EnVision FLEX, High ph (Dako Omnis)

Transkript

1 EnVision FLEX, High ph (Dako Omnis) Code GV utgave Settet inneholder tilstrekkelig reagenser for 600 prøver. For Dako Omnis-instrumenter. Valgfrie reagenser: Kode Produktnavn Tester GV804 GV805 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) (Dako Omnis) EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50x) (Dako Omnis) GC807 Wash Buffer (20x) (Dako Omnis) GC808 Hematoxylin (Dako Omnis) 600 GV809 EnVision FLEX+ Rabbit LINKER (Dako Omnis) 75 GV821 EnVision FLEX+ Mouse LINKER (Dako Omnis) 75 GV825 EnVision FLEX DAB+ Substrate Chromogen System (Dako Omnis) 150 Andre valg: K8020 FLEX IHC Microscope Slides 500 ( ) P04120NO_001_GV800/ s. 1/10

2 Innholdsfortegnelse Side Tiltenkt bruk... 3 Sammendrag og forklaring... 3 Reagenser... 4 A. Materialer som følger med... 4 B. Materialer som er nødvendige, men som ikke følger med... 4 C. Alternative reagenser... 5 Forholdsregler... 6 Oppbevaring... 6 Reagenspreparering... 7 Prøvetaking og -klargjøring... 8 Prosedyre... 8 Fargingsprosedyre... 8 Kvalitetskontroll... 9 Tolking av resultatene Begrensninger Symbolforklaring ( ) P04120NO_001_GV800/ s. 2/10

3 Tiltenkt bruk Til in vitro-diagnostisk bruk. Visualiseringssystemet EnVision FLEX High ph (Dako Omnis) er beregnet til bruk i immunhistokjemi sammen med Dako Omnis-instrumenter. Systemet påviser primære antistoffer fra mus og kanin, og reaksjonen visualiseres av EnVision FLEX DAB+ Chromogen. Signalforsterkning av primære antistoffer fra mus eller kanin kan oppnås ved bruk sammen med EnVision FLEX+ Rabbit LINKER (kode GV809) eller EnVision FLEX+ Mouse LINKER (kode GV821). EnVision FLEX-reagenser er beregnet for bruk på formalinfikserte, parafininnstøpte vevssnitt. Sammendrag og forklaring Visualiseringssystemet EnVision FLEX er et fleksibelt system som gir optimal farging på Dako Omnis-instrumenter ved bruk av protokollen som anbefales i dette pakningsvedlegget. Før farging blir formalinfikserte og parafininnstøpte vevssnitt utsatt for intern avparafinisering og hydrering, etterfulgt av varmeindusert epitopavmaskering (HIER) ved bruk av målhentingsreagenset som er spesifisert i det primære antistoffets pakningsvedlegg. Dette settet inneholder EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50 x) (DM848). Alternativt anbefales EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50 x) (kode GV804) eller EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50 x) (kode GV805). Enkelte primære antistoffer oppnår optimal farging ved enzymatisk forhåndsbehandling av vev i stedet for HIER. Endogen peroksidase bør blokkeres med EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent (DM841), som er inkludert i settet. På grunn av en effektiv vaskeprosedyre og det at det er stabiliserende proteiner i Dako-reagensene, er det ikke nødvendig med ekstra blokkeringsprosedyrer for å redusere uspesifikk bakgrunnsfarging. Wash Buffer (20 x) (GC807), tilgjengelig som valgfritt reagens, anbefales. Primære antistoffer følger ikke med settet. Vi anbefaler bruk av Dako FLEX Ready-to-Use Primary Antibodies eller Dako concentrated Primary Antibodies (de enkelte pakningsvedleggene inneholder retningslinjer). EnVision FLEX+ Rabbit LINKER (kode GV809) kan brukes for valgfri signalforsterkning av primære antistoffer fra kanin. For signalforsterkning ved bruk av primære antistoffer fra mus kan EnVision FLEX+ Mouse LINKER (kode GV821) brukes. Noen retningslinjer: EnVision FLEX+ Rabbit LINKER gir 2 3 ganger signalforsterkning, og EnVision FLEX+ Mouse LINKER gir 4 5 ganger signalforsterkning. Dako EnVision FLEX /HRP-reagenset (DM842) i settet består av en dekstranryggrad med et stort antall molekyler fra pepperrotperoksidase (HRP) og sekundære antistoffer tilkoblet. Koblingen skjer ved en unik kjemisk reaksjon der opptil 100 HRP-molekyler og opptil 20 antistoffmolekyler bindes til hver ryggrad. Substratsystemet i settet består av to komponenter: EnVision FLEX DAB+ Chromogen (DM847), en konsentrert løsning av diaminobenzidin (DAB) og EnVision FLEX Substrate Buffer (DM843) som inneholder hydrogenperoksid. EnVision FLEX DAB+ Chromogen må fortynnes med EnVision FLEX Substrate Buffer før bruk. Substratsystemet danner et brunt sluttprodukt på stedet til målantigenet. Regelmessig blanding av kromogen og buffer utføres automatisk internt i Dako Omnis. Hematoxylin (kode GC808) anbefales som kontrastfarge. Reagenset gir en klar blå nukleær farging. De fargede vevssnittene bør monteres med monteringsmedium basert på organisk løsningsmiddel. ( ) P04120NO_001_GV800/ s. 3/10

4 Reagenser A. Materialer som følger med DM841 DM842 EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent (Dako Omnis) 8 x 22,5 ml, klar til bruk Fosfatbuffer med hydrogenperoksid, 15 mmol/l NaN 3 og vaskemiddel. DM847 DM843 DM848 EnVision FLEX/HRP (Dako Omnis) 8 x 22,5 ml, klar til bruk Dekstran koblet med molekyler fra peroksidase og sekundære antistoffer fra geit mot immunoglobuliner fra kanin og mus. I bufrede løsninger med stabiliserende protein og konserveringsmiddel. EnVision FLEX DAB+ Chromogen (Dako Omnis) 8 x 1 ml 3,3'-diaminobenzidin-tetrahydroklorid i organisk løsningsmiddel. Fargen på dette reagenset kan variere fra kraftig fiolett til fargeløs, uten at det har innflytelse på settets ytelse. EnVision FLEX Substrate Buffer (Dako Omnis) 16 x 26 ml Bufret løsningsmiddel med hydrogenperoksid og konserveringsmiddel. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50 x) (Dako Omnis) 9 x 68 ml, 50 x konsentrert Tris/EDTA-buffer, ph 9 B. Materialer som er nødvendige, men som ikke følger med Antistoffortynningsmiddel, f.eks. Dako Antibody Diluent (kode S0809) Clearify Clearing Agent (kode GC810) Dako FLEX Ready-to-Use primære antistoffer eller riktig fortynnede, konsentrerte primære antistoffer fra kanin eller mus fra Dako Dako Omnis-instrument Dako Omnis-instrumenteringstilbehør Dako Proteinase K, Ready-to-Use (ved behov) (kode S3020) FLEX Universal Negative Control, Rabbit, Ready-to-Use (kode GA600), FLEX Universal Negative Control, Mouse, Ready-to-Use (kode GA750) eller passende negativt kontrollreagens for det primære antistoffet Hematoxylin (Dako Omnis) (kode GC808) eller passende hematoxylin-reagens som kontrastfarge Mikroskopobjektglass, f.eks. Dako FLEX IHC Microscope Slides (kode K8020) Monteringsmedium (organisk løsemiddelbasert) og dekkglass Wash Buffer (20 x) (Dako Omnis) (kode GC807) 0.3 M Sulfuric Acid (kode GC203) ( ) P04120NO_001_GV800/ s. 4/10

5 C. Alternative reagenser GV804 DM848 GV805 DM849 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50 x) (Dako Omnis) 3 x 68 ml, 50 x konsentrert Tris/EDTA-buffer, ph 9 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50 x) (Dako Omnis) 3 x 68 ml, 50 x konsentrert Sitratbuffer, ph 6,1 GC807 DM851 GC808 DM846 GV809 DM845 GV821 DM844 GV825 DM847 + DM843 Wash Buffer (20 x) (Dako Omnis) 20 x 175 ml, 20 x konsentrert Tris-bufret saltvannsløsning som inneholder Tween 20, ph 7,6 (± 0,1). Hematoxylin (Dako Omnis) 8 x 22,5 ml, klar til bruk Vannholdig løsning av hematoksylin. EnVision FLEX+ Rabbit LINKER (Dako Omnis) 1 x 22,5 ml, klar til bruk Bufret løsningsmiddel som inneholder stabiliserende protein og et antimikrobielt middel. EnVision FLEX+ Mouse LINKER (Dako Omnis) 1 x 22,5 ml, klar til bruk Bufret løsningsmiddel som inneholder stabiliserende protein og et antimikrobielt middel. EnVision FLEX DAB+ Substrate Chromogen System (Dako Omnis) EnVision FLEX DAB+ Chromogen (Dako Omnis) 2 x 1 ml 3,3'-diaminobenzidin-tetrahydroklorid i organisk løsningsmiddel. Fargen på dette reagenset kan variere fra kraftig fiolett til fargeløs, uten at det har innflytelse på settets ytelse. EnVision FLEX Substrate Buffer (Dako Omnis) 4 x 26 ml Bufret løsningsmiddel som inneholder hydrogenperoksid og konserveringsmiddel. ( ) P04120NO_001_GV800/ s. 5/10

6 Forholdsregler 1. For profesjonelle brukere. 2. EnVision FLEX/HRP inneholder materiale av animalsk opprinnelse, og grunnet produksjonsfremgangsmåten kan det ikke utelukkes at spormengder av menneskelig materiale forekommer. I likhet med alle andre produkter som er utvunnet fra biologiske kilder, skal produktene håndteres riktig. 3. EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent, EnVision FLEX/HRP, EnVision FLEX Substrate Buffer, EnVision FLEX DAB+ Chromogen eller EnVision FLEX Substrate Working Solution må ikke utsettes for sterkt lys. 4. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) inneholder 5-10% trometamol, 1-5% nonylfenol, etoksylatet, og 1-5% acetic acid, (ethylenedinitrilo)tetra-, disodium salt, dihydrate. EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50x) er merket: Advarsel H319 Gir alvorlig øyeirritasjon. H411 Giftig, med langtidsvirkning, for liv i vann. P280 Bruk vernebriller eller ansiktsvern. P273 Unngå utslipp til miljøet. P264 Vask hendene grundig etter håndtering. P305 + P351 + P338 VED KONTAKT MED ØYNENE: Skyll forsiktig med vann i flere minutter. Fjern eventuelle kontaktlinser dersom dette enkelt lar seg gjøre. Fortsett skyllingen. P337 + P313 P501 Ved vedvarende øyeirritasjon: Søk legehjelp. Disponer innholdet og emballasje i henhold til lokale, regionale, nasjonale og internasjonale forskrifter. 5. Et sikkerhetsdatablad for EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent er tilgjengelig på anmodning for profesjonelle brukere. 6. EnVision FLEX DAB+ Chromogen inneholder 1 5 % biphenyl-3,3',4,4'-tetrayltetraammonium tetrachloride og er merket: Fare H350 H341 P201 P202 P280 P308 + P313 P405 P501 Kan forårsake kreft. Mistenkes for å kunne forårsake genetiske skader. Innhent særskilt instruks før bruk. Skal ikke håndteres før alle advarsler er lest og oppfattet. Bruk vernehansker. Bruk vernebriller eller ansiktsvern. Bruk verneklær. Ved eksponering eller mistanke om eksponering: Søk legehjelp. Oppbevares innelåst. Disponer innholdet og emballasje i henhold til lokale, regionale, nasjonale og internasjonale forskrifter. Som en generell regel har ikke personer under 18 år tillatelse til å arbeide med dette produktet. Brukerne skal instrueres nøye i riktig arbeidsprosedyre, de farlige egenskapene til produktet og de nødvendige sikkerhetsinstruksjonene. Sikkerhetsdatabladet for materialsikkerhet (MSDS) inneholder ytterligere informasjon. 7. Bruk egnet personlig verneutstyr for å unngå kontakt med øyne og hud. 8. Ubrukt løsning skal kasseres i henhold til lokale, nasjonale og europeiske forskrifter. Oppbevaring Oppbevar EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50 x) ved 2 8 C. Oppbevar EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent, EnVision FLEX/HRP, EnVision FLEX DAB+ ( ) P04120NO_001_GV800/ s. 6/10

7 Chromogen og EnVision FLEX Substrate Buffer på et mørkt sted og ved 2 8 C. Lokket må være lukket under oppbevaring. Intern stabilitet for EnVision FLEX Peroxidase-Blocking Reagent, EnVision FLEX/HRP, EnVision FLEX DAB+ Chromogen og EnVision FLEX Substrate Buffer er 75 timer. Intern stabilitet for uttynnet EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph og Low ph er 7 dager. Gjenværende intern stabilitet spores av Dako Omnis-programvaren. Skal ikke brukes etter utløpsdatoen som er stemplet på flaskene. Hvis reagensene oppbevares under andre forhold enn de som er spesifisert, må forholdene verifiseres av brukeren. Hvis det observeres uventet farging som ikke kan forklares med variasjoner i laboratorieprosedyrer, og det er mistanke om at det er et problem med produktet, må du ta kontakt med Dakos tekniske avdeling. Reagenspreparering A.1 EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50 x) (DM848, kode GV804) eller EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph (50 x) (DM849, kode GV805) Gjør klar en arbeidsløsning ved å tynne ut konsentratet EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50 x) eller Low ph (50 x) 1:50 i destillert eller avionisert vann. Følgende fremgangsmåte anbefales: 1. Fyll en Dako Omnis volumflaske til påfyllingsstreken med destillert eller avionisert vann (3,325 L). Påse at volumflasken er plassert på et horisontalt underlag før påfylling. 2. Fyll hele innholdet i en 68 ml flaske med konsentratet EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph (50 x) eller Low ph (50 x) (Dako Omnis) på volumflasken. 3. Overfør den avtagbare merkelappen fra konsentratflasken til volumflasken. 4. Fest lokket, og snu volumflasken forsiktig 2 3 ganger. Ubrukt fortynnet løsning kan oppbevares ved 2 8 C i én måned. Den fortynnede løsningen kan brukes innen 7 dager hvis den oppbevares i Dako Omnis-instrumentet. Kast løsningen om den virker uklar. A.2 Wash Buffer (20 x) (DM851, kode GC807) Fremstill en arbeidsløsning ved å fortynne konsentratet Wash Buffer (20 x) (Dako Omnis) 1:20 i en Dako Omnis-volumflaske med destillert eller avionisert vann. Følgende fremgangsmåte anbefales for å redusere skumming: 1. Fyll en Dako Omnis volumflaske til påfyllingsstreken med destillert eller avionisert vann (3,325 L). Påse at volumflasken er plassert på et horisontalt underlag før påfylling. 2. Fyll en 175 ml flaske med konsentratet Wash Buffer (20 x) (Dako Omnis) på volumflasken. 3. Overfør den avtagbare merkelappen fra konsentratflasken til volumflasken. 4. Fest lokket, og snu volumflasken forsiktig 2 3 ganger. Ubrukt fortynnet løsning kan oppbevares ved 2 8 C i én måned. Den fortynnede løsningen kan brukes innen 7 dager hvis den oppbevares i Dako Omnis-instrumentet. Gjenværende intern stabilitet spores av Dako Omnis-programvaren. Kast løsningen om den virker uklar. A.3 EnVision FLEX Substrate Working Solution EnVision FLEX Substrate Working Solution med DAB-innhold klargjøres internt av Dako Omnisinstrumentet. Den automatiserte prosessen blander én del EnVision FLEX DAB+ Chromogen (DM847) med 50 deler EnVision FLEX Substrate Buffer (DM843). Substrate Working Solution klargjøres alltid for ett stativ (med 1 5 objektglass) om gangen. Mengdene som leveres er tilstrekkelig for lasting av 200 stativer. ( ) P04120NO_001_GV800/ s. 7/10

8 Prøvetaking og -klargjøring Prøvene bør være formalinfikserte, parafininnstøpte vevssnitt. Fikseringstiden avhenger av fiksativet og av vevsprøvens type/tykkelse. Vevsblokker med tykkelse på 3 4 mm bør for eksempel fikseres i nøytralbufret formalin i timer. Den optimale tykkelsen på parafininnstøpte vevssnitt er 4 µm. Prøvene skal monteres på mikroskopobjektglass. Det anbefales å bruke FLEX IHC Microscope Slides (kode K8020) for bedre adhesjon av vevssnittene til objektglassene. Snittene skal monteres på objektglassene så flate og rynkefri som mulig. For mange rynker vil påvirke fargingsresultatene. MERK: Objektglassene for mikroskopet må ha en bredde som passer til Dako Omnis-instrumentet. I brukerhåndboken for Dako Omnis finnes definisjonen av brukbare objektglass for mikroskop. Parafinsnitt skal monteres fra et forhåndsvarmet vannbad som inneholder destillert eller avionisert vann. Vannbadet skal ikke inneholde noen tilsetningsstoffer (som gelatin, poly-l-lysin osv.). Seksjonene bør tørkes ved oppvarming, vanligvis ved en temperatur som ikke overskrider 60 C, i opptil 60 minutter. For å sikre at snittene festes skikkelig til objektglassene, er det viktig å tømme av vannet fra undersiden av snittene før ovnstørkingen. Prosedyre Visualiseringssystemet EnVision FLEX er utviklet for bruk på Dako Omnis-instrumentet i kombinasjon med primære antistoffer fra Dako. Den automatiserte prosedyren på Dako Omnis omfatter avparafinisering av vevsprøvesnitt, varmeindusert epitopavmaskering, immunohistokjemisk farging og kontrastfarging av formalinfikserte, parafininnstøpte vevssnitt. Protokolltrinnene for de automatiske prosedyrene kan vises, skrives ut og redigeres i henhold til den avanserte og den grunnleggende utgaven av Dako Omnis Brukerhåndbok. Forhåndsbehandlingsprosedyre og fargingsprotokoll velges avhengig av antistoff. Se pakningsvedlegget for det aktuelle primære antistoffet fra Dako. Les nøye gjennom Dako Omnis Grunnleggende Brukerhåndbok før du utfører protokoller på Dako Omnis-instrumentet. Protokollen EnVision FLEX er forhåndsprogrammert i Dako Omnis-programvaren. Detaljerte instruksjoner om klargjøring av instrumentet for farging finnes i Dako Omnis Grunnleggende Brukerhåndbok, og om protokoller i Dako Omnis Avansert Brukerhåndbok. Fargingsprosedyre Ved bruk av FLEX RTU Primary Antibodies for Dako Omnis, er optimal fargingsprotokoll programmert i Dako Omnis-programvaren. Optimal forhåndsbehandlingsmetode og inkubasjonstider er beskrevet i pakningsvedlegget for FLEX RTU primært antistoff eller Dako konsentrert antistoff. For enklere oppsett av nye protokoller anbefales det å bruke en av protokollmalene beskrevet nedenfor. Fra Dako Omnis-arbeidsstasjonen velges en av tre protokollmaler som inneholder anbefalte fargingstrinn og inkubasjonstider for visualiseringssystemet EnVision FLEX (en oversikt finnes i tabell 2): FLEX FLEX+ Mouse FLEX+ Rabbit Protokollmalene kan brukes til å generere tilpassede protokoller for spesifikke primære antistoffer. Følgende protokolltrinn kan tilpasses: Målhentingsreagens (for varmeindusert epitopavmaskering), temperatur og inkubasjonstid Primært antistoff og inkubasjonstid Inkubasjonstid for merket polymer (kun reduksjon) ( ) P04120NO_001_GV800/ s. 8/10

9 Kontrastfargereagens og inkubasjonstid Brukeren må verifisere den brukte protokollen. Hvis protokollene ikke er tilgjengelige på Dako Omnis-systemet, kan du ta kontakt med Dakos tekniske avdeling. Tabell 2. Oversikt over protokollmaler for EnVision FLEX/FLEX+. Fase Trinn Reagens Fargingsprotokollmal FLEX FLEX+ Mouse FLEX+ Rabbit Dewax Clearify-klarningsmiddel ja ja ja Dewax Target retrieval (Målhenting) Farging Kontrast farging Target retrieval (Målhenting) EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High ph eller EnVision FLEX Target Retrieval Solution, Low ph eller 97 ± 2 C* 30 min* 97 ± 2 C* 30 min* 97 ± 2 C* 30 min* Tilpasset reagens Primært antistoff 20 min* 20 min* 20 min* 20 min* Endogen EnVision FLEX Peroxidase- 3 min 3 min 3 min enzymblokk Blocking Reagent Sekundær EnVision FLEX+ Mouse eller - Mouse LINKER Rabbit LINKER reagens Rabbit LINKER 10 min 10 min Vask Wash Buffer (Dako Omnis) - vask vask Merket polymer EnVision FLEX/HRP 20 min* 20 min* 20 min* Substrate Chromogen EnVision FLEX Substrate Working Solution 5 min 5 min 5 min Kontrastfarge Hematoxylin (Dako Omnis)* 3 min* 3 min* 3 min* Vask Avionisert vann vask vask vask *Kan tilpasses. Etterfargingsprosedyre 1. Etter at runden er gjennomført, fjerner du objektglassrammen fra Unloading Station og overfører rammene til friskt, avionisert vann. 2. Objektglassene skal deretter dehydreres, klarnes, monteres med permanent monteringsmedium og forsegles. Kvalitetskontroll Hver fargingskjøring skal inkludere en kjent positiv kontrollprøve for å sikre riktig ytelse av alle de brukte reagensene. Hvis den positive kontrollprøven ikke viser positiv farging, skal merkingen av testprøvene anses som ugyldig. Et negativt kontrollreagens bør brukes med hver prøve for å identifisere ikke-spesifikk farging. Hvis ikke-spesifikk farging ikke kan skilles klart fra spesifikk farging, skal resultatet med testprøven anses som ugyldig. ( ) P04120NO_001_GV800/ s. 9/10

10 Tolking av resultatene Substrate Working Solution med diaminobenzidin gir brun farge på stedet der målantigenet registreres av primærantistoffet. Den brune fargen skal vises på den positive kontrollprøven på det stedet der det ventes at målantigenet finnes. Hvis en ikke-spesifikk farging forekommer, registreres dette som en ganske diffus, brun misfarging på objektglassene som er behandlet med det negative kontrollreagenset. Cellekjernen vil farges blå av hematoksylinkontrastfargen. Begrensninger 1. Kun for automatisert bruk på Dako Omnis-instrumenter. Ved farging med konsentrerte primære antistoffer fra Dako må den enkelte bruker vurdere og kontrollere optimal prosedyre. 2. Kun for bruk på formalinfikserte, parafininnstøpte vevssnitt. Ved bruk av nedfryste snitt eller celleprøver må brukeren vurdere og kontrollere optimal prosedyre, med mindre annet er angitt i pakningsvedlegget for det spesifikke primære antistoffet fra Dako. Endringer i prosedyren kan ha innvirkning på antall prøver som følger med settet. Symbolforklaring Katalognummer Temperaturbegrensing Partikode GHS-faresymbol (se avsnittet om forholdsregler) Medisinsk utstyr til in vitrodiagnostikk Oppbevares på et mørkt sted Bruk innen GHS-faresymbol (se avsnittet om forholdsregler) Se bruksanvisningen Innhold tilstrekkelig til <n> tester Produsent Dako EnVision -systemene dekkes av den amerikanske patenten og den europeiske patenten Produsert av: Dako Denmark A/S Produktionsvej 42 DK-2600 Glostrup Danmark Tlf Faks ( ) P04120NO_001_GV800/ s. 10/10