Pasientnær analysering innen medisinsk mikrobiologi Marie Elisabeth Vad Fagbioingeniør/ Medlem av RUFMIK Seksjon for Utvikling Avdeling for Mikrobiologi Ullevål,OUS Hva mener vi med pasientnær analysering(pna)? Ingen entydig definisjon Kanskje en metode som anvendes direkte på prøvemateriale tatt fra pasienten, og som gir et resultat innen <1 time. Testresultatet må være til nytte for behandlende lege, f.eks når det gjelder vurdering av antibiotikabehandling, isolering eller vurdering av innleggelse på sykehus. 1
Diagnostiske metoder Mikroskopi Immunologiske tester Molekylære hurtigtester De første hurtigmetodene mikroskopi Gram Akridin oransje Ziehl Neelsen Auramin (Rhodamin) Calcofluor White «Immunfarging»: Immunfluorescens, immunenzymteknikker 2
Hurtigtester basert på immunologiske teknikker «Immunkromatografi» Influensavirus Gruppe A streptokokker Mononukleose og HIV (heterofile antistoffer) Legionella antigen Pneumokokkantigen Malaria Denguevirus Molekylære hurtigtester Stiller noe varierende krav til bruker, men stort sett meget enkle og raske instrumenter. GeneXpert BDmax easyplex FilmArray 3
Noen eksempler fra Ullevål, Avdeling for Mikrobiologi, Seksjon for Bakteriologi Plassering av Bactec FX blodkulturskap på Akuttmottaket: Redusert svartid på 1 døgn, da inkubering starter med en gang prøven er tatt < 1 time Henter positive flasker 3 ganger pr. dag og tas direkte MALDI, samtidig som det mikroskoperes I løpet av 1 time får rekvirent navn på mikroben elektronisk via DIPS GeneXpert Det finnes i dag 6 forskjellige varianter av instrumentet: 1, 2, 4, 16, 48 og 80 moduls instrument Rask underkant av 1 time både ekstraksjon, PCR og deteksjon Ulike kit innen mikrobiologi (MRSA,Influensa A/B,Cdiff, Chlamydia/Gc, Tb, VRE, Enterovirus, Anthrax) 4
BD MAX Kan analyser 2x12 prøver samtidig Tar rundt 2 timer både ekstraksjon, PCR og deteksjon Åpen kanal i tillegg til CE merka kit (Cdiff, MRSA,ulike fæces og veneria kit Utførelse av Filmarray 5
FilmArray Meningitis / Encephalitis Panel IVD 6
Utførelse av eplex system 7
eazyplex systemet "LAMP som står for Loop-mediated Isothermal Amplification er en enkel, rask og spesifikk isoterm nukleinsyre amplifikasjon Utføres ved en bestemt temperatur rundt 65ºC, hvor amplifikasjon og påvisning skjer samtidig. Noen begrensninger som multiplexing 8
Testprosedyre for eazyplex CSF direct: 125 µl cerebrospinalvæske blandes med 25 µl LA (Lysis Agent) i eppendorfrør Blandingen inkuberes 3 min ved 99 C (cellelysis) 125 µl lysert LA blanding overføres til 125 ul RS (Resuspension Solution), blandes forsiktig 25 µl av LA RS blandingen pipetteres til de respektive rør Start GENIE 30 min til ferdig resultat. eazyplex CSF direct panel: 9
Hvordan kan hurtigtester utnyttes i sykehus? 1. Som del av det mikrobiologiske laboratoriet Krever utvidet åpningstid, evt 24/7 Kan dekke hele sykehuset Kompetent personell 2. Som del av generell laboratorievirksomhet («Sentrallab.») Vil ofte kreve overføring av ressurser Kan dekke hele sykehuset Kompetent personell 3. Satelittlab. 4. Pasientnær analysering (PNA) (POCT, Point of care testing) Vil ofte dekke kun egen avdeling Kompetanse? Satelittlab: Point of care laboratorium Stort sykehus i Frankrike uten egen mikrobiologisk avd.: Point of care laboratorium: Betjent 24/7, en person. 23 ulike analyser (PCR og antigentester). Svartid 30 min 3 ½ time. Laboratorium lå nær Intensivavd. Mikrobiolog i bakvakt. Cohen Bacrie S et al. PLOS One 2011: 6; e22403. 10
Pasientnær analysering (PNA) (POCT, Point of care testing) Vil ofte dekke kun egen avdeling Kompetanse? PNA innen mikrobiologi PNA må forventes å øke hvordan bør vi forholde oss? Mye å lære av medisinsk biokjemi. Mikrobiologi må ha hovedansvar for: Valg av instrument sammen med avdeling og Med.tekn. Avd. Verifisering, installasjon og implementering Brukeropplæring Prosedyrer Kvalitetskontroller Online kobling Håndtering av resultater 11