Platelia Rubella IgM 1 Plakk KVALITATIV BESTEMMELSE AV IgM-ANTISTOFFER MOT RUBELLAVIRUS I HUMANT SERUM ELLER PLASMA VED ENZYMIMMUNANALYSE

Transkript

1 Platelia Rubella IgM 1 Plakk KVALITATIV BESTEMMELSE AV IgM-ANTISTOFFER MOT RUBELLAVIRUS I HUMANT SERUM ELLER PLASMA VED ENZYMIMMUNANALYSE /11 1. TILTENKT BRUK Platelia Rubella IgG er en immunanalyse som bruker immunfangende format for kvalitativ registrering av IgM-antistoffer mot rubellavirus i humant serum eller plasma. 2. KLINISK VERDI Rubella, vanligvis kalt røde hunder, er en virussykdom som er utbredt over hele verden. Rubellainfeksjon er hovedsakelig en mild sykdom hos barn og voksne. Kliniske manifestasjoner omfatter lav feber, hodepine, sår hals og et generelt hudutslett. Men en rubellainfeksjon ved graviditet er mer alvorlig med veldokumenterte multiple medfødte komplikasjoner, inkludert døvhet, katarakter, psykisk utviklingshemming og fosterets død. Agressiv immunisering av barn i førskolealderen har i stor grad redusert forekomsten av rubellaepidemier, men det fins fremdeles et behov for nøyaktig overvåkning av immunstatus, særlig for kvinner i fruktbar alder. Påvisning av Rubella IgG-antistoff hos kvinner før unnfangelsen gir visshet om beskyttelse av fosteret mot mulig rubellainfeksjon under graviditet. Vaksineringens effektivitet kan også bestemmes ved å oppdage Rubella-IgG-antistoff i serum etter immunisering. Siden immunisering av rubellaviruset i 1982, har oppdagelsen av spesifikke rubellaantistoffer blitt av stor interesse på grunn av teratogenisk risiko for viruset. Flere testmetoder har blitt utviklet i fortiden inkludert serumnøytralisering, komplementbinding og immunfluorescens. Disse analysene er enten vanskelige å utføre i et vanlig laboratorium, eller gir ustabile eller uregelmessige resultater. Hemagglutinasjonshindrende teknikker muliggjør rask diagnose av både den akutt infiserte tilstanden og pasientens immunstatus. Engvall og Perlmann beskriver de første immunanalyseprosedyrene i Utviklingen av immunanalyseprosedyren har bidratt til forbedret spesifikkhet og sensitivitet når det gjelder å oppdage mange forskjellige antigener og antistoffer. Fortolkninger av påfølgende serologiske tester som viser tilstedeværelsen av IgM, tilsynekomst av eller en betydelig økning i IgG-antistoffets titrervæske (fordobling av titrervæsken) i to serumr anskaffet med et minumsintervall på tre uker skal betraktes som bevis på avdekking av rubellavirus selv om det ikke finnes kliniske patognomoniske tegn på denne sykdommen. 3. PRINSIPP Platelia Rubella IgM er en kvalitativ test for oppdagelse av IgM-antistoffer mot rubellavirus i humant serum eller plasma av enzymimmunanalyse med oppfanging av IgM i fast form. Anti-humane µ-kjede-antistoffer er dekket i fast form (brønner av mikroplaten). En blanding av rubellaantigen og monoklonale anti-rubella-antigen-antistoff merket med peroksidase, blir brukt som konjugat. Testen omfatter følgende: Trinn 1 Pasientr, kalibratorer og kontrollr blir fortynnet 1/21 og deretter fordelt i brønnene til mikroplaten. Under denne inkubasjonen på én time ved 37 ºC bindes IgM-antistoffene i n til anti-µ-antistoffer som dekker mikroplatebrønnene. Etter inkubasjonen blir IgG og andre serumproteiner fjernet ved vasking. Trinn 2 Konjugatet (blanding av rubella-antigen og anti-rubella monoklonalt antistoff merket med peroksidase) blir lagt til mikroplatebrønnene. Under denne inkubasjonen på én time ved 37 C bindes konjugatet til de spesifikke IgM-anti-rubella-antistoffene som til slutt ble oppfanget på mikroplaten. Det ubundne konjugatet blir fjernet ved skylling på slutten av inkubasjonen.

2 Trinn 3 Tilstedeværelsen av immunkomplekser (anti-humane µ-kjeder / IgM anti-rubella / rubella-antigen / antirubella monoklonalt antistoff merket med peroksidase) blir vist ved å legge til en enzymatisk utviklingsløsning i hver brønn. Trinn 4 Etter inkubasjonen på romtemperatur ( C) blir den enzymatiske reaksjonen stoppet ved å legge til 1N svovelsyreløsning. Den optiske tetthetsavlesningen i et spektrofotometer stilt til 450/620 nm er proporsjonal med mengden IgM-antistoffer mot rubella i n. 4. PRODUKTINFORMASJON Reagensmengden skal rekke til 96 tester. Alle reagenser er kun for in vitro diagnostisk bruk. Merke Reagenstype Presentasjon R1 Mikroplate Mikroplate (Klar til å brukes): 12 striper med 8 ødeleggbare brønner dekket med anti-humane µ-kjeder R2 Konsentrert vaskeløsning (20x) Konsentrert vaskeløsning (20x): TRIS-NaCl-buffer (ph 7,4), 2 % Tween 20 Konserveringsmiddel: 0,04 % ProClin 300 R3 Negativ kontroll Negativ kontroll: Negativt humant serum for IgG-antistoffer mot CMV og negativt for HBs antigen, anti-hi1, anti-hiv2 og anti-hcv Konserveringsmiddel: 0,1 % ProClin 300 R4 Kalibrator Kalibrator: Humant serum reaktivt for IgM-antistoffer mot rubella og negativt for HBs antigen, anti-hiv1, anti- HIV2 og anti-hcv Konserveringsmiddel: 0,1 % ProClin 300 R5 Positiv kontroll Positiv kontroll: Humant serum reaktivt for IgM-antistoffer mot rubella og negativt for HBs antigen, anti-hiv1, anti- HIV2 og anti-hcv Konserveringsmiddel: 0,1 % ProClin 300 R6a Antigen Rubella-antigen: Lypfilisert rubella-antigen R6b Konjugat (101x) Konserveringsmiddel: 0,36 % ProClin 300 Konjugat (101x): Murint monoklonalt antistoff anti-rubella merket med peroksidase Konserveringsmiddel: 0,16 % ProClin 300 R7 Fortynningsmiddel Fortynningsmiddel for r og konjugat (klar til å brukes): TRIS-NaCl-buffer (ph 7,6), serum fra hornkveg, albumin, 0,1 %, Tween 20 og fenol rød. Konserveringsmiddel: 0,15 % ProClin 300 R9 Kromogen TMB Kromogen (klar til å brukes): 3,3 5,5 tetrametylbenzidin (< 0.1 %), H2O2 (<1 %) R10 Stoppløsning Stoppløsning (klar til å brukes) 1N svovelsyreløsning 1 1 x 70 ml 1 x 0,75 ml 1 x 0,75 ml 1 x 0,75 ml 4 x q.s. 8,0 ml 1 x 0,4 ml 1 x 80 ml 1 x 28 ml 1 x 28 ml For lagringsforhold og utløpsdato, vennligst se tekst på boksen.

3 5. ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER Påliteligheten av resultatene avhenger av korrekt gjennomføring av følgende laboratoriepraksiser: Ikke bruk reagenser som er utgått på dato. Ikke bland eller forbind reagenser fra forskjellige batcher innenfor en gitt prosess. BEMERKNING: For vaskeløsning (R2, merkeidentifikasjon: 20x farget grønn), kromogen (R9, merkeidentifikasjon: TMB farget turkis) og stoppeløsning (R10, merke, merkeidentifikasjon: 1N farget rød) er det mulig å bruke andre batcher enn de som er i utstyrssettet, forutsatt at disse reagensene er ekvivalente og at samme batch blir brukt i en gitt testprosess. BEMERKNING: I tillegg kan vaskeløsningen (R2, merkeidentifikasjon: 20x farget grønn) blandes med de 2 andre vaskeløsningene inkludert i forskjellige Bio-Rad reagenssett (R2, merkeidentifikasjoner: 10x farget blå eller 10x farget oransje) når rekonstituert, forutsatt at bare én blanding blir brukt innenfor en gitt testprosess. Vent i 30 minutter for å la reagensene nå romtemperatur ( C) før bruk Rekonstituer eller tynn forsiktig ut reagensene for å unngå all kontaminering. Ikke utfør testen i nærheten av reaktiv damp (syre, alkalin, aldehyddamper) eller støv som kan endre enzymaktiviteten i konjugatet. Bruk glass som er grundig vasket og skylt med deionisert vann, eller fortrinnsvis deponerbart materiale. Å vaske mikroplaten er et kritisk trinn i prosedyren. Følg det anbefalte antallet vaskesykluser og sikre at alle brønner er helt fylt og deretter fullstendig tømt. Feil vasking kan føre til unøyaktige resultater. Ikke la mikroplaten tørke mellom slutten av vaskingen og reagensdistribusjonen. Bruk aldri samme konteiner for å fordele konjugatet og utviklingsløsningen. Enzymreaksjonen er veldig sensitiv for metaller eller metallioner. Følgelig må du ikke la metall komme i kontakt med de forskjellige løsningene som inneholder konjugatet eller kromogenet. Kromogenløsning (R9) skal være fargeløs. Tilsynekomsten av fargen blå indikerer at reagensen ikke kan brukes og må erstattes. Bruk en ny pipettspiss for hver. Sjekk at pipettene og annet utstyr er nøyaktige og fungerer korrekt. Helse- og sikkerhetsinstruksjoner Materiale fra mennesker som blir brukt til å preparere reagenser, har blir testet og funnet ikke-reaktivt for hepatitt B overflateantigen (HBs Ag), antistoffer for hepatitt C-virus (anti-hcv) og for humant immunsviktvirus (anti-hiv1 og anti-hiv2). Fordi ingen metode absolutt kan garantere fraværet av infeksjonsbærende midler, må reagenser med human opprinnelse behandles som om de kan overføre smittsomme sykdommer: Ethvert materiale, inkludert vaskeløsninger, som kommer i direkte kontakt med r og reagenser som inneholder materiale av human opprinnelse, bør betraktes som i stand til å overføre smittsomme sykdommer. Bruk deponerbare hansker når du behandler r og reagenser. Ikke bruk munnen som pipette. Unngå å søle r eller løsninger som inneholder r. Sølt materiale må vaskes vekk med blekemiddel fortynnet til 10 %. Hvis det søles syre, må den først nøytraliseres med natriumbikarbonat, og deretter må det rengjøres med et blekemiddel fortynnet til 10 % og tørkes opp med adsorberende papir. Materialet som blir brukt til rengjøringen, må kastes i en beholder for spesialavfall. Pasientr, reagenser som inneholder materiale fra mennesker, samt kontaminert materiale og produkter, skal bare kastes etter dekontaminering: - enten ved å legge dem i blekemiddel på den endelige konsentrasjonen på 5 % natriumhypoklorid i 30 minutter, - eller ved å autoklavere på 121 C i minst 2 timer. FORSIKTIG: Ikke før løsninger som inneholder natriumhypoklorid, inn i autoklaven Unngå enhver kontakt med reagenser, inkludert de som ikke blir betraktet som farlige, med hud og slimhinner. Kjemiske og biologiske rester må håndteres og deponeres i henhold til regler for god laboratoriepraksis. Alle reagenser i utstyrssettet er kun for in vitro diagnostisk bruk. Når det gjelder fare- og forsiktighetsanbefalinger i forhold til enkelte kjemiske komponenter i dette testsettet, kan du se piktogrammet(-ene) nevnt på etikettene og informasjonen angitt på slutten av bruksanvisningen. Sikkerhetsdatabladet er tilgjengelig på

4 6. PRØVER 1. Serum og plasma (EDTA, heparin og sitrat) er de anbefalte typene. 2. Følg disse anbefalingene for håndtering, bearbeiding og lagring av blodr: Samle alle blodr mens du følger rutinemessige forsiktighetsregler for venepunktur. For serum må du la ne levre seg helt før sentrifugering. Hold rørene godt lukket hele tiden. Etter sentrifugering separeres serumet eller plasmaen fra det levrede blodet eller de røde cellene i et tett lukket lagringsrør. Prøvene kan lagres på +2 8 C hvis testen blir utført innen 7 dager. Hvis testen ikke blir fullført innen 7 dager, eller ved forsendelse, må ne fryses på -20 C eller kaldere. Ikke bruk ne som har blir tint opp mer enn 5 ganger. Tidligere frosne r skal blandes grundig (vortex) etter opptining før testing. 3. Prøver som inneholder 90 g/l albumin eller 100 mg/l ukonjugert bilirubin, lipemiske r som inneholder tilsvarende 36 g/l av triolein (triglyserid), og hemoglyserte tester som inneholder opp til 10 g/l med hemoglobin, påvirker ikke resultatene. 4. Ikke varm opp ne. 7. ANALYSEPROSEDYRE 7.1 Påkrevde materialer som ikke følger med Vortexmikser. Mikroplateavleser utstyrt med 450 nm- og 620 nm-filtre (*). Mikroplateinkubator termostatisk innstilt på 37±1 C (*). Automatisk, semiautomatisk eller manuell mikroplatevasker (*). Sterilt, destillert eller deionisert vann. Deponerbare hansker. Vernebriller. Adsorberende papir. Automatiske eller semiautomatiske, justerbare eller forhåndsinnstilte pipetter eller multipipetter for å måle og fordele 10 µl til 1000 µl og 1ml, 2 ml og 10 ml. Graderte sylindere på 25 ml, 50 ml, 100 ml og 1000 ml kapasitet. Natriumhypoklorid (blekemiddel) og natriumbikarbonat. Beholder for farlig biologisk avfall. Deponerbare rør. (*) Konsulter vår tekniske avdeling for detaljert informasjon om anbefalt utstyr. 7.2 Rekonstitusjon av reagensene R1: La stå i 30 minutter i romtemperatur ( C) før du åpner posen. Ta ut brettet, legg umiddelbart ubrukte striper tilbake i posen, og sjekk om det er tørkemidler der. Tett posen forsiktig, og lagre den på +2 8 C. R2: Fortynn vaskeløsningen R2 til 1/20 i destillert vann: for eksempel 50 ml R2 og 950 ml destillert vann for å få en vaskeløsning som er klar til å brukes. Preparer 350 ml fortynnet vaskeløsning for en plate på 12 striper hvis du vasker manuelt. R3, R4, R5: Fortynn 1/21 i fortynningsmiddel (R7) (eksempel: 300 µl av R µl av kalibrator eller kontroll). R6a: Rubella-antigen lyofiliseres. For å bruke 3 striper rekonstituerer du en flaske lyofilisert antigen ved å legge til 8 ml fortynningsmiddel (R7). Bland grundig. Etter at den har blitt fortynnet, må antigenløsningen (R6a+R7) være helt klar. R6 (R6a+R6b) konjugatarbeidsløsning: Legg til 80 µl konjugat (R6b) til hver flaske rekonstituert rubella-antigen (fortynnet R6a). Bland grundig. Konjugatarbeidsløsningen må rekonstitueres minst 1 time før bruk.

5 7.3 Lagring og validitet for åpnede og/eller rekonstituerte reagenser Utstyrssettet må lagres på +2 8 C. Når utstyrssettet er lagret på +2 8 C før det åpnes, kan hver komponent brukes til utløpsdatoen som står på det utvendige merket på utstyrssettet. R1: Etter at de har blitt åpnet, forblir stripene stabile i opptil 8 uker hvis de blir lagret på +2 8 C i den opprinnelige posen, godt lukket (sjekk om det er tørkemidler der). R2: Etter at den har blitt fortynnet, kan vaskeløsningen oppbevares i 2 uker på C. Etter at den har blitt åpnet, er den konsentrerte vaskeløsningen som er lagret på C, stabil til utløpsdatoen som står på merket. R3, R4, R5, R6b, R7: Etter at de er åpnet, og forutsatt at de ikke er kontaminert, er reagensene som er lagret på +2 8 C, stabile i opptil 8 uker. R6 (R6a+R6b): Etter at den er fortynnet, er konjugatets arbeidsløsning stabil i opptil 8 timer ved romtemperatur (+18 30ºC) eller 2 uker ved +2 8ºC. R9: Etter at den er åpnet, og forutsatt at den ikke er kontaminert, er reagensen som er lagret på +2 8 C, stabil i opptil 8 uker. R10: Etter at den er åpnet, og forutsatt at den ikke er kontaminert, er reagensen som er lagret på +2 8 ºC stabil inntil utløpsdatoen som står på merket. 7.4 Prosedyre Følg nøye analyseprosedyren og regler for god laboratoriepraksis. La reagenser nå romtemperatur ( ºC) før bruk. Bruken av ødeleggbare brønner krever spesiell oppmerksomhet under håndtering. Bruk alle kalibratorer i hver prosess for å bekrefte analyseresultatene. 1. Fastlegg nøye distribueringen og identifiseringsplanen for kalibratorer, kontrollr og pasientr. 2. Preparer den fortynnede vaskeløsningen (R2) [Se kapittel 7.2]. 3. Ta brettet og stripene (R1) ut av den beskyttende posen [Se kapittel 7.2]. 4. Preparer konjugatarbeidsløsningen R6 [Se kapittel 7.2]. 5. I individuelt identifiserte rør fortynner du kalibratorene og kontrollene (R3, R4, R5) og pasientne (S1, S2 ) i fortynningsmiddel (R7) for å gi en løsning på 1/21: 300 µl fortynningsmiddel (R7) og 15 µl. Vortex-fortynnede r. 6. Følg nøye den anviste sekvensen nedenfor, og fordel i hver brønn med 200 µl fortynnede kalibratorer, kontrollr og pasientr: A R3 S5 S13 B R4 S6 C R4 S7 D R5 S8 E S1 S9 F S2 S10 G S3 S11 H S4 S12 7. Dekk mikroplaten med en klebende platetetning, trykk den deretter hardt på platen for å sikre god tetning. Inkuber mikroplaten umiddelbart i et termostatkontrollert vannbad eller i en tørr inkubator i 1 time ± 5 minutter på 37 C ± 1 C. 8. På slutten av den første inkubasjonsperioden fjerne de den klebende platetetningen. Aspirer innholdet i alle brønnene til en beholder for farlig biologisk materiale (inneholder natriumhypoklorid). Vask mikroplaten 4 ganger med 350 µl av vaskeløsningen (R2). Vend mikroplaten, og slå forsiktig på det adsorberende papiret for å fjerne gjenværende væske. 9. Fordel umiddelbart 200 µl av konjugatets arbeidsløsning (R6) i alle brønner. Løsningen må ristes forsiktig før bruk. 10. Dekk mikroplaten med en klebende platetetning, trykk den deretter hardt på platen for å sikre en tetning. Inkuber mikroplaten umiddelbart i et termostatkontrollert vannbad eller i en tørr inkubator i 1 time ± 5 minutter på 37 C ± 1 C.

6 11. På slutten av den andre inkubasjonsperioden fjerner du den klebende platetetningen. Aspirer innholdet i alle brønnene til en beholder for farlig biologisk materiale (inneholder natriumhypoklorid). Vask mikroplaten 4 ganger med 350 µl av vaskeløsningen (R2). Vend mikroplaten, og slå forsiktig på det adsorberende papiret for å fjerne gjenværende væske. 12. Før raskt 200 µl kromogenløsning (R9) i hver brønn, vekk fra lyset. La reaksjonen utvikle seg i mørket i 30 ± 5 minutter på romtemperatur ( C). Ikke bruk klebende platetetning i denne inkubasjonen. 13. Stopp enzymreaksjonen ved å legge til 100 µl stoppeløsning (R10) i hver brønn. Bruk samme sekvens og distribusjonsrate som for utviklingsløsningen. 14. Tørk forsiktig av platebunnen. Les av den optiske tettheten på 450/620 nm ved hjelp av en plateavleser innen 30 minutter etter at du stopper reaksjonen. Stripene må alltid holdes vekk fra lyset før avlesningen. 15. Før du rapporterer resultatene, må du sjekke om det er samsvar mellom avlesningen og distribusjonsplanen til platen og ne. 8 FORTOLKNING AV RESULTATER 8.1 Beregning av avskjæringsverdien (CO) Avskjæringsverdien (CO) korresponderer til gjennomsnittsverdien av den optiske tettheten (OD) av avskjæringskontrollduplikatene (R4): CO = gjennomsnitt av OD R4 8.2 Beregning av raten Testresultat blir uttrykt ved rate ved hjelp av følgende formel: Prøverate = OD/CO 8.3 Kvalitetskontroll Inkluder kalibratoren og kontrollene for hver mikroplate og for hver prosess, og analyser de oppnådde resultatene. For bekreftelse av analysen må følgende kriterier møtes: Optiske tetthetsverdier: - CO ,80 x CO < OD R4 Repl. 1 < 1,20 x CO - 0,80 x CO < OD R4 Repl. 2 < 1,20 x CO (Individuell OD for hver kopi av avskjæringskontrollen (R4) må ikke avvike med mer enn 20 % av CO-verdien). Optiske tetthetsrater: - Rate R3 (OD R3 / CO) 0,30 - Rate R5 (OD R5 / CO) 1,50 Om disse kvalitetskontrollkriteriene ikke oppfylles, må testens forløp gjentas. 8.4 Fortolkning av resultatene Prøverate Resultat Fortolkning Rate < 0,80 Negativt 0,80 rate < 1,00 Uvisst Rate < 1,00 Positivt Prøven blir betraktet som ikke-reaktiv for tilstedeværelsen av IgM-antistoffer mot rubella. Prøven blir betraktet som uviss for tilstedeværelsen av IgM-antistoffer mot rubella. Resultatet må bekreftes av en annen test utført på en annen tatt minst 3 uker etter den første analysen. Prøven blir betraktet som uviss for tilstedeværelsen av IgM-antistoffer mot rubella.

7 8.5 Feilsøkingsguide Ikke godkjente reaksjoner eller reaksjoner som ikke kan gjentas, blir ofte forårsaket av: Utilstrekkelig mikroplatevasking Kontaminering av negative r av serum eller plasma med mye antistofftitrervæske. Kontaminering av utviklingsløsningen av kjemiske oksideringsmidler (blekemidler, metallioner ). Kontaminering av stoppløsningen. 9 YTELSE 9.1 Alminnelig forekomst Alminnelig forekomst av anti-rubella IgM-antistoffer ved bruk av Platelia Rubella IgM (72851) ble anslått på et panel av 347 r fra gravide kvinner. 2 r var positive for anti-rubella-igm-antistoffer. Alminnelig forekomst målt med Platelia Rubella IgM-analyse er fastslått til 0,6% (2/347). Ytelsen til Platelia Rubella IgM ble vurdert på 2 steder ved hjelp av totalt 809 r fra gravide kvinner og bloddonorer. På ett sted ble en komparativ studie utført ved hjelp av Platelia Rubella IgM TMB (72922). På et annet sted ble ytelsen av Platelia Rubella IgM evaluert mot en annen kommersielt tilgjengelig EIA-test. 9.2 Komparativ studie (sted 1) Ytelsen til Platelia Rubella IgM ble evaluert ved hjelp av et panel av 399 r gruppert som følger: 172 sera fra bloddonorer 151 sera fra gravide kvinner 76 sera fra kommersielt panel positivt for anti-rubella IgM Platelia Rubella IgM TMB (72922) Platelia Toxo IgM TMB (72851) Negativt Tvilsomt Positivt Totalt Negativt Tvilsomt Positivt Totalt Global enighet: 396/399 99,25 % [IC 95% = 97,82 % -99,84 %] Relativ spesifikkhet: 319/321 99,38 %* [IC 95% = 97,77 % -99,92 %] Relativ sensitivitet: 77/78 98,72 % [IC 95% = 93,06 % -99,97 %] * Tvilsom vurdert som positiv [IC 95 %] = 95 % sikkerhetsintervall I tillegg ble 60 sera fra 7 vaksinasjonsoppfølginger (utført med to slags vaksiner) evaluert med de to utstyrssettene: tilsynekomsten av IgM anti-rubella følger det samme skjemaet for de 2 utstyrssettene. 9.3 Ytelser (sted 2) Ytelsen til Platelia Rubella IgM ble evaluert ved hjelp av et panel av 350 r fra: 47 barn 15 år gamle eller yngre (27 jenter og 20 gutter) 299 voksne (298 kvinner som er gravide eller nettopp har født og 1 mann) 1 serum fra den franske nasjonale kvalitetskontroll-analysen Resultatene ble sammenlignet med de som ble oppnådd med en annen kommersielt tilgjengelig EIA-test brukt som referanse.

8 Annen EIA-test Platelia Toxo IgM TMB (72851) Negativt Tvilsomt Positivt Totalt Negativt Tvilsomt Positivt Totalt Relativ spesifikkhet: 344/345 99,71 %* [IC 95 % = 98,40 % -99,99 %] * Tvilsom vurdert som positiv [IC 95%] = 95 % sikkerhetsintervall Blant de 5 positive seraene: de 4 overensstemmende ne ble tatt fra den samme personen til forskjellige tider, det positivt avvikende serumet ble bekreftet positivt med en tredje kommersielt tilgjengelig EIA-test og korresponderer med en tatt 4 måneder etter vaksinasjonen. 9.4 Kryssreaktivitet Et panel på 212 r inkludert 164 positive r for CMV, Toksoplasmose, EBV, HSV, VZV, kusma, meslinger og HIV og 48 positive r for reumatoid faktor, autoantistoffer og heterofile antistoffer sammen med myelomr ble testet med Platelia Rubella IgM (72851) og Platelia Rubella IgM TMB (72922). Blant disse ne ble 1 CMV IgM- funnet positivt avvikende og 6 r fra reumatoid faktor ble funnet positive eller tvilsomme med begge metoder. Fire av disse 6 ne ble bekreftet negative med andre kommersielt tilgjengelige EIA-tester. 9.5 Presisjon Presisjon i prosess (gjentakbarhet): For å sammenligne gjentakbarheten innenfor analysen ble én negativ og tre positive r testet 30 ganger i samme prosess. Raten ( OD / CO) ble bestemt for hver. Gjennomsnittlig rate, standardavvik (SD) og variasjonskoeffisient (% CV) for hver er oppgitt i tabellen nedenfor: Presisjon i prosess (gjentakbarhet) Negativ Lav positiv Positiv Høy positiv N=30 Rate (Prøve OD/CO) Gjennomsnittlig 0,07 1,73 2,51 4,06 SD 0,002 0,03 0,06 0,11 % CV 2,7 % 1,8 % 2,5 % 2,7 % Presisjon mellom prosessene (reproduserbarhet): For å evaluere reproduserbarheten mellom prosessene ble de fire testene (én negativ og tre positive) testet i duplikat i to prosesser per dag i en 20-dagers periode. Raten ( OD / CO) ble bestemt for hver. Gjennomsnittlig rate, standardavvik (SD) og variasjonskoeffisient (% CV) for hver er listet opp i tabellen under: Presisjon mellom prosesser (reproduserbarhet): Negativ Lav positiv Positiv Høy positiv N=80 Rate (Prøve OD/CO) Gjennomsnittlig 0,04 1,19 2,24 3,60 SD 0,005 0,03 0,06 0,10 % CV 12,7 % 2,8 % 2,6 % 2,8 %

9 10 BEGRENSNINGER I PROSEDYREN Diagnose for rubella-infeksjon kan bare fastslås på basis av en kombinasjon av kliniske og biologiske data. Resultatet av en enkelt titreringstest av anti-rubella-igm-antistoffer utgjør ikke noe tilstrekkelig bevis for diagnosen av en nylig infeksjon av rubellavirus. Diagnose for en nylig infeksjon kan bare gjøres med komplett pasientinformasjon inkludert kliniske og biologiske data (vesentlig økning av anti-rubella-igg-antistoffer på 2-pasientsera tatt med 3 ukers mellomrom og testet i samme prosess, tilstedeværelse av anti-rubella-igm på et vesentlig nivå, demonstrasjon av lav IgG-reaksjonsevne). Tilstedeværelse av anti-rubella-igm-antistoffer utgjør ikke noe tilstrekkelig bevis på en nylig infeksjon fordi IgM kan fortsette i flere måneder eller i flere år etter infeksjonen. Når IgM oppdages, må en kvantitativ fastsettelse av anti-rubella-igg-antistoffer utføres, samt en oppfølging av utviklingen av anti-rubella-antistoffer på minst ett serum til, tatt tre uker senere. Hvis en blir testet for tidlig under en nylig primoinfeksjon, kan det hende at anti-rubella-igmantistoffer ennå ikke er til stede. Hvis det foreligger mistanke, må en andre tas omkring 3 uker senere og IgM-testingen utføres på nytt. Prøver som er positive for rheumatoid faktor, kan gi feilaktige positive resultater. 11 PRODUSENTENS KVALITETSKONTROLL Alle produserte reagenser blir preparert iht. vårt kvalitetssystem, fra mottak av råmateriale til kommersialisering av det ferdige produktet. Hver batch blir underlagt kvalitetskontrollvurderinger og blir bare videreført til markedet når det foreligger samsvar med forhåndsdefinerte godkjenningskriterier. Informasjon relatert til produksjon og kontroll av hver enkelt batch blir oppbevart hos Bio-Rad. 12 REFERANSER 1. COOPER, L.Z., BUIMOVICI-KLEIN, E : Rubella. In Virology: Edited by Fields, B.N., et al. New York, New York: Raven Press. 2. DORSETT, P.H., MILLER, D.C., GREEN, K., BYRD, F : Structure and function of the Rubella virus proteins. Reviews of Infect. Dis., 7 (Suppl. 1): S 150-S FORSGREN, M : Standardization of techniques and reagents for the study of Rubella antibody. Rev. Infect. Dis., 7 (Suppl. 1): S 129-S KALKKINEN, N., OKER-BLOM, C., AND PETTERSSON, R.F : Three genes code for Rubella virus structural proteins El. E2a, E2b, and C. J. Gen. Virol, 65: LUCAS, G., et al. April 17-20, : Serological diagnosis of IgG immunoglobulins ant-rubella by immunoenzymatic assay in a commercially available kit. Nice: 4th European Congress of Clinical Microbiology. 308/PP MAURIN, J : Le virus de la rubéole. Bulletin de l Institut Pasteur 1969, 67, Virologie médicale, chap. 34, Flammarion Médecine Sciences. 7. NCCLS Document I/LA6-T Tentative Guideline December 1992 : Evaluation and Performance Criteria for Multiple Component Test and Product intended for the Detection and Quantitation of Rubella IgG Test Products. 8. PETTERSSON, R., et al : Molecular and antigenic characteristics and synthesis of Rubella virus structural proteins. Reviews of Infect. Dis., 7 (Suppl. 1): S 140-S WOLINSKY J.S. : Rubella. In Virology, 1990, 2nd Ed Edited by Fields, B.N., and al. New York: Raven Press, Ltd.

10

11

12 Bio-Rad Bio-Rad 3, boulevard Raymond Poincare , boulevard Raymond Poincaré Marnes-la-Coquette - France Marnes-la-Coquette France Tel. Tel. : +33 : +33 (0) 1 (0) /11 Fax Fax : +33 :(0) (0) /