NKK møte mars Ida Jansrud Hammer Lege i spesialisering Laboratorium for klinisk biokjemi

Transkript

1 HOLBARHETSFORSØK LUPUS ANTIKOAGULANT NKK møte mars 2015 Ida Jansrud Hammer Lege i spesialisering Laboratorium for klinisk biokjemi

2

3 Antifosfolipidsyndrom (APS) Klassifikasjonskriterier (up to date) 1. Forekomst av minst én klinisk hendelse: venøs eller arteriell trombose, eller en spesifikk svangerskapskomplikasjon. 2. Tilstedeværelse av minst en type antifosfolipidantistoff, målt ved to anledninger med minst 12 ukers mellomrom. Minst 1 av følgende laboratoriekriterier, målt ved 2 eller flere anledninger med minst 12 ukers mellomrom: Lupus antikoagulant (LA) i plasma. Anti-cardiolipin antistoff IgG eller IgM i serum/plasma Anti-β 2 glykoprotein 1 (aβ2gp1) antistoff type IgG eller IgM i serum/plasma.

4 Anbefalt analysering av Lupus antikoagulant (LA) (SSC-ISTH 2009/CLSI 2014 ): «Pengo et al. Update of the guidelines of lupus anticoagulantdetection. J Thromb Haemost 2009;7: » A. Prøvetaking 1. Før oppstart av antikoagulantia, eller etter en periode med seponering av medikamentet. 2. Friskt venøst blod i Natriumcitratrør. 3. Dobbelsentrifugering 4. Rask nedfrysing av plasma dersom analysering skal utsettes. 5. Frossent plasma må tines ved 37 grader C (total nedsenkning i vannbad i 5 min).

5 Anbefalt analysering av Lupus antikoagulant (LA) (SSC-ISTH 2009): B. Valg av testmetode 1. 2 tester basert på ulike prinsipper 2. DRVVT bør være den første 3. Den andre bør være en sensitiv APTT test (lavt innhold av fosfolipid og Silica som aktivator). 4. LA bør anses positiv dersom en av testene ovenfor er positive. C. Resultatene bør utgis som en ratio av pasient/normalplasma. Hva har vi? APTT test: SCT (HemosIL Silica Clotting time, Screen + confirm) Silica aktiverer factor XII. DRVVT (STAGO Staclot diluted Russel Viper Venome time, screen + confirm). Slangegift aktiverer factor X.

6 Anbefalt analysering av Lupus antikoagulant (LA) (SSC-ISTH 2009): Screen(Ca 2+ +PL ): Confirm (Ca 2+ +PL ): pas plasma (koagulasjonstid sek) normalplasma (koagulasjonstid sek) pas plasma (koagulasjonstid sek) normalplasma (koagulasjonstid sek) Normalisert ratio= Screen (SCT/DRVVT1) Confirm (SCT/DRVVT 2) Ved negativ Lupus antikoagulant vil både screen og confirm være like lange og normalisert ratio tilnærmet 1. Ved positiv Lupus antikoagulant vil screen være økt og confirm redusert/korrigert og normalisert ratio vil være økt.

7 Hva påvirker lupus antikoagulant resultatet Preanalytiske faktorer: Prøvetaking Heparin kan gi forlenget koagulasjonstid (kateter) Koagel kan gi: forkortet koagulasjonstid (aktivering av koagulasjonsfaktorer), eller forlenget koagulasjonstid; forbruk av faktorene i et større koagel. Sentrifugering/platetall i plasma Høyt innhold av plater (fosfolipider) i plasma kan føre til falskt for lave prøver Nedfrysing: Kan gi falskt for lave resultater dersom platene sprekker og frigir fosfolipider. Bør skje så raskt som mulig for å hindre tap av koagulasjonsfaktorer Opptining (37 gr C, 5 min) Analytiske interferens: Behandling med antikoagulantia. Mangel på (evt økning av )koagulasjonsfaktorer Hemmere av koagulasjonfaktorer.

8 Preanalytiske faktorer 1: Hvordan behandles prøvene? Tas av helsesekretærer/bioingeniører på citratrør. Prøvemateriale dobbelsentrifugeres innen 24 timer. Serum avpipetteres, merkes citratplasma. Nedfryses til -20 C Opptines i vannbad 37 C i 5 minutter (10-15 stk om gangen) Kjøres på STA-R Evolution.

9 Bakgrunn for forsøket 1. Vi mottar prøver fra andre sykehus og fra allmennpraksis. Fra allmennpraksis kan prøvene være enkelsentrifugert og avpipettert, evt sendt som citratblod. 2. Tidligere holdbarhetsforsøk på LKB har vist at positive prøver/øvre normalområde sannsynligvis påvirkes mer av prøvehåndtering enn negative prøver. 3. Artikkel publisert i 2012: «Testing for lupus anticoagulant fresh or frozen?» P.Froom, M. Barak, Clin Chem Lab Med Mar 1;50(9): : Så på pasienter med forhøyet drvvt normalisert ratio og sammenlignet resultatet av fersk og frosset-opptint plasma (13 av 14 drvvt tester ble lavere etter frysing) Konklusjon: Analysering av frossent/opptint plasma med platetall < / μl resulterte i signifikant lavere drvvt ratio (p<0,001) og feilklassifisering av 6 av 14 pasienter. Også signifikant lavere SCT normalisert ratio, men dette førte ikke til feilklassifikasjon

10 Rekruttering av pasienter Vanskelig Hentet ut grensepositive og positive SCT og/eller DRVVT fra lab-journal (Unilab 700) Rekrutterte pasienter i 3 perioder (februar, april og mai 2014) Kontaktet pasienter via brev og telefon. Pasientene kom til Haukeland og tok 1 blodprøve. Registrering av alder, kjønn og bruk av evt antikoagulantia Signering av samtykke Måling av SCT, DRVVT, INR og TPK (etter sentrifugering).

11 Pasienter Totalt 30 pasienter Alder: år (født ) Antall kvinner: 21 Antall menn: 9 Antikoagulantia: Marevan: 9 Xarelto: 1 Fragmin: 1 ( IE x2 ) Positive prøver: År Antall 20-29: : : 9 Over DRVVT 14 9 Grense : 5 1 SCT Negative: 11 20

12 Flytdiagram

13 SCT DRVVT Figur: Arne Åsberg Negativ Grense Positiv SCT <1,23 1,23-1,31 >1,31 Negativ Grense Positiv DRVVT <1,20 1,20-1,31 >1,31

14 SCT Tillat bias: 5% Tillatt totalfeil: 12% 29 pasienter Figur: Arne Åsberg Fasit Citratplasma (2000/2600g) 24t Citratplasma (1500g), 24 t Citratblod, 24 t

15 DRVVT Tillat bias: 5% 29 pasienter Tillatt totalfeil: 12% Figur: Arne Åsberg Fasit Citratplasma (2000/2600g) 24t Citratplasma (1500g), 24 t Citratblod, 24 t

16 Tillat bias: 5% SCT, 20 pas. Marevan eks. Tillatt totalfeil: 12% Fasit Citratplasma (2000/2600g) 24t Citratplasma (1500g), 24 t Citratblod, 24 t

17 DRVVT 20 pas. Marevan pas ekskludert. Tillat bias: 5% Tillatt totalfeil: 12% Fasit Citratplasma (2000/2600g) 24t Citratplasma (1500g), 24 t Citratblod, 24 t

18 Utfordringer Referanseområdet kjørt inn på ferske prøver, i rutinen hos oss fryses prøvene ned og analyseres i batch. Rutiner for sentrifugering og nedfrysing. Er de gode nok? Hos oss? I PHT? Hos sykehus som sender prøver til oss? Er den preanalytiske håndteringen god nok? Fylning av rør? Riktig rør? Må vi endre rutinene våre? 18

19 Takk for oppmerksomheten!