SYSMEX XS-1000i. Analyseprinsipper

Transkript

1 SYSMEX XS-1000i Analyseprinsipper

2 Prinsipper RBC Plt impedans måling Hb fotometrisk måling WBC 5 Diff fluorescens flowcytometri 2

3 Erytrocytter og trombocytter Telles i en egen kanal, impedans kanalen, volum på cellene måles. Impedans prinsipp : Målingen foregår i en Transeducer, en enhet som overfører strøm fra ett system til et annet. Vi har en konstant spenning som står i apertur åpningen, der prøvestrømmen går igjennom. Når en celle passerer åpningen (apertur åpningen) i aperturplaten, brytes den spenningen, og en elektronisk puls, en motstand, måles. Intensiteten av den elektroniske pulsen fra hver analyserte celle, er proporsjonal med cellens volum størelsen på cellen. Hydrodynamisk fokusering : Sikrer at cellene strømmer igjennom flowcellen en om gangen. Automatiske discriminatorer skiller de to celle populasjonene basert på komplekse algoritmer, de er flytende, ikke faste. Dette vises i RBC- og Plt-histogramene. Y-akse antall, x-akse volum (fl) Impedance, engelsk : total mengde motstand, hinder, hindring. 3

4 Hemoglobin Hemoglobinkonsentrasjonen måles fotometrisk i en egen kanal. Hgb molekylet i prøven blir fritt ved at alle erytrocyttene i prøven lyseres. Jernet i Hgb-molekylet blir oksydert fra Fe 3+ til Fe 2+ og vi får en stabil kolorimetrisk binding med Natrium Lauryl Sulfat (SLS), C 12 H 25 SO 4 Na SLS-Hgb fargekomplekset måles fotometrisk ved λ 555nm Hgb konsentrasjonen er proporsjonal med fargeintensiteten som måles. Sysmex Natrium Lauryl Sulfate (SLS) SLS reagenset er bra på å løse opp lipider og leukocytter, noe som reduserer forstyrrelser fra lipemiske prøver og svært høye leukocyttkonsentrasjoner. 4

5 Hematocrit HCT er direkte målt, basert på måling av antallet og volumet til erytrocyttene. Hct RBC pulse height detection method Kalles også erythrocyte volume fraction, EVF En verdi som angir hvor stor del av blodets volum som utgjøres av HCT = RBC volymen i provet x 100 Volymen i provet de røde blodcellene. Sysmex XE

6 Erytrocytt indekser MCV (Middel Celle Volum) MCH (Middel Celle Hemoglobin) MCHC (Middel Celle Hemoglobin konsentrasjon) Beregnede parametere. Benytter disse målingene i utregningen: Hemoglobin konsentrasjonen Hb Erytrocytt tallet RBC Hematokrit verdien HCT MCV = HCT / RBC * 1000 MCH = Hb / RBC MCHC= Hb / HCT 6

7 Antall celler Leukocytter WBC i CBC-mode Laser Flowcytometri, forward scatter light, FSC, benyttes i denne målingen. FSC indikerer størrelsen på cellen. Når Leukocyttene analyseres, blir alle erytrocytter helt lysert av reagenset Stromatolyser 4 DL. Den volumetriske forskjellen, mellom gjenværende Trombocytter og WBC, gjør at antallet hvite blodlegemer kan analyseres ved hjelp av forward scattered light informasjon. FSC indikerer celle størrelse, det vil si jo større celle, jo høyere FSC-intensitet. FSC intensitet WBC partikkel størrelse distribusjon vises av WBC histogram. 7

8 Leukocytter Laser Fluoresence Flowcytometri er metoden som benyttes for å måle leukocytter. Prøven blir fortynnet med reagenset Stromatolyser 4 DL og samtidig blir erytrocyttene hemolysert. Polymetin, et fluoriscerende fargestoff, tilsettes det binder seg til nukleinsyrer (RNA og DNA) i cellene. Fluorescens fra bindingen måles. Størrelse FSC, Forward Scatter Light Kompleksitet SSC, Side Scatter Light, lysspredning Kjernemateriale SFL, Side Fluorescens Light, RNA/DNA innhold 8

9 Leukocytter WBC 5-DIFF SYSMEX-XS bruker et adaptivt Cluster Analyse System (ACAS) for å finne skille mellom de ulike celle typene. Finner definerte klynger som utgjør en samlet populasjon, samme celletype, kalles også cluster Faste diskriminatorer for å separere celle populasjoner brukes ikke. Lymfocytte- Rosa populasjon Neutrofile- Blå populasjon Monocytter - Grønn populasjon Eosinofile granulocytter-rød populasjon Basofile granulocytter-gul populasjon Mørkeblå partikler nederst er Ghost 9