Erfaringer med diagnostikk av kusmavirus i Trondheim

Transkript

1 Erfaringer med diagnostikk av kusmavirus i Trondheim Svein Arne Nordbø Årskonferansen FHI 3. desember 2015

2 Kusma (parotitt) Dråpesmitte/kontaktsmitte Inkubasjonstid 2-3 uker (18 dager) Smittsom 1uke før til og med 7-9 dager etter symptomdebut Rammer spyttkjertlene, men kan også infisere pancreas, testikler, ovarier og CNS Parotittvirus (paramyxovirus) 1 serotype 12 genotyper

3 Diagnostikk anbefalt av CDC Serology (serum) samples The first (acute-phase) serum sample should be collected as soon as possible upon suspicion of mumps disease. Convalescent-phase serum samples should be collected about 2 3 weeks after the acute-phase sample. Persons with a history of mumps vaccination may not have detectable mumps IgM antibody regardless of the timing of specimen collection. Paired serum samples from vaccinated persons, even if appropriately timed, may not show a rise in IgG titer.

4 Hvor pålitelige er de kommersielle parotitt-testene?

5 Evaluering av 6 kommersielle EIA tester for påvisning av IgG- og IgM- antistoffer mot parotittvirus (kusma) Torunn K. Sørensen og Kjersti Hundvin Bacheloroppgave 2010

6 Materiale og Metode ELISA testsystem: Det ble utprøvd kits fra 6 forskjellige produsenter Antistoffpåvisningen med hensyn på IgG og IgM mot parotittvirus Sera fra pasienter med CMV, EBV, enterovirus, parainfluensa, influensa, mistenkt parotitt, blodgivere og barn nylig MMR-vaksinert Følgende produsenter var med i sammenligningen: Virotech NovaTec Diagnostic Automation Inc. (DAI) VirionSerion LDN Siemens Enzygnost

7 Parotitt IgG resultater IgG DAI Virotech VirionSerion NovaLisa LDN Siemens Positiv Negativ Gråsone Sum

8 Parotitt IgM resultater IgM DAI Virotech VirionSerion NovaLisa LDN Siemens Positiv Negativ Gråsone Sum

9 Svært få som blir syk etter fullvaksinering (2 doser MMR) responderer med påvisbart IgM, men det er betydelig forskjell mellom ulike tester

10 Laboratory Confirmation by IgM Serology Ikke vaksinert: % IgM positiv 1 dose MMR: 50-80% IgM positiv 2 doser MMR: 13-15% IgM positiv

11 Rota et al. CVI 2013

12 Resultater ved St. Olavs Hospital Av 83 parotitt-pcr positive pasienter var kun 9 (11%) positive for IgM med Liaisons test! Et ukjent antall av disse pasientene var ikke eller var ufullstendig vaksinert.

13 Viruspåvisning 1. PCR (real-time) 2. Dyrkning (gullstandard)

14 Ved St. Olavs Hospital benyttes flocked swab i 2 ml UTM transportmedium med glasskuler

15 Diagnostikk anbefalt av CDC Oral or buccal swab samples Collect oral or buccal swab samples as soon as mumps disease is suspected. The buccal or oral swab specimens are obtained by massaging the parotid gland area for 30 seconds prior to swabbing the area around Stensen s duct. Flocked synthetic swabs are preferred over cotton swabs. Swabs should be placed in 2 ml of standard viral transport medium

16 Diagnostikk anbefalt av CDC Urine specimens Unlike buccal and oral specimens, urine samples may not be positive for mumps virus until >4 days after symptom onset. A minimum volume of 50 ml of urine should be collected in a sterile container and then processed by centrifuging at 2500 g for 15 minutes at 4 C. The sediment should be resuspended in 2 ml of VTM. The best method for preserving mumps virus in processed (centrifuged) urine is to freeze the sample at 70 C and ship on dry ice.

17 Dyrkning av parotittvirus i cellekultur Viruset kan dyrkes i flere ulike cellelinjer Apenyreceller er mye brukt (f.eks. Veroceller) Ved AMM, St. Olavs Hospital har vi hatt vekst i både LLC-MK2 celler og TMG-1 celler Cytopatogen effekt (CPE) er blitt registrert 2-9 dager etter utsæd CPE er meget karakteristisk for parotittvirus og kan vanskelig forveksles UTM-mediet fra Copan fungerer meget bra til dyrkning av parotittvirus

18 LLC-MK2 celler

19 TMG-1 celler

20 Diagnostiske erfaringer ved avdeling for medisinsk mikrobiologi, St. Olavs Hospital Neseprøver ga upålitelige resultater (for lav sensitivitet) 2 urinprøver (RNA-ekstraksjon fra 1 ml) fra kusmapasienter var negative 3 sera i akuttfasen til pasienter med diagnostisert kusma var PCR negativ Virus dyrkning var viktig i startfasen for å justere sensitiviteten til vår real-time PCR (noen prøver var kun dyrkning positive) Levende virus kunne påvises i halsprøve i opptil 9 døgn etter symptomdeby (også PCR positiv) 1 pasient var PCR-positiv (Ct 22) 11 døgn etter symptomdebut!

21 Diagnostiske erfaringer ved avdeling for medisinsk mikrobiologi, St. Olavs Hospital Nesten ingen av pasientene som fikk kusma til tross for fullvaksinering med MMR hadde påvisbart IgM med Liaison-testen Pasient født i 1982 ble innlagt med serøs meningitt og klassiske kusmasymptomer. Han hadde muligens kun fått 1dose MMR-vaksine. Spinalvæske tatt 7 dager etter symptomdebut (og positiv PCR i ekspektorat) var primært negativ i PCR, men ble reproduserbar svak positiv etter at ekstraksjonsvolumet ble økt fra 200 µl til 1000µl. IgM-testen var negativ. EBV var en hyppig differentialdiagnose.

22 Av 27 parotitt-dna positive prøver ble EBV-DNA påvist i 47,1% (13/27), men oftest i meget lav konsentrasjon (reaktivering?)

23 Situasjonen pr. 30. november personer er mistenkt å ha blitt smittet Av disse er 118 verifisert med positiv PCR og/eller dyrkning i cellekultur og muligens en ved serologi (neg PCR i ekspektorat, lavt IgM-titer) Totalt påvist kusma hos 12 som ikke er studenter + en ungdomsskoleelev 34 av studentene er utenlandsstudenter, hovedparten er studenter ved NTNU kun 3 ved HIST 26 av disse er studenter fra vesteuropeiske og søreuropeiske land. Noen få fra Asia og Mellom- Amerika. Ingen fra Afrika Eli Sagvik Smittevernlege Trondheim kommune

24

25 Hvordan vil parotittepidemien utvikle seg?

26 Epidemic of Mumps among Vaccinated Persons, the Netherlands, Jussi Sane,et al. EID 2014

27 Konklusjon Direkte påvisning av parotittvirus-rna i prøver tatt fra munnhulen er den raskeste, mest sensitive og beste metoden til å diagnostisere kusma-tilfeller Flocked swabs i virustransportmedium egner seg spesielt godt til både PCR og virus dyrkning Virus dyrkning kan være et nyttig supplement til PCR i spesielle tilfeller (kvalitetssikring) Serologi er best egnet til å påvise primærinfeksjoner, men sensitivitet og spesifisitet varier betydelig for ulike tester Serologi er uegnet til diagnostikk av kusmatilfeller hos fullvaksinerte pasienter