderen på inokulatet og ph-verdien. 2 Feil konsentrasjon av inokulater kan føre til ukorrekte resultater. Hemningssonene kan bli for små hvis inokulatet er for tykt, og de kan bli for store og vanskelige å måle hvis inokulatet er for tynt. Feil oppbevaring av antimikrobielle lapper kan føre til svekket konsentrasjon og feil resistensresultat. En organismes in vitro-følsomhet overfor et spesifikt antimikrobielt middel in vitro, betyr ikke nødvendigvis at midlet vil være effektivt in vivo. Referer til gjeldende referanser for rettledning når det gjelder tolkning av resultatene. 2,10 Ikke bruk dette mediet til testing av følsomheten for andre bakterier enn S. pneumoniae og beta-hemolytiske streptokokker. REFERANSER 1. Clinical and Laboratory Standards Institute. Approved Standard: M2. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests. CLSI, Wayne, PA, USA.Search for latest version at 2. Washington, J.A., and G.L. Woods Antibacterial susceptibility tests: dilution and disk diffusion methods, p In: P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 3. Baker, C.N., C. Thornsberry, and R.W. Hawkinson Inoculum standardization in antimicrobial susceptibility testing: evaluation of overnight agar cultures and the rapid inoculum standardization system. J. Clin. Microbiol. 17: Swenson, J.M., B.C. Hill, and C. Thornsberry Screening pneumococci for penicillin resistance. J. Clin. Microbiol. 24: Hindler, J.F., and J.M. Swenson Susceptibility test methods: fastidious bacteria. In: In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. National Committee for Clinical Laboratory Standards Approved Standard: M2-A5. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests, 5th ed. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Villanova, Pa. PA

5 7. National Committee for Clinical Laboratory Standards Sixth informational supplement: M100-S6. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing. National Committee for Clinical Laboratory Standards, Wayne, Pa. 8. Data i arkiv. Becton Dickinson Microbiology Systems 9. Jorgensen, J.J Detection of antimicrobial resistance in Streptococcus pneumoniae by use of standardized susceptibility testing methods and recently developed interpretive criteria. Clin. Microbiol. Newsl. 16(13) Neumann, M.A., D.F. Sahm, C. Thornsberry, J.E. McGowan, Jr Cumitech 6A, New developments in antimicrobial agent susceptibility testing: a practical guide. Coordinating ed., J.E. McGowan, Jr. American Society of Microbiology, Washington, D.C. EMBALLERING/BESTILLING BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood (med 5 % saueblod) (90 mm Stacker-skåler) Kat. nr Kat. nr Ferdiglagde agarskåler, 120 stk. BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood (med 5 % saueblod) (150 mm) Kat. nr BD Mueller Hinton Agar with 5% Sheep Blood (med 5 % saueblod) (120 x 120 mm) Kat. nr YTTERLIGERE INFORMASJON Kontakt din lokale BD-representant for ytterligere informasjon. Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com Prompt is a trademark of 3M. ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company BD PA