Måleprinsipper. Advia. 3 ulike prinsipper benyttes: Instrumentet har 5 kanaler. 2 flowceller benyttes til måling m

Transkript

1 ADVIA 120 (Bayer)

2 Måleprinsipper Advia 3 ulike prinsipper benyttes: Lysspredning Spesifikk farging Absorbansmåling Instrumentet har 5 kanaler RBC+PLT, Baso, Perox, Retic og Hb 2 flowceller benyttes til måling m av cellenes lysspredning og absorbans Hb måles med en modifisert Cyanmethemoglobinmetode

3 ADVIA optisk system Flowcelle 1:Perox Flowcelle 2: RBC/Retik/PLT/Baso/CSF Hgb Kolorimeter

4 Oversikt fortynningskammer og blodventil

5 RBC og PLT-kanal Blod og reagens blandes i reaksjonskammeret RBC og PLT blir sfæret og fiksert Cellene føres en og en gjennom en flowcelle I flowcellas vindu bestråles cellene med monokromatisk laserlys Cellene vil absorbere og spre lys Cellenes lysspredning måles

6 Måling av lysspredning i RBC/PLT kanal Høy vinkel detektor (5 o - 15 o ) 670nm Laser Diode Digital Konvertering Lav vinkel detektor (2 o -3 o )

7 Måling av lysspredning i RBC- og PLT-kanal Graden av lysspredning er avhengig av: Cellestørrelse Hemoglobin-innhold innhold i erytrocyttene Platenes refraktive index (tørrstoffinnhold) Spredt lys måles i to vinkler: lav vinkel; ; 2-3º 2 (korrelerer høy vinkel; ; korrelerer med cellestørrelse rrelse) 15º (korrelerer med celleinnhold)

8 Resultater RBC- og PLT-kanal Lysspredningssignalene fra 2 vinkler plottes mot hverandre i et cytogram som viser RBC s størrelse og Hb-innhold PLT s størrelse og tørrstoffinnhold I det lineære volum-hb Hb-cytogrammet deles RBC inn i 9 områder etter volum og HB-innhold Det plottes også histogram over RBC volum,, RBC Hb kons, og PLT volum I tillegg beregnes en rekke andre parametre for RBC og PLT

9 Cytogram (størrelse og Hb- innhold) ) og histogrammer for RBC

10 Størrelse og Hb-innhold av RBC (lineært cytogram)

11 RBC (st( størrelse og Hb-innhold innhold) cytogram Makro Mikro Hypo Hyper

12 Klassifisering av erytrocytter påp Hb-metning metning: Hypokrom Normokrom Hyperkrom Størrelse: Mikrocytter Normocytter Makrocytter Advia

13 Hva er størrelse (fl) og Hb-konsentrasjon (g/dl) i disse 5 cellene?

14 Prinsipp Baso-kanal Blod og reagens blandes i reaksjons- kammeret RBC/PLT lyseres Leukocyttene, unntatt basofile, strippes for cellemembran og cytoplasma Cellene føres enkeltvis gjennom flowcella hvor de bestråles med laserlys Cellene vil absorbere og spre lys Spredt lys måles i 2 vinkler

15 Lysspredning i Basokanal 670 nm Laser Diode Høy vinkel detektor (5 o - 15 o ) Lav vinkel detektor (2 o -3 o )

16 Måling av lysspredning i Baso- kanal Lysspredningen vil være avhengig av: Cellestørrelse Kjernestruktur (lobularitet) Det måles spredt lys i lav og høy vinkel Lav vinkel: : 2-3º, 2 påvirkes mest av størrelse Høy vinkel: : º, påvirkes mest av kjernestruktur (lobularitet)

17 Resultater basokanal Lysspredningen fra 2 vinkler plottes mot hverandre i et koordinatsystem Lav vinkel spredning (volum) på Y-aksen Høy vinkel spredning (kjernestruktur) på x-aksen Derved separeres cellene i mononukleære (MN), polymorfnukleære re (PMN), blaster, og basofile Samtidig registreres totalt antall leukocytter

18 Basofile,, mono- og polymorfnukleære re celler SCATTER (Størrelse) SCATTER (Nuclear Complexity - segmentering)

19 Prinsipp peroksydasekanal Erytrocytter hemolyseres, og uønskede enzymer inaktiviseres ved oppvarming Leukocyttene fikseres og farges med et substrat for peroksydase Celler som inneholder peroksydase gir spalting av substrat = brun farge Cellene føres gjennom flowcelle og bestråles av en tungsten-halogen lampe I flowcella måles lysspredning og absorbans

20 Peroxidase analyse Høj vinkel detektor (5 o - 15 o ) Tungsten- Halogen Lamp Absorbans Peroxidase

21 Resultater Perox-kanal Resultatet plottes i et koordinatsystem med volum på y- og absorbans på x-aksen Absorbans korrelerer med peroksydaseinnhold Lys spredning korrelerer med størrelse Cellene kan dermed klassifiseres som lymfocytter, eosinofile, monocytter, neutrofile og LUC (= Large Unstained Cells, dvs atypiske lymfocytter eller blaster) Totalt leukocytt-antall registreres også

22 Scattercytogram peroxkanal ABSORBANS ABSORBANS SCATTER (Størrelse) SCATTER (Størrelse)

23 Retikulocytter Retikulocytter er siste modningstrinn før f ferdige erytrocytter Har rester av RNA Tilbringer 2 dager i beinmarg og 1 dag i blod før f r modning God indikator påp beinmargfunksjon

24 Retikulocytt-telling telling Økt ved stor produksjon av erytrocytter Nedsatt ved aplastisk anemi og dårlig d beinmargsfunksjon Telles automatisk eller manuelt

25 Prinsipp retikulocytt-telling telling på ADVIA Isovolumetrisk sfæring av erytrocytter og retikulocytter Retikulocyttene farges med det RNA- bindende fargestoffet Oxacin Cellene føres gjennom flowcella (laseroptikk) hvor 3 detektorer registrerer: Lysspredning i lav vinkel Lysspredning høy vinkel Absorbans

26 Retikulocytt-måling ling i flowcella Høy vinkel detektor (5 o - 15 o ) 670nm Laser Diode Oxazin 750 RNA Farve Lav vinkel detektor (2 o -3 o ) Absorbans RNA innhold

27 Resultater Retic-kanal Flere cytogram plottes, bl.a.: Høy y vinkel spredning mot absorbans (RNA- innhold) hvor retikulocytter klassifiseres i lav-,, medium eller høy-absorberende celler Lav vinkel spredning (volum) mot høy h y vinkel (Hb-innhold) Retikulocytt indekser beregnes (MCVr( MCVr, CHCMr, RDWr, CHr)

28 Retikulocytt modningsgrad Oxazine 750 Absorbans Høy vinkel (5-15 grader) NRBC

29 Retikulocytt cytogram Lav vinkel (2-3 grader) Høy vinkel (5-15 grader) Lav vinkel gjenspeiler volum Høy y vinkel gjenspeiler Hb- innhold Absorbans skiller retikulocytter fra erytrocytter