Til in vitro-diagnostisk bruk Skal brukes med BD MAX System Norsk

Transkript

1 B MAX Vginl Pnel Til in vitro-dignostisk bruk P0203(03) Skl brukes med BD MAX System Norsk 4 U I BRUKSOMRÅDE BD MAX Vginl Pnel utført på BD MAX System er en utomtisert kvlittiv in vitro-dignostisk test for direkte påvisning v bkteriell vginose, Cndid-rter forbundet med vulvovginl cndidisis og Trichomons vginlis fr vginle penselprøver hos psienter som er symptomtiske for vginitt/vginose. Testen benytter polymersekjedereksjon (PCR) i snntid for oppformering v spesifikke DNA-mål og fluorogene målspesifikke hybridiseringsprober for å påvise og skille DNA fr: Bkterielle vginosemrkører Lctobcillus spp (L. crisptus og L. jensenii) Grdnerell vginlis Atopobium vgine BVAB-2 (Bcteril Vginosis Associted Bcteri-2) Megspher-1 Cndid spp (C. lbicns, C. tropiclis, C. prpsilosis, C. dubliniensis) Cndid glbrt Cndid krusei Trichomons vginlis BD MAX Vginl Pnel er beregnet på dignostisering v vginle infeksjoner hos kvinner med en klinisk presentsjon som smsvrer med bkteriell vginose, vulvovginl cndidisis og trichomonisis. SAMMENDRAG OG FORKLARING AV PROSEDYREN Vginitt, ett v de vnligste problemene i klinisk medisin, er årsken til millioner v legebesøk hvert år 1. De tre hovedktegoriene v vginitt er bkteriell vginose (BV), gjærvginitt (cndidisis) og T. vginlis-vginitt (trichomonisis). Bkteriell vginose er den vnligste vginle sykdommen, og utgjør % v tilfellene hos kvinner i fødedyktig lder 2. Hydrogenperoksidproduserende Lctobcillus-rter er viktige medlemmer v den normle vginlfloren og er lminnelig kjent for å reduseres hos psienter med vginose. Det t disse bkteriene reduseres i stedet for å kolonisere vgin, er en nerkjent mrkør for vginose 3,4. I motsetning til denne reduksjonen i Lctobcillus-rter er det en økning i velkjente rter v nerobe bkterier slik som Atopobium vgine og Grdnerell vginlis 4. Kolonisering forekommer også med ikke-kultiverbre nerobe orgnismer som BVAB-2 og Megspher-1 3. Bkteriell vginose er ssosiert med en høy forekomst v endrometritt og bekkeninfeksjon etter bort og gynekologiske prosedyrer i befolkningen generelt. Bkteriell vginose er også ssosiert med sene spontnborter, premtur membrnruptur og for tidlig fødsel, og er sterkt knyttet til økt risiko for HIV og ndre seksuelt overførbre sykdommer. 5, % v kvinner som er symptomtiske for vginitt, får dignosen vulvovginl cndidisis 6. Flere epidemologiske studier tyder på t Cndid lbicns er nsvrlig for 65 til 90 % v tilfellene v vulvovginl cndidisis 7-12, og t ndre rter enn Cndid lbicns kn være nsvrlige for opptil 30 % v episodene med vulvovginl cndidisis Blnt disse rtene er C. glbrt, C. prpsilosis og C. tropiclis de hyppigst rpporterte i litterturen. C. glbrt og C. krusei er de viktigste Cndid-rtene som er resistente mot flukonzolbsert ntifungl terpi 5,13,14. Vulvovginl cndidisis er vnligvis ssosiert med høyt Cndid-nivå, men symptomene kn være ssosiert med lvere nivåer hos kvinner som er predisponert v fktorer som endrer det vginle miljøet 15,16. Kompliksjoner ved vulvovginl cndidisis forekommer sjelden. Choriomnionitt ved grviditet og vulvr vestibulittsyndrom hr blitt rpportert 2. 1

2 Trichomonisis forårsket v Trichomons vginlis er én v de mest vnlige seksuelt overførbre sykdommene på verdensbsis, med over 170 millioner tilfeller per år % v kvinner som er symptomtiske for vginitt, får dignosen trichomonisis 6. Denne sykdommen er ssosiert med flere helseskdelige virkninger, slik som for tidlig fødsel, lv fødselsvekt og økt seksuell overføring v HIV 1. Leger dignostiserer trdisjonelt vginitt med en kombinsjon v symptomer, fysisk undersøkelse, ph v vginlvæsken, mikroskopi og "whiff test". I kombinsjon hr disse testene en sensitivitet og spesifisitet på henholdsvis 81 og 70 % for bkteriell vginose; 84 og 85 % for vulvovginl cndidisis og 85 og % for trichomonisis smmenlignet med en molekylær nlyse 6, 18. BD MAX Vginl Pnel er beregnet for bruk med BD MAX UVE Specimen Collection Kit (prøvetkingssett). Prøvene trnsporteres til testlbortoriet i BD MAX UVE Smple Buffer Tubes (prøvebufferrør). Prøvebufferrørene kjøres med virvelblnder for å frigi celler fr penselen til bufferen. Prøvebufferrørene, modulregensstrimlene og PCR-kssettene lstes inn i BD MAX System. Opertøren trenger ikke gjøre noe mer, og følgende utomtiserte prosedyrer utføres. Bkteriecellene lyseres, og DNA trekkes ut, fnges og konsentreres på mgnetiske kuler. Etter et eluteringstrinn tilsettes DNA til regensene som inneholder spesifikke primere og prober som brukes til å oppformere og påvise de genetiske målene, hvis de finnes. Etter oppformeringen utføres påvisningen og tolkingen v signlene utomtisk v BD MAX System med snntids PCR. Hvert ekstrksjonsrør inneholder en prøvebehndlingskontroll som overvåker integriteten til regensene og prosesstrinnene som er involvert i ekstrksjon, oppformering og påvisning v DNA smt forekomst v mulige nlyseinhibitorer. PROSEDYREPRINSIPPER En kombinsjon v lytiske regenser og ekstrksjonsregenter brukes for å utføre cellelysering og DNA-ekstrksjon. Nukleinsyrer som frigjøres fr målorgnismene blir fnget på mgnetisk ffinitet-kuler. Kulene smmen med de bundne nukleinsyrene blir vsket, og nukleinsyrene blir elutert med en kombinsjon v vrme og ph. Elutert DNA blir nøytrlisert og overført til Mster Mix-rørene for å rehydrere PCR-regensene. Etter rekonstitusjon dispenserer BD MAX System et fst volum v PCR-klr oppløsning som inneholder ekstrherte nukleinsyrer inn i PCR-kssetten. Systemet lukker mikroventiler i kssetten før PCR blir initiert, for å lukke inne oppformeringsblndingen og dermed hindre fordmpning og kontminsjon. De mplifiserte DNA-målene påvises ved bruk v hydrolyseprober (TqMn) som er merket i den ene siden med et fluorescerende rpporteringsfrgestoff (fluorofor) og i den ndre siden med en slukkerdel. Prober merket med ulike fluorogener brukes til å påvise målnlytter i ulike optiske knler i BD MAX-systemet. Når probene er i sin opprinnelige tilstnd, blir fluorescensen til fluoroforen undertrykt på grunn v nærheten til slukkeren. Ved forekomst v mål-dna hybridiserer imidlertid probene til sin komplementære sekvens og blir hydrolysert v 5-3 -eksonuklesektiviteten til DNA-polymerse når den syntetiserer den nscerende tråden lngs DNA-templten. Dette fører til t fluoroforene blir seprert fr slukkermolekylene, og fluorescens blir utstrålt. Mengden v fluorescens som påvises i de to optiske knlene som brukes for BD MAX Vginl Pnel, er direkte proporsjonl med mengden v tilsvrende probe som hydrolyseres. BD MAX System overvåker disse signlene i hver syklus v PCR og tolker dtene ved slutten v reksjonen for å gi kvlittive testresultter for hver nlytt (dvs. positivt eller negtivt). REAGENSER OG MATERIALER REF Innhold Mengde BD MAX Vginl Pnel - Vginitis Mster Mix (C4) 24 tester Tørket PCR Mster Mix inneholder DNA-polymerse, mål- og (2 x 12 rør) prøvebehndlingskontrollspesifikke primere og prober BD MAX Vginl Pnel - Vginosis Mster Mix (C5) Tørket PCR Mster Mix inneholder DNA-polymerse, mål- og prøvebehndlingskontrollspesifikke primere og prober. BD MAX Vginl Pnel Regent Strips Modulregensstrimler som inneholder lle flytende regenser og engngspipettespisser som er nødvendige for prøvebehndling og DNA-ekstrksjon. BD MAX Vginl Pnel - Extrction Tubes (C6) Tørkede mgnetisk ffinitet-kuler Tørket lytisk enzym Tørket prøvebehndlingskontroll 24 tester (2 x 12 rør) 24 tester 24 tester (2 x 12 rør) Korker med septum 25 NØDVENDIG UTSTYR OG MATERIALER SOM IKKE FØLGER MED BD MAX System (BD, kt. nr ) BD MAX UVE Specimen Collection Kit (BD, kt. nr ) BD MAX PCR Crtridges (BD, kt. nr ) BD MAX UVE Smple Buffer Tubes (BD, kt. nr ) VWR Multi-Tube Vortexer (VWR, kt. nr ) NALGENE Cryogenic Vil Holder (VWR, kt. nr ) Anbeflte medier for dyrkning v eksterne kontroller: Sbourud Dextrose Agr (Deep Fill), (for eksempel BD, kt. nr eller ) eller Sbourud Dextrose Agr (Deep Fill), Emmons (for eksempel BD, kt. nr eller ), Columbi Anerobic Sheep Blood Agr (for eksempel BD, kt. nr ). Anbeflte kommersielt tilgjengelige kontrollmteriler (Zeptometrix Corportion, kt. nr. NATBVP-BD: NATtrol BV Positive Control og kt. nr. NATVNC-BD: NATtrol Vginl Negtive Control) Pulverfrie engngshnsker 2

3 ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER BD MAX Vginl Pnel er for in vitro-dignostisk bruk. Hvis vginle pensler innhentet v psienten ikke blir overført til et BD MAX UVE Smple Buffer Tube, må de overføres innen 2 timer etter prøvetking når de oppbevres ved 2 30 C. Ikke forvrm prøver før bruk v BD MAX Vginl Pnel. Ikke bruk utløpte regenser og/eller mteriler. Ikke bruk settet hvis etiketten som forsegler ytterkrtongen, er skdet ved levering. Du må ikke bruke regenser hvis beskyttelsesposer er åpne eller skdet ved levering. Ikke bruk regensen hvis tørkemiddelposen ikke er til stede eller er skdet inne i regensposene. Ikke fjern tørkemiddelet fr regensposene. Lukk posene som beskytter regensene rskt med glidelåslukningen etter hver bruk. Fjern eventuell overflødig luft i posene før du forsegler dem. Beskytt regenser mot vrme og fuktighet. Lngvrig eksponering for fuktighet kn påvirke produktets ytelse. Du må ikke bruke regenser hvis folien er brutt eller skdet. Ikke blnd regenser fr forskjellige poser og/eller pkker og/eller lotnummer. Du må ikke bytte om på eller gjenbruke korker, d det kn oppstå kontminering som forstyrrer testresulttene. Kontroller t modulregensstrimlene hr korrekte væskenivåer (påse t væskene er på bunnen v rørene) (se figur 2). Kontroller t modulregensstrimlene hr lle pipettespissene på plss (se figur 2). BD MAX PCR Crtridges (PCR-kssetter) kn brukes bre i én kjøring. Gå frem med vrsomhet når du bruker kjemiske løsninger, d lesbrheten til strekkoder på Mster Mix- og ekstrksjonsrøret kn bli endret. God lbortorieteknikk er vgjørende for korrekt ytelse for denne nlysen. På grunn v den høye nlytiske sensitiviteten til denne testen må det utvises meget stor forsiktighet for å bevre renheten til lle mteriler og regenser. I tilfeller der ndre PCR-tester utføres i smme generelle område v lbortoriet, må du være forsiktig, slik t ikke BD MAX Vginl Pnel, eventuelle ndre regenser som er nødvendige for testing, og BD MAX System kontmineres. Unngå lltid kontminsjon v regenser med mikrober og deoksyribonuklese (DNse). Du må skifte hnsker før du håndterer regenser og kssetter. For å unngå kontminsjon v miljøet med oppformeringer må du ikke brekke i stykker BD MAX PCR Crtridges etter bruk. Forseglingene på BD MAX PCR Crtridges er utformet for å hindre kontminsjon. Lbortoriet skl rutinemessig utføre miljøovervåkning for å minimerer risikoen for krysskontminsjon. Hvis du bruker BD MAX Vginl Pnel utenfor de nbeflte tidsområdene, kn det oppstå ugyldige resultter. Anlyser som ikke utføres innenfor ngitte stbilitetstidsområder, skl gjents med en ny prøve. Ytterligere kontroller kn testes i smsvr med retningslinjer eller krv i lokle, sttlige og/eller kommunle forskrifter eller godkjenningsorgnissjoner. Håndter lltid prøver som om de vr smittebærende, og i smsvr med sikre lbortorieprosedyrer som dem som er beskrevet i CLSI-dokument M29 19 og i Biosfety in Microbiologicl nd Biomedicl Lbortories 20. Bruk beskyttelsesklær og engngshnsker mens du håndterer lle regenser. Vsk hendene godt etter t testen er utført. Du må ikke pipettere med munnen. Du må ikke røyke, drikke, tygge eller spise i områder der prøver eller settregenser håndteres. Ksser ubrukte regenser og vfll i smsvr med lokle eller nsjonle bestemmelser. Cndid-rter kn være til stede som kommensle orgnismer hos en betydelig prosentndel v kvinner, og resulttene fr BD MAX Vginl Pnel bør vurderes smmen med nnen klinisk informsjon og psientinformsjon for å fstslå sykdommens sttus. Et positivt kontrollgrupperesultt kn skyldes én eller flere Cndid-rter. Se i brukerhåndboken for BD MAX-systemet 21 for ytterligere dvrsler, forsiktighetsregler og prosedyrer. OPPBEVARING OG STABILITET Prøvens stbilitet Innsmlede prøver skl overføres til BD MAX UVE Smple Buffer Tubes i smsvr med instruksjonene i pkningsvedlegget for prøveinnsmlingssettet. Prøver i BD MAX UVE Smple Buffer Tubes kn oppbevres i mksimlt 8 dger ved 2 30 C eller i 14 dger ved 2 8 C før testing. Oppbvring v settkomponenter BD MAX Vginl Pnel-regenser og -komponenter er stbile ved 2 25 C frem til den ngitte utløpsdtoen. Ikke bruk komponenter etter utløpsdtoen. Mster Mix- og ekstrksjonsrør for BD MAX Vginl Pnel leveres i forseglede poser. Forsegl posen igjen umiddelbrt etter åpning for å beskytte produktet mot fuktighet. Regensrørene er stbile i opptil 7 dger ved 2 25 C etter første åpning og ny forsegling v posen. Urekonstituerte BD MAX Mster Mix- og ekstrksjonsrør er stbile i opptil 24 timer ved 2 25 C etter t de hr blitt ttt ut v beskyttelsesposen. 3

4 BRUKSANVISNING Trnsport/klrgjøring v prøve MERK: Bruk hnsker når du behndler komponenter i BD MAX UVE Specimen Collection Kit og prøver. Hvis hnskene kommer i kontkt med prøven, skl de byttes umiddelbrt for å unngå kontminsjon v ndre prøver. Prøver skl kun innhentes med BD MAX UVE Specimen Collection Kit, og instruksjonene i pkningsvedlegget til BD MAX UVE Specimen Collection Kit skl følges. For prøver som ennå ikke er overført til BD MAX UVE Smple Buffer Tube, klrgjør du prøvene for testing i henhold til instruksjonene nedenfor. Overføring v vginle penselprøver til BD MAX UVE Smple Buffer Tube MERK: Pensler må overføres fr penselhylsen til BD MAX UVE Smple Buffer Tube strks (foretrukket) eller innen 2 timer etter prøvetking når de oppbevres ved 2 30 C. MERK: I figur 1 finner du et smmendrg v rbeidsflyten for overføring v penselprøven. 1. T korken v BD MAX UVE Smple Buffer Tube og sett penselen helt inn i røret slik t tuppen er i bunnen. 2. Hold penselen i korken, og brekk penselen forsiktig ved skårmerket. Vær vrsom for å unngå sprut og kontminsjon v rørets innhold. 3. Sett korken godt på BD MAX UVE Smple Buffer Tube. Hvis penselskftet er for lngt til t røret kn lukkes forsvrlig, ber du om innhenting v ny prøve med en ny pensel. 4. Merk BD MAX UVE Smple Buffer Tube med psientopplysninger og dto/klokkeslett for prøvetking. MERK: Vær forsiktig så ikke strekkodene på røret blir utydelige. 5. Begynn umiddelbrt med prøveklrgjøring. Figur 1: Overføring v penselprøver til BD MAX UVE Smple Buffer Tube 1. Sett penselen helt inn i røret slik t tuppen er i bunnen. 2. Brekk skftet forsiktig ved skårmerket. 3. Sett korken godt på røret. 4. Merk røret med psientopplysninger. 4

5 Prøveklrgjøring MERK: 1 septumkork kreves for hver prøve og hver eksterne kontroll som skl testes. 1. Plsser Smple Buffer Tube i en NALGENE Cryogenic Vil Holder, og virvelblnd ved mksiml hstighet i 1 minutt med Multi-Tube Vortexer. Hvis kjøringen ikke kn strtes inn 4 timer fr dette virvelblndingstrinnet, virvelblnd igjen ved mksiml hstighet i 1 minutt med Multi-Tube Vortexer før kjøringen strtes. 2. T korken v prøvebufferrøret, og trykk penselen forsiktig mot siden v røret for å fjerne overflødig væske. MERK: Hvis en pensel ikke er festet i korken, skl du ikke prøve å fjerne den fr prøvebufferrøret. Penselen kn være i prøvebufferrøret under hele PCR-kjøringen. 3. T pensel/kork-kombinsjonen ut v røret og kst den i en beholder for biomedisinsk vfll. Merk t mikrobeinnholdet fr vginle prøver kn være svært høyt. Det bør derfor ts forholdsregler for å unngå miljøforurensning på dette trinnet v prøveklrgjøringen. 4. Lukk røret med en blå septumkork. 5. Begynn umiddelbrt med bruk v BD MAX System. Ikke forvrm rør før bruk v BD MAX Vginl Pnel. Drift v BD MAX System MERK: Se brukerhåndboken for BD MAX System 21 for detljerte instruksjoner (delen Bruk). MERK: Testing v BD MAX Vginl Pnel må utføres innen 4 timer etter virvelblndingstrinnet ovenfor (Se Prøveklrgjøring, trinn 1 3). Hvis det er nødvendig med ny testing, kjører du prøven(e) i vorteksblnderen på nytt. MERK: 1 Vginitis Mster Mix (C4), 1 Vginosis Mster Mix (C5), 1 ekstrksjonsrør (C6) og 1 modulregensstrimmel for BD MAX Vginl Pnel må brukes for hver prøve og hver ekstern kontroll som skl testes. 1. Slå på BD MAX-systemet (hvis det ikke llerede er gjort), og logg inn ved å oppgi <user nme> (brukernvn) og <pssword> (pssord). 2. Du må skifte hnsker før du håndterer regenser og kssetter. 3. T det nødvendige ntllet modulregensstrimler fr BD MAX Vginl Pnel-settet. Bnk hver modulregensstrimmel lett mot en hrd overflte for å sikre t lle væskene er i bunnen v rørene. 4. T det nødvendige ntllet ekstrksjonsrør og Mster Mix-rør ut v de beskyttende posene. Fjern overflødig luft, og lukk posene med vkuumforseglingen. 5. For hver prøve som skl testes, plsserer du 1 modulregensstrimmel i sttivet i BD MAX System og strter med posisjon 1 på sttiv A. 6. Klikk 1 ekstrksjonsrør (hvit folie) inn i hver modulregensstrimmel i posisjon 1 som vist i figur Klikk 1 Vginosis Mster Mix-rør (grønn folie) inn i hver modulregensstrimmel i posisjon 2 som vist i figur Klikk 1 Vginitis Mster Mix-rør (blå folie) inn i hver modulregensstrimmel i posisjon 4 som vist i figur 2. Innklikkingsrør Avfllsreservor Pipettespisser #1 #2 #3 #4 Lyserings-/ frigjøringsrør Vskebuffer Ekstrksjonsrør Vginitis Mster Mix Eluteringsbuffer Vginosis Mster Mix Klrt DNA/RNA-rør (blnderør) Nøytrliseringsbuffer #1 #2 #3 #4 Figur 2: Klikk BD MAX Vginl-ekstrksjonsrør og Mster Mix-rør inn i modulregensstrimler. 9. Klikk på ikonet for Run (Kjør), og legg inn settlotnummeret til BD MAX Vginl Pnel (for sporing v sett) enten ved å lese v strekkoden med leseren eller ved å legge det inn mnuelt. MERK: Gjent trinn 9 hver gng en ny sett-lot blir brukt. 10. Nviger til rbeidslisten. Bruk rullegrdinmenyen, og velg <BD MAX Vginl 46>. 11. Legg prøvebufferrør-id, psient-id og ksesjonsnummer (hvis ktuelt) inn i rbeidslisten, enten ved å sknne strekkodene med sknneren eller ved å legge inn mnuelt. 12. Velg det ktuelle sett-lot-nummeret (finnes på ytterkrtongen) fr rullegrdinmenyen. 13. Gjent trinn 10 til 12 for lle gjenværende prøvebufferrør. 14. Plsser prøvebufferrørene i sttiv på BD MAX System som svrer til modulregensstrimlene som er klrgjort i trinn 5 til Plsser nødvendig ntll BD MAX PCR-kssetter i BD MAX-systemet (se figur 3). 5

6 Hver kssett hr plss til 12 prøver testet mot vginose- og vginittpnelene, totlt 24 PCR-reksjoner per kssett. BD MAX System vil utomtisk velge plssering og rd på PCR-kssetten for hver kjøring. Figur 3: Sette inn BD MAX PCR Crtridges. 16. Sett inn sttiv i BD MAX System (se figur 4). Side A Side B Figur 4: Sette inn sttiv i BD MAX System. 17. Lukk lokket på BD MAX-systemet, og klikk på <Strt> for å begynne behndling. 18. Ved slutten v kjøringen kontrollerer du resulttene strks eller oppbevrer prøvebufferrørene i henhold til tempertur og tid som er oppgitt i "Prosedyre for gjenttt test" (nedenfor) til resulttene er kontrollert. MERK: Hvis et septumlokk blir ødelgt under kjøringen, må du bytte det ut med et nytt før prøven oppbevres. MERK: Når kjøringen er ferdig, kn prøvebufferrør med prøver oppbevres: i mksimlt 5 timer ved 2 30 C eller i mksimlt 120 timer ved 2 8 C. Hvis du oppnår et ubestemt (IND), uløst (UNR) eller ufullstendig (INC) resultt, eller hvis det oppstå en Externl Control-feil, må du gjent en test fr det klrgjorte prøvebufferrøret (se delen "Prosedyre for gjenttt test"). Hvis en ekstern kontroll ikke bestås, må du gjent testing v lle prøver ved å bruke nylig klrgjorte eksterne kontroller (se Kvlitetskontroll ). 6

7 KVALITETSKONTROLL Kvlitetskontrollprosedyrer overvåker ytelsen til enheten. Lbortorier må fstslå ntll, type og hyppighet for testing v kontrollmteriler i henhold til retningslinjer eller krv i nsjonle eller lokle bestemmelser eller fr kkrediteringsorgnissjoner. For generell veiledning om kvlitetskontroll kn det være hensiktsmessig for brukeren å se i Clinicl Lbortory Stndrds Institutedokumentene MM3, C24 og EP Mteriler for ekstern kontroll leveres ikke fr BD. BD MAX System-progrmvren bruker ikke eksterne positive og negtive kontroller i den hensikt å tolke resulttene v prøvetester. Eksterne kontroller behndles som om de vr psientprøver. BD MAX UVE Smple Buffer Tubes trengs for å klrgjøre eksterne kontroller. (Se tbellen i delen Tolkning v resultter for tolkning v nlyseresultter for ekstern kontroll.) 2. Én ekstern positiv kontroll og én ekstern negtiv kontroll skl kjøres minst dglig inntil tilstrekkelig prosessvlidering oppnås på BD MAX System i hver lbortoriesetting. Hver målkontrollstmme skl testes vekselvis. Redusert hyppighet v kontrolltesting skl være i smsvr med gjeldende bestemmelser. 3. Hensikten med ekstern positiv kontroll er å overvåke for vesentlige regensfeil. Hensikten med ekstern negtiv kontroll er å påvise kontminsjon v regens eller omgivelser (eller overføring) v målnukleinsyrer. 4. Kontrollstmmer skl testes i henhold til retningslinjer eller krv i lokle eller nsjonle bestemmelser eller fr godkjenningsorgnissjoner for å overvåke effektiviteten til hele nlyseprosessen. 5. Ulike typer eksterne kontroller nbefles for å gjøre det mulig for brukeren å velge den som psser best for lbortoriets kvlitetskontrollprogrm.. Ekstern negtiv kontroll: En suspensjon v kommersielt tilgjengelig kontrollmterile [f.eks. Lctobcillus iners (ATCC 55195)] i et BD MAX UVE Smple Buffer Tube. BD nbefler t ekstern negtiv kontroll klrgjøres før ekstern positiv kontroll for å redusere potensilet for kontminsjon som følge v kontrollklrgjøringen. b. Ekstern positiv kontroll: En suspensjon v de kommersielt tilgjengelige kontrollmterilene oppført nedenfor i et BD MAX UVE Smple Buffer Tube (tbell 1). Tbell 1: Kommersielt tilgjengelige mteriler for ekstern kontroll Positive kontroller Negtive kontroller Vginittpnel Vginosepnel Trichomons vginlis ATCC Cndid lbicns ATCC Cndid glbrt ATCC 2001 Cndid krusei ATCC 6258 Kommersielt tilgjengelig suspensjon for BV positiv ekstern kontroll b 1. Lctobcillus iners ATCC Kommersielt tilgjengelig suspensjon for BV negtiv ekstern kontroll b De eksterne positive og negtive kontrollene for vginosepnelet er en kombinsjon v flere orgnismer testet smtidig. b Se Nødvendig utstyr og mteriler som ikke følger med Hvis kontrollorgnismekulturer brukes: (1) Klrgjør strtkulturer v kontrollorgnismer som beskrevet i tbellen for klrgjøring v eksterne kontroller nedenfor. (2) For lle ndre kontroller enn Trichomons vginlis, klrgjør 0,5 McFrlnd-cellesuspensjoner i fosftbufret sltvnn (PBS) fr fersk kultur. (3) Utfør seriefortynninger med PBS for å oppnå den endelige fortynningen for hver orgnisme oppført i tbell 2. (4) Tilsett 150 μl v den endelige fortynningen eller suspensjonen til BD MAX UVE Smple Buffer Tube og lukk røret med en blå septumkork. Plsser Smple Buffer Tube i en NALGENE Cryogenic Vil Holder, og virvelblnd ved mksiml hstighet. (5) Plsser Smple Buffer Tube i en NALGENE Cryogenic Vil Holder, og virvelblnd ved mksiml hstighet i 1 minutt med Multi-Tube Vortexer. Hvis kjøringen ikke kn strtes innen 4 timer fr dette virvelblndingstrinnet, virvelblnd igjen ved mksiml hstighet i 1 minutt med Multi-Tube Vortexer før kjøringen strtes. (6) Behndle den eksterne kontrollen som en psientprøve i henhold til prosedyren som er ngitt i delen Bruk v BD MAX System. Tbell 2: Klrgjøring v eksterne kontroller Kontrollorgnisme Strtkultur Klrgjøring v suspensjon i PBS Endelig fortynning Trichomons vginlis ATCC Brukt ATCC-beholdning Fr ATCC-beholdning 1/0 Cndid lbicns ATCC Fersk kultur på Sbourud-skål 0,5 McF i PBS 1/20 Cndid glbrt ATCC 2001 Fersk kultur på Sbourud-skål 0,5 McF i PBS 1/ Cndid krusei ATCC 6258 Fersk kultur på Sbourud-skål 0,5 McF i PBS 1/20 Lctobcillus iners ATCC Fersk kultur på nerobisk blodgrskål 0,5 McF i PBS Ingen fortynning BV positiv ekstern kontroll Kommersielt tilgjengelig suspensjon Se leverndørens instruksjoner BV negtiv ekstern kontroll Kommersielt tilgjengelig suspensjon b Se Nødvendig utstyr og mteriler som ikke følger med 7

8 6. Eksterne kontroller skl gi forventede resultter.. En ekstern negtiv kontroll som gir et positivt testresultt, er indiktiv for en prøvehåndterings- og/eller kontmineringshendelse. Gå gjennom teknikken for prøvehåndtering for å unngå forvekslinger og/eller kontminering. b. En ekstern positiv kontroll som gir et negtivt resultt, indikerer et problem med prøvehåndteringen/-klrgjøringen. Les gjennom teknikken for prøvehåndtering/-klrgjøring. c. En ekstern kontroll som gir et testresultt som er uvklrt, ubestemt eller ufullstendig, indikerer en feil ved regens eller BD MAX System. Kontroller om det er feilmeldinger på monitoren til BD MAX System. Se i delen Oversikt over systemfeil i brukerhåndboken 21 for BD MAX-systemet for tolkning v dvrsels- og feilkoder. Hvis problemet vedvrer, bruk regenser fr en uåpnet pose eller bruk en et nytt nlysesett. 7. Hvert ekstrksjonsrør inneholder en prøvebehndlingskontroll som er et plsmid som inneholder en syntetisk mål- DNA-sekvens. Prøvebehndlingskontrollen overvåker effektiviteten ved DNA-innhenting, -vsking og -elutering under prøvebehndlingstrinnene smt effektiviteten v DNA-oppformering og -påvisning under PCR-nlyse. Hvis resulttet v prøvebehndlingskontrollen ikke innfrir kseptkriteriene, blir resulttet for prøven rpportert som uvklrt for denne Mster Mix. Hver Mster Mix inneholder sin egen prøvebehndlingskontroll, derfor påvises uvklrte resultter uvhengig for hver Mster Mix. Et resultt som er uvklrt, indikerer prøvereltert inhibering eller regenssvikt. Gjent kjøringen v eventuelle prøver som rpporteres som uvklrt, i henhold til delen Prosedyre for gjenttt test nedenfor. TOLKNING AV RESULTATER Resulttene er tilgjengelige i ktegorien Results (Resultter) i vinduet Results (Resultter) på BD MAX System-skjermen. BD MAX System-progrmvren tolker testresulttene utomtisk. Et testresultt kn betegnes NEG (negtivt), POS (positivt) eller UNR (uvklrt) bsert på oppformeringssttusen til målet og til prøvebehndlingskontrollen. IND (ubestemte) eller INC (ufullstendige) resultter skyldes svikt i BD MAX System. Resultter tolkes som vist i tbell 3: Rpportert nlyseresultt (Vginittpnel) TV POS TV NEG Kontrollgruppe POS Kontrollgruppe NEG Cgl POS Cgl NEG Ckru POS Ckru NEG UNR Tbell 3: Tolkning v resultter for BD MAX Vginl Pnel TOLKNING AV RESULTATENE Trichomons vginlis-dna påvist Ingen Trichomons vginlis påvist Cndid-gruppe DNA påvist (Cndid lbicns og/eller Cndid tropiclis og/eller Cndid prpsilosis og/eller Cndid dubliniensis) Ingen Cndid-gruppe påvist (Cndid lbicns og/eller Cndid tropiclis og/eller Cndid prpsilosis og/eller Cndid dubliniensis) Cndid glbrt-dna påvist Ingen Cndid glbrt påvist Cndid krusei-gruppe DNA påvist Ingen Cndid krusei påvist Uvklrt feil på grunn v hemmende prøve eller regensfeil Ingen mål påvist og oppformering v prøvebehndlingskontroll IND Ubestemt resultt på grunn v feil ved BD MAX System (med dvrsel- eller feilkode ) INC Ufullstendig kjøring (med dvrsel- eller feilkode ) Rpportert nlyseresultt (Vginosepnel) BV POS BV NEG UNR TOLKNING AV RESULTATENE Vginosepnel-DNA påvist. Påvisning v mrkørkombinsjoner reltert til bkteriell vginose: Grdnerell vginlis og/eller L. crisptus og/eller L. jensenii og/eller Atopobium vgine og/eller BVAB-2 og/eller Megspher-1 Påvisning v mrkørkombinsjoner reltert til norml flor Uvklrt feil på grunn v hemmende prøve eller regensfeil Ingen mål påvist og oppformering v prøvebehndlingskontroll IND Ubestemt resultt på grunn v feil ved BD MAX System (med dvrsel- eller feilkode ) INC Ufullstendig kjøring (med dvrsel- eller feilkode ) Se i delen Feilsøking i BD MAX System Brukerhåndbok 21 for tolkning v dvrsel- og feilkoder. 8

9 PROSEDYRE FOR TESTGJENTAKELSE MERK: Det er tilstrekkelig volum tilgjengelig for én gjenttt test fr prøvebufferrøret. For Smple Buffer Tubes som oppbevres ved 2 30 C, må ny testing utføres innen 5 timer fr kjøringen er ferdig. For Smple Buffer Tubes som oppbevres ved 2 8 C, kn ny testing utføres innen 120 timer (5 dger) fr kjøringen er ferdig. MERK: Nye prøver kn bli testet i smme kjøring som gjenttte prøver. MERK: Hvis UNR- eller IND-resultter gjelder bre én Mster Mix, må testen gjents med begge Mster Mixene festet på strimmelen. Hvis den gjenttte testen gir et nnet rpporterbrt resultt for et gitt mål, skl eventuelle positive resultter rpporteres. ULØST RESULTAT Uvklrte resultter kn forekomme hvis prøvereltert hemming eller en regensfeil hindrer riktig oppformering v mål eller prøvebehndlingskontroll. Prøve(r) kn gjents fr det tilhørende prøvebufferrøret innenfor tidsrmmene som er ngitt ovenfor. Blnd prøven(e) i 1 minutt i vorteksblnder, og strt på nytt ved å følge instruksjonene i delen Bruk v BD MAX System. UBESTEMT RESULTAT Ubestemte resultter kn oppstå hvis det forekommer et systemvrsel eller en regensfeil. Prøve(r) kn gjents fr det tilhørende prøvebufferrøret innenfor tidsrmmene som er ngitt ovenfor. Blnd prøven(e) i 1 minutt i vorteksblnder, og strt på nytt ved å følge instruksjonene i delen Bruk v BD MAX System. Når det gjelder tolkning v dvrsel- eller feilkodemeldinger, se i BD MAX Brukerhåndbok 21 (delen Feilsøking). UFULLSTENDIG RESULTAT Ufullstendig-resultter kn forekomme hvis prøveklrgjøringen eller PCR ikke blir fullført. Prøve(r) kn gjents fr det tilhørende prøvebufferrøret innenfor tidsrmmene som er ngitt ovenfor. Virvelblnd prøven(e) i 1 minutt, og strt på nytt ved å følge instruksjonene i delen Bruk v BD MAX System. Når det gjelder tolkning v dvrsel- eller feilkodemeldinger, se brukerhåndboken for BD MAX-systemet 21 (delen Feilsøking). EKSTERN KONTROLLSVIKT Externl Controls bør gi forventede resultter når de testes. Hvis prøver må gjents som følge v et feil resultt for ekstern kontroll, må de gjents fr sine prøvebufferrør smmen med nylig klrgjorte eksterne kontroller innenfor tidsrmmene som er ngitt ovenfor. Blnd prøvene i 1 minutt i vorteksblnder, og strt på nytt ved å følge instruksjonene i delen Bruk v BD MAX System. BEGRENSNINGER VED PROSEDYREN BD MAX Vginl Pnel er beregnet for bruk med BD MAX UVE Specimen Collection Kit. BD MAX Vginl Pnel skl kun brukes med BD MAX System v kompetente personer. BD MAX Vginl Pnel er ikke vlidert for vginle penselprøver som er innhentet v psienter hjemme. Interferens med BD MAX Vginl Pnel ble observert i nærvær v følgende substnser: Monistt 3 krem, Vgisil krem, Replens vginl fuktighetsgel, Metronidzol 0,75 % gel og leukocytter. For følgende substnser ble det observert interferens ved nivåer over de ngitte konsentrsjonene: Clotrimzol vginlkrem (> 3,1 µl/ml), Conceptrol vginl prevensjonsgel (> 3,1 µl/ml), Preprtion H hermoroidekrem (> 0,8 µl/ml), Zovirx cyclovir 5 % krem (> 3,1 µl/ml). Interferens med BD MAX Vginl Pnel ble observert i nærvær v følgende mikroorgnismer: Lctobcillus mylovorus, Lctobcillus delbrueckii subsp. bulgricus, Lctobcillus kefirgrnum og Lctobcillus helveticus, som lle kn brukes i probiotik. Interferens med Lctobcillus kefirnofciens er ikke fstslått. Kryssrektivitet med BD MAX Vginl Pnel kn bli observert med følgende orgnismer: Lctobcillus cidophilus, påvist i humn vføring; Trichomons tenx, en kommensl i munnhulen. For følgende orgnismer ble det observert kryssreksjon over de ngitte konsentrsjonene: Olsenell uli (> 9,9 x 10 4 CFU/ pensel) og Atopobium rime (> 6,6 x 10 4 CFU/pensel), begge isolert fr munnhulen; Lctobcillus delbrueckii subsp. lctis (> 5,8 x 10 3 CFU/pensel), påvist i humn vføring; Pichi fermentns (> 9,0 x 10 3 CFU/pensel), fr kffebønner og frukt. Alle stmmene som ble testet i inklusitivetsstudien, ble påvist. Imidlertid ble tre (3) v 10 testede Grdnerell vginlis-stmmer og 1 v 5 Lctobcillus crisptus-stmmer bre påvist ved høyere konsentrsjoner (henholdsvis 9 X LoD og 5 X LoD). Effekten v ndre potensielle vribler som vginl utflod, bruk v tmponger, eller prøvetkingsvribler er ikke fstslått. Som med mnge dignostiske tester skl resulttene v BD MAX Vginl Pnel tolkes i smmenheng med ndre lbortoriemessige og kliniske dt som er tilgjengelige for legen. Feil testresultter kn oppstå som følge v feil prøvetking, håndtering eller oppbevring, teknisk feil, forveksling v prøver eller fordi ntllet orgnismer i prøven er under testens nlytiske sensitivitet. God lbortorieteknikk er vgjørende for korrekt ytelse v nlysen. På grunn v den høye nlytiske sensitiviteten til denne testen må det utvises meget stor forsiktighet for å bevre renheten til lle mteriler og regenser. Et positivt testresultt betyr ikke nødvendigvis forekomsten v levedyktige orgnismer. Et positivt resultt indikerer forekomst v mål-dna. BD MAX Vginl Pnel kn ikke brukes til å vurdere om behndlingen er vellykket eller mislykket siden målnukleinsyrer kn vedvre etter ntimikrobiell behndling. Som med lle PCR-bserte tester, kn det påvises ekstremt lve nivåer v målet under LoD for nlysen. Det kn hende t resulttene ikke vil kunne reproduseres. 9

10 Flske negtive resultter kn forekomme som følge v tp v nukleinsyre grunnet utilstrekkelig innhenting, trnsport eller oppbevring v prøver, eller som følge v utilstrekkelig lysering v celler. Prøvebehndlingskontrollen er lgt til testen for å bistå i identifiseringen v prøver som inneholder hemmere for PCR-oppformering. Smple Processing Control gir ingen indiksjoner på om nukleinsyre hr gått tpt som følge v utilstrekkelig innhenting, trnsport eller oppbevring v prøver, eller om celler hr blitt tilstrekkelig lysert. Denne testen er en kvlittiv test, den gir ikke kvntittive verdier, og den indikerer ikke mengden v orgnismer som er til stede. FORVENTEDE VERDIER I den kliniske studien v BD MAX Vginl Pnel ble rpporterbre resultter fr prøver som vr i overensstemmelse på prøve- og PCR-nivå, innhentet fr 10 ulike geogrfiske steder. Antll klinikerinnhentede prøver vr 1632 for bkteriell vginose og 1647 for ndre nlysemål. Antll selvinnhentede prøver vr 1652 for bkteriell vginose og 1656 for ndre nlysemål. Antllet og prosentndelen positive ksus per mål, fstslått med BD MAX Vginl Pnel, er presentert nedenfor i tbell 4. Innsmlingstype Klinikerinnsmlet Selvinnsmlet Klinikktype Tbell 4: Positivitetsrte per klinikktype for BD MAX Vginl Pnel Bkteriell vginose Kontrollgruppe Cndid glbrt Cndid krusei Trichomons vginlis STD / HIV 72,7 % (224/308) 34,0 % (105/309) 2,6 % (8/309) 0,3 % (1/309) 15,9 % (49/309) Fmilieplnlegging 60,2 % (645/1,072) 33,8 % (367/1,085) 1,2 % (13/1,085) 0,1 % (1/1,085) 7,2 % (78/1,085) OB/Gyn 20,6 % (52/252) 29,6 % (75/253) 2,0 % (5/253) 0,8 % (2/253) 0,4 % (1/253) Totlt 56,4 % (921/1,632) 33,2 % (547/1,647) 1,6 % (26/1,647) 0,2 % (4/1,647) 7,8 % (128/1,647) STD / HIV 74,6 % (229/307) 33,9 % (104/307) 2,3 % (7/307) 0,0 % (0/307) 16,0 % (49/307) Fmilieplnlegging 59,5 % (649/1,090) 35,5 % (388/1,094) 1,6 % (18/1,094) 0,0 % (0/1,094) 7,4 % (81/1,094) OB/Gyn 22,0 % (56/255) 34,5 % (88/255) 2,4 % (6/255) 0,0 % (0/255) 0,4 % (1/255) Totlt 56,5 % (934/1,652) 35,0 % (580/1,656) 1,9 % (31/1,656) 0,0 % (0/1,656) 7,9 % (131/1,656) Cndid lbicns, Cndid tropiclis, Cndid prpsilosis og/eller Cndid dubliniensis YTELSESKARAKTERISTIKK Ytelseskrkteristikk for nlysen ble evluert i en studie utført ved 10 geogrfisk spredte prøveinnsmlingssteder, inkludert 7 som bre utførte prøveinnsmling, og 3 som også utførte testing med BD MAX Vginl Pnel. To (2) refernselbortorier utførte testing med BD MAX Vginl Pnel og/eller refernsemetode. For frivillige kvinnelige psienter med symptomer på vginitt eller bkteriell vginose ble én selvinnhentet og én klinikerinnhentet vginl penselprøve innhentet med BD MAX UVE Specimen Collection Kit og testet uvhengig. Ytterligere fire (4) vginle penselprøver ble innhentet for testing med refernsemetode. Tre (3) refernsemetoder ble utført på lle innhentede prøver: 1) Sttus for bkteriell vginose ble fstslått med en kombinsjon v Nugent-skår og Amsels kriterier. Prøver med norml flor etter Nugent-skår ble vurdert som negtive, prøver med BV-flor ble vurdert som positive, mens de med intermediær flor ble skilt i positive og negtive ktegorier med Amsels kriterier. Prøver som vr positive etter 2 v følgende 3 kriterier, ble vurdert som Amsels-positive: vginl ph > 4,5, nærvær v sporceller og positiv whiff-test. 2) Cndid-sttus ble fstslått med selektivt (Cndid) kromogenisk medium eller Sbourud-dekstrose / Emmons-skålkultur fulgt v PCR-oppformering og toveis sekvensering v its2-genet for identifisering v Cndid-rter. 3) Sttus for Trichomons vginlis ble fstslått med mikroskopisk visulisering v motile trikomonder i våtmontering med sltvnn v vginlsekret og med kultur. Alle positive resultter vr tilstrekkelige for å vurdere prøverefernsemetoden positiv for Trichomons vginlis. Totlt 1763 psienter ble ttt med i studien. Av disse ble 1686 psienter nsett å være smsvrende, og 77 ikke-smsvrende i henhold til protokollkriteriene. For klinikerinnhentede prøver vr ntll smsvrende prøver med rpporterbr refernsemetode og resultter fr BD MAX Vginl Pnel 1508 for bkteriell vginose, 1566 for Cndid og 1594 for Trichomons vginlis. For selvinnhentede prøver vr ntll smsvrende prøver med rpporterbr refernsemetode og resultter fr BD MAX Vginl Pnel 1531 for bkteriell vginose, 1576 for Cndid og 1604 for Trichomons vginlis. Ytelsesresultter for bkteriell vginose per sted og totlt er gitt i tbell 5. Sensitiviteten og spesifisiteten vr henholdsvis 90,5 og 86,1 % for klinikerinnhentede vginle penselprøver, og 90,7 og 84,8 % for selvinnhentede vginle penselprøver. For populsjonen som ble testet, resulterte dette i en positiv prediktiv verdi (PPV) på henholdsvis 89,0 og 88,0 % for klinikerinnhentede og selvinnhentede prøver. NPV vr på 88,0 % for begge innhentingstyper. 10

11 Innsmlingstype Klinikerinnsmlet Selvinnsmlet KI: konfidensintervll Sted Tbell 5: BV-ytelsesresultter per innhentingstype og innhentingssted Sensitivitet Spesifisitet Estimt (%)/n 95 % CI Estimt (%)/n 95 % CI 1 76,5 (26/34) (60,0, 87,6) 96,6 (113/117) (91,5, 98,7) 2 92,3 (48/52) (81,8, 97,0) 78,9 (30/38) (63,7, 88,9) 3 92,3 (36/39) (79,7, 97,3) 81,0 (17/21) (60,0, 92,3) 4 92,3 (12/13) (66,7, 98,6) 66,7 (4/6) (30,0, 90,3) 5 89,7 (166/185) (84,5, 93,3) 89,6 (121/135) (83,3, 93,7) 6 87,1 (81/93) (78,8, 92,5) 87,8 (72/82) (79,0, 93,2) 7 95,7 (44/46) (85,5, 98,8) 84,8 (28/33) (69,1, 93,3) 8 93,4 (198/212) (89,2, 96,0) 75,0 (87/116) (66,4, 82,0) 9 96,0 (144/150) (91,5, 98,2) 77,6 (52/67) (66,3, 85,9) 10 45,0 (9/20) (25,8, 65,8) 98,0 (48/49) (89,3, 99,6) Til smmen 90,5 (764/844) (88,4, 92,3) 86,1 (572/664) (83,3, 88,6) 1 80,0 (28/35) (64,1, 90,0) 94,1 (111/118) (88,3, 97,1) 2 88,5 (46/52) (77,0, 94,6) 76,9 (30/39) (61,7, 87,4) 3 92,3 (36/39) (79,7, 97,3) 70,0 (14/20) (48,1, 85,5) 4 84,6 (11/13) (57,8, 95,7) 66,7 (4/6) (30,0, 90,3) 5 88,6 (164/185) (83,3, 92,5) 89,5 (128/143) (83,4, 93,5) 6 88,3 (83/94) (80,2, 93,3) 85,4 (70/82) (76,1, 91,4) 7,0 (47/47) (92,4,,0) 80,0 (28/35) (64,1, 90,0) 8 93,5 (201/215) (89,4, 96,1) 78,5 (95/121) (70,4, 84,9) 9 97,3 (145/149) (93,3, 99,0) 73,5 (50/68) (62,0, 82,6) 10 45,0 (9/20) (25,8, 65,8) 96,0 (48/50) (86,5, 98,9) Til smmen 90,7 (770/849) (88,6, 92,5) 84,8 (578/682) (81,9, 87,3) Ytelsesresultter for kontrollgruppe (Cndid lbicns, Cndid tropiclis, Cndid prpsilosis og/eller Cndid dubliniensis) per sted og totlt er gitt i tbell 6. Sensitiviteten og spesifisiteten vr henholdsvis 90,9 og 94,1 % for klinikerinnhentede vginle penselprøver, og 92,0 og 92,0 % for selvinnhentede vginle penselprøver. For populsjonen som ble testet, resulterte dette i en positiv prediktiv verdi (PPV) på henholdsvis 87,8 og 84,4 % for klinikerinnhentede og selvinnhentede prøver. NPV vr på henholdsvis 95,7 og 96,1 % for klinikerinnhentede og selvinnhentede vginle penselprøver. Innsmlingstype Klinikerinnsmlet Selvinnsmlet KI: konfidensintervll Tbell 6: Ytelsesresultter for kontrollgruppe per innhentingstype og innhentingssted Sted Sensitivitet Spesifisitet Estimt (%)/n 95 % CI Estimt (%)/n 95 % CI 1 96,4 (53/55) (87,7, 99,0) 97,0 (98/101) (91,6, 99,0) 2 82,8 (24/29) (65,5, 92,4) 93,9 (62/66) (85,4, 97,6) 3 61,5 (8/13) (35,5, 82,3) 89,1 (41/46) (77,0, 95,3) 4,0 (3/3) (43,9,,0),0 (17/17) (81,6,,0) 5 96,7 (89/92) (90,8, 98,9) 94,2 (229/243) (90,6, 96,5) 6 91,9 (57/62) (82,5, 96,5) 96,6 (114/118) (91,6, 98,7) 7 90,9 (30/33) (76,4, 96,9) 93,9 (46/49) (83,5, 97,9) 8 95,4 (104/109) (89,7, 98,0) 93,9 (214/228) (90,0, 96,3) 9 86,4 (70/81) (77,3, 92,2) 89,1 (131/147) (83,1, 93,2) 10 70,0 (14/20) (48,1, 85,5),0 (54/54) (93,4,,0) Til smmen 90,9 (452/497) (88,1, 93,2) 94,1 (1.006/1.069) (92,5, 95,4) 1 98,2 (54/55) (90,4, 99,7) 93,1 (95/102) (86,5, 96,6) 2 93,1 (27/29) (78,0, 98,1) 93,9 (62/66) (85,4, 97,6) 3 83,3 (10/12) (55,2, 95,3) 91,3 (42/46) (79,7, 96,6) 4,0 (3/3) (43,9,,0) 94,1 (16/17) (73,0, 99,0) 5 90,3 (84/93) (82,6, 94,8) 91,0 (222/244) (86,7, 94,0) 6 85,2 (52/61) (74,3, 92,0) 91,6 (109/119) (85,2, 95,4) 7 91,2 (31/34) (77,0, 97,0) 87,8 (43/49) (75,8, 94,3) 8 96,4 (107/111) (91,1, 98,6) 91,0 (212/233) (86,6, 94,0) 9 90,0 (72/80) (81,5, 94,8) 93,9 (138/147) (88,8, 96,7) 10 90,5 (19/21) (71,1, 97,3) 96,3 (52/54) (87,5, 99,0) Til smmen 92,0 (459/499) (89,3, 94,1) 92,0 (991/1.077) (90,2, 93,5) 11

12 Ytelsesresultter for Cndid glbrt per sted og totlt er gitt i tbell 7. Sensitiviteten og spesifisiteten vr henholdsvis 75,9 og 99,7 % for klinikerinnhentede vginle penselprøver, og 86,7 og 99,7 % for selvinnhentede vginle penselprøver. For populsjonen som ble testet, resulterte dette i en positiv prediktiv verdi (PPV) på henholdsvis 84,8 og 83,6 % for klinikerinnhentede og selvinnhentede prøver. NPV vr på henholdsvis 99,5 og 99,7 % for klinikerinnhentede og selvinnhentede vginle penselprøver. D Cndid glbrt hr lv prevlens, ble en vurdering v konstruerte prøver utført for å supplere dtene fr studien. Disse prøvene ble klrgjort ved å tilsette 50 ulike stmmer v Cndid glbrt i individuelle vginlmtrikser. Snne negtive prøver, med bre vginlmtriks, ble også testet. Stmmene ble tilstt ulike klinisk relevnte nivåer og tilfeldig fordelt blnt de 3 studiestedene for testing med BD MAX Vginl Pnel. En positiv overensstemmelse på % ble oppnådd for de testede nivåene. Resulttene er vist i tbell 8. Tbell 7: Smlede ytelsesresultter for Cndid glbrt per innhentingstype og innhentingssted Innsmlingstype Klinikerinnsmlet Selvinnsmlet KI: Konfidensintervll Sted Sensitivitet Spesifisitet Estimt (%)/n 95 % CI Estimt (%)/n 95 % CI 1,0 (3/3) (43,9,,0),0 (153/153) (97,6,,0) 2 0,0 (0/1) (0,0, 79,3),0 (94/94) (96,1,,0) 3,0 (1/1) (20,7,,0),0 (58/58) (93,8,,0) 4,0 (1/1) (20,7,,0),0 (19/19) (83,2,,0) 5,0 (5/5) (56,6,,0),0 (330/330) (98,8,,0) 6 40,0 (2/5) (11,8, 76,9),0 (175/175) (97,9,,0) 7 Ingen dt for sensitivitetsberegning,0 (82/82) (95,5,,0) 8 60,0 (3/5) (23,1, 88,2) 99,1 (329/332) (97,4, 99,7) 9,0 (6/6) (61,0,,0) 99,5 (221/222) (97,5, 99,9) 10 50,0 (1/2) (9,5, 90,5),0 (72/72) (94,9,,0) Til smmen 75,9 (22/29) (57,9, 87,8) 99,7 (1.533/1.537) (99,3, 99,9) 1,0 (3/3) (43,9,,0),0 (154/154) (97,6,,0) 2 0,0 (0/1) (0,0, 79,3),0 (94/94) (96,1,,0) 3,0 (1/1) (20,7,,0),0 (57/57) (93,7,,0) 4,0 (1/1) (20,7,,0),0 (19/19) (83,2,,0) 5,0 (5/5) (56,6,,0) 99,4 (330/332) (97,8, 99,8) 6 83,3 (5/6) (43,6, 97,0),0 (174/174) (97,8,,0) 7 Ingen dt for sensitivitetsberegning 98,8 (82/83) (93,5, 99,8) 8 60,0 (3/5) (23,1, 88,2) 99,4 (337/339) (97,9, 99,8) 9,0 (6/6) (61,0,,0),0 (221/221) (98,3,,0) 10,0 (2/2) (34,2,,0),0 (73/73) (95,0,,0) Til smmen 86,7 (26/30) (70,3, 94,7) 99,7 (1.541/1.546) (99,2, 99,9) KI: konfidensintervll Tbell 8: Resultter per ktegori for konstruerte prøver v Cndid glbrt Cndid glbrt Prosentvis overensstemmelse Ktegori Innhold (x LoD) Estimt (%)/n 95 % CI Høyt positivt 10 og <20,0 (5/5) (56,6,,0) Modert positiv 2 og <10,0 (20/20) (83,9,,0) Lv positiv 1 og <2,0 (25/25) (86,7,,0) Snn negtiv 0,0 (50/50) (92,9,,0) Ytelsesresultter for Cndid krusei per sted og totlt er vist i tbell 9. Ingen Cndid krusei-positive prøver ble identifisert i studien, derfor er ingen dt tilgjengelige for sensitivitetsberegning. Spesifisiteten vr på henholdsvis 99,7 og % for klinikerinnhentede og selvinnhentede vginle penselprøver. PPV kn ikke beregnes siden prevlensverdien vr null. NPV vr på henholdsvis 99,7 og % for klinikerinnhentede og selvinnhentede vginle penselprøver. D Cndid krusei er en sjelden nlytt, ble en vurdering v konstruerte prøver utført for å supplere dtene fr studien. Disse prøvene ble klrgjort ved å tilsette 50 ulike stmmer v Cndid krusei i individuelle vginlmtrikser. Snne negtive prøver, med bre vginlmtriks, ble også testet. Stmmene ble tilstt ulike klinisk relevnte nivåer og tilfeldig fordelt blnt de 3 studiestedene for testing med BD MAX Vginl Pnel. En positiv overensstemmelse på % ble oppnådd for de testede nivåene. Resulttene er vist i tbell

13 Tbell 9: Smlede ytelsesresultter per innhentingstype for Cndid krusei Innsmlingstype Sted Sensitivitet Spesifisitet Estimt (%)/n 95 % CI Estimt (%)/n 95 % CI Klinikerinnsmlet Til smmen Ingen dt for sensitivitetsberegning 99,7 (1562/1566) (99,3, 99,9) Selvinnsmlet Til smmen Ingen dt for sensitivitetsberegning,0 (1576/1576) (99,8,,0) KI: konfidensintervll KI: konfidensintervll Tbell 10: Resultter per ktegori for konstruerte prøver v Cndid krusei Cndid krusei Prosentvis overensstemmelse Ktegori Innhold (x LoD) Estimt (%)/n 95 % CI Høyt positivt 10 og <20,0 (5/5) (56,6,,0) Modert positiv 2 og <10,0 (20/20) (83,9,,0) Lv positiv 1 og <2,0 (25/25) (86,7,,0) Snn negtiv 0,0 (50/50) (92,9,,0) Ytelsesresultter for Trichomons vginlis per sted og totlt er gitt i tbell 11. Sensitiviteten og spesifisiteten vr henholdsvis 92,7 og 99,3 % for klinikerinnhentede vginle penselprøver, og 92,9 og 99,3 % for selvinnhentede vginle penselprøver. For populsjonen som ble testet, resulterte dette i en positiv prediktiv verdi (PPV) på henholdsvis 91,4 og 91,5 % for klinikerinnhentede og selvinnhentede prøver. NPV vr på 99,4 % for begge innhentingstyper. Innsmlingstype Klinikerinnsmlet Selvinnsmlet KI: konfidensintervll Tbell 11: Ytelsesresultter per innhentingstype og innhentingssted for Trichomons vginlis Sted Sensitivitet Spesifisitet Estimt (%)/n 95 % CI Estimt (%)/n 95 % CI 1 Ingen dt for sensitivitetsberegning,0 (168/168) (97,8,,0) 2,0 (4/4) (51,0,,0) 97,9 (92/94) (92,6, 99,4) 3,0 (17/17) (81,6,,0) 97,8 (45/46) (88,7, 99,6) 4 60,0 (3/5) (23,1, 88,2),0 (15/15) (79,6,,0) 5 83,3 (20/24) (64,1, 93,3) 99,4 (308/310) (97,7, 99,8) 6 90,9 (10/11) (62,3, 98,4) 98,3 (170/173) (95,0, 99,4) 7,0 (6/6) (61,0,,0),0 (67/67) (94,6,,0) 8 93,1 (27/29) (78,0, 98,1) 99,4 (320/322) (97,8, 99,8) 9,0 (27/27) (87,5,,0) 99,5 (206/207) (97,3, 99,9) 10,0 (1/1) (20,7,,0),0 (68/68) (94,7,,0) Til smmen 92,7 (115/124) b (86,8, 96,1) 99,3 (1.459/1.470) c (98,7, 99,6) 1 Ingen dt for sensitivitetsberegning,0 (169/169) (97,8,,0) 2,0 (5/5) (56,6,,0) 98,9 (92/93) (94,2, 99,8) 3,0 (17/17) (81,6,,0) 97,8 (44/45) (88,4, 99,6) 4 60,0 (3/5) (23,1, 88,2),0 (15/15) (79,6,,0) 5 83,3 (20/24) (64,1, 93,3) 99,0 (309/312) (97,2, 99,7) 6,0 (12/12) (75,8,,0) 98,3 (169/172) (95,0, 99,4) 7,0 (6/6) (61,0,,0),0 (68/68) (94,7,,0) 8 90,0 (27/30) (74,4, 96,5) 99,4 (326/328) (97,8, 99,8) 9,0 (27/27) (87,5,,0) 99,5 (205/206) (97,3, 99,9) 10,0 (1/1) (20,7,,0),0 (69/69) (94,7,,0) Til smmen 92,9 (118/127) b (87,1, 96,2) 99,3 (1.466/1.477) c (98,7, 99,6) b 9 flskt negtive resultter ble registrert. Av disse ble 7 påvist negtive med en FDA-godkjent molekylær metode. c 11 flskt positive resultter ble registrert. Av disse ble 10 påvist positive med en FDA-godkjent molekylær metode Av lle prøvene som opprinnelig ble evluert med BD MAX Vginl Pnel, ble 3,1 og 2,9 % opprinnelig rpportert som uvklrt for henholdsvis kliniker- og selvinnhentede prøver. Etter en gyldig gjenttt test forble 1,3 og 0,6 % uvklrt for henholdsvis kliniker- og selvinnhentede prøver. Resulttene er vist i tbell

14 Tbell 12: Uløst-frekvenser Innsmlingstype Opprinnelig uvklrt-frekvens Endelig uvklrt-frekvens med gyldig gjenttt test Estimt (%)/n 95 % CI Estimt (%)/n 95 % CI Klinikerinnsmlet 3,1 (52/1680) (2,4, 4,0) 1,3 (21/1671) (0,8, 1,9) Selvinnsmlet 2,9 (48/1682) (2,2, 3,8) 0,6 (10/1679) (0,3, 1,1) Av lle prøvene som opprinnelig ble evluert med BD MAX Vginl Pnel, ble 3,7 og 2,8 % opprinnelig rpportert som uvklrt for henholdsvis kliniker- og selvinnhentede prøver. Etter en gyldig gjenttt test forble 0,8 og 0,6 % uvklrt for henholdsvis kliniker- og selvinnhentede prøver. Resulttene er vist i tbell 13. Innsmlingstype Tbell 13: Ubestemt-frekvens Opprinnelig ubestemt-frekvens Endelig ubestemt-frekvens med gyldig gjenttt test Estimt (%)/n 95 % CI Estimt (%)/n 95 % CI Klinikerinnsmlet 3,7 % (62/1680) (2,9 %, 4,7 %) 0,8 % (13/1671) (0,5 %, 1,3 %) Selvinnsmlet 2,8 % (47/1682) (2,1 %, 3,7 %) 0,6 % (10/1679) (0,3 %, 1,1 %) Av lle prøvene som opprinnelig ble evluert med BD MAX Vginl Pnel, ble 1,4 % opprinnelig rpportert som ufullstendige. Etter en gyldig gjenttt test forble 0,2 % ufullstendige. Resulttene er vist i tbell 14. Innsmlingstype Tbell 14: Ufullstendig-frekvenser Opprinnelig ufullstendig-frekvens Endelig ufullstendig-frekvens med gyldig gjenttt test Estimt (%)/n 95 % CI Estimt (%)/n 95 % CI Klinikerinnsmlet 1,4 % (24/1680) (1,0 %, 2,1 %) 0,2 % (3/1671) (0,1 %, 0,5 %) Selvinnsmlet 1,4 % (24/1682) (1,0 %, 2,1 %) 0,2 % (4/1679) (0,1 %, 0,6 %) Anlytisk sensitivitet Den nlytiske sensitiviteten (deteksjonsgrensen LoD) for BD MAX Vginl Pnel ble bestemt slik: To (2) representtive bkteriesuspensjoner ble klrgjort for hver v målorgnismene som ble påvist med BD MAX Vginl Pnel. Positive prøver ble klrgjort ved å inokulere simulert vginlmtriks i BD MAX UVE Smple Buffer med flere konsentrsjoner v hver representtiv stmme. Hver suspensjon ble testet med 24 replikter per LoD-konsentrsjon ved bruk v flere eksemplrer v BD MAX System og 3 ulike produksjons-lot-er v BD MAX Vginl Pnel. Anlytisk sensitivitet (LoD) ble definert som den lveste konsentrsjonen der 95 % v lle replikter testet positive. Tbell 15 viser LoD for Vginitis Mster Mix-målene og Vginosis Mster Mix-mrkørene. Anlysemål Vginitt Bkteriell vginose Mrkører Orgnisme Tbell 15. Deteksjonsgrense Stmme ATCC-nr. LoD Konsentrsjon (95 % konf.intervll) Cndid lbicns (36 481, ) Cndid glbrt (147, 620) Cndid krusei Cndid dubliniensis MYA (3 810, 9 455) Cndid tropiclis (198, 1 111) Cndid prpsilosis (19 779, ) Enhet CFU/penselprøve Trichomons vginlis (71, 290) Celler/pensel Atopobium vgine BAA (79, 200) Grdnerell vginlis (919, 2263) Lctobcillus crisptus (55, 120) Lctobcillus jensenii (474, 1233) Megspher (2137, 5401) BVAB 2 NA b 464 (294, 731) C. krusei LoD ble bestemt ved å teste flere stmmer. Det ble ikke bestemt noe konfidensintervll. b LoD bestemt med plsmid-dna. CFU/penselprøve Eksemplrer/pensel 14