Laboratoriediagnostikk av flåttbårne infeksjoner

Transkript

1 Laboratoriediagnostikk av flåttbårne infeksjoner - Lyme borreliose (Borrelia burgdorferi sensu lato) - Skogflåttencefalitt (Tick-borne encephalitis virus/tbe-virus) - Harepest (Francisella tularensis) - Anaplasmose (Anaplasma phagocytophilium) - Babesiose (Babasia sp)

2 Skogflått Larve 0,5mm Voksen hann 2mm Voksen hunn 2-2,5mm Nymfe 1mm

3 Laboratoriediagnostikk ved Borreliainfeksjon Bedre enn sitt rykte!

4 Dyrkning PCR Laboratoriediagnostikk Serologi (antistoffpåvisning) ELISA Immunoblot

5 Dyrkning Gullstandard Minimum 5 uker Lav sensitivitet Ikke i bruk rutinemessig

6 Nukleisyre amplifikasjon (PCR) Kan benyttes som supplerende test På leddvæske eller synovialbiopsi ved mistanke om borreliaartritt der serologiske resultater er vanskelig å tolke På spinalvæske ved mistanke om nevroborreliose der serologisk diagnose er usikker (tidlig i sykdomsforløpet) På hudbiopsi ved mistanke om atypisk erythema migrans i tidlig fase eller ACA (acrodermatitis chronica atrophicans)

7 PCR OBS! Negativt svar har liten diagnostisk verdi

8 ELISA-tester Indikasjon for antistoffundersøkelse Klinisk mistanke om disseminert Lyme borreliose Multiple Erythema migrans Nevroborreliose Artritt Karditt ACA Ikke indikasjon for antistoffundersøkelse Flåttbitt Erythema migrans Uspesifikke symptomer Behandlingskontroll

9 Tilpasning til ny vert I flåttens tarm, ved flåttbitt og blodmåltid: - Endring i temperatur, ph og næringstilgang - Eksposisjon for antistoff, komplement og andre deler av immunforsvaret - Borrelia replikerer raskt (<500 >10 5 på 72 timer - Endret genekspresjon Oppregulering av enkelte overflateproteiner, for eksempel OspC Nedregulering av flått-relaterte genprodukter, for eksempel OspA og OspB

10 Tilpasning til ny vert forts. Fra ca 36 timer etter bitt: Migrasjon av Borrelia fra flåttens tarm til spyttkjertel Overføring til nytt vertsdyr via spytt OspC synes å være nødvendig for etablering i ny vert OspC blir deretter nedregulert (immune evasion?)

11 ELISA-tester Antigenvariasjon Strategi for å unngå immunapparatet VlsE: lipoprotein på Borreliabakteriens overflate som gjennomgår antigen variasjon C6: konservert område i VlsE som er immunogent ELISA-tester bør inneholde VlsE/C6 Mer korrelert til aktiv infeksjon enn andre antigener

12 ELISA-tester Sensitivitet Nevroborreliose % etter 6-8 uker Artritt og ACA ca 100 % Spesifisitet Problem med falskt positiv IgM (5-6%?) IgG god analytisk spesifisitet, men betydelig lavere diagnostisk spesifisitet, spesielt i endemisk område

13 Tolkning av serologiske tester IgM IgG Tolkning Ikke påvist Ikke påvist Påvist Ikke påvist Påvist Påvist Ikke påvist Påvist Ikke infeksjon eller tidlig i sykdomsforløpet Uspesifikk IgM, evt tidlig infeksjon Aktuell eller tidligere gjennomgått infeksjon Tidligere eller aktuell infeksjon

14 Supplerende tester Annen ELISA C6-peptid Usikkert om dette bidrar til økt sensitivitet ettersom testen inneholder VlsE-antigen Immunoblot Kan øke spesifisiteten med 1-2% Ingen konsensus om hvilken type konfirmasjonstest som er å foretrekke

15 Immunoblot Viser hvilke undergrupper av antigener antistoffene reagerer mot Noen antigener høy sensitivitet, men lav spesifisitet (p41) Noen antistoff markør for tidlig smitte (OspC), mens andre markerer smitte tilbake i tid (p18, p83, p100)

16 Immunoblot Viktigste indikasjoner Mistenkt uspesifikk IgM Konfirmasjonstest ved positiv ELISA, både IgM og IgG Screeningtest ved negativ primærtest ved langvarig symptomatologi med stor klinisk mistanke om borreliose

17 Diagnostikk av nevroborreliose Passende klinikk Mononukleær pleocytose i spinalvæske Positiv antistoffindeks spinalvæske/serum Testen skiller mellom intrathekal antistoffproduksjon og lekkasje pga defekt blod/hjernebarriere Kan være negativ i tidlig fase Negativ serologi og antistoffindeks ved symptomer >6-8 uker vil i praksis utelukke nevroborreliose

18 Kontroversielle tester Lymfocytt transformasjonstester CD57/CD3 lymfocytt-telling Begge tester utføres for norske pasienter på private klinikker i Tyskland Foreløpig foreligger ikke dokumentasjon som tilsier at disse testene har noen plass i diagnostikken av borreliose Bruk frarådes også i nasjonale anbefalinger fra bl.a. Tyskland, Frankrike, England, Nederland og USA Mikroskopi Uegnet! (Nylig studie i regi av FHI)

19 CXCL13 En mulig aktivitetsmarkør? Kjemokin, tiltrekker B-celler Økte nivåer i spinalvæske hos pasienter med akutt nevroborreliose Nivået faller ved antibiotikabehandling Foreløpig usikker spesifisitet

20 Fylke Østfold Akershus Oslo Hedmark Oppland Buskerud Vestfold Telemark Aust-Agder Vest-Agder Rogaland Hordaland Sogn og Fjordane Møre og Romsdal Sør-Trøndelag Nord-Trøndelag Nordland Troms Finnmark Ukjent fylke Totalt

21 Husk Problem: skille aktuell og tidligere gjennomgått infeksjon Gode kliniske opplysninger essensielt for tolkning av borreliaserologi Sykdomsvarighet, flåttbitt, symptomer, evt. tidligere infeksjon og behandling Viktigste tiltak for å forbedre serologisk diagnostikk er innstramming av indikasjonsområde

22 SEROPREVALENS AV ANTISTOFFER MOT TBE- VIRUS BLANT BLODGIVERE I ØSTFOLD Astri Lervik Larsen I, Anita Kanestrøm I, Marthe Bjørland I, Sirkka Vene II, Susanne Dudman III I Senter for laboratoriemedisin, Sykehuset Østfold, II Smittskyddsinstitutet, Solna, Sverige, III Avdeling for virologi, Nasjonalt folkehelseinstitutt Inklusjon av blodgivere fra januar 2012 Totalt 460 blodgivere inkludert Alle 5 blodbankene i Østfold deltok Innsamling av flått på Hvaler

23 Resultater 8 positive prøvene deretter videresendt Smittskyddsinstitutet Nøytralisasjonstest 3 negative (1 fått gulfebervaksine) 5 positive (2 av disse tidligere TBE vaksine, 1 oppholdt seg mye i annet land med høy forekomst) Prevalens i Østfold: 0,65% TBE også påvist i flått fra Spjærøy

24 Laboratoriediagnostikk av skogflåttencefalitt (TBE) Antistoffpåvisning (IgM og IgG) i serum og spinalvæske OBS kryssreaksjon andre flavivirus PCR tidlig i sykdomsforløpet Prøvene sendes Folkehelseinstituttet

25 Laboratoriediagnostikk av harepest (tularemi) Antistoffpåvisning (IgM og IgG) i serum Helst parsera Vevsprøver til dyrkning (dårlig sensitivitet) og PCR-undersøkelse Prøvene sendes St.Olavs Hospital i Trondheim

26 Takk for meg