Elucigene QST*R -produkter Bruksanvisning

Transkript

1 Elucigene QST*R -produkter Bruksanvisning Produkt Størrelse Katalogkode Elucigene QST*Rplusv2 50 tester AN0PLB2 Elucigene QST*R 50 tester AN003B2 Elucigene QST*R-XYv2 50 tester AN0XYB2 Elucigene QST*R tester AN013BX Elucigene QST*R tester AN018BX Elucigene QST*R tester AN021BX Til in vitro-diagnostisk bruk Fremstilt av: Elucigene Diagnostics Greenheys House Pencroft Way Manchester Science Park Manchester M15 6JJ Salg, kundetjeneste og teknisk støtte: T: +44 (0) F: +44 (0) E: E: Elucigene Diagnostics is the trading name of Delta Diagnostics (UK) Limited., a company registered in England and Wales, registration number AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 1 av 35

2 Elucigene QST*R Elucigene QST*R produktutvalg er DNA-baserte, multipleksede analyser for hurtig, prenatal bestemmelse av aneuploidstatus for de tre mest vanlige levedyktige autosomale trisomiene og kjønnskromosomene X og Y. Elucigene QST*R-settene er tilgjengelige i formatene oppført nedenfor. Du finner mer informasjon om settene i QST*R-utvalget på Beregnet bruk QST*Rplusv2 For den rutinemessige in vitro kvantitativ diagnose av de tre mest levedyktige autosomale trisomiene: trisomi 13 (Patau syndrom), trisomi 18 (Edwards syndrom) og trisomi 21 (Down syndrom). Settet inkluderer også markører for X- og Y-kromosomet og TAF9Lmarkøren for bestemmelsen av kjønnsstatus. Metoden som brukes av Elucigene QST*Rplusv2-settet er QF-PCR-teknikken (Quantitative Fluorescence-Polymerase Chain Reaction). Anordningene skal brukes på DNA, ekstrahert fra enten amnionvæske eller chorionis villus-prøver (CVS) som tas under amniocentese. Den tiltenkte målbefolkningen er gravide kvinner som har blitt vurdert til å ha høy risiko for å bære et berørt foster, enten i henhold til biokjemiske eller ultralyddiagnostiske prosedyrer, eller vurdert til å ha høy risiko enten på grunn av tidligere familiehistorie eller morens alder. Anordningen er beregnet brukt i forbindelse med andre diagnostiske prosedyrer for å støtte eller avvise den foreslåtte kliniske diagnosen. Anordningen skal bare brukes av fagfolk i et molekylært eller cytogenetisk laboratoriemiljø. QST*R For den rutinemessige in vitro kvantitativ diagnose av de tre mest levedyktige autosomale trisomiene: trisomi 13 (Patau syndrom), trisomi 18 (Edwards syndrom) og trisomi 21 (Down syndrom). Metoden som brukes av Elucigene QST*R-settet er QF-PCR-teknikken (Quantitative Fluorescence-Polymerase Chain Reaction). Anordningene skal brukes på DNA, ekstrahert fra enten amnionvæske eller chorionis villus-prøver (CVS) som tas under amniocentese. Den tiltenkte målbefolkningen er gravide kvinner som har blitt vurdert til å ha høy risiko for å bære et berørt foster, enten i henhold til biokjemiske eller ultralyddiagnostiske prosedyrer, eller vurdert til å ha høy risiko enten på grunn av tidligere familiehistorie eller morens alder. Anordningen er beregnet brukt i forbindelse med andre diagnostiske prosedyrer for å støtte eller avvise den foreslåtte kliniske diagnosen. Anordningen skal bare brukes av fagfolk i et molekylært eller cytogenetisk laboratoriemiljø. QST*R-XYv2 For rutinemessig in vitro kvantitativ diagnose av for analyse av kjønnskromosomstatus, inkludert det vanlige aneuploide. Metoden som brukes av Elucigene QST*R-XYv2-settet er QF-PCR-teknikken (Quantitative Fluorescence-Polymerase Chain Reaction). Anordningene skal brukes på DNA, ekstrahert fra enten amnionvæske eller chorionis villus-prøver (CVS) som tas under amniocentese. Den tiltenkte målbefolkningen er gravide kvinner som har blitt vurdert til å ha høy risiko for å bære et berørt foster, enten i henhold til biokjemiske eller ultralyddiagnostiske prosedyrer, eller vurdert til å ha høy risiko enten på grunn av tidligere familiehistorie eller morens alder. Anordningen er beregnet brukt i forbindelse med andre diagnostiske prosedyrer for å støtte eller avvise den foreslåtte kliniske diagnosen. Anordningen skal bare brukes av fagfolk i et molekylært eller cytogenetisk laboratoriemiljø. AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 2 av 35

3 QST*R-13, QST*R-18, QST*R-21 Tilleggssettene inneholder ekstra autosomale markører som brukes i forbindelse med QST*R eller QST*Rplusv2, for den rutinemessige kvantitative in vitro-diagnosen de tre mest vanlige levedyktige autosomale trisomier: henholdsvis trisomi 13 (Patau syndrom), trisomi 18 (Edwards syndrom) og trisomi 21 (Down syndrom). Disse settene er tilgjengelig for utvidet kromosomtesting, der dette er nødvendig, eller for bekreftelse av positive resultater. Metoden som brukes med disse settene er QF-PCRteknikken (Quantitative Fluorescence-Polymerase Chain Reaction). Anordningene skal brukes på DNA, ekstrahert fra enten amnionvæske eller chorionis villus-prøver (CVS) som tas under amniocentese. Den tiltenkte målbefolkningen er gravide kvinner som har blitt vurdert til å ha høy risiko for å bære et berørt foster, enten i henhold til biokjemiske eller ultralyddiagnostiske prosedyrer, eller vurdert til å ha høy risiko enten på grunn av tidligere familiehistorie eller morens alder. Anordningen er beregnet brukt i forbindelse med andre diagnostiske prosedyrer for å støtte eller avvise den foreslåtte kliniske diagnosen. Anordningen skal bare brukes av fagfolk i et molekylært eller cytogenetisk laboratoriemiljø. Oppsummering og forklaring Down syndrom, Edwards syndrom og Patau syndrom er de tre vanligste, levedyktige autosomale trisomiene. Levendefødte insidenser er henholdsvis omtrent 1 av 700, 1:3.000 og 1: Turner syndrom hos kvinner og Klinefelter syndrom hos menn er de mest vanlige kjønnskromosom-aneuploidiene. Den mest vanlige årsaken til Turner syndrom er monosomi for X-kromosomet (45, X karyotype) og for Klinefelter syndromet en ekstra kopi av X-kromosomet (47, XXY karyotype). Levendefødte insidenser er mellom 1:2.000 til 1:5.000 kvinner for Turner syndrom og mellom 1: 500 og 1:650 menn for Klinefelter syndrom. Risikoen for å få et barn med Down syndrom øker betydelig med morens alder, fra omtrent 1:1.600 i alderen til 1:200 i alderen 35 og 1:19 i alderen 45 og eldre. Gravide kvinner tilbys rutinemessig screening for Down syndrom i graviditetens første trimester. En standardtest er den såkalte OSCAR-testen, One Stop Clinical Assessment of Risk som utføres mellom 10 og 13,5 ukers graviditet. Dette er en kombinasjon av to biokjemiske markører, fri beta hcg (humant chorionisk gonadotropin) og PAPP-A (Pregnancy Associated Plasma Protein-A) med måling av tykkelsen på den føtale nuchale bretten (nuchal gjennomskinnlighet) (1). En kombinasjon av resultatene av disse tre testene gir et generelt risikotall. Kvinner som blir ansett å ha økt risiko for å få et barn med Down syndrom, blir da tilbudt en amniocentesis-test for å teste direkte for unormaliteten. Amniocentesis er en invasiv test og innebærer innføring av en nål, veiledet med ultralyd, inn i fostervannsekken som omgir fosteret. En liten prøve, vanligvis ml amnionvæske som inneholder føtale celler, blir trukket ut og testet. Down syndrom ble oppkalt etter Dr John Langdon Down i 1866, selv om det ble beskrevet tidligere. Det er forårsaket av trisomi for alle eller deler av kromosom 21 (2). I tillegg til en kognitiv funksjonshemming av varierende grad, har personer med Down syndrom vanligvis en rekke felles karakteristikker, inkludert hypotoni (dårlig muskeltone), en fremstående tunge, mandelformede øynene, forårsaket av en epikantisk fold, skråstilte palpebrale sprekker, enkelt palmar fold og kortere enn normale lemmer. De har også økt risiko for kongenitale hjertedefekter og senere i livet kan du utvikle en form for Alzheimer. Edward syndrom ble først beskrevet av Dr John Edwards i Det er forårsaket av trisomi for alle eller deler av kromosom 18. Som ved Down syndrom, er morens alder relatert til økt risiko for å få et barn med Edwards syndrom. Typiske kliniske trekk omfatter lav fødselsvekt, hjertedefeketer, gastrointestinal misdannelse, urogenital misdannelse, AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 3 av 35

4 nevrologiske problemer og kraniofaciale misdannelser. Median overlevelsestid er omtrent 4 dager. Patau syndrom er oppkalt etter Dr Klaus Patau, som beskrev sykdommen med kromosomal assosiasjon. Det er forårsaket av trisomi for alle eller deler av kromosom 13. Spedbarn med Patau syndrom er alvorlig rammet med flere misdannelser. Typiske karakteristikker inkluderer intrauterin veksthemming, lav fødselsvekt, medfødte hjertefeil, mikrocefali, holoprosencefali med ganespalte og mikroftalmi, sentral apné, polydaktyli og rocker bottom -føtter. Median overlevelsestid er omtrent 2,5 dager. Turner syndrom hos kvinner er forårsaket av monosomi for X-kromosomet. Omtrent 98 % av Turner-fostre vil spontanaborteres. Overlevende barn viser flere typiske karakteristikker, inkludert kortvoksthet, primær amenorré, svømmehudhals (fra cystisk hygrom, et væskefylt hulrom, i utero). De lider også vanligvis av kongenital hjertesykdom og kan ha hesteskoformede nyrer. Klinefelter syndrom hos menn er forårsaket av en ekstra kopi av X-kromosomet. Klinefelter-menn er infertile og kan ha en mild kognitiv svekkelse. De er vanligvis høyere enn gjennomsnittet, kan utvikle gynekomasti som krever kirurgisk reduksjon og har økt risiko for å utvikle osteoporose på grunn av reduserte testeronnivåer. QST*Rplusv2 inkluderer markører for alle tre autosomene og både X og Y. Det er utformet for å detektere hele kromosomaneuploider i disse kromosomene, men vil ikke detektere balanserte strukturelle omlegginger eller skjelne mellom aneuploidi forårsaket av nondisjunksjonhendelse eller en ubalansert omlegging. Prinsipper for prosedyren Metoden som brukes av Elucigene QST*R-settene er QF-PCR-teknikken (Quantitative Fluorescence-Polymerase Chain Reaction) (3-7). Ved hjelp av PCR-amplifisering, rettes fluorescerende fargestoff markerte primere mot sterkt polymorfe områder av DNAsekvensen, kalt korte tandemrepetisjoner (STR) som er plassert på kromosomene av interesse. Hver målsatt STR-markør er spesifikk for kromosomet der den er plassert. Kopinummeret på STR-markøren kan derfor bli diagnostisk for kopinummeret på kromosomet. Det har blitt valgt informative STR-markører som viser høy heterogenitet, slik at kopinummeret lett kan bestemmes. En normal diploidprøve har det normale komplementet av to av hver av de somatiske kromosomene, og dermed to alleler av et kromosomspesifikk STR, bestemt av QF-PCR-teknikken som to topper i forholdet 1:1. Observasjon av en ekstra STR-allele som enten et mønster med tre topper i et 1:1:1-forhold, eller et mønster med to topper i et 2:1- eller 1:2-forhold er diagnostisk for tilstedeværelsen av en tilleggssekvens som i sin tur kan representere et ekstra kromosom, som er tilfelle ved en trisomi. Amplifiserte produkter fra QF-PCR-teknikken blir analysert kvantatavt på en genetisk kapillærelektroforese-analysator for å bestemme antallet analyserte STR-markører. AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 4 av 35

5 Advarsler og forholdsregler 2. Den normale DNA-kontrollen som følger med i settene har blitt uavhengig testet og funnet å være negativ for hepatitt B-virus (HBV), hepatitt C-virus (HCV) og Human Immunodeficiency Virus (HIV) 1 og Vær forsiktig ved håndtering av materiale av human opprinnelse. Alle prøver skal anses å være potensielt infeksiøse. Ingen testemetoder kan gi full garanti for at HBV, HCV, HIV eller andre infeksiøse agenser er fraværende. 3. Håndtering av prøver og testkomponenter, samt bruk, oppbevaring og avhending av disse, skal gjøres i samsvar med fremgangsmåtene som fremgår av gjeldende nasjonale retningslinjene eller regler for biologisk sikkerhet. 4.I overensstemmelse med gjeldende god laboratoriepraksis, skal laboratoriene behandle sine egne interne kvalitetskontrollprøver av kjent genotype i hver analyse, slik at validiteten av prosedyren kan vurderes. 5.Hvis esken med settet er skadet, kan det finnes skade på innholdet. Ikke bruk settet. Kontakt kundeservice. AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 5 av 35

6 Symboler som brukes på etiketter Symbolene brukt på alle etiketter og emballasje oppfyller den harmoniserte standarden ISO Produsent Antall tester Se bruksanvisningen X C Oppbevares under angitt temperatur Brukes før angitt dato Katalogkode Parti- eller batchnummer In vitro-diagnostisk medisinsk anordning AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 6 av 35

7 Vedlagte materialer Alle komponenter skal oppbevares under -20 C. Hvert sett inneholder: (TA): 2 x 250 µl (50 tester) eller 1 x 100 µl (10 tester) av QST*R reaksjonsblanding som inneholder primere for amplifisering av et antall STR (kort tandemrepetisjon)-markører. Se vedlegg 2 for detaljer om markørene i hvert sett. QST*R-reaksjonsblandingen inneholder også DNA-polymerase og deoxynukleotide trifosfater i buffer. Sett 0,2 ml PCR-hetteglass Komponentdel nr. Elucigene QST*Rplusv2 Gjennomsiktig Elucigene QST*R Oransje Elucigene QST*R-XYv2 Rosa Elucigene QST*R-13 Grønn Elucigene QST*R-18 Fiolett Elucigene QST*R-21 Gul (DC): 1 x 50 µl hetteglass DNA-kontroll, diploid for markørene som detekteres av Elucigene QST*R: Sett Komponentdel nr. Elucigene QST*Rplusv Elucigene QST*R Elucigene QST*R-XYv Elucigene QST*R Elucigene QST*R Elucigene QST*R (10) x 0,2 ml PCR-hetteglass, fargekodet som beskrevet ovenfor. Sett-preparering og oppbevaring Når settet åpnes, anbefaler vi at reaksjonsblandingen blir dispensert inn i 0,2 ml PCRhetteglassene som følger med (eller tilsvarende) i 10 µl volumer og frosset ved -20 C. Sørg for at innholdet i hetteglassene er grundig opptint og blandet før dispensering AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 7 av 35

8 Nødvendige materialer som ikke følger med Generelt Forbruksvarer for laboratoriet hansker, pipettespisser. Laboratorieutstyr presisjonspipetter (2 sett: 1 til håndtering av preamplifisering og 1 til postamplifisering: fortrinnsvis positive forskyvningspipetter), verneklær, vorteksblander, mikrofuge, sentrifuge for 96-brønners mikrotiterplate. DNA-ekstraksjon DNA-preparering InstaGene Matrix (Bio-Rad Laboratories, kat.nr ), sterilt avionisert vann. PCR-amplifikasjon Termisk variator som rommer 96-brønners mikrotiterplater, eller 0,2 ml hetteglass med en temperaturnøyaktighet på +/- 1 C mellom 33 C and 100 C og statisk temperaturensartethet på +/- 1 C. Kapillærelektroforese Kapillærelektroforese GeneScan 500 LIZ standard størrelse (ABI kat. nr ), GeneScan 600 LIZ (ABI kat. nr ) eller GeneScan 600v2 LIZ (ABI kat. nr ), DS-33 (fargesett G5) matrisestandard (ABI kat. nr ), POP-7-polymer (ABI kat. nr ), 10x Genetic Analyzer Buffer (ABI kat. nr ) og Hi-Diformamid (ABI kat. nr ). Applied Biosystems ABI 3130 og 3500 Genetic Analyzer (med GeneMapperprogramvare), 36 cm kapillærarray (50 cm kapillærarray for 3500 Genetic Analyzer), 96- optisk brønnplate, 96-septabrønn, 96-brønnkassetter. Dataanalyse En av følgende programvarepakker for dataanalyse er påkrevd: GeneMapper 3.7 (Applied Biosystems Inc.) eller høyere, eller GeneMarker 1.65 (SoftGenetics LLC) eller høyere. Ekstra Elucigene QST*R-dokumentasjon Denne bruksanvisningen inkluderer et grunnavsnitt om tolkning av resultatene som oppnås. Et tillegg til Guide to Interpretation (tolkningsveiledningen) med eksempler og ordliste, og en Guide to Analysis (analyseveiledning) er tilgjengelig på Elucigene Diagnostics nettsted: Prøvetaking og -oppbevaring Det bør brukes chorionic villus- (CV)- eller amniovæske (AF)-prøver. Prøveoppsamlingsanordninger har sporadisk vært rapportert å være skadelige for integriteten ved visse analytter og kan innvirke på enkelte metodeteknologier. Det anbefales at hver bruker påser at den valgte anordningen brukes i samsvar med produsentens instruksjoner og at prøveoppsamlingsanordningene og alternative DNAprepareringsmetoder er kompatible med denne testen. AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 8 av 35

9 DNA-ekstraksjon Elucigene QST*R-settene er validerte med InstaGene-matrisemetode for DNAekstrahering og kan utføres i ett enkelt rør, og derved eliminere nødvendigheten av rør-tilrør-overføringer. Andre ekstraksjonsmetoder har vist seg å gi like pålitelige resultater, for eksempel Qiagen QIAamp -settene. InstaGene-metoden for DNA-ekstraksjon er beskrevet nedenfor. InstaGene ekstraksjonsmetode Amnionvæske (AF) Omtrent 1-2 ml av amnionvæske skal brukes. Chorionic Villus (CV) CV-prøver skal rengjøres omhyggelig for å fjerne eventuell vedhengt uterusslimhinne. Det er viktig at celler fra mer enn én region på prøven blir testet, og at celler fra mesenkymkjernen er tilstede. En liten alikvot av cellesuspensjonen, klargjort for konvensjonelt oppsett av cellekultur, anbefales til QST*R analyse. Dette sørger for at QST*R-resultatet som oppnås fra den samme populasjonen av celler brukes til karyotypeanalyse. 1. Resuspender InstaGene-matrisen på den magnetiske agitatoren og still inn på medium hastighet i minst 5 minutter. 2. Sentrifuger prøven (AF eller CV) ved g i 1 minutt for å pelletere cellene. 3. Ta prøvene ut av sentrifugen og sjekk pelleten visuelt for blodfarging. Gjør notater om prosentdelen av blodfarging, hvis dette er aktuelt. 4. Fjern og kasser omhyggelig supernatanten fra pelleten og sørg for at pelleten ikke berøres. La det bli igjen omtrent µl av supernatanten for resuspendering av pelleten. 5. Bland prøven grundig ved hjelp av vorteksering. 6. Hvis mer enn 50 % av blodfarging blir observert, fortsett til trinn 7. Hvis mindre enn 50 % blodfarging blir observert, fortsett til trinn Tilsett 200 µl sterilt avionisert vann til cellepelleten. Bland grundig ved hjelp av vorteksering. Sentrifuger ved g i 1 minutt, fjern supernatanten og la µl av supernatanten bli igjen for resuspendering av pelleten. Merknad: Dette ekstra vasketrinnet bidrar til å lysere de røde blodcellene og fjerne hem som kan inhibere PCR. 8. Tilsett 200 µl InstaGene-matrise fra trinn 1 til prøvene ved bruk av en pipettespiss med stort hull, for eksempel µl. Merknad: For å optimalisere ekstraksjonsprotokollen, kan det tilsatte volumet av InstaGene-matrise (Chelex-100 resin) varieres med 100 µl InstaGene-matrise for små AF-cellepelleter (såvidt synlige), eller 300 µl for store pelleter (som dekker basis på røret), CV og vevsprøver. Registrer mengden av InstaGene-matrise tilsatt hver prøve. 9. Bland prøvene grundig ved hjelp av vorteksering, og inkuber ved 100 C i 8 minutter i en varm blokk eller vannbad. 10. Bland grundig på nytt ved å vorteksere ved høy hastighet i 10 sekunder. AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 9 av 35

10 11. Sentrifuger prøvene ved g i 3 minutter. Supernatanten inneholder det ekstraherte DNA-materialet. 12. Fortsett til oppsett av PCR eller oppbevar den ekstraherte DNA ved -20 C til DNA er nødvendig. DNA-konsentrasjon Det anbefales at det brukes alternative DNA-ekstraksjonsmetoder og at prøvetypene blir grundig evaluert med Elucigene QST*R-testen før resultatene brukes til diagnostiseringsformål. Under optimale PCR-forhold, og ved bruk av anbefalte prøveinjeksjonsinnstillinger* som beskrevet i kapillærkolonnens kjøremodul (side 12), blir akseptable resultater kontinuerlig oppnådd med innsatte DNA-mengder på 1,25 ng til 10 ng. *Merknad: Innstillingene for prøveinjeksjon kan endres slik at de tilpasses mengden amplikon som produseres under PCR-reaksjonen, som kan variere på grunn av mengden av genomisk DNA som tilsettes. Mindre amplikon kan brukes i kolonnen til analyse ved å redusere injeksjonstiden. Omvendt kan mer amplikon brukes i kolonnen til analyse ved å øke enten tiden eller spenningen ved injeksjonen. Tidligere amplifiserte prøver kan reinjiseres flere ganger for ny analyse. Testprotokoll Amplifikasjonsprosedyre Der prøvene har blitt ekstrahert med InstaGene-metoden, anbefaler vi å bruke ufortynnet supernatant direkte i PCR-reaksjonen. Merknad: Trinn 3-5 skal utføres på et sted fritt for DNA, slik at risikoen for kontaminasjon minimeres. Det bør også iverksettes tiltak for å unngå kontaminering med PCR-produktet. 1. Programmer den termiske variatoren for ett enkelt syklustrinn for å aktivere DNApolymerase ved 95 C i 15 minutter, forbundet til et amplifikasjonssyklusprogram på 30 minutter ved 95 C (denaturering), 1 minutt og 30 sekunder ved 59 C (annealing) og 1 minutt og 30 sekunder ved 72 C (forlengelse) i 26 sykler. Dette bør forbindes til en 30 minutters tidsforsinkelsesfil ved 72 C (forlengelse) i den siste syklusen. Enzymaktivering Sykling Endelig forlengelse 95 C 95 C 15 min. 30 sek. 72 C 72 C 1 min 30 sek. 30 min. 59 C Omgivelsestemperatur 1 min 30 sek. 26 sykler AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 10 av 35

11 2. En negativ (vann) kontroll skal inkluderes i hver PCR-kjøring. Det kan også vurderes å være passende å inkludere andre kontroller, for eksempel positiv normal (DNA-kontroll følger med) og positiv trisomi-kontroll (DNA følger ikke med). 3. Tin opp tilstrekkelige antall hetteglass med pre-alikvotert QST*R-reaksjonsblanding for antallet prøver og kontroller som skal kjøres (se merknad under Materialer som følger med) og sentrifuger hetteglassene ved i 10 sekunder. 4. Bruk separate pipettespisser og tilsett 2,5 µl test-dna i et prøvehetteglass som inneholder 10 µl QST*R-reaksjonsblanding og bland ved å pipettere opp og ned. Gjør dette med alle prøvene som skal testes. DNA skal ikke tilsettes PCR-hetteglasset for negativ kontroll, i stedet tilsettes 2,5 µl sterilt distillert vann. Merknad: Vær forsiktig for å unngå å kontaminere PCR-reaksjonen med InstaGeneresin. 5. Sentrifuger kort hetteglassene til all væske er på bunnen av hvert hetteglass. 6. Sett hetteglassene fast på plass i blokken på den termiske variatoren. Start aktiviseringsprogrammet på 95 C, fulgt av amplifikasjonsprogrammet (se trinn 1). 7. Når amplifiseringssyklusprogrammet er ferdig, kan prøvene oppbevares i romtemperatur over natten, eller ved 2-8 C i opp til 7 dager før de analyseres med kapillærelektroforese. Kapillærelektroforese Det anbefales at hver bruker påser at det valgte utstyret brukes i henhold til produsentens instruksjoner, og er kompatibelt med testen. I denne sammenhengen er nøkkelparametrene polymeret og kapillærarrayet. Optimale resultater kan oppnås ved følgende kapillærelektroforeseforhold på en ABI3130 eller ABI3500 Genetic Analyzer. 1. Kombiner 6,85 μl av standardsstørrelse med 250 μl Hi-Di formamid og bland grundig (tilstrekkelig blanding til 16 brønner). Dispenser 15 μl av blandingen i nødvendig antall brønner på en 96 optisk brønnplate. 2. Tilsett 3 μl testprøve PCR-produkt til blanding av standardstørrelse (fra trinn 1) som allerede er dispensert inn i platen og bland med pipetten. Forsegle platen. 3. Denaturer PCR-produktet som er dispensert i den optiske platen på den termiske variatoren med følgende parametre: 94 C i 3 minutter forbundet med 4 C i 30 sekunder. 4. Sentrifuger platen ved g i 10 sekunder for å fjerne eventuelle bobler i brønnene og last den over på Genetic Analyzer. AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 11 av 35

12 ABI3130 GENETIC ANALYZER Opprett et prøveark med 3130 datainnsamlingsprogramvaren med følgende innstillinger: Sample name (Prøvenavn): dette må være det samme prøvespesifikke navnet eller nummeret. Run Owner (Kjøringseier): velg standard eier for laboratoriet. Run Protocol (Kjøreprotokoll): QSTR (inneholder QST*R 3130 kjøringsmodul se nedenfor)*. *Merknad: Det er nødvendig å opprette en kjøringsmodul som beskriver instrumentinnstillingene og deretter tilordne dette til en kjøringsprotokoll der fargesett G5 har blitt valgt. Mer informasjon om oppretting av kjøringsmodulen finnes i instrumentets brukerhåndbok RUN MODULE (KJØRINGSMODUL) FOR POP7 POLYMER 36 cm kapillærmodul: QSTR # Parameter Name Value Range 1 Oven Temperature 60 int Deg.C 2 Poly_fill_Vol steps 3 Current Stability 5.0 int uamps 4 PreRun_Voltage kvolts 5 Pre_Run_Time sec. 6 Injection_Voltage kvolts 7 Injection_Time sec. 8 Voltage_Number_of_Steps nk 9 Voltage_Step_Interval sec. 10 Data_Delay_Time sec. 11 Run_Voltage kvolts 12 Run_Time sec. AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 12 av 35

13 ABI3500 GENETIC ANALYZER Det er nødvendig å opprette en QSTR instrumentprotokoll som kan brukes ved hver QSTR-kjøring. Opprett QSTR instrumentprotokoll via 3500 Instrumentprotokollbiblioteket. Påse at følgende er valgt: Run Module (Kjøringsmodul): FragmentAnalysis50_POP7 Før opp innstillingene beskrevet i bildet nedenfor: Prøvene kjøres ved å opprette en prøveplate ved å "klikke på Create Plate from Template (opprett plate fra mal) i Dashboard (instrumentbord), og sørg for at riktig instrumentprotokoll for QSTR har blitt tilordnet (se ovenfor). AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 13 av 35

14 Analyse og tolking av resultater Det anbefales at hvert laboratorium utvikler sine egne tolknings- og rapporteringsprosedyrer og -kriterier. Retningslinjer for best praksis for QF-PCR har blitt dokumentert av Association for Clinical Genetic Science, og er tilgjengelig for referanse på: PCR-produktene blir observert som et 5-farger merket system med filtersett G5. Filtersett G5 detekterer 6-FAM (blå), VIC (grønn), NED (gul) og PET (rød) merkede fragmenter, pluss størrelsesstandard markør merket med LIZ (oransje) på et elektroforetogram og i GeneMapper- eller GeneMarker-programmet. Retningslinjer for programvareanalyse for GeneMarker og GeneMapper er tilgjengelig på Elucigene Diagnostics nettsted: Retningslinjene for GeneMapper-analyse oppgir detaljer i programvareinnstillingene og instruksjoner for import av analysert data til en Excel rapportmal. GeneMarker har et trisomianalyseapplikasjon som er kompatible med Elucigene QST*R. Viktig merknad: Forskjellige kombinasjoner av instrument, polymer og størrelsesstandard kan gi størrelsesbeskrivelsen mindre variasjoner. Under valideringen av settet, bør brukeren kontrollere at standardbin-innstillingene resulterer i nøyaktig toppmerking og justere hvis nødvendig. Hvis det oppstår vanskeligheter, ta kontakt med teknisk støtteavdeling for veiledning. Retningslinjer for generell analyse av alle QST*R-sett 1. Den negative kontrollen bør vise skarpe topper innenfor leseområdet på 100 til 510 bp. 2. Den positive kontrollen må vise de forventede resultatene og alle topper må oppfylle kriteriene nedenfor. 3. Ved analyse av DNA-prøver, bør minst 1 topp observeres for hver markør som ble testet. Det akseptable området for markørtopper, analysert på 3130 Genetic Analyzer, er mellom 50 og 6000 relative fluorescente enheter (rfus) og for 3500 Genetic Analyzers mellom 175 og rfus. Topphøydene som faller utenfor dette området må ikke analyseres. 4. Elektroforetogrammer av dårlig kvalitet grunnet for sterk gjennomblødning mellom fargene (også kalt pull-up ), eller elektroforetiske spisser (skarpe topper tilstede i mer enn én farge) skal ikke tolkes. PCR-produkter skal reinjiseres og analyseres på nytt. 5. Analysen utføres ved vurdering av toppforholdene (A1/A2), der A1 er toppområdet for det korteste lengdefragmentet, og A2 er toppområdet for det lengste lengdefragmentet. Det resulterende forholdet er diagnostisk for locuskopinummeret. For disomiske kromosomer bør heterozygotiske markører vise to topper med samme høyde. En fullstendig analyse av kromosomkopinummerets status utføres med sammenligning mellom toppområdeforholdene. 6. Heterozygotiske di-alleliske (det vil si to alleler) markører skal falle innenfor et forholdsvindu på 0,8 til 1,4. For to alleler, atskilt av mer enn 24 bp i størrelse, er imidlertid et forhold på opp til 1,5 akseptabelt. Eventuelle verdier som faller innenfor denne AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 14 av 35

15 regionen anses å ha et forhold på 1:1. Hvis forholdsbalansen faller ut av dette vinduet, kan det være forårsaket av flere faktorer, for eksempel: Hel kromosomtrisomi Delvis kromosomtrisomi (inkludert submikroskopiske duplikasjoner) Mosaisisme Kontaminert andre genotype (for eksempel maternell, tvilling, ekstern) Skyggebånd (stutters) forårsaker forskyvning Foretrukket amplifisering av én allele forårsaker forskyvning Polyformismer på primerstedet Somatiske mikrosatellittmutasjoner Guide to Interpretation (Tolkningsveiledningen) gir eksempler på typiske profiler for mange av disse. Homozygotiske markører er uinformative, siden et forhold ikke kan bestemmes. 7. For å kunne tolke et resultat som unormalt (for eksempel trisomi er tilstede), kreves minst to informative markører som er konsistente med en tri-allelisk genotype mens alle andre markører er uinformative. Det anbefales ikke å tolke et resultat som unormalt, basert på informasjon fra bare én markør. Hvis nødvendig, følges testingen opp med enkle kromosom-sett (det vil si Elucigene QST*R-13, Elucigene QST*R-18 og Elucigene QST*R-21) kan gi tilstrekkelig informasjon for tolking. Trisomi bestemmes av enten: 7.1. To topper med ulik høyde, fordi én av toppene representerer to alleler, som er felles for én eller begge foreldrene. I dette tilfellet vil forholdet mellom de to toppene bli klassifisert som 2:1 eller 1:2 slik at A1/A2 gir et resultat i regionen 1,8 til 2,4, når toppen som representerer allelen med kortest lengde er større i området enn toppen som representerer allelen med lengre lengde, eller der A1/A2 gir et resultat i regionen på 0,45 til 0,65 når toppen representerer allelen med kortest lengde er mindre i området enn toppen som representerer allelen med lengre lengde Tre topper med sammenlignbare høyde er tilstede. Forholdet mellom toppene blir klassifisert som 1:1:1, og verdiene deres faller innenfor det normale 0,8-1,4-området (selv for alleler som er atskilt av mer enn 24bp, er et allelforhold på opp til 1,5 akseptabelt). Hvis dette ikke forekommer, kan årsaken være én av faktorene nevnt i trinn For å tolke et resultat som normalt, er det nødvendig med minst to informative markører som er forenlige med en diallelisk genotype og alle andre markører som uinformative. Et normalt resultat angir det normale komplementet av to for kromosomene som er testet. 9. Toppområdeforholdene som faller mellom de normale og unormale områdene klassifiseres som ufullstendige. Ufullstendige resultater kan løses ved å bruke enkeltkromosomsettene. 10. Hvis både normale og unormale allelmønstre oppnås for et enkelt kromosom, anbefaler vi at oppfølgingsstudier utføres for å identifisere årsaken til uoverensstemmende resultater før konklusjonene nås. 11. I sjeldne tilfeller kan allelstørrelser for markører overlappe. Hvis dette mistenkes, kan analyse med det enkle kromosomsettet løse dette. AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 15 av 35

16 Spesifikk for QST*R-XYv2 og kjønnskromosommarkørene i QST*Rplusv2 1. AMEL-markøren amplifiserer ikke-polymorfiske sekvenser på X (104 bp)- og Y (110 bp)-kromosomer og kan brukes til å bestemme nærværet eller fravær av et Y-kromosom og representerer den relative mengden i X- til Y-sekvensen. Vær oppmerksom på at i sjeldne tilfeller har det vært rapportert amplifikasjonssvikt på grunn av mutasjon av AMEL-Y-sekvensen. 2. TAF9L er en konstant, paralog markør med sekvenser på kromosomene 3 and X. Kromosom 3-spesifikk topp (116 bp, som representerer 2 kopier av kromosom 3), kan derfor brukes som en referansetopp som assisterer ved bestemmelsen av antallet X- kromosomer som er tilstede (121 bp topp). Analysert i kombinasjon med Amelogenin og de andre kjønnskromosommarkørene, er det spesielt nyttig ved diagnosen av kjønnskromosomaneuploidy. Hos en normal kvinne skal markørene falle innenfor et forholdsvindu på 0,8 til 1,4. Hos en normal mann eller monosomi X, gir markørene et forhold på 1,8. Videre detaljer i tolkningen av TAF9L-markøren finnes i Guide to Interpretation (tolkningsveiledningen). 3. DXYS267 og DXYS218 polymorfe STR-markører er tilstede på både X- og Y- kromosomene og representerer det totale antallet kjønnskromosomer. For informative mannlige resultater er det ikke mulig å bestemme hvilken allel som representerer X- eller Y-kromosomet. 4. Informative X-spesifikke markører DXS981, DXS1187, XHPRT, DXS6807, DXS7423, DXS6803 and DXS6809 representerer antallet X-kromosomer. 5. Den Y-spesifikke markøren, SRY, gir en enkel topp hos normale menn og vil ikke amplifisere hos normale kvinner. 6. Den Y-spesifikke markøren, DYS448, vil i de fleste tilfellene gi en enkel topp hos normale menn og vil ikke amplifisere hos normale kvinner. Det har blitt lagt merke til at i sjeldne tilfeller kan denne markøren vise et arvelig di-allelisk mønster (submikroskopisk duplikasjon, fulgt av replikasjonsglidning) eller ikke vise amplifikasjon (null allel). 7. Et resultat som viser ingen amplifikasjon for Y-spesifikke markører og homozygotisk for alle andre markører, er ikke nødvendigvis diagnostisk for Turner syndrom. Basert på publiserte data, vil omtrent 1 av kvinner være homozygotisk for alle 7 x spesifikke polymorfe markører. Dette gir en bayesiansk probabilitet på omtrent 1 av at en profil som er homozygotisk for alle X-spesifikke markører, representerer en sann monosomi X genotype, i stedet for en normal homozygotisk kvinne. AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 16 av 35

17 Ytelseskarakteristikker INTERN VALIDERING QST*Rplusv2 98 prøver ble blindtestet med Elucigene QST*Rplusv2. Av disse var 22 normale/xy, 17 var normale/xx, 12 var trisomi 21/XY, 7 var trisomi 21/XX, 9 var trisomi 18/XY, 8 var trisomi 18/XX, 2 var trisomi 13/XY, 4 var trisomi 13/XX, 8 var normale/x0, 1 var normal/xyy og 1 var triploid for alle kromosomene som ble testet. Én prøve ga et uinformativt resultat. Seks prøver ga uanalyserbare resultater på grunn av dårlige prøvekvalitet. Alle analyserbare resultater viste 100 % spesifisitet og sensitivitet med resultater tidligere oppnådd av en alternativ, etablert metode. QST*R 312 prøver ble blindtestet med Elucigene QST*R. Av disse var 286 normale, 2 viste trisomi 13, 7 viste trisomi 18, 13 viste trisomi 21 og 2 var triploide for alle 3 kromosomene som ble testet. Én prøve viste maternell cellekontaminasjon som hindret analyse og én prøve ga ikke tolkbare resultater til tross for gjentatt amplifikasjon. Totalt 310 prøver ga analyserbare resultater. Alle analyserbare resultater viste 100 % spesifisitet og sensitivitet med resultater tidligere oppnådd med karyotyping. QST*R-XYv2 321 prøver ble blindtestet med Elucigene QST*R-XYv2. Av disse var 160 normale menn, 147 var normale kvinner, 3 viste monosomi X, 2 viste XXY, 2 viste XYY og 1 viste XXX. Seks prøver viste ikke tolkbare resultater til tross for gjentatt amplifikasjon. Totalt 315 prøver ga analyserbare resultater. Alle analyserbare resultater viste 100 % spesifisitet og sensitivitet med resultater tidligere oppnådd med karyotyping. QST*R prøver ble blindtestet med Elucigene QST*R-13. Av disse var 144 normale og 2 viste trisomi 13. Seks prøver viste ikke tolkbare resultater til tross for gjentatt amplifikasjon. Alle analyserbare resultater viste 100 % spesifisitet og sensitivitet med resultater tidligere oppnådd med karyotyping. QST*R prøver ble blindtestet med Elucigene QST*R-18. Av disse var 143 normale og 4 viste trisomi 18. Fem prøver ga ikke tolkbare resultater til tross for gjentatt amplifisering. Alle analyserbare resultater viste 100 % spesifisitet og sensitivitet med resultater tidligere oppnådd med karyotyping. QST*R prøver ble blindtestet med Elucigene QST*R-21. Av disse var 148 normale og 2 viste trisomi 21. To prøver ga ikke tolkbare resultater til tross for gjentatt amplifisering. Alle analyserbare resultater viste 100 % spesifisitet og sensitivitet med resultater tidligere oppnådd med karyotyping. AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 17 av 35

18 TILLEGG 1: EKSEMPLER Elucigene QST*Rplusv2 Markørene er merket slik: 6-FAM VIC NED PET DXS6803 DXS1187 AMEL D21S1409 D21S1435 D21S1446 TAF9L D13S252 D21S11 XHPRT D18S978 D21S1442 D21S1437 D18S386 SRY D18S819 D13S634 D13S305 D13S800 D18S535 D18S390 D13S628 Se tillegg 2 for flere detaljer om STR-markører, inkludert størrelsesområder. AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 18 av 35

19 Elucigene QST*Rplusv2 - GENEMAPPER Et eksempel på en normal mannlig QST*Rplusv2-profil viste den relative posisjonen til de detekterte markørene. AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 19 av 35

20 Elucigene QST*R Markørene er merket slik: 6-FAM VIC NED PET D21S1435 D18S391 D18S978 D21S1409 D21S11 D18S325 D21S1411 D13S252 D21S1437 D18S386 D18S390 D18S819 D13S634 D13S305 D13S628 D18S535 Se tillegg 2 for flere detaljer om STR-markører, inkludert størrelsesområder. AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 20 av 35

21 Elucigene QST*R - GENEMAPPER Et eksempel på en normal QST*R-profil viste den relative posisjonen til de detekterte markørene. AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 21 av 35

22 Elucigene QST*R-XYv2 Markørene er merket slik: 6-FAM VIC NED PET DXS6803 DXS1187 AMEL DXYS267 DXS981 XHPRT SRY DYS448 DXS6807 DXS7423 DXS6809 DXYS218 Se tillegg 2 for flere detaljer om STR-markører, inkludert størrelsesområder. AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 22 av 35

23 Elucigene QST*R-XYv2 - GENEMAPPER Et eksempel på en normal mannlig QST*R-XYv2-profil viste den relative posisjonen til de detekterte markørene. AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 23 av 35

24 Elucigene QST*R-21 Markørene er merket slik: 6-FAM VIC NED PET D21S1435 D21S1446 D21S1411 D21S1409 D21S11 D21S1442 D21S1437 Se tillegg 2 for flere detaljer om STR-markører, inkludert størrelsesområder. AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 24 av 35

25 Elucigene QST*R-21 - GENEMAPPER Et eksempel på en normal mannlig QST*R-21-profil viste den relative posisjonen til de detekterte markørene. AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 25 av 35

26 Elucigene QST*R-18 Markørene er merket slik: 6-FAM VIC NED PET D18S847 D18S391 D18S978 D18S977 D18S1002 D18S386 D18S390 D18S819 D18S535 Se tillegg 2 for flere detaljer om STR-markører, inkludert størrelsesområder. AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 26 av 35

27 Elucigene QST*R-18 - GENEMAPPER Et eksempel på en normal mannlig QST*R-18-profil viste den relative posisjonen til de detekterte markørene. AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 27 av 35

28 Elucigene QST*R-13 Markørene er merket slik: 6-FAM VIC NED PET D13S797 D13S325 D13S800 D13S252 D13S762 D13S305 D13S628 D13S634 Se tillegg 2 for flere detaljer om STR-markører, inkludert størrelsesområder. AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 28 av 35

29 Elucigene QST*R-13 - GENEMAPPER Et eksempel på en normal mannlig QST*R-13-profil viste den relative posisjonen til de detekterte markørene. AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 29 av 35

30 TILLEGG 2: TABELL OVER MARKØRER SOM BLE BRUKT Merknad: NED-fargen som ble brukt i settene ble identifisert spektralt som en gul farge. Den vises konvensjonelt i svart skrift av klarhetshensyn. Observerte heterozygositeter, basert på antallet alleler som er observert med Elucigene Diagnostics valideringspanel. Disse tallene kan derfor avvike fra publiserte data og kan også variere i samsvar med populasjonen som testes. Tabell 1. Markører i Elucigene QST*Rplusv2 Markør Plass Observert heterozygositet * Allelstørrelse Område (bp) Markørfarge D13S252 13q12.2 0, rød D13S305 13q13.3 0, grønn D13S634 13q , blå D13S800 13q22.1 0, gul D13S628 13q31.1 0, gul D18S819 18q11.2 0, rød D18S535 18q12.3 0, blå D18S978 18q12.3 0, gul D18S386 18q22.1 0, grønn D18S390 18q22.3 0, gul D21S11 21q21.1 0, blå D21S q21.1 0, blå D21S q21.2 0, rød D21S q21.3 0, rød D21S q21.3 0, blå D21S q22.3 0, grønn AMEL Xp22.22/Yp11.2 i/a 104/110 gul TAF9L 3p24.2/Xq21.1 i/a 116/121 gul DXS6803 Xq , blå XHPRT Xq26.2 0, grønn DXS1187 Xq26.2 0, grønn SRY Yp11.31 i/a 248 gul AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 30 av 35

31 Tabell 2. Markører i Elucigene QST*R Markør Plass Observert heterozygositet * Allelstørrelse Område (bp) Markørfarge D13S252 13q12.2 0, rød D13S305 13q13.3 0, grønn D13S325 13q , grønn D13S634 13q , blå D13S628 13q31.1 0, gul D18S391 18p , grønn D18S819 18q11.2 0, rød D18S535 18q12.3 0, blå D18S978 18q12.3 0, gul D18S386 18q22.1 0, grønn D18S390 18q22.3 0, gul D21S11 21q21.1 0, blå D21S q21.1 0, blå D21S q21.2 0, rød D21S q21.3 0, blå D21S q22.3 0, gul AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 31 av 35

32 Tabell 3. Markører i Elucigene QST*R-XYv2 Markør Plass Observert heterozygositet * Allelstørrelse Område (bp) Markørfarge DXYS218 Xp22.32/Yp11.3 0, blå AMEL Xp22.22/Yp11.2 i/a gul DXYS267 Xq21.31/Yp11.3 0, rød DXS Xp22.3 0, blå DXS981 Xq13.1 0, blå DXS6803 Xq , blå DXS6809 Xq , gul DXS1187 Xq26.2 0, grønn XHPRT Xq26.2 0, grønn DXS7423 Xq28 0, grønn SRY Yp11.31 i/a 248 gul DYS448 Yq i/a rød Tabell 4. Markører i Elucigene QST*R-21 Markør Plass Observert heterozygositet * Allelstørrelse Område (bp) Markørfarge D21S11 21q21.1 0, blå D21S q21.1 0, blå D21S q21.2 0, rød D21S q21.3 0, grønn D21S q21.3 0, blå D21S q22.3 0, gul D21S q22.3 0, grønn AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 32 av 35

33 Tabell 5. Markører i Elucigene QST*R-18 Markør Plass Observert heterozygositet * Allelstørrelse Område (bp) Markørfarge D18S391 18p , grønn D18S q11.2 0, blå D18S819 18q11.2 0, rød D18S847 18q12.1 0, blå D18S535 18q12.3 0, blå D18S978 18q12.3 0, gul D18S977 18q , rød D18S386 18q22.1 0, grønn D18S390 18q22.3 0, gul Tabell 6. Markører i Elucigene QST*R-13 Markør Plass Observert heterozygositet * Allelstørrelse Område (bp) Markørfarge D13S252 13q12.2 0, rød D13S305 13q13.3 0, grønn D13S325 13q , grønn D13S634 13q , blå D13S800 13q22.1 0, gul D13S628 13q31.1 0, gul D13S762 13q31.3 0, blå D13S797 13q33.2 0, blå AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 33 av 35

34 Begrensninger ved prosedyren Denne testen er utarbeidet for å detektere spesifikke kromosomtrisomier og kjønnskromosomaneuploider som beskrevet i bruksanvisningen. Den detekterer kanskje ikke strukturelle omlegginger som involverer kromosomene som testes og vil ikke detektere unormale tilstander i noen andre kromosomer. Det er mulig at mosaisisme for kromosomet som testet ikke blir detektert. Et QST*R-resultat kan bare brukes direkte på vevet som testes, og vil kanskje ikke representere den føtale karyotypen. Maternell cellekontaminasjon (MCC) og begrenset placentalmosaisisme (CPM) kan resultere i uoverensstemmelser mellom QST*R og karyotyperesultatene Merknad: Heterozygositeter for markørene som ble brukt, ble tatt fra et tilfeldig prøvesett som ble innlevert for rutinemessig analyse fra en hovedsakelig nordeuropetisk, hvit populasjon. Eventuelle beregninger med disse heterozygositetene gjelder strengt bare populasjonen der prøvene ble tatt. En liten studie som bruker lokalt innhentede prøver kan utføres som en del av valideringsstudien, som kan etablere heterozygositeter i populasjonen som testes. Det forventes ikke at populasjonsvariasjon vil medføre betydelige endringer i analysens generelle informasjonsevne. Ansvarsfraskrivelse Resultatene fra denne eller andre diagnostiske analyser skal tolkes i sammenheng med andre laboratorie- og kliniske data som er tilgjengelig for klinikeren. Disse Elucigene-reagensene leveres for in vitro-diagnostisk testing. Ytterligere informasjon om QST*R-produkter er tilgjengelig på: AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 34 av 35

35 Referanser 1. CG Antenatal Care: full guidelines (Corrected June 2008) UK National Institute for Health and Clinical Excellence 2. O Connor, C. (2008) Trisomy 21 Causes Down syndrome. Nature Education 1(1) 3. Mansfield E S. Diagnosis of Down syndrome and other aneuploidies using quantitative polymerase chain reaction and small tandem repeat polymorphisms. Human Molecular Genetics (1): Mann K, Fox SP, Abbs SJ, Yau SC, Scriven PN, Docherty Z, Mackie Ogilvie C. Development and implementation of a new rapid aneuploidy diagnostic service within the UK National Health Service and implications for the future of prenatal diagnosis. The Lancet (9287): Mann K, Donaghue C, Fox SP, Docherty Z, Mackie Ogilvie C. Strategies for the rapid prenatal diagnosis of chromosome aneuploidy. European Journal of Human Genetics : Mackie Ogilvie C, Donaghue C, Fox SP, Docherty Z, Mann K. Rapid prenatal diagnosis of an aneuploidy using Quantitative Fluorescence-PCR (QF-PCR). Journal of Histochemistry and Cytochemistry (3): Deutsch S, Choudhury U, Merla G, Howald C, Sylvan A, Antonarakis SE. Detection of aneuploidies by paralogous sequence quantification. Journal of Medical Genetics : ELUCIGENE og QST*R er varemerker for Delta Diagnostics (UK) Ltd. GENEMAPPER, GENESCAN, VIC, PET, NED, LIZ, POP-7 og HI-DI er varemerker for Life Technologies Corporation. QIAAMP er et varemerke for Qiagen Gmbh. GENEMARKER er et varemerke for SoftGenetics Corporation. INSTAGENE er et varemerke for Bio-Rad Laboratories Inc. Merknad til kjøperen: Begrenset lisens Polynucleotider merket med VIC-, NED- og PET farger og/eller bruk av disse kan være dekket av en eller flere patenter som eies av Applied Biosystems, LLC. Kjøpesummen for dette produktet inkluderer begrensede, uoverførbare rettigheter under visse krav i visse patenter tilhørende Applied Biosystems, LLC om å bruke denne produktmengden kun for kjøperens aktiviteter i forbindelse med deteksjon av mål innen human diagnostikk-feltet. Ingen andre rettigheter er overført. Mer informasjon om kjøp av lisenser i forbindelse med fargene nevnt ovenfor, kan fås ved å kontakte outlicensing@lifetech.com. Copyright 2014 Delta Diagnostics (UK) Ltd. AN000BYNO 001 Sep-2014 Side 35 av 35