BD BBL CHROMagar Salmonella

Transkript

1 BRUKSANVISNING FERDIGLAGDE MEDIUMSKÅLER PA _NO Rev.: mars 2013 BD BBL CHROMagar Salmonella U.S. Patent nr , BRUKSOMRÅDE BBL CHROMagar Salmonella er et selektivt og differensierende medium for isolering og presumptiv identifikasjon av arter av Salmonella fra kliniske avføringsprøver. BBL CHROMagar Salmonella har også blitt validert av AOAC Research Institute i henhold til programmet Performance Tested Methods SM (metoder testet for ytelse), men kun for analyse av rått, malt storfekjøtt, rå kylling, rå fisk, salat og egg med skall. ISO-, USDA FSIS- og FDA BAMmetoder ble benyttet til sammenligning av metoder. 1-3 Det ble påvist at BBL CHROMagar Salmonella er ekvivalent med skålmediene som er anbefalt i ISO-, FDA- og USDA-metodene. PRINSIPPER FOR OG FORKLARING AV PROSEDYREN Mikrobiologisk metode. Salmonella er svært vanlig hos populasjoner av dyr og blir som regel isolert fra fordøyelseskanalen hos dyr og mennesker. Den er én av de vanligste organismene som er knyttet til sykdommer som overføres med mat, og som ofte har sitt opphav hos dyr. 4 Sykdommer forårsaket av Salmonella er blitt knyttet til fjærfe-, storfe-, sjokolade-, meieri- og grønnsakprodukter. 5 BBL CHROMagar Salmonella er tiltenkt for isolering av og differensiering mellom Salmonella-arter. Mediet er tilsatt kromogene substrater som gjør det lettere å påvise Salmonella-arter i forhold til annen flora. BBL CHROMagar Salmonella ble opprinnelig utviklet av A. Rambach, CHROMagar, Paris, Frankrike. BD har i henhold til en lisensavtale optimert denne formuleringen ved å benytte egne immaterielle eiendeler i produksjonen av det ferdiglagde skålmediet BBL CHROMagar Salmonella ved å bruke formuleringen for Difco CHROMagar Salmonella dehydrert kulturmedium. I BBL CHROMagar Salmonella står spesielt utvalgte peptoner for næringsstoffene. Grampositive organismer blir vanligvis hemmet som et resultat av den selektive mediumbasen. Det er tilsatt et antifungusmiddel som hindrer vekst av Candida-arter, og andre antimikrobielle stoffer brukes til å hemme veksten av gramnegative, ikke-glukosefermenterende bakterier og Proteus-arter, som potensielt kunne gro over Salmonella-kolonier. Det er inkludert en blanding av kromogener i mediet. På grunn av forskjeller i metabolismen når utvalgte kromogener er til stede, fremstår kolonier av Salmonella med lyslilla (rosa til lilla) farge, mens uønskede bakterier enten blir hemmet eller danner blågrønne eller fargeløse kolonier. REAGENSER Formulering** per liter renset vann Kromopepton 22,0 g Kromogenblanding 0,34 g Hemmende midler 0,02 g Agar 15,0 g ph 7,7 +/- 0,2 **Justert og/eller supplert etter behov for å oppfylle ytelseskriteriene. *PRODUSENTLEVERTE PRØVER AV DENNE TESTKITMODELLEN ER UAVHENGIG EVALUERT AV AOAC RESEARCH INSTITUTE, OG BLE FUNNET Å FUNGERE I SAMSVAR MED PRODUSENTENS SPESIFIKASJONER, SOM ANGITT I BESKRIVELSEN I PAKNINGSVEDLEGGET FOR TESTKITTET. PRODUSENTEN BEKREFTER AT DETTE KITET I ALLE HENSEENDER SAMSVARER MED SPESIFIKASJONENE SOM OPPRINNELIG BLE EVALUERT AV AOAC RESEARCH INSTITUTE, SOM ANGITT I Performance Tested Methods sm, SERTIFIKAT NUMMER PA _NO Side 1 av 7

2 FORSIKTIGHETSREGLER. Kun til profesjonell bruk. Dersom det dannes for mye fuktighet, snus nedre del og plasseres på lokket noe forskjøvet slik at den kan lufttørke. Dette gjøres for å unngå dannelse av et tett lag mellom toppen og bunnen av skålen under inkubasjonen. Skal beskyttes mot lys under tørking. Se OPPBEVARING OG HOLDBARHET. For å gjøre seg kjent med de forventede kromogenreaksjonene (fargereaksjonene) i forbindelse med Salmonella bør brukeren inokulere representative stammer som vanligvis observeres i deres institusjon. Følgende stammer foreslås: Salmonella ser. Typhimurium, ATCC 14028, Salmonella ser. Dublin, ATCC 15480, Salmonella ser. Typhi, ATCC og Salmonella enterica, underart arizonae, ATCC Patogene mikroorganismer, blant annet hepatittvirus og HIV kan være til stede i kliniske prøver. Standard forholdsregler 6-9 og institusjonens retningslinjer skal følges ved håndtering av alle gjenstander som er kontaminert med blod og andre kroppsvæsker. I dokumentet GENERELL BRUKSANVISNING finner du flere opplysninger og beskrivelse av prosedyrer for aseptisk behandling, biologisk risiko og avhending av brukte produkter. OPPBEVARING OG HOLDBARHET Etter mottak skal platene oppbevares i mørke ved 2 til 8 C i originalinnpakningen inntil like før de skal brukes. Unngå frysing og overoppheting. Platene kan inokuleres frem til utløpsdatoen (se etiketten på pakningen) og inkuberes i de anbefalte inkubasjonsperiodene. Plater fra åpnede stabler på 10 plater kan brukes i én uke når de oppbevares på et rent sted ved 2 til 8 C. Produktforringelse Platene må ikke brukes hvis de viser tegn på mikrobiell kontaminering, misfarging, uttørking eller sprekkdannelse eller har andre tegn til forringelse. KVALITETSKONTROLL FOR BRUKERE Undersøk skålene med henblikk på tegn til forringelse som beskrevet under Produktforringelse. Sjekk ytelsen ved å inokulere et representativt utvalg av skåler med renkulturer av stabile kontrollorganismer som produserer kjente, ønskede reaksjoner. Følgende teststammer anbefales: Stammer Vekstresultater Salmonella Typhimurium ATCC God til kraftig vekst av kolonier med svak lyslilla til lyslilla (rosa til lilla) farge Salmonella Enteritidis ATCC Vekst med lyslilla (= rosa til lilla) kolonier Citrobacter freundii ATCC 8090 God til kraftig vekst av kolonier med svak blågrønn til blågrønn farge Escherichia coli ATCC Delvis til fullstendig hemming, blågrønne kolonier Klebsiella pneumoniae ATCC Delvis hemming, blågrønne kolonier Proteus mirabilis ATCC Delvis til fullstendig hemming Enterococcus faecalis ATCC Delvis til fullstendig hemming, blågrønne, små kolonier Staphylococcus aureus ATCC Hemning (delvis til fullstendig) Utseende av ikke-inokulert medium Fargeløst til lyst ravgult, transparent Merk: Kvalitetskontrollkravene må ivaretas i samsvar med gjeldende lokalt og/eller nasjonalt regelverk, eller akkrediteringskravene og laboratoriets standardprosedyrer for kvalitetskontroll. PROSEDYRE Materialer som følger med BBL CHROMagar Salmonella (90 mm Stacker-skåler). Mikrobiologisk kontrollert. PA _NO Side 2 av 7

3 Nødvendige materialer som ikke følger med Ekstra kulturmedier, reagenser, kvalitetskontrollorganismer og annet laboratorieutstyr etter behov for den spesifikke laboratorieprosedyren som benyttes, for eksempel ISO 7218, USDA FSIS MLG, FDA BAM eller den spesifikke laboratorieprosedyren hos dere. Prøvetaking Se i relevant litteratur for opplysninger om prosedyrer for prøvetaking og -håndtering. 1-5 Prøvetyper Dette mediet kan brukes sammen med kliniske avføringsprøver og ulike matprøver (rått, malt storfekjøtt, rå kylling, rå fisk, salat og egg med skall). Testprosedyre Bruk aseptisk teknikk. Agaroverflaten skal være jevn og fuktig, men ikke for fuktig. La mediet få romtemperatur før inokulering. For kliniske prøver: Så snart som mulig etter mottak på laboratoriet inokuleres prøven på en skål med BBL CHROMagar Salmonella og strykes ut for isolering. Hvis prøven dyrkes fra en bomullspinne, kan denne rulles varsomt over et lite område ved kanten av overflaten og deretter strykes ut fra dette området med en løkke. Avhengig av lokale prosedyrer kan det være påkrevet å inokulere ytterlige medier for isolering av Salmonella og påvisning av andre fordøyelsespatogener. Inkuber skåler opp-ned (agarsiden opp) aerobt ved 35 ± 2 C i 24 timer. Hvis resultatet er negativt etter 24 timer, utføres reinkubering i ytterligere 24 timer for å rapportere endelige resultater. Når fargede kolonier er utviklet, er det tillatt å eksponere BBL CHROMagar Salmonella for lys. Det bør utføres bekreftende biokjemisk eller serologisk testing av typiske kolonier av Salmonella. BBL CHROMagar Salmonella kan også brukes til underkultur fra forhåndsanrikningsmedier som Selenite Broth (selenittbuljong) eller Tetrathionate Broth (tetrationatbuljong). For matprøver: Følg metoder for klargjøring av prøver som beskrevet i USDA FSISs Microbiology Laboratory Guidebook: Isolation and Identification of Salmonella from Meat, Poultry, and Egg Products, FDA BAMs kapittel om Salmonella, ISO-retningslinjer eller prosedyreretningslinjene som er relevante for prøvetypen og geografisk sted. Inokuler prøven fra den inkuberte anrikningsbuljongen på en BBL CHROMagar Salmonella-skål. Stryk ut for isolering. og inkuber skåler aerobt opp-ned (agarsiden opp) ved 35 ± 2 C i 24 timer. Hvis resultatet er negativt etter 24 timer, utføres reinkubering i ytterligere 24 timer for å rapportere endelige resultater. Typiske kolonier av Salmonella som vokser på BBL CHROMagar Salmonella, bør gjennomgå bekreftende testing som beskrevet i prosedyrer i henhold til ISO, USDA FSIS og FDA BAM. 1-3 Resultater Etter tilfredsstillende inkubasjon leses skålene av mot en hvit bakgrunn. Salmonella Typhimurium og andre Salmonella-arter fremstår som svak lyslilla til lyslilla kolonier med unntak av Salmonella enterica, underarten arizonae, og andre Salmonella-arter som er positive for laktose og betaglukosidase. Disse isolatene vil fremstå som blåfiolette eller lilla kolonier. Citrobacter og andre koliforme bakterier vil fremstå som kolonier med lys blågrønn farge. Noen organismer som ikke hydrolyserer noen av de kromogene forbindelsene, kan fremstå som fargeløse kolonier. YTELSESKARAKTERISTIKK OG BEGRENSNINGER VED PROSEDYREN BBL CHROMagar Salmonella er et selektivt og differensierende medium for isolering og presumptiv identifikasjon av arter av Salmonella fra kliniske avføringsprøver og ulike matprøver. Forventede resultater Salmonella-arter vil fremstå som kolonier med svak lyslilla til lyslilla (= rosa til lilla) farge med unntak av Salmonella-arter som er positive for laktose og betaglukosidase. Disse isolatene vil fremstå som blåfiolette eller lilla kolonier. PA _NO Side 3 av 7

4 Følgende organismer ble isolert på BBL CHROMagar Salmonella under intern og ekstern evaluering av kliniske og industrielle prøver: Salmonella 8, (20):-:26 Salmonella ser. Javiana Salmonella enterica, underart arizonae Salmonella ser. Johannesburg Salmonella enterica, underart diarizonae Salmonella ser. Kentucky Salmonella ser. Abony Salmonella ser. London Salmonella ser. Adelaide Salmonella ser. Mbandaka Salmonella ser. Agona Salmonella ser. Michigan Salmonella ser. Anatum Salmonella ser. Minnesota Salmonella ser. Bareilly Salmonella ser. Montevideo Salmonella ser. Berta Salmonella ser. Muenster Salmonella ser. Brandenburg Salmonella ser. Newport Salmonella ser. California Salmonella ser. Oranienburg Salmonella ser. Cerro Salmonella ser. Panama Salmonella ser. Choleraesuis Salmonella ser. Paratyphi A Salmonella ser. Cubana Salmonella ser. Paratyphi B Salmonella ser. Derby Salmonella ser. Pomona Salmonella ser. DT 104 Salmonella ser. Poona Salmonella ser. Dublin Salmonella ser. Potsdam Salmonella ser. Enteritidis Salmonella ser. Pullorum Salmonella ser. Essen Salmonella ser. Rubislaw Salmonella ser. Gallinarum Salmonella ser. Schwarzengrund Salmonella ser. Gaminara Salmonella ser. Senftenberg Salmonella ser. Hadar Salmonella ser. St. Paul Salmonella ser. Hartford Salmonella ser. Thompson Salmonella ser. Heidelberg Salmonella ser. Typhi Salmonella ser. Illinois Salmonella ser. Typhimurium Salmonella ser. Infantis Salmonella ser. Typhimurium (laktosepositiv) Salmonella ser. Iverness Salmonella ser. Weltevreden Ytelseskarakteristikk 10 Klinisk testing: BBL CHROMagar Salmonella ble tested ved et stort klinisk laboratorium. Totalt 150 avføringsprøver som var kjent som negative, og 110 avføringsprøver som var kjent som positive, ble testet på BBL CHROMagar Salmonella og ble sammenlignet med ytelsen til mediene XLD and Hektoen Enteric (mage-tarm). Sensitiviteten og spesifisiteten til mediet BBL CHROMagar Salmonella etter timers inkubering var henholdsvis 76 % og 99 % og var henholdsvis 90 % og 94 % etter 48 timers inkubasjon. Sensitiviteten og spesifisiteten økte til henholdsvis 99 % og 97 % ved underkultur på Selenite F-buljong. Komparative sensitivitets- og spesifisitetsresultater for XLD-medium var 71 % og 97 % etter timers inkubasjon og 78 % og 95 % etter 48 timers inkubasjon. Sensitivitetsresultatene for Hektoen Enteric-medium var 71 % og 94 % etter timers og 79 % og 93 % etter 48 timers inkubasjon. Testing av landbruksmatvarer: USDA- og FDA-metoder BBL CHROMagar Salmonella ble evaluert for gjenvinning av Salmonella i rå kylling, rått, malt storfekjøtt, rå fisk, salat, og egg med skall ved interne og AOAC-godkjente eksterne laboratorier. Rå kylling og malt storfekjøtt ble behandlet i henhold til USDA FSISreferansemetoder. Rå fisk, salat og egg med skall ble behandlet i henhold til FDA BAMprosedyrer. BBL CHROMagar Salmonella bla sammenlignet med referansemetodemedier for selektiv gjenvinning av Salmonella. Totalt 16 positive kulturer ble innhentet i prøver fra rå kylling, 17 fra rått, malt storfekjøtt, 18 fra rå fisk og salat og 11 fra egg med skall. BBL CHROMagar Salmonella gav resultater som var sammenlignbare med resultatene fra referansemetodene for alle matriksprøver, og dette resulterte i en metodeoverensstemmelse på 100 %. PA _NO Side 4 av 7

5 Tjue prøver av rå kylling med tilsetning ble testet i henhold til USDA FSIS-referansemetoden. Kyllingen ble tilsatt et inokulum med lavt nivå på 8 CFU / 25 g og et inokulum med høyt nivå på 50 CFU/25 g av prøven. BBL CHROMagar Salmonella gjenvant 100 % (20/20) av tilsetningen med lavt og høyt nivå av Salmonella. Ved inokulumnivåer lavere enn 1 CFU/25 g ble delvis gjenvinning oppnådd. Naturlig kontaminert kylling ble testet. Gjenvinningen av Salmonella var 100 %, og MPN/g (Most Probable Number / g) var 0,23. Ett hundre og atten (118) Salmonella-isolater med opphav i mat, inkludert ulike serotyper, ble dyrket i Lactose Broth (laktosebuljong) i 24 timer og deretter overført og dyrket i underkultur i Tetrathionate Broth i 24 timer. Tetrathionate Broth-prøver ble overført til underkultur i BBL CHROMagar Salmonella og ble inkubert ved 35 C. Hvis ikke lyslilla kolonier ble gjenvunnet etter 24 timer, ble skåler inkubert i ytterligere 24 timer. BBL CHROMagar Salmonella gjenvant 111 isolater. Fire stammer ble hemmet med Tetrathionate Broth og ble gjenvunnet på BBL CHROMagar Salmonella eller på en ikke-selektiv kontrollskål. Andre isolater av samme serotype som de fire negative, dannet typiske kolonier, så mangel på positiv reaksjon var stammespesifikk, ikke serotypespesifikk. Samlet sensitivitet for BBL CHROMagar Salmonella var 94 % (111 av 118 isolater). Sekstifem (65) isolater av ikke-salmonella ble dyrket i Brain Heart Infusion Broth (hjertehjerne-infusjonsbuljong) ved 35 C i 24 timer og ble dyrket i underkultur på BBL CHROMagar Salmonella ved 35 C i 24 timer. Negative skåler ble inkubert i totalt 48 timer. Sekstien (61) av de 65 isolatene viste ikke lyslilla farge på BBL CHROMagar Salmonella og gav en spesifisitet på 94 %. De fire ikke-salmonella-stammene som viste lyslilla farge, ble inokulert i Tetrathionate Broth (anbefalt anrikningsbuljong for USDA- og FDA-metoder). Etter 24 timers inkubasjon ble Tetrathionate Broth-prøver dyrket i underkultur på BBL CHROMagar Salmonella. Etter 48 timers inkubasjon gav én stamme lyslilla kolonier, og tre stammer var hemmet. På grunnlag av bruk av anrikning med Tetrathionate Broth var den samlede spesifisiteten for BBL CHROMagar Salmonella i denne studien lik 98 %. ISO-metode BBL CHROMagar Salmonella ble sammenlignet med referansemetodemedier for selektiv gjenvinning av Salmonella i rå kylling, rått, malt storfekjøtt, rå fisk, salat og egg med skall. Alle matriksprøver ble behandlet i henhold til ISO-kulturmetoden. Totalt 16 positive kulturer ble innhentet i prøver fra rå kylling, 17 fra rått, malt storfekjøtt, 9 fra rå fisk og 19 fra salat og egg med skall. BBL CHROMagar Salmonella gav resultater som var sammenlignbare med resultatene fra referansemetodene for alle matriksprøver, og dette resulterte i en metodeoverensstemmelse på 100 %. Tjue (20) prøver av rått, malt storfekjøtt, salat og egg med skall ble tilsatt inokulum med lavt nivå av Salmonella og ble analysert i henhold til ISO-kulturprosedyren. Tjue (20) prøver av naturlig kontaminert rå kylling ble analysert i henhold til ISOkulturprosedyren. BBL CHROMagar Salmonella ble tilføyd til batteriet av referansemedier for hver matvarematriks som ble testet. Metodesamsvaret mellom BBL CHROMagar Salmonella og de andre referansemetodene var 100 %. Inokulum med lavt nivå var i området 0,0036 til 0,23 MPN/g. Ett hundre og tjuesju (127) Salmonella-isolater med opphav i mat ble dyrket i Buffered Peptone Water (bufret peptonvann) i 18 timer og deretter dyrket i underkultur i mediet Rappaport-Vassiliades with Soya (med soya) (RVS) i 24 timer. RVS-buljongprøver ble overført til underkultur på BBL CHROMagar Salmonella og ble inkubert ved 35 C i 24 timer. Hvis lyslilla kolonier ikke ble gjenvunnet etter 24 timer, ble skåler inkubert i ytterligere 24 timer. BBL CHROMagar Salmonella gjenvant 123 isolater. Gjenvinningen av de 4 stammene som ikke vokste på BBL CHROMagar Salmonella, var dårlig på de ikke-selektive kontrollmediene. Samlet sensitivitet for BBL CHROMagar Salmonella var 96,8 % (123 av 127 isolater). PA _NO Side 5 av 7

6 Begrensninger ved prosedyren Av og til vil stammer av artene Aeromonas hydrophila, Hafnia alvei, Pseudomonas aeruginosa, P. putida, Stenotrophomonas maltophilia, Acinobacter eller arter av Candida ikke bli fullstendig hemmet, og kolonier kan vise svak lyslilla til lyslilla pigmentering. Bekreftelsestester som benytter lyslilla eller lilla som indikatorfargereaksjon, kan være vanskelige å tolke på grunn av den faktiske fargen på kolonien. Det kan hende at sjeldne stammer av følgende organismer: S. Typhi, S. Paratyphi A, S.Typhimurium, S. Choleraesuis, S. Minnesota, S. enterica, underart arizonae og S. Pullorum ikke gror eller har redusert vekst på dette mediet. Dette er stammespesifikt, og flertallet av de testede stammene av hver av disse serovarene ble gjenvunnet. BBL CHROMagar Salmonella er ikke utformet for isolasjon av andre mage-tarm-patogener enn Salmonella. Ved testing av noen prøver kan lilla misfarging av mediet, uten påvisbar vekst av kolonier, bli observert. Dette skal anses som et negativt resultat. Minimer eksponering av BBL CHROMagar Salmonella for lys både før og under inkubasjon, da lyset kan ødelegge kromogenene. Oppbevar skålene i originalinnpakningen og kartongen så lenge de lagres. Inkubasjon i CO 2 anbefales ikke. REFERANSER 1. Rose, Bonnie E Isolation and identification of Salmonella from meat, poultry and egg products. In: Microbiology laboratory guidebook, 3 rd ed., Food Safety and Inspection Service, U.S. Department of Agriculture, Washington, D.C. 2. U.S. Food and Drug Administration Bacteriological analytical manual (online), AOAC International, Gaithersburg, MD. 3. International Organization for Standards (ISO). Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the detection of Salmonella spp., 4 th Edition, ISO 6579: Bopp, Brenner, Fields, Wells and Strockbine Escherichia, Shigella, and Salmonella. In Murray, Baron, Jorgensen, Pfaller, and Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 8 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 5. D Aoust, Mauer and Bailey Salmonella species. In: Doyle, Beuchat and Montville (ed.), Food microbiology: fundamentals and frontiers, 2 nd ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. National Committee for Clinical Laboratory Standards Approved Guideline M29-A2. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2 nd ed. NCCLS, Wayne, Pa. 7. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4 th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 9. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Data on file, BD Diagnostic Systems. FORPAKNING/TILGJENGELIGHET BBL CHROMagar Salmonella REF Ferdiglagde skålmedier, 20 stk. FLERE OPPLYSNINGER Ta kontakt med din lokale BD-representant for mer informasjon. PA _NO Side 6 av 7

7 Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com AOAC is a trademark and Performance Tested is a service mark of AOAC International. CHROMagar is a trademark of Dr. A. Rambach. Difco is a trademark of Difco Laboratories, subsidiary of Becton, Dickinson and Company. ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company BD PA _NO Side 7 av 7