ANTISTOFFER MOT NERVEVEKSTFAKTOR (NGF) MED FORBEDRET STABILITET IN VIVO

Transkript

1 1 ANTISTOFFER MOT NERVEVEKSTFAKTOR (NGF) MED FORBEDRET STABILITET IN VIVO Bakgrunn for oppfinnelsen 1 Nervevekstfaktor (nerve growth factor, NGF) er et utskilt protein som ble oppdaget for over 0 år siden som et molekyl som fremmer overlevelse og differensiering av sensoriske og sympatiske nevroner. Betakjeden av NGF er ene og alene ansvarlig for den nervevekststimulerende aktiviteten av NGF. Betakjeden homodimeriserer og inkorporeres i et større proteinkompleks. NGF er medlem av en familie nevrotrofiske faktorer kjent som nevrotrofiner. NGF binder med høy affinitet til en tropomyosinreseptorkinase kjent som TrkA. NGF er også i stand til å binde en reseptor kjent som p7 NTR, et medlem av tumornekrosefaktorreseptor-superfamilien, som også interagerer med andre nevrotrofiner. Struktur og funksjon av NGF er gjennomgått i for eksempel Sofroniew, M.V. et al. (01) Annu. Rev. Neurosci. 24: ; Weismann, C. og de Vos, A.M. (01) Cell. Mol. Life Sci. 8:748 79; Fahnestock, M. (1991) Curr. Top. Microbiol. Immunol. 16: Selv om NGF opprinnelig ble identifisert for sin evne til å promotere overlevelsen og differensieringen av nevroner, er det økende bever for at disse utviklingsaspektene kun er ett aspekt av biologien av NGF. Særlig har NGF vært implisert i overføring og opprettholdelse av vedvarende eller kronisk smerte. For eksempel har både lokal og systemisk administrering av NGF vist seg å fremkalle hyperalgesi og allodyni (Lewin, G.R. et al. (1994) Eur. J. Neurosci. 6: ). Intravenøs infusjon av NGF hos mennesker frembringer myalgi i hele kroppen, mens lokal administrering fremkaller hyperalgesi og allodyni på injeksjonsstedet i tillegg til de systemiske effektene (Apfel, S.C. et al. (1998) Neurology 1:69 702). Videre letter overskudd av NGF, i enkelte cancerformer, vekst og infiltrering av nervefiber med induksjon av cancer-smerte (Zhu, Z. et al. (1999) J. Clin. Oncol. 17: ). 3 Involveringen av NGF i kronisk smerte har ført til betydelig interesse i terapeutiske tilnærminger basert på hemming av effektene av NGF (se f.eks. Saragovi, H.U. og Gehring, K. (00) Trends Pharmacol. Sci. 21:93-98). For eksempel ble en oppløselig form av TrkA-reseptoren anvendt for å blokkere aktiviteten av NGF, som viste seg å signifikant redusere dannelsen av nevromer,

2 2 som er ansvarlige for nevropatisk smerte, uten å skade de skadde nevronenes cellelegemer (Kryger, G.S. et al. (01) J. Hand Surg. (Am.) 26:63-644). 1 En annen tilnærming til nøytralisering av NGF-aktivitet er anvendelsen av anti- NGF-antistoffer, eksempel på hvilke antistoffer er beskrevet (se f.eks. PCTpublikasjonsnr. WO 01/78698, WO 01/64247, WO 02/09648, WO 04/032870, WO 0/06140, WO 06/13191, WO 06/1883, USpatentnr. 7,449,616; US-publikasjonsnr. US , US , US og US ). I dyremodeller av nevropatisk smerte (f.eks. ligering av nervestamme eller spinalnerve) hindrer systemisk injeksjon av nøytraliserende antistoffer mot NGF både allodyni og hyperalgesi (Ramer, M.S. og Bisby, M.A. (1999) Eur. J. Neurosci. 11: ; Ro, L.S. et al. (1999) Pain 79:26 274). Videre frembringer behandling med et nøytraliserende anti-ngfantistoff signifikant smertereduksjon i en murin cancersmertemodell (Sevcik, M.A. et al. (0) Pain 11: ). WO 09/02340 beskriver humane antistoffer mot human nervevekstfaktor. WO 06/13191 beskriver molekyler som er i stand til å hemme bindingen mellom NGF og TrkA-reseptoren som analgetika med langvarig effekt. I lys av det foregående, er således ytterligere NGF-antagonister ønsket. Kort beskrivelse av oppfinnelsen 2 3 Denne oppfinnelsen tilveiebringer anti-ngf-antistoffer som definert i kravene, som fremviser forbedret stabilitet in vivo. Særlig tilveiebringer oppfinnelsen et anti-ngf-antistoff omfattende en konstant region av humant IgG4, hvori den konstante regionen av humant IgG4 omfatter en hengselregionmutasjon som definert i kravene og hvori antistoffet fremviser en uventet lang terminal halveringstid for eliminasjon, så som en terminal halveringstid for eliminasjon hos en cynomolgus-ape på minst 1 dager og typisk i området fra omtrent 1 til omtrent 22 dager (eller i området fra 1 dager til 22 dager), eller i et område fra omtrent 1 dager til 28 dager (eller i et område fra 1 dager til 28 dager), eller i området fra omtrent 21 dager til omtrent 28 dager (eller i område fra 21 dager til 28 dager). Dette stabiliserte anti-ngf-antistoffet (hengsel-stabilisert antistoff)

3 3 1 fremviser også en terminal halveringstid for eliminasjon hos rotter på minst 8 dager, typisk i området fra omtrent 8 til omtrent 9 dager (eller i område fra 8 til 9 dager). I enda andre utførelsesformer kan det stabiliserte anti-ngf-antistoffet (hengsel-stabilisert antistoff) fremvise en gjennomsnittlig terminal halveringstid for eliminasjon hos mennesker på minst dager, eller minst dager, minst 1 dager, minst dager, minst 2 dager, minst dager eller i et område fra omtrent dager til omtrent 40 dager eller i et område fra omtrent 1 dager til omtrent dager (eller i et område fra til 40 dager eller i et område fra 1 til dager). I enda andre utførelsesformer kan det stabiliserte anti-ngf-antistoffet (hengsel-stabilisert antistoff) fremvise en gjennomsnittlig farmakologisk halveringstid hos mennesker på minst dager, eller minst 3 dager, eller minst 40 dager, eller i et område fra minst fire til seks uker (eller i et område fra fire til seks uker), eller i et område fra minst fire til sju uker (eller i et område fra fire til sju uker) eller i et område fra minst fire til åtte uker (eller i et område fra fire til åtte uker). 2 Mutasjonen i den konstante regionen av IgG4 er en hengselregionmutasjon. Hengselregionmutasjonen i den konstante regionen av IgG4 omfatter mutasjon av serinet i aminosyreposisjonen som tilsvarer aminosyreposisjon 8 med SEQ ID NO: 9 (som viser villtype-aminosyresekvensen av den konstante regionen av humant IgG4). Følgelig har anti-nervevekstfaktor (NGF)-antistoffet en konstant region av humant IgG4, der den konstante regionen av humant IgG4 inneholder en hengselregionmutasjon omfattende mutasjonen av serin i aminosyreposisjonen som tilsvarer aminosyreposisjon 8 med SEQ ID NO: 9. Serinet i aminosyreposisjonen som tilsvarer aminosyreposisjon 8 med SEQ ID NO: 9 er foretrukket mutert til prolin. Anti-NGF-antistoffets konstante region av humant IgG4 omfatter aminosyresekvensen med SEQ ID NO:. Andre IgG4- stabiliserende mutasjoner er beskrevet heri. 3 Et foretrukket anti-ngf-antistoff ifølge oppfinnelsen er antistoff PG1, hvorav tungkjede-aminosyresekvensen er vist i SEQ ID NO: 13, og hvorav lettkjedeaminosyresekvensen er vist i SEQ ID NO: 16. Følgelig tilveiebringer oppfinnelsen et anti-ngf-antistoff som definert i kravene, omfattende en konstant region av humant IgG4, hvori antistoffet omfatter en tungkjede omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 13 og en lettkjede omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 16. Beskrivelsen beskriver et anti-ngfantistoff omfattende en konstant region av humant IgG4, hvori antistoffet

4 4 1 omfatter en tungkjede som kodes av nukleotidsekvensen med SEQ ID NO: 11 og en lettkjede som kodes av nukleotidsekvensen med SEQ ID NO: 14. Beskrivelsen beskriver et anti-ngf-antistoff omfattende en tungkjede omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 13, hvori antistoffet har en terminal halveringstid for eliminasjon hos en cynomolgus-ape på minst 1 dager (og typisk i området fra omtrent 1 til omtrent 22 dager, eller i et område fra 1 til 22 dager, eller i et område fra omtrent 1 dager til 28 dager, eller i et område fra 1 til 28 dager, eller i området fra omtrent 21 dager til omtrent 28 dager eller i område fra 21 til 28 dager), og/eller har en terminal halveringstid for eliminasjon hos et menneske på minst dager (eller minst dager, eller minst 1 dager, eller minst dager, eller minst 2 dager, eller minst dager eller i et område fra omtrent dager til omtrent 40 dager eller i område fra omtrent 1 til omtrent dager, eller i et område fra til 40 dager eller i område fra 1 til dager). I tillegg eller alternativt kan antistoffet fremvise en gjennomsnittlig farmakologisk halveringstid hos mennesker på minst dager, eller minst 3 dager, eller minst 40 dager, eller i et område fra minst fire til seks uker (eller i et område fra fire til seks uker), eller i et område fra minst fire til sju uker (eller i et område fra fire til sju uker) eller i et område fra minst fire til åtte uker (eller i et område fra fire til åtte uker). Foretrukket kodes tungkjeden av nukleotidsekvensen med SEQ ID NO: 11. Foretrukket omfatter antistoffet en lettkjede omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 16. Foretrukket kodes lettkjeden av nukleotidsekvensen med SEQ ID NO: I en annen utførelsesform omfatter anti-ngf-antistoffet en variabel tungkjederegion omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 1 (som viser den variable tungkjederegionen av PG1). I en annen utførelsesform omfatter anti-ngf-antistoffet en variabel lettkjederegion omfattende aminosyresekvensen av SEQ ID NO: 2 (som viser den variable lettkjederegionen av PG1). I enda en annen utførelsesform omfatter anti-ngf-antistoffet en variabel tungkjederegion omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 1 og en variabel lettkjederegion omfattende aminosyresekvensen av SEQ ID NO: 2. I enda en annen utførelsesform konkurrerer anti-ngf-antistoffet om binding til NGF, med et antistoff omfattende en variabel tungkjederegion omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 1 og en variabel lettkjederegion omfattende aminosyresekvensen av SEQ ID NO: 2.

5 Anti-NGF-antistoffet omfatter en variabel tungkjederegion omfattende CDR 1, 2 og 3 som har aminosyresekvensene med SEQ ID NO: henholdsvis 3, 4 og (hvori SEQ ID NO: 3, 4 og viser henholdsvis de variable tungkjederegionene CDR 1, 2 og 3 av PG1). Anti-NGF-antistoffet omfatter også en variabel lettkjederegion omfattende CDR 1, 2 og 3 som har aminosyresekvensene med SEQ ID NO: henholdsvis 6, 7 og 8 (hvori SEQ ID NO: 6, 7 og 8 viser henholdsvis den variable lettkjederegionen CDR 1, 2 og 3 av PG1). Således omfatter anti- NGF-antistoffet definert i kravene en variabel tungkjederegion omfattende CDR 1, 2 og 3 som har aminosyresekvensene med SEQ ID NO: henholdsvis 3, 4 og, og omfatter en variabel lettkjederegion omfattende CDR 1, 2 og 3 som har aminosyresekvensene med SEQ ID NO: henholdsvis 6, 7 og 8. Foretrukket har anti-ngf-antistoffet én eller flere av følgende funksjonelle egenskaper: 1 a) binder til human NGF, men binder ikke til human hjerne-derivert nevrotrofisk faktor (brain-derived nevrotrophic factor, BDNF), human nevrotrofin 3 (NT-3) eller human nevrotrofin 4 (NT-4); b) binder til human - eller rotte-ngf med en K D på 0 pm eller mindre; c) hemmer binding av NGF til TrkA eller p7 NTR ; d) hemmer NGF-avhengig proliferasjon av TF-1-celler; e) hemmer NGF-avhengig overlevelse av kylling-dorsalrotganglie; f) hemmer NGF-avhengig nevrittutvekst i PC12-celler 2 I en annen utførelsesform fremviser anti-ngf-antistoffet ifølge oppfinnelsen ikke noen rebound-effekt når det administreres til et individ. For eksempel kan en doseringsmengde og doseringshyppighet av administrering for antistoffet være valgt slik at antistoffet ikke fremviser noen rebound-effekt når det administreres til et individ. 3 I en annen utførelsesform er et anti-ngf-antistoff ifølge oppfinnelsen i stand til å lindre smerte hos et individ med lang varighet, for eksempel med en varighet på minst omtrent én uke, eller minst omtrent to uker, eller minst omtrent fire uker, eller minst omtrent åtte uker, eller minst omtrent tolv uker, eller minst omtrent én uke til omtrent tolv uker, eller minst omtrent fire uker til omtrent tolv uker, eller minst omtrent åtte uker til omtrent tolv uker, eller med en varighet på

6 6 1 2 minst én uke, eller minst to uker, eller minst fire uker, eller minst åtte uker eller minst tolv uker eller minst én til tolv uker, eller minst fire til tolv uker, eller minst åtte til tolv uker etter administrering av en enkelt dose av anti-ngfantistoffet til individet. I en særlig foretrukket utførelsesform tilveiebringer oppfinnelsen et anti-ngfantistoff som definert i kravene, som har de kombinerte fordelaktige trekkene at med en forlenget terminal halveringstid for eliminasjon og en langvarig varighet av smertelindring. Følgelig tilveiebringer oppfinnelsen også et anti-ngf-antistoff som definert i kravene omfattende en konstant region av humant IgG4, hvori den konstante regionen av humant IgG4 omfatter en hengselregionmutasjon, hvori antistoffet har en terminal halveringstid for eliminasjon hos et menneske på minst dager, eller minst dager, eller minst 1 dager, eller minst dager, eller minst 2 dager, eller minst dager eller i et område fra omtrent dager til omtrent 40 dager eller i et område fra omtrent 1 dager til omtrent dager (eller i et område fra 40 dager eller i et område fra 1 dager), og hvori antistoffet lindrer smerte med en varighet på minst omtrent én uke til omtrent tolv uker, eller minst én uke til tolv uker, eller minst omtrent fire uker til omtrent tolv uker, eller minst fire uker til tolv uker, etter administrering av en enkelt dose antistoffet til et menneskelig individ (eller minst én uke, eller minst to uker, eller minst fire uker, eller minst åtte uker, eller minst tolv uker, eller én til tolv uker, eller fire til tolv uker, eller åtte til tolv uker, etter administrering av enkelt dose av antistoffet til et menneskelig individ). Hengselregionmutasjonen omfatter en serin-til-prolinmutasjon i aminosyreposisjonen som tilsvarer aminosyreposisjon 8 med SEQ ID NO: 9. Den konstante regionen av humant IgG4 omfatter aminosyresekvensen med SEQ ID NO:. I forskjellige utførelsesformer kan antistoffet fremvise én eller flere av de funksjonelle egenskapene beskrevet heri. I en foretrukket utførelsesform konkurrerer antistoffet om binding til NGF med et antistoff omfattende en variabel tungkjederegion omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 1 og en variabel lettkjederegion omfattende aminosyresekvensen av SEQ ID NO: 2. 3 I enda en annen utførelsesform tilveiebringer oppfinnelsen en antinervevekstfaktor (NGF)-antistoff som definert i kravene, omfattende en konstant region av humant IgG4, hvori den konstante regionen av humant IgG4 omfatter aminosyresekvensen med SEQ ID NO:, og hvori antistoffet binder til human - eller rotte-ngf med en K D på 0 pm eller mindre, hemmer binding av NGF til

7 TrkA eller p7 NTR med en IC 0 på pm eller mindre, og hemmer NGF-avhengig proliferasjon av TF-1-celler med en IC 0 på 0 ng/ml eller mindre. Foretrukket har antistoffet gjennomsnittlig halveringstid for endelig eliminasjon hos mennesker på minst dager, eller minst dager, eller minst 1 dager, eller minst dager, eller minst 2 dager, eller minst dager eller i et område fra omtrent dager til omtrent 40 dager eller i et område fra omtrent 1 dager til omtrent dager (eller i et område fra 40 dager eller i et område fra 1 dager). I tillegg eller alternativt kan antistoffet fremvise en gjennomsnittlig farmakologisk halveringstid hos mennesker på minst dager, eller minst 3 dager, eller minst 40 dager, eller i et område fra minst fire til seks uker (eller i et område fra fire til seks uker), eller i et område fra minst fire til sju uker (eller i et område fra fire til sju uker) eller i et område fra minst fire til åtte uker (eller i et område fra fire til åtte uker). Antistoffet kan videre fremvise én eller flere ytterligere funksjonelle egenskaper, så som at det binder til human NGF, men ikke binder til human hjerne-derivert nevrotrofisk faktor (BDNF), human nevrotrofin 3 (NT-3) eller human nevrotrofin 4 (NT-4); hemmer NGF-avhengig overlevelse av kylling-dorsalrotganglie; og/eller hemmer NGF-avhengig PC 12- celle-nevrittutvekst. Foretrukket lindrer antistoffet smerte med en varighet på minst omtrent én uke til omtrent tolv uker, eller minst omtrent fire uker til omtrent tolv uker, eller minst omtrent åtte uker til omtrent tolv uker, eller minst én uke til tolv uker, eller minst fire uker til tolv uker eller minst åtte uker til tolv uker (eller minst én uke, eller minst fire uker, eller minst åtte uker, eller minst tolv uker, eller i én til tolv uker, eller i fire til tolv uker, eller i åtte til tolv uker) etter administrering av en enkelt dose anti-ngf-antistoffet til et individ. Anti- NGF-antistoffet omfatter en variabel tungkjederegion omfattende CDR 1, 2 og 3 som har aminosyresekvensene med SEQ ID NO: henholdsvis 3, 4 og, og en variabel lettkjederegion omfattende CDR 1, 2 og 3 som har aminosyresekvensene med SEQ ID NO: henholdsvis 6, 7 og 8. Foretrukket omfatter antistoffet en variabel tungkjederegion omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 1 eller antistoffet omfatter en variabel lettkjederegion omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 2, eller antistoffet omfatter en variabel tungkjederegion omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 1 og en variabel lettkjederegion omfattende aminosyresekvensen av SEQ ID NO: 2, eller antistoffet konkurrerer om binding til NGF med et antistoff omfattende en variabel tungkjederegion omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 1 og en variabel lettkjederegion omfattende aminosyresekvensen av SEQ ID NO: 2.

8 8 I forskjellige foretrukne utførelsesformer tilveiebringer oppfinnelsen anti-ngfantistoffer som definert i kravene som har følgende trekk: 1 Et anti-nervevekstfaktor (NGF)-antistoff omfattende (i) en variabel tungkjederegion omfattende CDR 1, 2 og 3 som har aminosyresekvensene med SEQ ID NO: henholdsvis 3, 4 og, (ii) en variabel lettkjederegion omfattende CDR 1, 2 og 3 som har aminosyresekvensene med SEQ ID NO: henholdsvis 6, 7 og 8, og (iii) en konstant region av humant IgG4, hvori den konstante regionen av humant IgG4 omfatter aminosyresekvensen med SEQ ID NO:, hvori antistoffet har en gjennomsnittlig terminal halveringstid for eliminasjon hos mennesker på minst dager. I tillegg eller alternativt kan antistoffet fremvise en gjennomsnittlig farmakologisk halveringstid hos mennesker på minst dager, eller minst 3 dager, eller minst 40 dager, eller i et område fra minst fire til seks uker (eller i et område fra fire til seks uker), eller i et område fra minst fire til sju uker (eller i et område fra fire til sju uker) eller i et område fra minst fire til åtte uker (eller i et område fra fire til åtte uker). 2 3 Et anti-nervevekstfaktor (NGF)-antistoff omfattende (i) en variabel tungkjederegion omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO:1, (ii) en variabel lettkjederegion omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 2, og (iii) en konstant region av humant IgG4, hvori den konstante regionen av humant IgG4 omfatter aminosyresekvensen med SEQ ID NO:, hvori antistoffet har en gjennomsnittlig terminal halveringstid for eliminasjon hos mennesker på minst dager. I tillegg eller alternativt kan antistoffet fremvise en gjennomsnittlig farmakologisk halveringstid hos mennesker på minst dager, eller minst 3 dager, eller minst 40 dager, eller i et område fra minst fire til seks uker (eller i et område fra fire til seks uker), eller i et område fra minst fire til sju uker (eller i et område fra fire til sju uker) eller i et område fra minst fire til åtte uker (eller i et område fra fire til åtte uker). Et anti-nervevekstfaktor (NGF)-antistoff omfattende (i) en variabel tungkjederegion omfattende CDR 1, 2 og 3 som har aminosyresekvensene med SEQ ID NO: henholdsvis 3, 4 og, (ii) en variabel lettkjederegion omfattende CDR 1, 2 og 3 som har aminosyresekvensene med SEQ ID NO: henholdsvis 6, 7 og 8, og (iii) en konstant region av humant IgG4 omfattende en hengselregionmutasjon som definert i kravene, hvori antistoffet har en

9 9 gjennomsnittlig terminal halveringstid for eliminasjon hos mennesker på minst dager. I tillegg eller alternativt kan antistoffet fremvise en gjennomsnittlig farmakologisk halveringstid hos mennesker på minst dager, eller minst 3 dager, eller minst 40 dager, eller i et område fra minst fire til seks uker (eller i et område fra fire til seks uker), eller i et område fra minst fire til sju uker (eller i et område fra fire til sju uker) eller i et område fra minst fire til åtte uker (eller i et område fra fire til åtte uker). 1 Et anti-nervevekstfaktor (NGF)-antistoff omfattende (i) en variabel tungkjederegion omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO:1, (ii) en variabel lettkjederegion omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 2, og (iii) en konstant region av humant IgG4 omfattende en hengselregionmutasjon som definert i kravene, hvori antistoffet har gjennomsnittlig halveringstid for endelig eliminasjon hos mennesker på minst dager. I tillegg eller alternativt kan antistoffet fremvise en gjennomsnittlig farmakologisk halveringstid hos mennesker på minst dager, eller minst 3 dager, eller minst 40 dager, eller i et område fra minst fire til seks uker (eller i et område fra fire til seks uker), eller i et område fra minst fire til sju uker (eller i et område fra fire til sju uker) eller i et område fra minst fire til åtte uker (eller i et område fra fire til åtte uker). 2 3 Et anti-nervevekstfaktor (NGF)-antistoff omfattende (i) en variabel tungkjederegion omfattende CDR 1, 2 og 3 som har aminosyresekvensene med SEQ ID NO: henholdsvis 3, 4 og, (ii) en variabel lettkjederegion omfattende CDR 1, 2 og 3 som har aminosyresekvensene med SEQ ID NO: henholdsvis 6, 7 og 8, og (iii) en konstant region omfattende en hengselregionmutasjon som definert i kravene, hvori antistoffet har en gjennomsnittlig terminal halveringstid for eliminasjon hos mennesker på minst dager. I tillegg eller alternativt kan antistoffet fremvise en gjennomsnittlig farmakologisk halveringstid hos mennesker på minst dager, eller minst 3 dager, eller minst 40 dager, eller i et område fra minst fire til seks uker (eller i et område fra fire til seks uker), eller i et område fra minst fire til sju uker (eller i et område fra fire til sju uker) eller i et område fra minst fire til åtte uker (eller i et område fra fire til åtte uker). Et anti-nervevekstfaktor (NGF)-antistoff omfattende (i) en variabel tungkjederegion omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 1, (ii) en

10 variabel lettkjederegion omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 2, og (iii) en konstant region omfattende en hengselregionmutasjon som definert i kravene, hvori antistoffet har en gjennomsnittlig terminal halveringstid for eliminasjon hos mennesker på minst dager. I tillegg eller alternativt kan antistoffet fremvise en gjennomsnittlig farmakologisk halveringstid hos mennesker på minst dager, eller minst 3 dager, eller minst 40 dager, eller i et område fra minst fire til seks uker (eller i et område fra fire til seks uker), eller i et område fra minst fire til sju uker (eller i et område fra fire til sju uker) eller i et område fra minst fire til åtte uker (eller i et område fra fire til åtte uker) Et anti-nervevekstfaktor (NGF)-antistoff som definert i kravene, omfattende en konstant region av humant IgG4, hvori den konstante regionen av humant IgG4 omfatter aminosyresekvensen med SEQ ID NO:, hvori antistoffet binder til human - eller rotte-ngf med en K D på 0 pm eller mindre, hemmer binding av NGF til TrkA eller p7 NTR med en IC 0 på pm eller mindre, og hemmer NGFavhengig proliferasjon av TF-1-celler med en IC 0 av 0 ng/ml eller mindre, og hvori antistoffet har en gjennomsnittlig terminal halveringstid for eliminasjon hos mennesker på minst dager. I tillegg eller alternativt kan antistoffet fremvise en gjennomsnittlig farmakologisk halveringstid hos mennesker på minst dager, eller minst 3 dager, eller minst 40 dager, eller i et område fra minst fire til seks uker (eller i et område fra fire til seks uker), eller i et område fra minst fire til sju uker (eller i et område fra fire til sju uker) eller i et område fra minst fire til åtte uker (eller i et område fra fire til åtte uker). Et anti-nervevekstfaktor (NGF)-antistoff omfattende (i) en variabel tungkjederegion omfattende CDR 1, 2 og 3 som har aminosyresekvensene med SEQ ID NO: henholdsvis 3, 4 og, (ii) en variabel lettkjederegion omfattende CDR 1, 2 og 3 som har aminosyresekvensene med SEQ ID NO: henholdsvis 6, 7 og 8, og (iii) en konstant region av humant IgG4, hvori den konstante regionen av humant IgG4 omfatter aminosyresekvensen med SEQ ID NO:, hvori antistoffet binder til human - eller rotte-ngf med en K D på 0 pm eller mindre, hemmer binding av NGF til TrkA eller p7 NTR med en IC 0 av pm eller mindre, og hemmer NGF-avhengig proliferasjon av TF-1-celler med en IC 0 på 0 ng/ml eller mindre.

11 Et anti-nervevekstfaktor (NGF)-antistoff omfattende (i) en variabel tungkjederegion omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO:1, (ii) en variabel lettkjederegion omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 2, og (iii) en konstant region av humant IgG4, hvori den konstante regionen av humant IgG4 omfatter aminosyresekvensen med SEQ ID NO:, hvori antistoffet binder til human - eller rotte-ngf med en K D på 0 pm eller mindre, hemmer binding av NGF til TrkA eller p7 NTR med en IC 0 av pm eller mindre, og hemmer NGF-avhengig proliferasjon av TF-1-celler med en IC 0 på 0 ng/ml eller mindre. Et anti-nervevekstfaktor (NGF)-antistoff omfattende (i) en variabel tungkjederegion omfattende CDR 1, 2 og 3 som har aminosyresekvensene med SEQ ID NO: henholdsvis 3, 4 og, (ii) en variabel lettkjederegion omfattende CDR 1, 2 og 3 som har aminosyresekvensene med SEQ ID NO: henholdsvis 6, 7 og 8,og (iii) en konstant region av humant IgG4, omfattende en hengsdrlregionmutasjon som definert i kravene, hvori antistoffet binder til humant - eller rotte-ngf med en K D på 0 pm eller mindre, hemmer binding av NGF til TrkA eller p7 NTR med en IC 0 på pm eller mindre, og hemmer NGFavhengig proliferasjon av TF-1-celler med en IC 0 på 0 ng/ml eller mindre. Et anti-nervevekstfaktor (NGF)-antistoff omfattende (i) en variabel tungkjederegion omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 1, (ii) en variabel lettkjederegion omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 2, og (iii) en konstant region av humant IgG4 omfattende en hengselregionmutasjon som definert i kravene, hvori antistoffet binder til humant - eller rotte-ngf med en K D på 0 pm eller mindre, hemmer binding av NGF til TrkA eller p7 NTR med en IC 0 på pm eller mindre, og hemmer NGF-avhengig proliferasjon av TF-1- celler med en IC 0 på 0 ng/ml eller mindre. 3 Et anti-nervevekstfaktor (NGF)-antistoff omfattende (i) en variabel tungkjederegion omfattende CDR 1, 2 og 3 som har aminosyresekvensene med SEQ ID NO: henholdsvis 3, 4 og, (ii) en variabel lettkjederegion omfattende CDR 1, 2 og 3 som har aminosyresekvensene med SEQ ID NO: henholdsvis 6, 7 og 8, og (iii) en konstant region omfattende en hengselregionmutasjon som definert i kravene, hvori antistoffet binder til humant - eller rotte-ngf med en K D på 0 pm eller mindre, hemmer binding av NGF til TrkA eller p7 NTR med en

12 12 IC 0 på pm eller mindre, og hemmer NGF-avhengig proliferasjon av TF-1- celler med en IC 0 på 0 ng/ml eller mindre. Et anti-nervevekstfaktor (NGF)-antistoff omfattende (i) en variabel tungkjederegion omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 1, (ii) en variabel lettkjederegion omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 2, og (iii) en konstant region omfattende en hengselregionmutasjon som definert i kravene, hvori antistoffet binder til humant - eller rotte-ngf med en K D på 0 pm eller mindre, hemmer binding av NGF til TrkA eller p7 NTR med en IC 0 på pm eller mindre, og hemmer NGF-avhengig proliferasjon av TF-1-celler med en IC 0 på 0 ng/ml eller mindre. 1 Et anti-nervevekstfaktor (NGF)-antistoff som definert i kravene, omfattende en konstant region av humant IgG4, hvori den konstante regionen av humant IgG4 omfatter en mutasjon som definert i kravene, og hvori antistoffet har en gjennomsnittlig terminal halveringstid for eliminasjon hos mennesker på minst dager. I tillegg eller alternativt kan antistoffet fremvise en gjennomsnittlig farmakologisk halveringstid hos mennesker på minst dager, eller minst 3 dager, eller minst 40 dager, eller i et område fra minst fire til seks uker (eller i et område fra fire til seks uker), eller i et område fra minst fire til sju uker (eller i et område fra fire til sju uker) eller i et område fra minst fire til åtte uker (eller i et område fra fire til åtte uker). 2 Et anti-nervevekstfaktor (NGF)-antistoff som definert i kravene, omfattende en konstant region av humant IgG4, hvori den konstante regionen av humant IgG4 omfatter en mutasjon som definert i kravene, og hvori antistoffet har en terminal halveringstid for eliminasjon hos en cynomolgus-ape på minst 1 dager. I tillegg eller alternativt kan antistoffet fremvise en gjennomsnittlig farmakologisk halveringstid hos mennesker på minst dager, eller minst 3 dager, eller minst 40 dager, eller i et område fra minst fire til seks uker (eller i et område fra fire til seks uker), eller i et område fra minst fire til sju uker (eller i et område fra fire til sju uker) eller i et område fra minst fire til åtte uker (eller i et område fra fire til åtte uker). 3 I forskjellige utførelsesformer kan anti-ngf-antistoffet ifølge oppfinnelsen for eksempel være et kimært, et humanisert eller et humant antistoff, eller et antistoff i hvilket de potensielle T-celleepitopene er eliminert.

13 I et annet aspekt tilveiebringer oppfinnelsen en farmasøytisk sammensetning omfattende et anti-ngf-antistoff ifølge oppfinnelsen som definert i kravene, og en farmasøytisk akseptabel bærer. Beskrivelsen beskriver demping eller lindring av en NGF-relatert sykdom eller tilstand hos et individ, omfattende administrering til individet av et anti-ngfantistoff ifølge oppfinnelsen. Ikke-begrensende eksempel på NGF-relaterte sykdommer og tilstander inkluderer inflammatorisk smerte, post-operativ smerte, nevropatisk smerte, bruddsmerte, urinsyregikt leddsmerte, postherpetisk nevralgi, cancersmerte, osteoartritt eller revmatoid atrtittsmerte, isjas, smerter assosiert med sigdcellekriser, hodepiner, dysmenoré, endometriose, muskel- og skjelettsmerte, kronisk nedre ryggsmerte, fibromyalgi, forstuinger, visceral smerte, cyster på eggstokkene, prostatitt, cystitt, interstitiell cystitt, snittsmerte, migrene, trigeminusnevralgi, smerte fra forbrenninger og/eller skader, smerte assosiert med trauma, smerte assosiert med muskel- og skjelettsykdommer, Bekhterevs sykdom, periartikulære patologier, smerte fra benmetastaser, smerte fra HIV, erytromelalgi eller smerte forårsaket av pankreatitt eller nyrestein. Andre eksempel på NGF-relaterte sykdommer og tilstander inkluderer malignt melanom, Sjøgrens syndrom og asthma, så som ukontrollert asthma med alvorlig hyperreaktivitet i luftveiene og hoste som er vanskelig å behandle. Særlig foretrukne sykdommer og tilstander for behandling ifølge fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen inkluderer inflammatorisk smerte (særlig osteoartritt- eller revmatoid atrtittsmerte), muskel- og skjelettsmerte (særlig kronisk nedre ryggsmerte), nevropatisk smerte (særlig diabetisk nevropati), cancer-smerte og smerte fra benmetastaser, interstitiell cystitt / smertefull blære-syndrom, smerte assosiert med kronisk abakteriell prostatitt, smerte assosiert med endometriose og/eller livmorfibromer og post-operativ smerte. Antistoffet kan være for administrering, for eksempel, intravenøst, subkutant (f.eks. via en injeksjonspenn eller subkutant implantat), intramuskulært eller intraartikulært, selv om andre egnede administrasjonsmåter er beskrevet heri. Foretrukket er antistoffet for administrering i en dose i et område fra 0,1 mg/kg til 3 mg/kg eller i en dose i et område fra 0,1 mg/kg til mg/kg. Antistoffet kan for eksempel være for administrering i en dose i et område fra omtrent 3 µg/kg til omtrent 00 µg/kg, der foretrukne doser inkluderer 0 µg/kg eller 0

14 14 µg/kg, I andreutførelsesformer er antistoffet for administrering i en dose i et område fra 0,1 mg/kg til mg/kg, eller i et område fra 0,1 mg/kg til mg/kg, eller i et område fra 0,1 mg/kg til mg/kg, eller i et område fra 1 mg/kg til mg/kg, eller i et område fra 1 mg/kg til mg/kg eller i et område fra 1 mg/kg til mg/kg, selv om andre egnede doser og doseområder er beskrevet heri. Videre kan en fast doseformulering av antistoffet anvendes. 1 Antistoffet kan være for administrering alene eller i kombinasjon med ett eller more ytterligere farmasøytiske middel. For eksempel kan et andre farmasøytisk middel, så som et NSAID, et analgetikum (f.eks. et opioidanalgetikum) en lokalbedøvelse, en nerveblokker, en fenolblokker, et terapeutisk antistoff, et antikonvulsivum, et antidepressivum, topikal kapsaicin eller et antiviralt middel, administreres i kombinasjon med anti-ngf-antistoffet ifølge oppfinnelsen. Særlig foretrukne andre farmasøytiske middel for kombinasjonsbehandling med et antistoff ifølge oppfinnelsen, inkluderer opioidanalgetika, så som morfin. Andre foretrukne andre farmasøytiske middel for kombinasjonsbehandling inkluderer TrkA-hemmere og proteinkinase C (PKC)-hemmere. 2 3 I en foretrukket utførelsesform tilveiebringer oppfinnelsen et anti-ngf-antistoff for anvendelse i en fremgangsmåte for demping eller hemming av smerte hos et individ, hvori anti-nervevekstfaktor (NGF)-antistoffet er som definert i kravene, og hvori antistoffet lindrer smerte hos individet med en varighet på minst fire til tolv uker (eller i minst én til tolv uker, eller i minst åtte til tolv uker, eller i fire til tolv uker, eller i én til tolv uker, eller i åtte til tolv uker, eller i minst én uke, eller i minst fire uker, eller i minst åtte uker, eller i minst tolv uker) etter administrering av en enkelt dose av anti-ngf-antistoffet til et individ. Anti-NGFantistoffet omfatter en variabel tungkjederegion omfattende CDR 1, 2 og 3 som har aminosyresekvensene med SEQ ID NO: henholdsvis 3, 4 og, og en variabel lettkjederegion omfattende CDR 1, 2 og 3 som har aminosyresekvensene med SEQ ID NO: henholdsvis 6, 7 og 8. Foretrukket omfatter anti-ngf-antistoffet en variabel tungkjederegion omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 1 og en variabel lettkjederegion omfattende aminosyresekvensen av SEQ ID NO: 2. Foretrukket er smerten valgt fra gruppen bestående av osteoatrtittsmerte, kronisk nedre ryggsmerte, diabetisk nevropatisk smerte, cancer-smerte, smerte fra benmetastaser, interstitiell cystitt, smertefull blære-syndrom, smerte assosiert med kronisk abakteriell prostatitt, smerte assosiert med endometriose, smerte assosiert med livmorfibromer og post-operativ smerte. Foretrukket er

15 1 anti-ngf-antistoffet for administrering i en dose i et område fra 0,1 til 3 mg/kg eller i en dose i et område fra 0,1 mg/kg til mg/kg. Foretrukket er antistoffet for administrering intravenøst eller subkutant. Foretrukket har antistoffet en gjennomsnittlig halveringstid for endelig eliminasjon hos et menneske på minst dager (eller minst dager, eller minst 1 dager, eller minst dager, eller minst 2 dager, eller minst dager eller i et område fra omtrent dager til omtrent 40 dager, eller i område fra omtrent 1 dager til omtrent dager, eller i et område fra 40 dager, eller i et område fra 1 dager) Beskrivelsen beskriver demping eller hemming av en nervevekstfaktor (NGF)- relatert sykdom eller tilstand hos et individ slik at en rebound-effekt unngås hos individet, ved hjelp av et anti-ngf-antistoff omfattende en konstant region av humant IgG4, hvori den konstante regionen av humant IgG4 omfatter en hengselregionmutasjon, og hvori antistoffet har en terminal halveringstid for eliminasjon hos et menneske på minst dager (eller minst dager, eller minst 1 dager, eller minst dager, eller minst 2 dager, eller minst dager eller i et område fra omtrent dager til omtrent 40 dager eller i område fra omtrent 1 til omtrent dager, eller i et område fra til 40 dager eller i område fra 1 til dager), og hvori antistoffet administreres i en dose og med en hyppighet slik at en rebound-effekt unngås hos individet. I tillegg eller alternativt kan antistoffet fremvise en gjennomsnittlig farmakologisk halveringstid hos mennesker på minst dager, eller minst 3 dager, eller minst 40 dager, eller i et område fra minst fire til seks uker (eller i et område fra fire til seks uker), eller i et område fra minst fire til sju uker (eller i et område fra fire til sju uker) eller i et område fra minst fire til åtte uker (eller i et område fra fire til åtte uker). Foretrukket omfatter den konstante regionen av humant IgG4 en mutasjon i aminosyreposisjonen som tilsvarer aminosyreposisjon 8 med SEQ ID NO: 9. Serinet i aminosyreposisjonen som tilsvarer aminosyreposisjon 8 med SEQ ID NO: 9 er foretrukket mutert til prolin. Foretrukket omfatter den konstante regionen av humant IgG4 aminosyresekvensen med SEQ ID NO:. Foretrukket omfatter anti-ngf-antistoffet en variabel tungkjederegion omfattende CDR 1, 2 og 3 som har aminosyresekvensene med SEQ ID NO: henholdsvis 3, 4 og, og en variabel lettkjederegion omfattende CDR 1, 2 og 3 som har aminosyresekvensene med SEQ ID NO: henholdsvis 6, 7 og 8. Foretrukket omfatter anti-ngf-antistoffet en variabel tungkjederegion omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 1 og en variabel lettkjederegion omfattende aminosyresekvensen av SEQ ID NO: 2. Foretrukket

16 16 konkurrerer antistoffet om binding til NGF, med et antistoff omfattende en variabel tungkjederegion omfattende aminosyresekvensen med SEQ ID NO: 1 og en variabel lettkjederegion omfattende aminosyresekvensen av SEQ ID NO: 2. Foretrukket er den NGF-relaterte sykdommen eller tilstanden smerte valgt fra gruppen bestående av osteoatrtittsmerte, kronisk nedre ryggsmerte, diabetisk nevropatisk smerte, cancer-smerte, smerte fra benmetastaser, interstitiell cystitt, smertefull blære-syndrom, smerte assosiert med kronisk abakteriell prostatitt, smerte assosiert med endometriose, smerte assosiert med livmorfibromer og post-operativ smerte. Foretrukket administreres anti-ngfantistoffet i en dose i et område fra 0,1 til 3 mg/kg eller i en dose i et område fra 0,1 mg/kg til mg/kg. Foretrukket administreres antistoffet intravenøst eller subkutant. 1 I et annet aspekt tilveiebringer oppfinnelsen anvendelse av anti-ngf-antistoffet ifølge oppfinnelsen som definert i kravene, for fremstilling av et legemiddel for demping eller hemming av en NGF-relatert sykdom eller tilstand hos et individ, hvori den NGF-relaterte sykdommen eller tilstanden er smerte. Foretrukket er smerten valgt fra gruppen bestående av osteoatrtittsmerte, kronisk nedre ryggsmerte, diabetisk nevropatisk smerte, cancer-smerte, smerte fra benmetastaser, interstitiell cystitt, smertefull blære-syndrom, smerte assosiert med kronisk abakteriell prostatitt, smerte assosiert med endometriose, smerte assosiert med livmorfibromer og post-operativ smerte. 2 Patentbeskrivelsen beskriver anvendelsen av anti-ngf-antistoffet ifølge oppfinnelsen for fremstilling av et legemiddel til anvendelse for å dempe eller hemme smerte hos et individ, slik at smerte dempes eller hemmes hos individet med en varighet på minst omtrent én uke til omtrent tolv uker, eller minst omtrent fire uker til omtrent tolv uker, eller minst omtrent åtte uker til omtrent tolv uker (eller med en varighet på én til tolv uker, eller fire til tolv uker, eller åtte til tolv uker, eller minst én uke, eller minst to uker, eller minst fire uker, eller minst åtte uker, eller minst tolv uker) etter administrering av en enkelt dose av anti-ngf-antistoffet til et individ. 3 Beskrivelsen beskriver anvendelsen av anti-ngf-antistoffet ifølge oppfinnelsen for fremstilling av et legemiddel for anvendelse for å dempe eller hemme en NGF-relatert sykdom eller tilstand hos et individ slik at en rebound-effekt unngås

17 17 hos individet. Særlig administreres antistoffet i en dose og med en hyppighet slik at en rebound-effekt unngås hos individet I enda andre aspekter tilveiebringer oppfinnelsen nukleinsyremolekyler som koder for de tunge kjedene og/eller lette kjedene av anti-ngf-antistoffene ifølge oppfinnelsen, så vel som vektorer (f.eks. ekspresjonsvektorer) omfattende slike vektorer, vertsceller omfattende slike vektorer og fremgangsmåter for ekspresjon av anti-ngf-antistoffene ved hjelp av vertscellene ifølge oppfinnelsen, alt som definert i kravene. Beskrivelsen beskriver demping eller hemming av en nervevekstfaktor (NGF)- relatert sykdom eller tilstand hos et individ slik at en rebound-effekt unngås hos individet. Fremgangsmåten omfatter administrering til individet av et anti-ngfantistoff omfattende en konstant region av humant IgG4, hvori den konstante regionen av humant IgG4 omfatter en mutasjon (foretrukket en hengselregionmutasjon) og hvori antistoffet har en terminal halveringstid for eliminasjon hos en cynomolgus-ape på minst 1 dager, mer foretrukket på minst 21 dager, og hvori antistoffet administreres i en dose og med en hyppighet slik at en rebound-effekt unngås hos individet. I en annen utførelsesform har antistoffet en terminal halveringstid for eliminasjon hos en cynomolgus-ape i et område fra omtrent 1 dager til omtrent 22 dager (eller 1 22 dager), eller et område fra omtrent 1 dager til omtrent 28 dager (eller 1 28 dager), eller i et område fra omtrent 21 dager til omtrent 28 dager (eller dager). I en annen utførelsesform har antistoffet en terminal halveringstid for eliminasjon hos en rotte på minst 8 dager. I enda en annen utførelsesform har antistoffet en gjennomsnittlig terminal halveringstid for eliminasjon hos mennesker på minst dager (eller minst dager, eller minst 1 dager, eller minst dager, eller minst 2 dager, eller minst dager, eller i et område fra omtrent dager til omtrent 40 dager, eller i et område fra omtrent 1 fra omtrent dager, eller i et område fra 40 dager eller i et område fra 1 dager). I tillegg eller alternativt kan antistoffet fremvise en gjennomsnittlig farmakologisk halveringstid hos mennesker på minst dager, eller minst 3 dager, eller minst 40 dager, eller i et område fra minst fire til seks uker (eller i et område fra fire til seks uker), eller i et område fra minst fire til sju uker (eller i et område fra fire til sju uker) eller i et område fra minst fire til åtte uker (eller i et område fra fire til åtte uker). Foretrukne mutasjoner inkluderer dem som er beskrevet ovenfor. Foretrukne antistoffer inkluderer dem som har sekvensene og/eller de ytterligere

18 18 funksjonelle egenskapene som beskrevet ovenfor. Ikke-begrensende eksempel på NGF-relatert sykdommer eller tilstander inkluderer dem som er fremsatt ovenfor. Beskrivelsen beskriver anvendelsen av anti-ngf-antistoffet ifølge oppfinnelsen for fremstilling av et legemiddel for anvendelse for å dempe eller hemme en NGF-relatert sykdom eller tilstand hos et individ slik at en rebound-effekt unngås hos individet. Sett omfattende et anti-ngf-antistoff ifølge oppfinnelsen er også definert i kravene. Et sett kan for eksempel omfatte anti-ngf-antistoff og anvisninger for anvendelse av antistoffet i behandling av en NGF-relatert sykdom eller tilstand. Kort beskrivelse av tegningene 1 Figur 1 er en grafisk fremstilling som viser bindingen av PG1 til human nervevekstfaktor (NGF) men ikke til human nervederivert nevrotrofisk faktor (BDNF), human nevrotrofin 3 (NT-3) eller human nevrotrofin 4 (NT-4), som bestemt ved ELISA. 2 Figur 2A er en grafisk fremstilling som viser hemming av binding av NGF til TrkA-reseptoren ved PG 1-antistoffet, som bestemt ved et radiomerket ligandbindingsforsøk. Figur 2B er en grafisk fremstilling som viser hemming av binding av NGF til p7 NTR -reseptoren ved PG 1-antistoffet, som bestemt ved et radiomerket ligandbindingsforsøk. Figur 3A er en grafisk fremstilling som viser den hemmende effekten av PG1- antistoff på TF-1 celleproliferasjon stimulert ved human NGF. Figur 3B er en grafisk fremstilling som viser den hemmende effekten av PG1- antistoff på TF-1 celleproliferasjon stimulert ved rotte-ngf. Figur 3C er en grafisk fremstilling som viser den hemmende effekten av PG1- antistoff på TF-1 celleproliferasjon stimulert ved muse-ngf. Figur 4 er en grafisk fremstilling som viser effekten av PG 1- antistoffbehandling på hudlesjoner hos rotter.

19 19 Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen Oppfinnelsen vedrører anti-nervevekstfaktor-antistoffer som definert i kravene, som fremvises forbedret stabilitet in vivo, som bevist ved, for eksempel, en uventet lang terminal halveringstid for eliminasjon hos cynomolgus-aper. Antistoffene ifølge oppfinnelsen inkluderer en modifikasjon av antistoffets konstante region av humant IgG4, ved introduksjon av en mutasjon i den konstante 1994-regionens hengselregion. For å lette forståelsen av den foreliggende oppfinnelsen, defineres først visse betegnelser. Ytterligere definisjoner gis gjennom hele den detaljerte beskrivelsen. I. Definisjoner Betegnelsene "nervevekstfaktor" eller "NGF" anvendes om hverandre heri og inkluderer varianter, isoformer, homologer, ortologer og paraloger. For eksempel kan et antistoff som er spesifikt for human NGF, i enkelte tilfeller, kryssreagere med NGF fra andre arter enn mennesket. I andre utførelsesformer kan et antistoff som er spesifikt for human NGF være fullstendig spesifikt for human NGF og kan ikke fremvise arter eller andre typer kryssreaktivitet. Betegnelsen "human NGF" henviser til sekvens av human NGF, så som omfattende aminosyresekvensen av human NGF-β-kjede, hvorav forløperformen har Genbank-aksesjonsnummer NP_002497, som kodes av nukleotidsekvensen med Genbank-aksesjonsnummer M_006. Sekvensen av human NGF-β-kjede kan skille seg fra human NGF-β med Genbank-aksesjonsnr. NP_ ved for eksempel å ha bevarte substitusjoner eller substitusjoner i ikke-bevarte regioner hvori den humane NGF-β har i det vesentlige den samme biologiske funksjonen som den humane NGF-β med Genbank-aksesjonsnr. NP_ Betegnelsen "rotte-ngf" henviser til sekvens av rotte-ngf, så som omfattende aminosyresekvensen av rotte-ngf-β-kjede, hvorav forløperformen har Genbankaksesjonsnummer XP_2272, som kodes av nukleotidsekvensen med Genbankaksesjonsnummer XP_2272. Betegnelsen "muse-ngf" henviser til sekvens av muse-ngf, så som omfattende aminosyresekvensen av muse-ngf-β-kjede, hvorav forløperformen har Genbank-aksesjonsnummer NP_038637, som kodes av nukleotidsekvensen med Genbank-aksesjonsnummer NM_

20 Betegnelsen "TrkA-reseptor", som anvendt heri, henviser til en NGF-reseptor også kjent i teknikken som tropomyosinkinase-reseptor A og nevrotrofisk tyrosinkinase-reseptortype 1 (NTRK1). Eksempel på ikke-begrensende sekvenser for human TrkA-reseptor inkluderer aminosyresekvensene med Genbankaksesjonsnummer NP_ (isoform 1), NP_002 (isoform 2) og NP_ (isoform 3). 1 Betegnelsen "p7 NTR -reseptor", som anvendt heri, henviser til a nevrotrofinreseptor, med en molekylvekt på tilnærmet 7 kda, som binder NGF og andre nevrotrofiner, hvilken reseptor er beskrevet i, f.eks. Bothwell, M. (1996) Science 272: Et eksempel på ikke-begrensende sekvens for human p7 NTR -reseptor er aminosyresekvensen NP_002498, som kodes av nukleotidsekvensen med Genbank-aksesjonsnummer NM_007. Betegnelsen "terminal halveringstid for eliminasjon", som anvendt heri med hensyn til anti-ngf-antistoffene, henviser til den mengden tid som trengs for at konsentrasjonen av antistoffet, som målt i serumet til et individ som antistoffet er administrert til, skal reduseres med halvparten etter at både absorpsjon og redistribusjon av antistoffet er fullstendig. Når en gruppe individer anvendes kan det geometriske gjennomsnittet av den terminale halveringstiden for eliminasjon hos individene anvendes som mål på terminal halveringstid for eliminasjon av antistoffet. 2 Betegnelsen "farmakologisk halveringstid", som anvendt heri med hensyn til anti-ngf-antistoffene, henviser til den gjennomsnittlige mengden tid for å opprettholde legemiddeleffekt in vivo (MRT for legemiddeleffekt). Den kan beregnes som forholdet mellom området av den grunnlinje-korrigerte effekttidskurven (AUMEC) ved oppstart vs. akkumulert grunnlinje-korrigert legemiddeleffekt over tid ((område under effekttidskurven (area under effecttime curve, AUEC)), ved hjelp av følgende formel: 3 Når en gruppe individer anvendes kan det geometriske gjennomsnittet av den farmakologiske halveringstiden for eliminasjon hos individene anvendes som mål på farmakologisk halveringstid for eliminasjon av antistoffet.

21 21 Betegnelsen "hengselregionmutasjon", som anvendt heri, henviser til en mutasjon, så som en punktmutasjon, substitusjon, addisjon eller delesjon, i hengselregionen av et immunglobulins konstante domene Betegnelsen "hemming" som anvendt heri, henviser til en hvilken som helst statistisk signifikant reduksjon i biologisk aktivitet, inkludert full blokkering av aktiviteten. "Hemming" kan for eksempel henvise til en reduksjon på omtrent %, %, %, 40 %, 0 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, eller 0 % i biologisk aktivitet. Betegnelsen "antistoff" eller "immunglobulin," som anvendt om hverandre heri, inkluderer hele antistoffer og et hvilket som helst antigenbindingsfragment (dvs., "antigen-bindende del") eller enkeltkjeder derav som opprettholder den forbedrede stabiliteten in vivo beskrevet heri. Et "antistoff" omfatter minst to tunge (H) kjeder og to lette (L) kjeder sammenbundet av disulfidbindinger. Hver tungkjede består av en variabel region i tungkjeden (forkortet heri som V H ) og en konstant region i tungkjeden. Tungkjedens konstante region består av tre domener, CH1, CH2 og CH3. Hver lettkjede består av en variabel region i lettkjeden (forkortet heri som V L ) og en konstant region i lettkjeden. Lettkjedens konstante region består av ett domene, CL. V H - og V L -regionene kan videre oppdeles i hypervariabilitetsregioner, kalt komplementaritetsbestemmende regioner (CDR), ispedd regioner som er mer konservert, kalt strukturregioner (FR). Hver V H og V L er omfattet av tre CDR-er og fire FR-er, ordnet fra aminoterminal til karboksy-terminal i følgende rekkefølge: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Tung- og lettkjedenes variable regioner inneholder et bindingsdomene som interagerer med et antigen. Antistoffenes konstante regioner kan mediere bindingen av immunglobulinet til vertsvev eller -faktorer, inkludert forskjellige immunsystemceller (f.eks. effektorceller) og den første komponenten (CIq) i det klassiske komplementsystemet. Betegnelsen "monoklonalt antistoff" betyr som anvendt heri et antistoff oppnådd fra en populasjon av i det vesentlige homogene antistoffer, dvs. at de enkelte antistoffene omfattende populasjonen er identiske med unntak av mulige naturlig forekommende mutasjoner som kan være til stede i mindre mengder. Monoklonale antistoffer er svært spesifikke, idet de rettes mot et enkelt antigensted. I motsetning til konvensjonelle (polyklonale) antistoffremstillinger som typisk omfatter forskjellige antistoffer rettet mot forskjellige determinanter