PLATELIA CMV IgG 1 Plakk KVANTITATIV BESTEMMELSE AV IgG-ANTISTOFFER MOT CYTOMEGALOVIRUS I HUMANT SERUM ELLER PLASMA AV ENZYMIMMUNANALYSE

Transkript

1 PLATELIA CMV IgG 1 Plakk KVANTITATIV BESTEMMELSE AV IgG-ANTISTOFFER MOT CYTOMEGALOVIRUS I HUMANT SERUM ELLER PLASMA AV ENZYMIMMUNANALYSE /11 1. TILTENKT BRUK Platelia CMV IgG er en indirekte ELISE-immunanalyse for kvantitativ bestemmelse av IgG-antistoffer mot cytomegalovirus i humant serum eller plasma. 2. KLINISK VERDI Det humane cytomegaloviruset (CMV) er et ubikvitært virus som finnes i alle geografiske områder og sosioøkonomiske grupper. CMV tilhører herpesvirusfamilien, og blir formidlet gjennom biologiske væsker ved nær mellommenneskelig kontakt (urin, spytt, morsmelk, blod, tårer, sperm og vaginal sekresjon). Etter en infeksjon kan CMV forbli latent i flere år i kroppen til smittede pasienter, og kan deretter reaktiveres og forårsake gjentatte infeksjoner med mulig spredning til andre individer. Primærinfeksjon skjer ved forskjellige former for smitte, og ved forskjellige perioder i livet (medfødte infeksjoner, postnatale infeksjoner). Etter latensfasen kan den sekundære infeksjonen skje enten gjennom reinfeksjon ved et eksogent virus eller ved reaktivering av det latente viruset. 50 til 85 % av befolkningen blir infisert før de blir voksne, men de fleste infeksjoner forblir asymptomatiske, og bare 2 % av pasientene viser atypiske symptomer som feber, asteni, muskel- eller leddsmerter. CMV-infeksjonen kan imidlertid være alvorlig når den rammer gravide kvinner, nyfødte eller personer med svekket immunforsvar. 1 til 3 % av gravide kvinner blir infisert med CMV, og overføring til fosteret gjennom morkakediffusjon blir observert i 40 til 50 % av pasientene. 95 % av fosterinfeksjonene er ikke symptomatiske, men i 5 % av tilfellene er komplikasjonene svært alvorlige: hepatomsplenomegali, mikrocefali, hydrocefalus, prematuritet, psykomotorisk retardasjon og fosterdød. I 10 % av asymptomatiske infeksjoner vil nyfødte få forsinkede komplikasjoner som delvis eller fullstendig døvhet eller blindhet. Hos pasienter med svekket immunforsvar (AIDS, mottakere av organtransplantasjoner, lymfoproliferative sykdommer eller kreft) er alvorlige komplikasjoner relatert til en disseminert og/eller visceral infeksjon som splenomegali, chrorioretinitt, hepatitt, lungebetennelse, myokarditt, encefalitt. Infeksjonen kan være dødelig i disse pasientene. Noen uker etter CMV-infeksjonen fører immunresponsen til at det oppstår spesifikke IgM-antistoffer, fulgt noen dager senere av spesifikke IgG-antistoffer. Den serologiske diagnosen av CMV-infeksjonen indikeres av en serokonversjon eller en vesentlig økning med titervæske av IgG. Registrering av spesifikke anti-cmv IgG-antistoffer er nyttig for diagnose av en primærinfeksjon og for å avgjøre pasientens immunstatus. 3. PRINSIPP Platelia CMV IgG er en test for registrering og titrering av IgG-antistoffer mot cytomegalovirus i humant serum eller plasma ved hjelp av en indirekte ELISA immunenzymatisk metode. Inaktivert CMV-antigen blir brukt til å dekke mikroplaten. Et polyklonalt antistoff merket med peroksidase som er spesielt for humane gammakjeder (anti-igg) blir brukt som konjugat. Testen omfatter følgende trinn: Trinn 1 Pasientprøver og kalibratorer blir fortynnet 1/21 og så fordelt i brønnene til mikroplaten. Under denne inkubasjonen på en time ved 37 ºC, binder IgG-antistoffene mot CMV som er til stede i prøven seg til CMV-antigen som dekker mikroplatebrønnene. Etter inkubasjonen blir ubundne ikke-spesifikke antistoffer og andre serumproteiner fjernet med skylling. Trinn 2 Konjugatet (peroksydase-merket polyklonalt antistoff spesifikt for gammakjeder) blir lagt til mikroplatebrønnene. Under denne inkubasjonen på en time på 37 C, binder det merkede antistoffet seg til serumet IgG som fanges opp av CMVantigenet. Det ubundne konjugatet blir fjernet ved skylling på slutten av inkubasjonen. 1

2 Trinn 3 Tilstedeværelsen av immunkomplekser (CMV-antigen, IgG-antistoffer mot CMC, anti-igg-konjugat) blir demonstrert ved å legge til en enzymisk utviklingsløsning i hver brønn. Trinn 4 Etter inkubasjonen på romtemperatur ( C), blir den enzymatiske reaksjonen stoppet ved å legge til 1N svovelsyreløsning. Den optiske tetthetsavlesningen i et spektrometer stilt til 450/620 nm er proporsjonal med mengden IgG-antistoffer mot CMV i prøven. 4. PRODUKTINFORMASJON Reagensmengden skal rekke til 96 tester. Alle reagenser er kun for in vitro diagnostisk bruk. Merke Reagenstype Presentasjon R1 Mikroplate Mikroplate (klar til å brukes) 12 striper med 8 ødeleggbare brønner dekket med inaktivt CMV-antigen R2 Konsentrert vaskeløsning (20x) Konsentrert vaskeløsning (20x) TRIS-NaCl-buffer (ph 7,4), 2 % Tween 20 Konserveringsmiddel : 0,04 % ProClin 300 R3 Kalibrator 0 Kalibrator 0 Negativt humant serum for IgG-antistoffer mot CMV og negativt for HBs antigen, anti-hiv1, anti-hiv2 og anti-hcv Konserveringsmiddel : 0,15 % ProClin 300 R4a Kalibrator 0,4 Kalibrator 0,4 AU/ml Humant serum reaktivt for IgG-antistoffer mot CMV og negativt for HBs antigen, anti-hiv1, anti-hiv2 og anti-hcv Konserveringsmiddel : 0,15% ProClin 300 R4b Kalibrator 1 Kalibrator 1 AU/ml Humant serum reaktivt for IgG-antistoffer mot CMV og negativt for HBs antigen, anti-hiv1, anti-hiv2 og anti-hcv Konserveringsmiddel : 0,15% ProClin 300 R4c Kalibrator 4 Kalibrator 4 AU/ml Humant serum reaktivt for IgG-antistoffer mot CMV og negativt for HBs antigen, anti-hiv1, anti-hiv2 og anti-hcv Konserveringsmiddel : 0,15% ProClin 300 R4d Kalibrator 10 Kalibrator 10 AU/ml Humant serum reaktivt for IgG-antistoffer mot CMV og negativt for HBs antigen, anti-hiv1, anti-hiv2 og anti-hcv Konserveringsmiddel : 0,15% ProClin 300 R6 Konjugat (51x) Konjugat (51 x) Polyklonalt antistoff fra geit mot humane gammakjeder koblet med perokysdase fra pepperrot Konserveringsmiddel : 0,16% ProClin 300 R7 Fortynningsmiddel Fortynningsmiddel for prøver og konjugat (klar til å brukes) Tris-NaCl (ph 7,7) albumin fra hornkveg, glycerol, 0,1 % Tween 20, rød fenol Konserveringsmiddel : 0,15% ProClin 300 R9 Kromogen TMB Mikroplate (klar til å brukes) 3,3 5,5 tetrametylbenzidin (<0,1 %), H 2 O 2 (<1 %) R10 Stoppeløsning Mikroplate (klar til å brukes) 1N svovelsyreløsning 1 mikroplate 70 ml 0,75 ml 0,75 ml 0,75 ml 0,75 ml 0,75 ml 0,7 ml 80 ml 28 ml 28 ml For lagringsforhold og utløpsdato, vennligst se tekst på boksen. 2

3 5. ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER Påliteligheten av resultatene avhenger av korrekt gjennomføring av følgende laboratoriepraksiser: Ikke bruk reagenser som er utgått på dato. Ikke bland eller forbind reagenser fra forskjellige batcher innenfor en gitt prosess. BEMERKNINGER: For vaskeløsning (R2, merkeidentifikasjon: 20x farget grønn), kromogen (R9, merkeidentifikasjon: TMB farget turkis) og stoppeløsning (R10, merke, merkeidentifikasjon: 1N farget rød), er det mulig å bruke andre batcher enn de som er i utstyrssettet, forutsatt at disse reagensene er strengt ekvivalente og at samme batch blir brukt i en gitt testprosess. BEMERKNINGER: I tillegg kan vaskeløsningen (R2, merkeidentifikasjon: 20x farget grønn) blandes med de 2 andre vaskeløsningene inkludert i forskjellige Bio-Rad reagenssett (R2, merkeidentifikasjoner: 10x farget blå eller 10x farget oransje) når rekonstituert, forutsatt at bare én blanding blir brukt innenfor en gitt testprosess. Vent i 30 minutter for å la reagensene nå romtemperatur ( C) før bruk. Rekonstituer eller tynn forsiktig ut reagensene for å unngå kontaminering. Ikke utfør testen i nærheten av reaktiv damp (syre, alkalin, aldehyddamper) eller støv som kan endre enzymaktiviteten i konjugatet. Bruk glass som er grundig vasket og skylt med deionisert vann, eller fortrinnsvis deponerbart materiale. Å vaske mikroplaten er et kritisk trinn i prosedyren: følg det anbefalte antallet vaskesykluser og sikre at alle brønner er helt fylt og så fullstendig tømt. Feil vasking kan føre til unøyaktige resultater. Ikke la mikroplaten tørke mellom slutten av vasking og reagensdistribusjon. Bruk aldri samme beholder for å fordele konjugatet og utviklingsløsningen. Enzymreaksjonen er veldig sensitiv for metaller eller metallioner. Følgelig må du ikke la metall komme i kontakt med de forskjellige løsningene som inneholder konjugatet eller kromogenet. Kromogenløsning (R9) skal være fargeløs. Tilsynekomsten av fargen blå indikerer at reagensen ikke kan brukes og må erstattes. Bruk en ny pipettspiss for hver prøve. Sjekk at pippettene og annet utstyr er nøyaktige og fungerer korrekt. Helse- og sikkerhetsinstruksjoner Materiale fra mennesker som blir brukt til å preparere reagenser, har blir testet og funnet ikke-reaktivt for hepatitt B overflateantigen (HBs Ag), antistoffer for hepatitt C-virus (anti-hcv) og for human immunsviktvirus (anti-hiv1 og anti- HIV2). Fordi ingen metode absolutt kan garantere fraværet av infeksjonsbærende midler, må reagenser med human opprinnelse og pasientprøver behandles som om de kan overføre smittsomme sykdommer: Ethvert materiale, inkludert vaskemidler, som kommer i direkte kontakt med prøver og reagenser som inneholder materiale av human opprinnelse, bør betraktes som i stand til å overføre smittsomme sykdommer. Bruk deponerbare hansker når du behandler prøver og reagenser. Ikke bruk munnen som pipette. Unngå å søle prøver eller løsninger som inneholder prøver. Sølt materiale må vaskes vekk med blekemiddel fortynnet til 10 %. Hvis det søles syre, må den først nøytraliseres med natriumbikarbonat. Deretter må det rengjøres med et blekemiddel fortynnet til 10 % og tørkes opp med adsorberende papir. Materialet som blir brukt til rengjøringen, må kastes i en beholder for spesialavfall. Pasientprøver, reagenser som inneholder materiale fra mennesker, samt kontaminert materiale og produkter skal bare kastes etter dekontaminering: - enten ved å legge det i blekemiddel på den endelige konsentrasjonen på 5 % natriumhypoklorid i 30 minutter, - eller ved å autoklavere ved 121 C i minst 2 timer. FORSIKTIG: Ikke før løsninger som inneholder natriumhypoklorid, inn i autoklaven Unngå enhver kontakt med reagenser, inkludert de som ikke blir betraktet som farlige, med hud og slimhinner. Kjemiske og biologiske rester må håndteres og deponeres i henhold til regler for god laboratoriepraksis. Alle reagenser i utstyrssettet er kun for in vitro diagnostisk bruk. Når det gjelder fare- og forsiktighetsanbefalinger i forhold til enkelte kjemiske komponenter i dette testsettet, kan du se piktogrammet(-ene) nevnt på etikettene og informasjonen angitt på slutten av bruksanvisningen. Sikkerhetsdatabladet er tilgjengelig på 6. PRØVER 1. Serum og plasma (EDTA, heparin og sitrat) er de anbefalte prøvetypene. 2. Følg følgende anbefalinger for håndtering, bearbeiding og lagring av blodprøver: Samle alle blodprøver mens du følger rutinemessige forholdsregler for venepunktur. For serum lar du prøvene levre seg helt før sentrifugering. Hold rørene godt lukket hele tiden. 3

4 Etter sentrifugering separerer du serumet eller plasmaen fra det levrede blodet eller de røde cellene i et tett lukket lagringsrør. Prøvene kan lagres på +2 8 C hvis testen blir utført innen 7 dager. Hvis testen ikke blir fullført innen 7 dager, eller ved forsendelse, må prøvene fryses på -20 C eller kaldere. Ikke bruk prøvene som har blir tint opp mer enn fem ganger. Tidligere frosne prøver skal blandes grundig (vortex) etter opptining før testing. 3. Prøver som inneholder 90 g/l albumin eller 100 mg/l ukonjugert bilirubin, lipemiske prøver som inneholder tilsvarende 36 g/l av triolein (triglyserid), og hemoglyserte tester som inneholder opp til 10 g/l med hemoglobin, påvirker ikke resultatene. 4. Ikke varm opp prøvene. 7. ANALYSEPROSEDYRE 7.1 Påkrevde materialer som ikke følger med Vortexmikser. Mikroplateavleser utstyrt med 450 nm og 620 nm-filtre (*). Mikroplateinkubator termostatisk innstilt på 37±1 C (*). Automatisk, semiautomatisk eller manuell mikroplatevasker (*). Sterilt destillert eller deionisert vann. Deponerbare hansker. Vernebriller. Adsorberende papir. Automatiske eller semiautomatiske, justerbare eller forhåndsinnstilte pipetter eller multipipetter for å måle og fordele 10 µl til 1000 µl og 1ml, 2 ml og 10 ml. Graderte sylindere på 25 ml, 50 ml, 100 ml og 1000 ml kapasitet. Natriumhypoklorid (blekemiddel) og natriumbikarbonat. Beholder for farlig biologisk avfall. Deponerbare rør. (*) Konsulter vår tekniske avdeling for detaljert informasjon om anbefalt utstyr. 7.2 Rekonstitusjon av reagensene R1: La stå i 30 minutter i romtemperatur ( C) før du åpner posen. Ta ut brettet, legg umiddelbart ubrukte striper tilbake i posen og sjekk som det er tørkemidler der. Tett posen forsiktig og lagre den på +2 8 C. R2: Fortynn vaskeløsningen R2 til 1/20 i destillert vann: for eksempel 50 ml R2 og 950 ml destillert vann for å få en vaskeløsning som er klar til å brukes. Preparer 350 ml fortynnet vaskeløsning for en plate på 12 striper hvis du vasker manuelt. R3, R4a, R4b, R4c, R4d: Fortynn 1/21 i fortynningsmiddel (R7) (eksempel: 300 µl på R µl av kalibrator). R6+R7: Konjugat (R6) er konsentrert 51x og må homogeniseres før bruk. Fortynn 1/51 i fortynningsmiddel (R7). For én plate fortynnes 0,5 ml konjugat (R6) i 25 ml fortynningsmiddel (R7). Del disse volumene med 10 for å oppnå volumet du trenger til én stripe. 7.3 Lagring og validitet til åpnede og/eller rekonstituerte reagenser Utstyrssettet må lagres på +2 8 C. Når utstyrssettet er lagret på +2 8 C før det åpnes, kan hver komponent brukes til utløpsdatoen som står på det utvendige merket på utstyrssettet. R1: Etter at de har blitt åpnet, forblir stripene stabile i opptil 8 uker hvis de blir lagret på +2 8 C i den opprinnelige posen, tett lukket (sjekk om det er tørkemidler der). R2: Etter at den er fortynnet, kan vaskeløsningen oppbevares i 2 uker på C. Etter at den er åpnet, er den konsentrerte vaskeløsningen, lagret på C, stabil til utløpsdatoen som står på merket, forutsatt at den ikke er kontaminert R3, R4a, R4b, R4c, R4d, R6, R7: Etter at de er åpnet, og forutsatt at de ikke er kontaminert, er reagensene lagret på +2 8 C, stabile i opptil 8 uker. R6+R7: Etter at den er fortynnet, er konjugatets løsning stabil i opptil 8 timer ved romtemperatur (+18 30ºC) eller 24 timer på +2 8ºC. R9: Etter at den er åpnet, og forutsatt at den ikke er kontaminert, er reagensen som er lagret på +2 8 C, stabil i opptil 8 uker. R10: Etter at den er åpnet, og forutsatt at den ikke er kontaminert, er reagensen som er lagret på +2 8 ºC, stabil til utløpsdatoen som står på merket. 4

5 7.4 Prosedyre Følg analyseprosedyren og regler for god laboratoriepraksis nøye. La reagensene nå romtemperatur ( ºC) før bruk. Bruken av ødeleggbare brønner krever spesiell oppmerksomhet under håndtering. Bruk alle kalibratorer i hver prosess for å bekrefte analyseresultatene. 1. Fastlegg distribueringen og identifiseringsplanen for kalibratorer og pasientprøver nøye. 2. Preparer den fortynnede vaskeløsningen (R2) [Se seksjon 7.2]. 3. Ta brettet og stripene (R1) ut av den beskyttende posen [Se seksjon 7.2]. 4. I individuelt identifiserte rør fortynner du kalibratorene R3, R4a, R4b, R4c og R4d og pasientprøvene (S1, S2 ) i fortynningsmiddel (R7) for å gi en løsning på 1/21: 300 µl av fortynningsmiddel (R7) og 15 µl av prøver [Se kapittel 7.2] Vortex-fortynnede prøver. 5. Følg nøye den anviste sekvensen nedenfor, og distribuer i hver brønn med 200 µl fortynnede kalibratorer og pasientprøver: A R3 S4 S12 B R4a S5 C R4b S6 D R4c S7 E R4d S8 F S1 S9 G S2 S10 H S3 S11 6. Dekk mikroplaten med en klebende platetetning, trykk den deretter hardt på platen for å sikre en god tetning. Inkuber mikroplaten umiddelbart i et termostatkontrollert vannbad eller i en tørr inkubator i 1 time 5 minutter ved 37 C 1 C. 7. Før slutten på den første inkubasjonsperioden prepareres konjugatets arbeidsløsning (R6+R7) [Se kapittel 7.2]. 8. På slutten av den første inkubasjonsperioden fjernes den klebende platetetningen. Aspirer innholdet i alle brønnene til en beholder for farlig biologisk materiale (inneholder natriumhypoklorid). Vask mikroplaten 4 ganger med 350 µl av vaskeløsningen (R2). Vend mikroplaten, og slå forsiktig på det adsorberende papiret for å fjerne gjenværende væske. 9. Distribuer umiddelbart 200 µl konjugatets arbeidsløsning (R6+R7) i alle brønner. Løsningen må ristes forsiktig før bruk. 10. Dekk mikroplaten med en klebende platetetning, og trykk den deretter hardt på platen for å sikre en god tetning. Inkuber mikroplaten umiddelbart i et termostatkontrollert vannbad eller i en tørr inkubator i 1 time 5 minutter på 37 C 1 C. 11. På slutten av den andre inkubasjonsperioden fjernes den klebende platetetningen. Aspirer innholdet i alle brønnene til en konteiner for farlig biologisk materiale (inneholder natriumhypoklorid). Vask mikroplaten 4 ganger med 350 µl av vaskeløsningen (R2). Vend mikroplaten, og slå forsiktig på det adsorberende papiret for å fjerne gjenværende væske. 12. Fordel raskt 200 µl kromogenløsning (R9) i hver brønn, vekk fra lyset. La reaksjonen utvikle seg i mørket i 30 ± 5 minutter på romtemperatur ( C). Ikke bruk klebende platetetning i denne inkubasjonen. 13. Stopp enzymreaksjonen ved å legge til 100 µl stoppeløsning (R10) i hver brønn. Bruk samme sekvens og distribusjonsrate som for utviklingsløsningen. 14. Tørk forsiktig av platebunnen. Les av den optiske tettheten på 450/620 nm ved hjelp av en plateavleser innen 30 minutter etter at du stopper reaksjonen. Stripene må alltid holdes vekk fra lyset før avlesningen. 15. Før du rapporterer resultatene, sjekker du om det er samsvar mellom avlesningen og distribusjonsplanen til platen og prøvene. 5

6 8 FORTOLKNING AV RESULTATER 8.1 Etablering av standardkurven Det finnes ingen internasjonal standardpreparering tilgjengelig for måling av anti-cmv IgG-antistoffer. Platelia CMV IgG-analysen er standardisert iht. den foreslåtte internasjonale standardprepareringen WHO Tilstedeværelse og konsentrasjon av IgG-antistoffer mot CMV i en prøve vil bli bestemt ved sammenligning mellom optisk tetthet (OD) for denne prøven med konsentrasjonen i tilfeldige prøver per milimeter (AU/ml) av kalibratorene i standardkurven. Tegn standardkurven [OD = funksjon (AU/ml] ved å plotte OD-avlesningene av kalibratorer R3, R4a, R4b, R4c og R4d på den vertikale (Y)-aksen, deretter ved å plotte deres respektive konsentrasjon i AU/ml på den horisontale (X)-aksen. For hver testet prøve beregnes anti-cmv IgG-antistofftitrervæske ved å bestemme den korresponderende konsentrasjonen med den målte OD fra den foretrukne standardkurven. 8.2 Kvalitetskontroll Inkluder alle kalibratorer for hver mikroplate og for hver prosess, og analyser de oppnådde resultatene. For bekreftelse av analysen må følgende kriterier møtes: Optiske tetthetsverdier: OD R4a 0,150 OD R4b 0,300 OD R4d > OD R4c Optiske tetthetsrater: OD R4a / OD R3 3,50 OD R4b / OD R4a 1,50 OD R4c / OD R4b 1,50 Om disse kvalitetskontrollkriteriene ikke etterkommes, må testens forløp repeteres. 8.3 Fortolkning av resultatene Anti-CMV antistofftitrervæske(tilfeldige enheter/ml) Resultat Fortolkning Titrervæske < 0,25 UA/ml Negativt Et negativt eller uvisst resultat tyder på fravær av oppnådd immunitet, men kan ikke utelukke en nylig infeksjon. Hvis man mistenker en nylig infeksjon av pasienten, skal man skaffe en ny prøve omkring to 0,25 UA/ml Titrervæske < 0,5 UA/ml Uvisst uker senere. Titrervæske 0,5 UA/ml Positivt Et positivt resultat tyder vanligvis på en tidligere infeksjon. Men en nylig infeksjon kan ikke utelukkes, særlig om anti-cmv IgM-antistoffer er til stede. Hvis det er mistanke om en nylig infeksjon, kan andre serologiske tester som å måle IgG-antistoffenes reaksjonsvillighet, være nyttig for å bekrefte diagnosen. En større variasjon av titreringsvæske kan observeres over konsentrasjoner på 4 AU/ml. Prøver som gir konsentrasjoner over den høyere kalibratoren på standardkurven, kan fortynnes i fortynningsmiddel R7 for å oppnå et resultat innenfor analysens lineære rekkevidde. I en slik situasjon blir den endelige konsentrasjonen oppnådd ved å multiplisere det målte resultatet med fortynningsraten. 8.4 Feilsøkingsguide Ikke godkjente eller reaksjoner som ikke kan gjentas, blir ofte forårsaket av: Utilstrekkelig mikroplatevasking Kontaminering av negative prøver av serum eller plasma med mye antistofftitreringsvæske. Kontaminering av utviklingsløsningen av kjemiske oksideringsmidler (blekmidler, metallioner ). Kontaminering av stoppløsningen. 6

7 9 YTELSE Ytelsen til Platelia CMV IgG ble vurdert på 2 steder ved hjelp av totalt 1096 prøver fra gravide kvinner og bloddonorer. 9.1 Alminnelig forekomst Alminnelig forekomst av anti-cmv IgG-antistoffer ved hjelp av Platelia CMV IgG ble anslått for et panel av prøver fra gravide kvinner fra Paris-området (Frankrike). 145 prøver var positive for anti-cmv IgG-antistoffer. Alminnelig forekomst målt med Platelia CMV IgG er fastslått til 48,3% (145/300). 9.2 Spesifikkhet Relativ spesifikkhet ble anslått ved hjelp av et panel på 490 prøver fra 2 steder i Frankrike, med følgende fordeling: 61 sera fra bloddonorer 429 sera fra gravide kvinner Resultater ble sammenlignet med dem som ble oppnådd ved hjelp av en kommersialisert EIA-analyse som ble betraktet som referanse. Sted 1 Sted 2 Testet befolkning / sted Gravide kvinner Antall sera Negativt Uvisst Positivt Spesifikkhet Bloddonorer Gravide kvinner Totalt [IC 95 %] = 95 % sikkerhetsintervall 100,0% (81/81) [96,3 %-100,0 %] 100,0% (61/61) [95,2 %-100,0 %] 100,0% (348/348) [99,1 %-100,0 %] 100,0% (490/490) [99,4 %-100,0 %] 9.3 Sensitivitet Relativ sensitivitet ble anslått ved hjelp av et panel på 606 prøver fra 2 steder i Frankrike, med følgende fordeling: 136 sera fra bloddonorer 470 sera fra gravide kvinner Resultater ble sammenlignet med dem som ble oppnådd ved hjelp av en kommersialisert EIA-analyse som ble betraktet som referanse. Sted 1 Sted 2 Testet befolkning / sted Gravide kvinner Antall sera Negativt Uvisst* Positivt Sensitivitet Bloddonorer Gravide kvinner Totalt * Usikre resultater ble betraktet som negative for beregning av sensitivitet. [IC 95%] = 95 % sikkerhetsintervall 98,4 % (121/123) [94,2 %-99,8 %] 97,1 % (132/136) [92,6 %-99,2 %] 98,8 % (343/347) [97,1 %-99,7 %] 98,4 % (596/606) [97,0 %-99,2 %] 9.4 Kryssreaktivitet Et panel på 103 prøver inkludert 77 positive prøver for toksoplasmose, rubella, EBV, HSV, VZV, kusma, meslinger og HIV og 26 positive prøver for reumatoid faktor, autoantistoffer og heterofile antistoffer ble testet med Platelia CMV IgG, og en kommersialisert EIA-analyse for screening av anti-cmv IgG-antistoffer. Blant disse prøvene ble 37 funnet negative og i samsvar med EIA-utsyrssettet som ble brukt til sammenligning, noe som bekreftet fraværet av potensielle kryssreaksjoner. 7

8 9.5 Presisjon Presisjon i prosess (gjentakbarhet): For å vurdere gjentakbarhet innenfor analyse ble én negativ og tre positive prøver testet 30 ganger i samme prosess. Konsentrasjonen (AU/ml) ble bestemt for hvert positiv prøve. Resultatet for den negative prøven blir uttrykt i rate. Gjennomsnitt av konsentrasjon og rate, standardavvik (SD) og variasjonskoeffisient (% CV) for hver av de fire eksemplarene er oppgitt i tabellen nedenfor: Presisjon i prosess (gjentakbarhet): N=30 Negativ prøve Lav positiv prøve Positiv prøve Høy positiv prøve Rate OD Prø. / OD R4a) Konsentrasjon (AU/ml) Gjennomsnittlig 0,11 1,87 3,53 4,78 SD 0,01 0,10 0,18 0,30 % CV 6.6 % 5,1 % 5,1 % 6,3 % Presisjon mellom prosesser (reproduserbarhet): For å evaluere reproduserbarheten mellom analyser ble de fire testene (én negativ og tre postitve) testet i duplikat i to prosesser per dag i en 20-dagers periode. Konsentrasjonen (AU/ml) ble bestemt for hver positiv prøve. Resultatet for den negative prøven blir uttrykt i rate. Gjennomsnitt av konsentrasjon og rate, standardavvik (SD) og variasjonskoeffisient (% CV) for hver av de fire eksemplarene er oppgitt i tabellen nedenfor: Presisjon mellom prosesser (reproduserbarhet): N=80N=80 Negativ prøve Lav positiv prøve Positiv prøve Høy positiv prøve Rate OD Prø. / OD R4a) Konsentrasjon (AU/ml) Gjennomsnittlig 0,10 1,44 3,10 4,22 SD 0,02 0,19 0,40 0,76 % CV 16,0 % 13,4 % 13,0 % 18,0 % 9.6 Linearitet Analysens linearitetsområde for Platelia CMV IgG ble definert mellom 0 og 4 AU/ml etter at man hadde utført fortynningsstudier på 5 positive prøver. 10 BEGRENSNINGER I PROSEDYREN Diagnose av CMV-infeksjon kan bare fastslås på basis av en kombinasjon av kliniske og biologiske data. Resultatet av en enkelt titreringstest av anti-cmv IgG-antistoffer utgjør ikke tilstrekkelig bevis for diagnose av en nylig infeksjon av cytomegalovirus. 11 PRODUSENTENS KVALITETSKONTROLL Alle produserte reagenser blir preparert iht. vårt kvalitetssystem, fra mottak av råmateriale til kommersialisering av det ferdige produktet. Hver batch blir underlagt kvalitetskontrollvurderinger og blir bare videreført til markedet når det foreligger samsvar med forhåndsdefinerte godkjenningskriterier. Informasjon relatert til produksjon og kontroll av hver enkelt batch oppbevares hos Bio-Rad. 12 REFERANSER 1. Alford C.A., Stagno S., Pass R.F., Britt W.J Congenital and perinatal cytomegalovirus infection. Rev. Infect. Dis. 12: S745-S Demmler G.J Summary of a workshop on surveillance for congenital cytomegalovirus disease. Rev. Infect. Dis. 13: Fowler K.B., Stagno S., Pass R.F., Britt W.J., Boll T.J., Alford C.A The outcome of congenital and cytomegalovirus in relation to maternal antibody status. N. Engl. J. Med. 326:

9 4. Gaytant M.A., Rours I.G., Steegers E.A., Galama J.M., Semmekrot B.A Congenital cytomegalovirus infection after recurrent infection: case reports and review of the literature. Europ. J. Pediatr. 162: Grangeot-Keros L., Mayaux M.J., Lebon P., and al Value of cytomegalovirus (CMV) IgG avidity index for the diagnosis of primary CMV infection in pregnant women. J. Infect. Dis. 175: Lazzarotto T., Guerra B., Spezzacatena P., Varani S., Gabrielli L., Pradelli P., Rumpianesi F., Banzi C., Bovicelli L., Landini M.P Prenatal diagnosis of congenital cytomegalovirus infection. J. Clin. Microbiol. 36: Macé M., Sissoef L., Rudent A., Grangeot-Keros L A serological testing algorithm for the diagnosis of primary CMV infection in pregnant women. Prenat. Diagn. 28: Munro S.C., Hall B., Whybin L.R., Leader L., Robertson P., Maine G.T., Rawlinson W.D Diagnosis of and screening for cytomegalovirus infection in pregnant women. J. Clin. Microbiol. 43: Revello M.L., Gerna G Diagnosis and management of human cytomegalovirus infection in the mother, fetus and newborn infant. Clin. Microbiol. Rev. 15: Stagno S., Pass R.F., Dworsky M.E., and al Congenital cytomegalovirus infection: the relative importance of primary and recurrent maternal infections. N. Engl. J. Med. 306:

10 10

11 Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincare Marnes-la-Coquette - France Tel. : +33 (0) /11 Fax : +33 (0)