Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1 Clone 22C3. Kode M3653. Tiltenkt bruk

Transkript

1 Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1 Clone 22C3 Kode M3653 Tiltenkt bruk Synonymer for antigen Sammendrag og forklaring Til in vitro-diagnostisk bruk. Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, Clone 22C3, er beregnet på bruk i immunhistokjemi. Dette antistoffet merker PD-L1 i normalt og neoplastisk vev. Den kliniske tolkningen av farging, eller mangel på farging, må suppleres med morfologiske studier ved bruk av egnede kontroller og skal evalueres av en sertifisert patolog i sammenheng med pasientens sykehistorie og andre diagnostiske prøver. Dette antistoffet er ment for å brukes etter at primær diagnose er gitt ved konvensjonell histopatologi ved hjelp av ikke-immunologisk, histokjemisk farging. Programmert dødsligand-1 (1). Binding av PD-1-ligandene, PD-L1 og PD-L2 til PD-1-reseptoren som finnes på T-celler, hemmer T-celledeling og cytokinproduksjon (2). Oppregulering av PD-1-ligander forekommer i enkelte tumorer, og signalering via denne veien kan bidra til hemming av aktiv T-celleimmunovervåkning av tumorer (3). Blokkering av PD-1-interaksjon med PD-L1 og PD-L2 frigjør PD-1-mediert hemming av immunresponsen, inkludert immunresponsen mot tumorer (2). Se Dakos General Instructions for Immunohistochemical Staining eller deteksjonssysteminstruksjoner for IHC-prosedyrer. Reagens som følger med Immunogen Spesifisitet Forholdsregler Monoklonalt antistoff fra mus levert i flytende form i 0,05 mol/l Tris-HCI, 0,015 mol/l natriumazid, 1 % bovint serumalbumin, ph 7,2. Clone: 22C3 (5). Isotype: IgG1. IgG-konsentrasjon av mus mg/l: Se etiketten på flasken. Proteinkonsentrasjonen mellom partier kan variere uten å påvirke den optimale fortynningen. Titreringen for hvert enkelt parti sammenlignes og justeres etter et referanseparti for å sikre konsekvent immunhistokjemisk fargingsevne fra parti til parti. Humant ekstracellulært domene til PD-L1 (Phe19-Thr239) sammensmeltet med et humant lgg1-fragment (R&D Systems katalognr. 156-B7-100) (5) I Western-blotting av rekombinant humant PD-L1-protein merker Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, Clone 22C3 et bånd som tilsvarer ~40 kda (5). 1. For profesjonelle brukere. 2. Dette produktet inneholder natriumazid (NaN 3), et svært giftig kjemikalie i ren form. Selv om det ikke klassifiseres som farlig ved produktkonsentrasjonene, kan natriumazid reagere med bly- og kopperrør og danne svært eksplosive ansamlinger av metallazider. Ved avhending må du skylle rikelig med vann for å forhindre ansamling av metallazid i rørene. 3. Riktige håndteringsprosedyrer bør brukes med dette produktet, i likhet med alle andre produkter som er utvunnet fra biologiske kilder. 4. Bruk egnet personlig verneutstyr for å unngå kontakt med øyne og hud. 5. Ubrukt løsning skal kasseres i henhold til lokale og nasjonale forskrifter. Oppbevaring Prøveklargjøring Oppbevares ved 2-8 C. Må ikke brukes etter utløpsd atoen som er stemplet på flasken. Hvis reagensene oppbevares under andre forhold enn de som er spesifisert, må forholdene verifiseres av brukeren. Det er ingen tydelige tegn som indikerer at dette produktet er ustabilt. Derfor bør positive og negative kontroller kjøres samtidig med pasientprøver. Hvis det observeres uventet farging som ikke kan forklares med variasjoner i laboratorieprosedyrer, og det er mistanke om at det er et problem med antistoffet, må du ta kontakt med Dakos tekniske avdeling. Parafinsnitt: Antistoffet kan brukes til å merke parafininnstøpte vevssnitt fiksert i formalin. Vevsprøver skal skjæres i snitt på ca. 4 µm. Forhåndsbehandling: Se EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (kode K8005) for instruksjoner angående hvordan forhåndsbehandling av objektglass skal utføres. Fargingsprosedyre Dette er kun retningslinjer. Optimale forhold kan variere avhengig av prøvetype og prepareringsfremgangsmåte, og skal valideres av hvert enkelt laboratorium. Ytelsen til dette antistoffet skal være fastsatt av brukeren når det brukes med andre manuelle fargesystemer eller automatiserte plattformer. ( ) P04435NO_01/M3653/ p. 1/4

2 Fortynning: Anbefalt fortynning av Monoclonal Mouse Anti-Human PD-L1, Clone CCP58, kode M3653 er 1 : 50. Fortynn antistoffet i Dako Antibody Diluent with Background-Reducing Components (kode S3022). Inkuber forbehandlede vevssnitt i 30 minutter ved romtemperatur. Negativ kontroll: Anbefalt negativ kontrollreagens er Dako Negative Control, Mouse lgg1 (kode X0931), fortynnet til den samme lgg1-konsentrasjonen som det primære antistoffet. Med mindre stabiliteten til det fortynnede antistoffet og den negative kontrollen har blitt fastsatt i den faktiske fargeprosedyren, bør disse reagensene fortynnes umiddelbart før bruk. Positive og negative kontroller skal kjøres samtidig med pasientprøver. Visualisering: Det anbefalte EnVision FLEX HRP-visualiseringssystemet benytter 30 minutters inkubasjon ved romtemperatur. Inkubasjonstiden for EnVision FLEX+ Mouse (LINKER) (kode K8021/K8022) er 30 minutter ved romtemperatur. Følg prosedyren som følger med det valgte visualiseringssystemet. Merk: Bruk EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (kode GV805) for HIER. Inkubasjonstiden for DAB Enhancer (S ) er fem minutter ved romtemperatur. Kontrastfarging: Anbefalt kontrastfarge er EnVision FLEX Hematoxylin (kode K8008/K8018). Det anbefales å anvende ikke-vandig, permanent monteringsmedium for optimale resultater. Kontroller: Positive og negative kontroller skal kjøres samtidig med samme protokoll som pasientprøvene. Det positive kontrollvevet skal inkludere tonsill, og cellene/strukturene skal vise reaksjonsmønstre som beskrevet for dette vevet i Ytelsesegenskaper. Tolkning av farging Ytelsesegenskaper Cellefargingsmønsteret er membranøst. Normalt vev: Plasmamembranfarging ble observert på immunceller og celler med epitelopprinnelse. Cytoplasmisk farging ble observert i noen celletyper, men den ble ikke registrert som positiv farging. Tabell 1 oppsummerer PD-L1-immunreaktiviteten på det anbefalte panelet av normalt vev. Alle vev ble formalinfiksert og parafininnstøpt og farget med Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Clone 22C3, i henhold til instruksjonene i pakningsvedlegget. Ingen uventede resultater ble observert i testede celle- og vevtyper. Observert farging samsvarte med rapportert litteratur for PD-L1 IHC-uttrykk i normalt vev (1, 2). Tabell 1: Sammendrag av normal vevsreaktivitet for Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Clone 22C3 Vevstype Positive vevselementer Vevstype Positive vevselementer (antall testet) (antall testet) Benmarg (3) 3/3 megakaryocytt Mage (3) 2/3 lymfocytter Binyre (3) 0/3 1/3 gastriske kjertler Bryst (3) 0/3 Mesoteliale celler (2) Bukspyttkjertel (3) 0/3 Milt (3) 2/3 makrofager Cerebellum (3) 0/3 Muskel, hjerte (3) 0/3 Cerebrum (3) 0/3 Muskel, skjelett (3) 0/3 Cervix (3) 1/3 epitelceller Nerve, perifer (3) 0/3 Eggstokk (3) 0/3 Nyre (3) 1/3 tubulært epitel Hud (3) 0/3 Prostata (2) 2/2 epitel Hypofyse (3) 1/3 anterior hypofyse Skjoldbruskkjertel (3) 0/2 1/3 glandulær epitel 1/3 posterior hypofyse Spiserør (3) 0/3 Kolon (3) 1/3 lymfocytter Spyttkjertel (3) 0/3 1/3 makrofager Testis (3) 0/3 Lever (3) 1/3 makrofager Thymus (3) 3/3 medulla 1/3 hepatocytter Thyroidea (3) 0/3 Livmor (3) 0/3 Tonsill (3) 3/3 kryptepitel Lunge (3) 3/3 makrofager 2/3 makrofager Tynntarm (3) 0/3 Abnormalt vev: Plasmamembranfarging ble observert på immunceller og celler med epitelopprinnelse. Cytoplasmisk farging ble observert i noen celletyper, men den ble ikke registrert som positiv farging. Tabell 2 gir et sammendrag av PD-L1-immunreaktiviteten på et panel av neoplastisk vev. Alle vev ble formalinfiksert og parafininnstøpt og farget med Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Clone 22C3, i henhold til instruksjonene i pakningsvedlegget. Ingen uventede resultater ble observert i testede tumorprøver. Observert farging samsvarte med rapportert litteratur for PD-L1 IHC-uttrykk i neoplastisk vev (1 4). ( ) P04435NO_01/M3653/ p. 2/4

3 Tabell 2: Sammendrag av neoplastisk vevsreaktivitet for Monoclonal Mouse Anti-PD-L1, Clone 22C3 Tumortype Adenokarsinom Location (Plassering) Blindtarm Bryst, DCIS 0/2 Bryst, invasiv duktal 0/7 Bryst, invasiv duktal, metastatisk i lymfeknute PD-L1-positiv / total N=159 Bukspyttkjertel 0/2 Bukspyttkjertel, duktal 0/3 Cervix, endocervikal type Eggstokk Eggstokk, endometrioid Eggstokk, mucinøs Eggstokk, serøs Galleblære 1/5 GI, metastatisk i lunge Hode og nakke, hard gane Kolon 0/5 Kolon, metastatisk i lever Kolon, mucinøs Livmor, endometrium 0/3 Livmor, klar celle Lunge 1/4 Mage 0/6 Mage, mucinøs Prostata 0/5 Rektum 0/4 Skjoldbruskkjertel, follikulær Skjoldbruskkjertel, follikulær-papillær Skjoldbruskkjertel, papillær 0/3 Spiserør Spyttkjertel / Glandula parotis 0/2 Tynntarm 0/2 Adrenokortikalt karsinom Binyre Basalcellekarsinom Hud Chordom Bekkenrom Embryoisk karsinom Testis Ependymom Hjerne Feokromocytom Binyre Glioblastom Hjerne Hepatoblastom Lever Hepatocellulært karsinom Lever 0/5 Hjernetumor Cerebrum 0/3 Interstitialom Kolon Rektum Tynntarm Karsinom Nese/svelg, NPC Kondrosarkom Bein Leiomyosarkom Lymfom Blære Bløtvev, brystvegg Anaplastisk storcelle Lymfeknute ( ) P04435NO_01/M3653/ p. 3/4

4 Diffus B-celle Lymfeknute 0/4 Hodgkin Lymfeknute 2/2 Non-Hodgkin Lymfeknute 1/1 Medulloblastoma Hjerne Medullært karsinom Skjoldbruskkjertel Melanom Nesehule Rektum Meningeom Hjerne 0/2 Mesoteliom Peritoneum Nevroblastom Retroperitoneum Nevrofibrom Bløtvev, korsrygg Osteosarkom Bein 0/2 Overgangscellekarsinom Primitiv nevroektodermal tumor (PNET) Rabdomyosarkom Renalcellekarsinom Blære 0/6 Nyre Retroperitoneum Bløtvev, embryonisk Prostata Retroperitoneum Klar celle Nyre 0/6 Papill Nyre Seminom Testis 0/2 Signetringcellekarsinom Skvamøst cellekarsinom Kolon Metastatisk kolon-signetringcellekarsinom i eggstokk Cervix 2/5 Hode og nakke 0/2 Hud 0/2 Livmor Lunge 1/2 Metastatisk, øsofagealt, skvamøst cellekarsinom i lymfeknute Spiserør 0/7 Småcellekarsinom Lunge Spermatocytt Testis 0/2 Synovialt sarkom Bekkenrom Thymom Mediastinum 1/1 Øycelletumor Bukspyttkjertel Referanser 1. Okazaki T, Honjo T. PD-1 and PD-1 ligands: from discovery to clinical application. International Immunol 2007(19); 7: Brown JA, Dorfman DM, Ma F-R, Sullivan EL, Munoz O, Wood CR, et al. Blockade of Programmed Death-1 Ligands on Dendritic Cells Enhances T Cell Activation and Cytokine Production. J Immunol 2003;170: Cooper WA, Tran T, Vilain RE, Madore J, Seliger CI, Kohonen-Cornish M, et al. PD-L1 expression is a favorable prognostic factor in early stage non-small cell carcinoma. Lung Cancer 2015; 89: Chen B, Chapuy B, Ouyang J et al. PD-L1 Expression Is Characteristic of a Subset of Aggressive B-cell Lymphomas and Virus-Associated Malignancies. Clin Cancer Res 2013; 19: Ellison AR. Technical Report: Characterization of monoclonal mouse anti-pd-l1 antibody clone 22C3. D29539/rev01/C22282, 2015 ( ) P04435NO_01/M3653/ p. 4/4

5 Utgave 03/16 ( ) P04435NO_01/M3653/ p. 5/4