Hemolyse og lipemi som feilkilder for koagulasjonsanalyser

Transkript

1 Hemolyse og lipemi som feilkilder for koagulasjonsanalyser BFI koagulasjonskurs 13. september Kine N. Svendsen Fagbioingeniør, Stavanger Universitetssykehus Koagulasjonsinstrumenter på SUS 2 x Sysmex CS2100i fra Siemens Optisk målemetode HIL check Hvordan bruker vi HIL check til å avvise prøver med hemolyse og lipemi 1

2 Hemolyse Hemolyse In vitro hemolyse Dårlig prøvetaking Feil prøvebehandling (risting av prøven, feil temperatur) In vivo hemolyse Hemolytisk anemi Forgiftninger G6PD mangel Kuldebinding Hjerteklaffer, dialyse, hjerte lunge maskin 2

3 Lippi et. Al (2012): Interference in Coagulation Testing: Focus on Spurious Hemolysis, Icterus, and Lipemia Hemolyse som biologisk interferens Frigjøring av vevsfaktor, proteaser, fosfolipider og ADP som kan aktivere koagulasjonskaskaden og trombocytter Aktivering av koagulasjonskaskaden gir falsk for kort clotting tid Dannelse av clot Forbruk av koagulasjonsfaktorer gir falsk for lang clotting tid. 3

4 Hemolyse som analytisk interferens Hemolyse kan interferere ved optiske målinger dersom de bølgelengdene som blir brukt har en sterk absorbsjon av hemoglobin. Lipemi 4

5 Lipemi Lipemisk plasma inneholder lipidpartikler som lipoprotein og chylomicroner. Kan komme av Fettrikt måltid, eller intravenøse lipider (parenteral ernæring) Sykdommer som diabetes, nyresvikt, thyroidasykdommer, cirrhose, SLE. Medikamenter som proteaseinhibitorer, østrogen og steroider Lipemi som analytisk interferens Lipemi gir økt turbiditet, som kan gi feil måling av lysscatter, reflektans eller absorbsjon i optiske målemetoder. 5

6 Optisk målemetode Lys går igjennom 5 filter som gir lys i 5 ulike bølgelengder. Lyset går igjennom kyvetten med prøve. Jo mer klott, jo mindre lys 6

7 HIL detektor HIL check Lys med 3 ulike bølgelengder går igjennom prøven og blir fanget opp av HIL detektor. 7

8 HIL check HIL=Hemolyse, Icterus, Lipemi Hemolysenivå 8

9 Lipeminivå Icterus HIL-sjekken måler også Icteri Icteri gir lite/ingen biologisk interferens. Gir lite/ingen analytisk interferens, så lenge rett bølgelengde blir brukt. Denne er skrudd av, får ingen alarm ved bilirubin i prøven. 9

10 Hvilke analyser påvirkes av Hemolyse og Lipemi Hvilke kriterier skal settes for å avvise en prøve? Hvilke analyser påvirkes av hemolyse 10

11 Avvisingskriterier på SUS Siemens brukermøte, Stockholm, høst 2015 Innlegg av Steve Kitchen (PhD Lead Clinical Scientist Sheffield, Haemophilia & Thrombosis Centre, Sheffield, UK) Bruker ekte hemolyse. Når det ble mottatt en hemolytisk prøve av en pasient, ble det tatt en ny innen 4 timer, som ikke var hemolytisk. Brukt samme reagenser og instrument som SUS. Følgende blå slides er fra Steve Kitchens innlegg i

12 APTT Avvises fra nivå 1 Dvs. alle med hemolyse 12

13 13

14 D-dimer Avvises fra nivå 1 Dvs. alle med hemolyse PT-INR PT-INR England bruker Quick metode, ikke Owrens 14

15 15

16 PT-INR Pakningsvedlegg: Analysen påvirkes ikke av hemoglobin opp til 10g/L= over nivå 5. Godkjennes til og med hemolysenivå 4 Fra og med nivå 5, gis ut med kommentar: «Hemolytisk prøve, analysesvaret kan bli påvirket». Fibrinogen Steve Kitchen: Ingen biologisk interferens, anbefaler stopp ved nivå 5 (Mangler plott). Godkjennes til og med hemolysenivå 4 Fra og med nivå 5, gis ut med kommentar: «Hemolytisk prøve, analysesvaret kan bli påvirket». 16

17 Eksempel fra SUS Hvilke analyser påvirkes av lipemi Forfatter Instrument APTT PT TT Fibrinogen Antitrombin Roß and Paar MDA 180 = = Dorn Beineke Sysmex CA = 6000 og Sysmex CA 7000 Tantanatae Sysmex 2100i Lippi ACL TOP = = = = Kitchen Sysmex 2100i = = Quehenberger Bai et al Sysmex CA 6000 Korrelasjon med og uten lipemi= 0,988 Sysmex CA Korrelasjon 1500 og Stago med og uten STA lipemi >0,98 Korrelasjon med og uten lipemi= 0,907 Korrelasjon med og uten lipemi >0,98 Korrelasjon med og uten lipemi= 0,288 Korrelasjon med og uten lipemi= 0,991 Korrelasjon med og uten lipemi >0,98 Korrelasjon med og uten lipemi= 0,902 17

18 PT-INR og Fibrinogen: Valideres uten kommentar APTT: Fra nivå 3 og opp: Prøven sentrifugeres en ekstra gang, på program 3 (trombolyseprogram), evt. 2 ganger. Lipidene vil da legge seg på toppen av plasma og kan fjernes. Dersom ikke lipeminivået synker, må analysen utgå. 18

19 D-dimer Immunturbidimetrisk metode: - Partikler med antistoff mot d-dimer->lager komplekser - Måler absorbans ved 660 nm - Turbiditet kan forstyrre absorbansmålingen D-dimer Fra pakningsvedlegg: Turbiditet og partikler i prøvene kan virke forstyrrende på målingen. Derfor må prøver som inneholder partikler sentrifugeres på nytt i 10 minutter ved ca x g før testing. Lipemiske prøver eller prøver som inneholder partikler som ikke kan klarnes ved sentrifugering, må utelukkes fra testing. 19

20 D-dimer Fra nivå 3 og opp: Prøven sentrifugeres en ekstra gang, på program 3 (trombolyseprogram), evt. 2 ganger. Lipidene vil da legge seg på toppen av plasma og kan fjernes. Dersom ikke lipeminivået synker, må analysen utgå. Oppsummering PT-INR og Fibrinogen kan valideres uansett hemolyse eller lipemi. APTT og D-dimer kan ikke valideres ved hemolyse eller lipemi. 20