(12) Translation of european patent specification

Transkript

1 (12) Translation of european patent specification (11) NO/EP B1 (19) NO NORWAY (51) Int Cl. C12N 9/36 ( ) C12N 9/52 ( ) Norwegian Industrial Property Office (21) Translation Published (80) Date of The European Patent Office Publication of the Granted Patent (86) European Application Nr (86) European Filing Date (87) The European Application s Publication Date (30) Priority , EP, (84) Designated Contracting States: AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LI LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO RS SE SI SK SM TR (73) Proprietor Lysando AG, Wangerberg 688, 9497 Triesenberg, LI-Liechtenstein (72) Inventor MILLER, Stefan, Roggenweg 11, Regensburg, DE-Tyskland (74) Agent or Attorney Zacco Norway AS, Postboks 2003 Vika, 0125 OSLO, Norge (54) Title Method of reducing biofilms (56) References Cited: WO-A2-2010/ WO-A2-2010/ DONOVAN D M ET AL: "Peptidoglycan hydrolase fusions maintain their parental specificities", APPLIED AND ENVIRONMENTAL MICROBIOLOGY, AMERICAN SOCIETY FOR MICROBIOLOGY, US, vol. 72, no. 4, 1 April 2006 ( ), pages , XP , ISSN: , DOI: DOI: /AEM ARIMA H ET AL: "Bactericidal action of lysozymes attached with various sizes of hydrophobic peptides to the C-terminal using genetic modification", FEBS LETTERS, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 415, no. 1, 22 September 1997 ( ), pages , XP , ISSN: , DOI: DOI: /S (97) LOPEZ R ET AL: "Enzymes for anti-infective therapy: phage lysins", DRUG DISCOVERY TODAY: THERAPEUTIC STRATEGIES, ELSEVIER, vol. 1, no. 4, 1 December 2004 ( ), pages , XP , ISSN: , DOI: DOI: /J.DDSTR KUMAR C GANESH ET AL: "Significance of microbial biofilms in food industry: A review", INTERNATIONAL JOURNAL OF FOOD MICROBIOLOGY, vol. 42, no. 1-2, 30 June 1998 ( ), pages 9-27, XP , ISSN:

2 Enclosed is a translation of the patent claims in Norwegian. Please note that as per the Norwegian Patents Acts, section 66i the patent will receive protection in Norway only as far as there is agreement between the translation and the language of the application/patent granted at the EPO. In matters concerning the validity of the patent, language of the application/patent granted at the EPO will be used as the basis for the decision. The patent documents published by the EPO are available through Espacenet ( or via the search engine on our website here: NO/EP

3 1 Patentkrav Fremgangsmåte for å fjerne eller redusere en bakteriell biofilm omfattende a) å tilveiebringe et fusjonsprotein omfattende et endolysin eller bakteriocin til hvilket et peptid med membran- eller LPS-forstyrrende 5 aktivitet fusjonerer; og b) å bringe et materiale, en væske, en overflate eller et biologisk materiale i kontakt med fusjonsproteinet, hvori fremgangsmåten ikke er en fremgangsmåte for behandling av en menneske- eller dyrekropp ved kirurgi eller terapi. 2. Fremgangsmåten ifølge krav 1, hvori peptidet som er fusjonert til endolysinet eller bakteriocinet, er et syntetisk eller naturlig forekommende peptid som har en lengde på 6 til 39 aminosyrerester. 3. Fremgangsmåten ifølge krav 1 eller 2, hvori peptidet 15 som er fusjonert til endolysinet eller bakteriocinet, er et syntetisk kationisk, et syntetisk polykationisk, et syntetisk hydrofobt, et syntetisk amfifatisk eller et naturlig forekommende mikrobielt peptid. 4. Fremgangsmåten ifølge et hvilket som helst av 20de foregående kravene, hvori peptidet er fusjonert til endolysinets N- og/eller C-terminal. 5. Fremgangsmåten ifølge et hvilket som helst av de foregående kravene, hvori endolysinet eller bakteriocinet har aktiviteten med å bryte ned celleveggen til Gram-negative og/eller Gram-positive bakterier Fremgangsmåten ifølge krav 5, hvori celleveggen til de Gram-negative bakteriene er valgt fra gruppen bestående av Enterobacteriaceae (Escherichia, Salmonella, Shigella, Citrobacter, Edwardsiella, Enterobacter, Hafnia, Klebsiella, Morganella, Proteus, Providencia, Serratia, Yersinia), 30 Pseudomonadaceae (Pseudomonas, Burkholderia, Stenotrophomonas, Shewanella, Sphingomonas, Comamonas), Neisseria, Moraxella, Vibrio, Aeromonas, Brucella, Francisella, Bordetella, Legionella, Bartonella, Coxiella, Haemophilus, Pasteurella, Mannheimia, Actinobacillus, Gardnerella, Spirochaetaceae (Treponema og Borrelia), Leptospiraceae, Campylobacter, Helicobacter, 35 Spirillum, Streptobacillus, Bacteroidaceae (Bacteroides, Fusobacterium, Prevotella, Porphyromonas), Acinetobacter og hvori de Gram-positive bakteriene er valgt fra

4 gruppen bestående av Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Streptococcus pneumoniae, 2 Streptococcus pyogenes, Streptococcus mutans, Streptococcus equi, Clostridium difficile, Clostridium botulinum, Clostridium tetani, Clostridium perfringens, Bacillus anthracis, Bacillus cereus, Propionibacterium 5 acnes, Mycobacterium avium, Mycobacterium tuberculosis, Corynebacterium diphteriae, Mycoplasma pneumoniae, Actinomyces. 7. Fremgangsmåten ifølge krav 6, hvori celleveggen til de Gram-negative bakteriene er valgt fra gruppen bestående av E. 10 coli, K. pneumoniae, P. aeruginosa og A. baumannii. 8. Fremgangsmåten ifølge et hvilket som helst av de foregående kravene, hvori endolysinet er valgt fra gruppen bestående av phikzgp144 ifølge SEQ ID NO: 1, ELgp188 ifølge SEQ ID NO: 2, Salmonella-endolysin 15 ifølge SEQ ID NO: 3, Enterobacteria phage T4-endolysin ifølge SEQ ID NO: 4, Acinetobacter baumannii-endolysin ifølge SEQ ID NO: 5, E.coli Phage K1F-endolysin ifølge SEQ ID NO: 6, OBPgpLys ifølge SEQ ID NO: 7, PSP3 salmonella-endolysin ifølge SEQ ID NO: 8, E.coli Phage P2-endolysin ifølge SEQ ID NO: 9, Ply511 ifølge SEQ ID NO: 85, Ply2638 ifølge SEQ ID NO: 92 eller hvori 20bakteriocinet er ifølge SEQ ID NO: Fremgangsmåten ifølge et hvilket som helst av de foregående kravene, hvori det kationiske/polykationiske peptidet fremviser en aminosyresekvens ifølge SEQ ID NO: 10 til 30 og 32 til 34, eller hvori det antimikrobielle 25 peptidet fremviser en aminosyresekvens ifølge SEQ ID NO: 93 til 133, eller hvori det hydrofobe peptidet fremviser en aminosyresekvens ifølge SEQ ID NO: 134 og 135; eller hvori det amfifatiske peptidet fremviser en aminosyresekvens ifølge SEQ ID NO: 136 til Fremgangsmåten ifølge et hvilket som helst av de foregående kravene, hvori endolysinvarianten eller bakteriocinet omfatter en aminosyresekvens valgt fra gruppen bestående av SEQ ID NO: 35 til 49, 53, 57, 62 til 64, 66 til 78 og 139 til 142.

5 3 11. Fremgangsmåten ifølge et hvilket som helst av de foregående kravene, hvori materialet som er brakt i kontakt med fusjonsproteinet, er en stein, fjell, jord, sedimenter, næringsmidler, fôr eller kosmetikk. 12. Fremgangsmåten ifølge et hvilket som helst av 5 de foregående kravene, hvori væsken som er brakt i kontakt med fusjonsproteinet, er vann. 13. Fremgangsmåten ifølge krav 11, hvori vannet er drikkevann, grunnvann eller avløpsvann, varm kilde, sjø, innsjø, elv, en hvilken som helst type vannsystem, rengjørings- og lagringsoppløsninger til kontaktlinser, 10 tannproteser, implantater, proteser eller tannreguleringer. 14. Fremgangsmåten ifølge et hvilket som helst av de foregående kravene, hvori væsken som er brakt i kontakt med fusjonsproteinet, er et hvilket som helst stoff avledet eller oppnådd fra en levende organisme Fremgangsmåten ifølge et hvilket som helst av de foregående kravene, hvori væsken som er brakt i kontakt med fusjonsproteinet, er valgt fra gruppen bestående av en overflate til: medisinske innretninger, rør til systemer for industrielt vann eller drikkevann og naturlige vannsystemer Fremgangsmåten ifølge et hvilket som helst av de foregående kravene, hvori, i kombinasjon med eller i tillegg til fusjonsproteinet, antibiotika kan tilsettes. 17. Endolysinvariant eller bakteriocinvariant omfattende et endolysin eller bakteriocin til hvilket et peptid med membran- eller LPS-forstyrrende aktivitet er fusjonert for bruk i en fremgangsmåte for behandling av Gram-negative og/eller Gram-positive bakterielle infeksjoner assosiert med bakteriell biofilm, hvori den bakterielle biofilmen er dannet av bakterielle mikroorganismer Endolysinvarianten eller bakteriocinvariant for bruk i en fremgangsmåte for behandling ifølge krav 17, hvori endolysinvarianten eller bakteriocinvarianten brukes i kombinasjon med eller i tillegg til antibiotika. 19. Bruken av en endolysinvariant eller en bakteriocinvariant omfattende et endolysin eller bakteriocin til hvilket et peptid med membran- eller LPS-

6 4 forstyrrende aktivitet er fusjonert for fjerning og/eller reduksjon av Gramnegative og/eller Gram-positive kontaminasjoner assosiert med bakteriell biofilm på næringsmidler, på næringsmiddelprosesseringsutstyr, på næringsmiddelprosesseringsanlegg, på overflater som kommer i kontakt med næringsmidler, på medisinske innretninger, på overflater 5 på sykehus eller operasjonssaler, hvori den bakterielle biofilmen er dannet av bakterielle mikroorganismer. 20. Bruken av en endolysinvariant eller en bakteriocinvariant omfattende et endolysin eller bakteriocin til hvilket et peptid med 10 membran- eller LPS- forstyrrende aktivitet er fusjonert, som et diagnostisk middel i medisinsk in vitro-diagnostikk, i næringsmiddel- eller fôr- eller miljødiagnostikk av bakterieinfeksjon assosiert med bakteriell biofilm. 21. Bruken ifølge krav 19, hvori endolysinvarianten 15 eller bakteriocinvarianten brukes i kombinasjon med eller i tillegg til antibiotika.