(12) Oversettelse av europeisk patentskrift (11) NO/EP 2475645 B1 (19) NO NORGE (51) Int Cl. C07D 213/82 (2006.01) A61K 31/465 (2006.01) A61P 3/06 (2006.01) Patentstyret (21) Oversettelse publisert 2013.11.18 (80) Dato for Den Europeiske Patentmyndighets publisering av det meddelte patentet 2013.07.03 (86) Europeisk søknadsnr 10749873.5 (86) Europeisk innleveringsdag 2010.09.08 (87) Den europeiske søknadens Publiseringsdato 2012.07.18 (30) Prioritet 2009.09.11, EP, 09170097 (84) Utpekte stater AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LI LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO SE SI SK SM TR Utpekte samarbeidende stater RS (73) Innehaver F.Hoffmann-La Roche AG, Grenzacherstrasse 124, 4070 Basel, Sveits (72) Oppfinner ROEVER, Stephan, Auf der Neusetze 19, 79594 Inzlingen, Tyskland WRIGHT, Matthew, Pfeffingerstrasse 16, CH-4053 Basel, Sveits (74) Fullmektig Bryn Aarflot AS, Postboks 449 Sentrum, 0104 OSLO, Norge (54) Benevnelse 5-(3,4-diklor-fenyl)-N-(2-hydroksy-cykloheksyl)-6-(2,2,2-trifluor-etoksy)-nikotinamid og salter derav som HDL kolesterol økende midler (56) Anførte publikasjoner WO-A1-2006/106054
1 Beskrivelse Foreliggende oppfinnelse angår en forbindelse med formel I og isomere former derav og farmasøytisk akseptable salter derav, fremstilling derav, farmasøytiske preparater inneholdende dem og anvendelse derav som medikamenter. Forbindelsen med formel I, dens isomere former og farmasøytisk akseptable salter er spesielt anvendelige som HDL-kolesteroløkende midler. Aterosklerose og dens assosierte koronar hjertesykdom er den viktigste dødsårsaken i den industrialiserte verden. Risiko for utvikling av koronar hjertesykdom er vist å være sterkt forbundet med visse lipidnivåer i plasma. Lipider blir transportert i blodet av lipoproteiner. Den generelle strukturen til lipoproteiner er en kjerne av nøytrale lipider (triglyserid og kolesterolester) og et hylster av polare lipider (fosfolipider og uforestret kolesterol). Det finnes tre forskjellige klasser av plasma-lipoproteiner med forskjellig kjernelipid-innhold: lav-densitet-lipoprotein (LDL) som er rik på kolesterylester (CE); høy-densitet-lipoprotein (HDL) som også er rik på kolesterylester (CE); og megetlav-densitet-lipoprotein (VLDL) som er triglyserid (TG)-rik. De forskjellige lipoproteinene kan separeres basert på deres ulike flotering ("flotation")-densitet eller størrelse. Høye LDL-kolesterol (LDL-C) og triglyseridnivåer er positivt korrelert, mens høye nivåer av HDL-kolesterol (HDL-C) er negativt korrelert med risikoen for å utvikle kardiovaskulære sykdommer. Ingen helt tilfredsstillende HDL-økende behandlinger finnes. Niacin kan øke HDL i betydelig grad, men har alvorlige toleranseproblemer hvilket reduserer complianse. Fibrater og HMG-CoA-reduktasehemmere øker HDL-kolesterol kun i beskjeden grad (-10-12%). Som følge av dette er det et betydelig udekket medisinsk behov for et veltolerert middel som i betydelig grad kan øke HDL-nivåer i plasma. Følgelig kan HDL-kolesteroløkende midler være anvendelige som medikamenter
2 for behandling og/eller forebygging av aterosklerose, perifer vaskulær sykdom, dyslipidemi, hyperbetalipoproteinemi, hypoalfalipoproteinemi, hyperkolesterolemi, hypertriglyseridemi, familiær hyperkolesterolemi, kardiovaskulære lidelser, angina, iskemi, hjerteiskemi, slag, myokardialt infarkt, reperfusjonsskade, angioplastikk restenose, hypertensjon og vaskulære komplikasjoner ved diabetes, fedme eller endotoksemi. I tillegg kan HDL-kolesteroløkende midler anvendes i kombinasjon med en annen forbindelse, hvor nevnte forbindelse er en HMG-CoA-reduktasehemmer, mikrosomalt triglyserid overføringsprotein (MTP)/ ApoB sekresjonsinhibitor, en PPAR-aktivator, en gallesyre reopptak inhibitor, en kolesterylester transportprotein (CETP)-inhibitor, en kolesterolabsorpsjonshemmer, en kolesterolsyntesehemmer, et fibrat, niacin, preparater inneholdende niacin eller andre HM74a-agonister, en ionebytterresin, en antioksidant, en ACAT-inhibitor eller en gallesyre sekvestrant. Formål ifølge foreliggende oppfinnelse er derfor å tilveiebringe en forbindelse som er et kraftig HDL-kolesteroløkende middel. Det er funnet at forbindelsen med formel I ifølge foreliggende oppfinnelse er svært anvendelig for behandling og/eller forebygging av sykdommer som kan behandles med HDL-kolesteroløkende midler, dvs. forbindelsen med formel I er spesielt anvendelig for behandling og/eller forebygging av dyslipidemi, aterosklerose og kardiovaskulære sykdommer. Formål ifølge foreliggende oppfinnelse er også å tilveiebringe en forbindelse som, ved terapeutisk aktive konsentrasjoner som øker HDL-konsentrasjoner, ikke interagerer med CB1-reseptoren. Dette er fordi CB1 reseptorligander kan kompromittere den terapeutiske nytten av HDL-kolesteroløkende midler, ettersom både agonister og antagonister av CB1-reseptoren har potensiale til å føre til bivirkninger. Forbindelser med felles strukturelle elementer er beskrevet som CB1 reseptorantagonister (WO 2006/106054) og blandede CB1 reseptorantagonister/ HDLkolesteroløkende midler (WO 2008/040651). Dersom ikke annet er angitt, er de følgende definisjoner angitt for å illustrere og definere betydningen og omfanget av de forskjellige betegnelsene anvendt for å beskrive oppfinnelsen heri. "Isomere former" er alle former av en forbindelse karakterisert ved at de har en identisk molekylformel men er forskjellig i karakteren eller sekvensen av binding av deres atomer eller romlig arrangement av deres atomer. Fortrinnsvis er de isomere
3 formene forskjellige i arrangementet av deres atomer i rommet og kan også betegnes "stereoisomerer". Stereoisomerer som ikke er speilbilder av hverandre er betegnet "diastereoisomerer" og stereoisomerer som er ikke-superponerbare speilbilder er betegnet "enantiomerer" eller noen ganger optiske isomerer. Et karbonatom bundet til fire ikke-identiske substituenter er betegnet et "kiralt senter". Betegnelsen "farmasøytisk akseptable salter" angir de salter som beholder den biologiske effektiviteten og egenskapene av de frie basene eller frie syrene, som ikke er biologisk eller på annen måte uønskede. Saltene blir dannet med uorganiske syrer så som saltsyre, bromhydrogensyre, svovelsyre, salpetersyre, fosforsyre og lignende, fortrinnsvis saltsyre og organiske syrer så som maursyre, eddiksyre, propionsyre, glykolsyre, pyrodruesyre, oksalsyre, maleinsyre, malonsyre, salicylsyre, ravsyre, fumarsyre, vinsyre, sitronsyre, benzosyre, kanelsyre, mandelsyre, metansulfonsyre, etansulfonsyre, p-toluensulfonsyre, salicylsyre, N-acetylcystein og lignende. Følgelig omfatter foretrukne "farmasøytisk akseptable salter" acetat, bromid, klorid, formiat, fumarat, maleat, mesylat, nitrat, oksalat, fosfat, sulfat, tartrat og tosylatsalt av forbindelser med formel I. I tillegg kan farmasøytisk akseptable salter fremstilles ved tilsetning av en uorganisk base eller en organisk base til den frie syren. Salter avledet fra en uorganisk base omfatter, men er ikke begrenset til, natrium, kalium, litium, ammonium, kalsium, magnesiumsalter og lignende. Salter avledet fra organiske baser omfatter, men er ikke begrenset til salter av primære, sekundære og tertiære aminer, substituerte aminer omfattende naturlig forekommende substituerte aminer, sykliske aminer og basisk ionebytterresiner, så som isopropylamin, trimetylamin, dietylamin, trietylamin, tripropylamin, etanolamin, dietylamin, lysin, arginin, N-etylpiperidin, piperidin, piperazin og lignende. Forbindelsen med formel I kan også være til stede i form av zwitterioner eller i form av hydrater. Spesielt foretrukne farmasøytisk akseptable salter av forbindelser med formel I er hydrokloridsaltene. I et foretrukket aspekt angår foreliggende oppfinnelse 5-(3,4-diklor-fenyl)-N- ((1R,2R)-2-hydroksy-sykloheksyl)-6-(2,2,2-trifluor-etoksy)-nikotinamid, dvs. en forbindelse med formel I av den isomere formen Ia.
4 Oppfinnelsen angir også 5-(3,4-diklor-fenyl)-N-((1R,2R)-2-hydroksy-sykloheksyl)- 6-(2,2,2-trifluor-etoksy)-nikotinamid og farmasøytisk akseptable salter derav. I et annet foretrukket aspekt angir foreliggende oppfinnelse 5-(3,4-diklor-fenyl)- N-((1S,2R)-2-hydroksy-sykloheksyl)-6-(2,2,2-trifluor-etoksy)-nikotinamid, dvs. en forbindelse med formel I av den isomere formen Ib. Oppfinnelsen angår også 5-(3,4-diklor-fenyl)-N-((1S,2R)-2-hydroksysykloheksyl)-6-(2,2,2-trifluor-etoksy)-nikotinamid og farmasøytisk akseptable salter derav. Forbindelsen med formel I kan fremstilles ved en fremgangsmåte, hvilken fremgangsmåte omfatter å binde en forbindelse med formelen hvor X er halogen, til en aryl-metall-spesie med formelen hvor M betyr boronsyre eller en boronsyreester, i nærvær av en Pd-katalysator under basiske betingelser, og eventuelt separere isomerene på en kiral HPLC-kolonne, og, om ønsket, omdanne den resulterende forbindelsen med formel I til et farmasøytisk akseptabelt salt derav. Aryl-metall-spesien er fortrinnsvis en aryl-boronsyre eller aryl-boronsyreester.
5 Palladium-katalysatoren er fortrinnsvis en palladium(ii)acetat/ trifenylfosfin-blanding eller et palladium(ii)klorid-dppf-kompleks som blir anvendt i nærvær av en base, fortrinnsvis trietylamin eller natriumkarbonat. X er halogen, mer foretrukket er X brom eller jod. Syntese av forbindelsene med den generelle struktur I kan gjennomføres i henhold til de følgende skjemaene 1 til 2. Ved å følge metoden i henhold til skjema 1, kan forbindelse AA (5-brom-6-klor-3- pyridinkarboksylsyre, CAS RN 29241-62-1) anvendes som utgangsmateriale. AA er kommersielt tilgjengelig eller kan alternativt fremstilles ved en flertrinns sekvens fra 6- hydroksy-3-pyridinkarboksylsyre ifølge metoder fra litteraturen. Forbindelse AC kan fremstilles fra AA ved omsetning med en egnet substituert primær eller sekundær alkohol med formel AB i nærvær av en base for eksempel kaliumhydroksid, i et inert løsningsmiddel, for eksempel dimetylsulfoksid, ved temperaturer fra romtemperatur til reflukstemperatur for løsningsmidlet, fortrinnsvis ved romtemperatur. Forbindelse AE kan fremstilles ved binding av AC og det tilsvarende aminet med formel AD ved egnede reaksjoner som danner amidbindinger. Disse reaksjonene er kjent på området. For eksempel kan koblingsreagenser som N,N'-karbonyl-diimidazol (CDI), N,N'-disykloheksylkarbodiimid (DCC), 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidhydroklorid (EDCI), 1-[bis(dimetylamino)-metylen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]pyridinium- 3-oksid heksafluorfosfat (HATU), 1-hydroksy-1,2,3-benzotriazol (HOBT) og O- benzotriazol-1-yl-n,n,n',n'-tetrametyluronium tetrafluorborat (TBTU) anvendes for å påvirke slik omsetning. En hensiktsmessig metode er å anvende for eksempel TBTU og en base for eksempel Hünig's base (N-etyldiisopropylamin) i et inert løsningsmiddel så som for eksempel dimetylformamid ved romtemperatur. I de følgende trinn blir forbindelser med formel I oppnådd ved binding av hensiktsmessig substituert aryl metall-spesie med formel AF, fortrinnsvis en arylboronsyre eller arylboronsyreester, til AE i nærvær av en egnet katalysator, fortrinnsvis en palladium-katalysator og mer foretrukket palladium(ii)acetat/ trifenylfosfin-blandinger eller palladium(ii)klorid-dppf (1,1'-bis(difenylfosfino)ferrocen)- komplekser og en base, fortrinnsvis trietylamin eller natriumkarbonat i et inert løsningsmiddel så som dimetylformamid eller toluen.
6 Forbindelser med formel AE eller forbindelser I som blir fremstilt i henhold til skjema 1 kan inneholde ett eller flere kirale sentere avhengig av den eksakte karakteren av aminet AD. De kirale forbindelsene AE-kiral eller I-kiral kan oppnås ved en rekke metoder kjent på området, som syntese fra kirale forløpere eller metoder for kiral separasjon. Kiral separasjon på kiral HPLC-kolonne blir fordelaktig utført for forbindelsen som gir den høyere oppløseligheten i den mobile fasen. Forbindelser med formel AE er generelt mer oppløselige i heptan/alkohol-blandinger enn forbindelser med formel I. Separering av AE-kiral 1 og AE-kiral 2 fra AE-rac kan utføres i henhold til skjema 2 ved anvendelse av en egnet kiral HPLC-kolonne så som ChiralPak AD eller lignende stasjonære faser enten i batch-prosess eller som moving bed-prosess med egnede mobile faser så som heptan/ isopropanol-blandinger.
7 Som beskrevet ovenfor kan forbindelsene med formel I ifølge foreliggende oppfinnelse anvendes som medikamenter for behandling og/eller forebygging av sykdommer som kan behandles med HDL-kolesteroløkende midler. Eksempler på slike sykdommer er aterosklerose, perifer vaskulær sykdom, dyslipidemi, hyperbetalipoproteinemi, hypoalfalipoproteinemi, hyperkolesterolemi, hypertriglyseridemi, familiær hyperkolesterolemi, kardiovaskulære sykdommer så som angina, iskemi, hjerteiskemi, slag, myokardialt infarkt, reperfusjonsskade, angioplastikk restenose, hypertensjon og vaskulære komplikasjoner ved diabetes, fedme eller endotoksemi. Anvendelse som medikament for behandling og/eller forebygging av dyslipidemi aterosklerose og kardiovaskulære sykdommer er foretrukket. Oppfinnelsen angår derfor også et farmasøytisk preparat omfattende en forbindelse som definert ovenfor og en farmasøytisk akseptabel bærer og/eller adjuvans som er anvendelig for behandling og/eller forebygging av sykdommer som kan behandles med HDL-kolesteroløkende midler. Oppfinnelsen angår følgelig et farmasøytisk preparat som definert ovenfor for behandling og/eller forebygging av aterosklerose, perifer vaskulær sykdom, dyslipidemi, hyperbetalipoproteinemi, hypoalfalipoproteinemi, hyperkolesterolemi, hypertriglyseridemi, familiær hyperkolesterolemi, kardiovaskulære sykdommer så som angina, iskemi, hjerteiskemi, slag, myokardialt infarkt, reperfusjonsskade, angioplastikk restenose, hypertensjon og vaskulære komplikasjoner ved diabetes, fedme eller endotoksemi. I en annen utførelsesform angår oppfinnelsen en forbindelse med formel (I) for anvendelse ved en fremgangsmåte for behandling og/eller forebygging av sykdommer som kan behandles med HDL-kolesteroløkende midler. Eksempler på slike sykdommer er aterosklerose, perifer vaskulær sykdom, dyslipidemi, hyperbetalipoproteinemi, hypoalfalipoproteinemi, hyperkolesterolemi, hypertriglyseridemi, familiær
8 hyperkolesterolemi, kardiovaskulære sykdommer så som angina, iskemi, hjerteiskemi, slag, myokardialt infarkt, reperfusjonsskade, angioplastikk restenose, hypertensjon og vaskulære komplikasjoner ved diabetes, fedme eller endotoksemi. En fremgangsmåte for behandling og/eller forebygging av dyslipidemi aterosklerose og kardiovaskulære sykdommer er foretrukket. I tillegg angår oppfinnelsen anvendelse av forbindelser med formel I som definert ovenfor for fremstilling av et medikament for behandling og/eller forebygging av sykdommer kan behandles med HDL-økende midler. Eksempler på slike sykdommer er aterosklerose, perifer vaskulær sykdom, dyslipidemi, hyperbetalipoproteinemi, hypoalfalipoproteinemi, hyperkolesterolemi, hypertriglyseridemi, familiær hyperkolesterolemi, kardiovaskulære sykdommer så som angina, iskemi, hjerteiskemi, slag, myokardialt infarkt, reperfusjonsskade, angioplastikk-restenose, hypertensjon og vaskulære komplikasjoner ved diabetes, fedme eller endotoksemi. Anvendelse av forbindelser med formel I som definert ovenfor for fremstilling av medikamenter for behandling og/eller forebygging av dyslipidemi aterosklerose og kardiovaskulære sykdommer er foretrukket. I tillegg er HDL-økende midler med formel I anvendelige i kombinasjon eller assosiasjon med en annen forbindelse, hvori nevnte forbindelse er valgt fra gruppen bestående av en HMG-CoA-reduktasehemmer, mikrosomalt triglyserid overføringsprotein (MTP)/ ApoB sekresjonsinhibitor, en PPAR-aktivator, en kolesterylester transportprotein (CETP)-inhibitor, en gallesyre reopptak inhibitor, en kolesterolabsorpsjonshemmer, en kolesterolsyntesehemmer, et fibrat, niacin, et preparat inneholdende niacin eller andre HM74a-agonister, en ionebytterresin, en antioksidant, en ACAT-inhibitor eller en gallesyre sekvestrant. Oppfinnelsen angår derfor også et farmasøytisk preparat omfattende en forbindelse med formel I som definert ovenfor i kombinasjon eller assosiasjon med en forbindelse valgt fra gruppen bestående av en HMG-CoA-reduktasehemmer, mikrosomalt triglyserid overføringsprotein (MTP)/ApoB sekresjonsinhibitor, en PPAR-aktivator, en kolesterylester transportprotein (CETP)-inhibitor, en gallesyre reopptak inhibitor,en kolesterolabsorpsjonshemmer, en kolesterolsyntesehemmer, et fibrat, niacin, et preparat inneholdende niacin eller andre HM74a-agonister, en ionebytterresin, en antioksidant, en ACAT-inhibitor eller en gallesyre sekvestrant, så vel som en farmasøytisk akseptabel bærer og/eller adjuvans. Oppfinnelsen angår videre anvendelse av forbindelser med formel I som definert
9 ovenfor i kombinasjon eller assosiasjon med en forbindelse valgt fra gruppen bestående av en HMG-CoA-reduktasehemmer, mikrosomalt triglyserid overføringsprotein (MTP)/ApoB sekresjonsinhibitor, en PPAR-aktivator, en kolesterylester transportprotein (CETP)-inhibitor, en gallesyre reopptak inhibitor, en kolesterolabsorpsjonshemmer, en kolesterolsyntesehemmer, et fibrat, niacin, et preparat inneholdende niacin eller andre HM74a-agonister, en ionebytterresin, en antioksidant, en ACAT-inhibitor eller en gallesyre sekvestrant for fremstilling av et medikament for behandling og/eller forebygging av sykdommer så som aterosklerose, perifert vaskulær sykdom, dyslipidemi, hyperbetalipoproteinemi, hypoalfalipoproteinemi, hyperkolesterolemi, hypertriglyseridemi, familiær hyperkolesterolemi, kardiovaskulære lidelser, angina, iskemi, hjerteiskemi, slag, myokardialt infarkt, reperfusjonsskade, angioplastikk restenose, hypertensjon og vaskulære komplikasjoner ved diabetes, fedme eller endotoksemi. Oppfinnelsen angår også en forbindelse med formel I i kombinasjon eller assosiasjon med en terapeutisk effektiv mengde av en forbindelse valgt fra gruppen bestående av en HMG-CoA-reduktasehemmer, mikrosomalt triglyserid overføringsprotein (MTP)/ApoB sekresjonsinhibitor, en PPAR-aktivator, en kolesterylester transportprotein (CETP)-inhibitor, en gallesyre reopptak inhibitor, en kolesterolabsorpsjonshemmer, en kolesterolsyntesehemmer, et fibrat, niacin, et preparat inneholdende niacin eller andre HM74a-agonister, en ionebytterresin, en antioksidant, en ACAT-inhibitor eller en gallesyre sekvestrant for anvendelse i en fremgangsmåte for behandling og/eller forebygging av sykdommer som kan behandles med HDL-kolesteroløkende midler. Forbindelsene med formel I og/eller deres farmasøytisk akseptable salter kan anvendes i form av farmasøytiske preparater for enteral, parenteral eller topisk administrering. De kan administreres, for eksempel peroralt, f.eks. i form av tabletter, drasjerte tabletter, dragéer, harde og myke gelatinkapsler, løsninger, emulsjoner eller suspensjoner, oralt, f.eks. i form av bukkalt, rektalt, f.eks. i form av suppositorier, parenteralt, f.eks. i form av injeksjonsløsninger eller infusjonsløsninger for intramuskulær, intravenøs eller subkutan injeksjon eller topisk, f.eks. i form av salver, kremer eller oljer. Oral administrering er foretrukket. Fremstilling av de farmasøytiske preparatene kan utføres på en måte som vil være velkjent for hvilke som helst fagfolk på området ved å bringe de beskrevne forbindelsene med formel I og/eller deres farmasøytisk akseptable salter, eventuelt i kombinasjon med andre terapeutisk verdifulle substanser, inn i en galenisk
10 administreringsform sammen med egnede, ikke-toksiske, inerte, terapeutisk kompatible faste eller flytende bærermaterialer og, om ønsket, vanlige farmasøytiske adjuvantia. Egnede bærermaterialer er ikke kun uorganiske bærermaterialer, men også organiske bærermaterialer. Følgelig kan for eksempel laktose, maisstivelse eller derivater derav, talkum, stearinsyre eller salter derav anvendes som bærermaterialer for tabletter, drasjerte tabletter, dragéer og harde gelatinkapsler. Egnede bærermaterialer for myke gelatinkapsler er for eksempel vegetabilske oljer, voks, fett og halvfaste og flytende polyoler (avhengig av karakteren av den aktive bestanddelen kunne imidlertid kanskje ingen bærere være nødvendig i tilfellet av myke gelatinkapsler). Egnede bærermaterialer for fremstilling av løsninger og siruper er for eksempel vann, polyoler, sukrose, invertsukker og lignende. Egnede bærermaterialer for injeksjonsløsninger er for eksempel vann, alkoholer, polyoler, glyserol og vegetabilske oljer. Egnede bærermaterialer for suppositorier er for eksempel naturlige eller herdede oljer, voks, fett og halvflytende eller flytende polyoler. Egnede bærermaterialer for topiske preparater er glyserider, semisyntetiske og syntetiske glyserider, hydrogenerte oljer, flytende vokser, flytende parafin, flytende fettalkoholer, steroler, polyetylenglykoler og cellulosederivater. Vanlige stabiliseringsmidler, konserveringsmidler, fukte- og emulgeringsmidler, konsistensforbedrende midler, smaksforbedrende midler, salter for å endre det osmotiske trykket, buffersubstanser, solubiliseringsmidler, fargemidler og maskeringsmidler og antioksidanter kommer i betraktning som farmasøytiske adjuvantia. Den terapeutisk effektive mengden eller dosen av forbindelsene med formel I kan variere innen vide grenser avhengig av sykdommen som skal kontrolleres, alder og individuell tilstand av pasienten og administreringsmåten og vil, selvfølgelig, tilpasses til de individuelle kravene i hvert enkelt tilfelle. For voksne pasienter kommer en daglig dose på ca. 1 til 100 mg, spesielt ca. 1 til 50 mg, i betraktning. Avhengig av alvorlighetsgraden av sykdommen og den nøyaktige farmakokinetisk profilen kunne forbindelsen administreres med én eller flere daglige doseenheter, f.eks. i 1 til 3 doseenheter. De farmasøytiske preparatene inneholder hensiktsmessig ca. 1-100 mg, fortrinnsvis 5-50 mg, av en forbindelse med formel I. I de følgende eksemplene blir testene som ble utført for å bestemme aktiviteten av forbindelsene med formel I og spesielt deres verdifulle farmakologiske egenskaper beskrevet.
11 Eksempler MS = massespektrometri; EI = Elektron Ionisering ("Electron (Impact) Ionosation"); ISP = ionespray, svarer til ESI (elektrospray); NMR-data er angitt i deler pr. million (δ) relativt til indre tetrametylsilan og er henvist til deuterium "lock" signalet fra prøve løsningsmidlet (d 6 -DMSO hvis ikke annet er angitt); koblingskonstanter (J) er i Hertz, Sm.p. = smeltepunkt; bp = kokepunkt; HPLC = LC = væskekromatografi med høy ytelse, Rt = retensjonstid, TLC = tynnskiktskromatografi, RT = romtemperatur, TBTU = O-(benzotriazol-1-yl)-N,N',N'-tetrametyl-uronium-tetrafluorborat; DMF = dimetylformamid, DMSO = dimetylsulfoksid, THF = tetrahydrofuran, CAN = CAS Registry Number. Eksempel 1 Effekter på lipidnivåer i plasma hos hamstere Effektivitet av forbindelser med hensyn til å modulere lipidnivåer i plasma ble bestemt i hamstere etter 5 dagers daglig administrering av forbindelser. Hann-hamstere, 6-8 uker gamle, ble anvendt i studiene. Etter én ukes akklimatisering ble blodprøver oppsamlet fra 4 timers fastende dyr for bestemmelse av plasmalipid. Dyrene ble deretter anvist til behandlingsgrupper basert på nivåer av HDL-kolesterol. Forbindelser ble administrert ved gavage, én gang daglig i fem dager. Kontrolldyr mottok kun konstituent. Blod ble oppsamlet på dag fem fra 4 timers fastende hamstere, 2 timer etter en siste behandling, for analyse av plasmalipid. Totalt kolesterol, HDL-kolesterol, LDL-kolesterol og triglyserider ble bestemt ved anvendelse av kolorimetriske enzymatiske analyser (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Tyskland). HDL-kolesterol ble også bestemt etter selektiv utfelling av HDL fra plasma ved standardmetoder. Tabell 1: Effekter på nivåer av HDL-kolesterol hos hamstere Forbindelse 5-(3,4-diklor-fenyl)- N-((1R,2R)-2- hydroksy-sykloheksyl)-6-(2,2,2-trifluoretoksy)-nikotinamid 5-(3,4-diklor-fenyl)-N-((1S,2R)-2- hydroksy-sykloheksyl)-6-(2,2,2-trifluoretoksy)-nikotinamid Nivåer av HDL-kolesterol [% sammenlignet med kontroll] ved 30 mg/kg p.o. av forbindelse +77,9 ± 11,1 % +121,9 ± 21,0%
12 Forbindelse 5-(4-klor-fenyl)-N-((1R,2R)-2-hydroksy- sykloheksyl)-6-(2,2,2-trifluor-etoksy)- nikotinamid Nivåer av HDL-kolesterol [% sammenlignet med kontroll] ved 30 mg/kg p.o. av forbindelse +103,8 ± 14,7 % Eksempel 2 CB1 og CB2 reseptor-affinitet Affiniteten av forbindelsene ifølge oppfinnelsen for cannabinoidreseptorer ble bestemt ved anvendelse av membranpreparater fra humane embryonale nyre (HEK)- celler hvor den humane cannabis CB1-reseptoren er transient transfektert ved anvendelse av Semliki Forest Virus-systemet i forbindelse med [3H]-CP-55,940 som radioligand. Etter inkubering av nyfremstilt cellemembranpreparat med [3H]-liganden, med eller uten tilsetning av forbindelser ifølge oppfinnelsen, ble separasjon av bundet og fri ligand utført ved filtrering over glassfiberfiltre. Radioaktivitet på filteret ble målt ved scintillasjonstelling. Affiniteten av forbindelsene ifølge oppfinnelsen for cannabinoid CB2-reseptorer ble bestemt ved anvendelse av membranpreparater fra humane embryonale nyre (HEK)- celler hvor den humane cannabis CB2-reseptoren er transient transfektert ved anvendelse av Semliki Forest Virus-systemet i forbindelse med [3H]-CP-55,940 som radioaktiv ligand. Etter inkubering av nyfremstilt cellemembranpreparat med [3H]- liganden, med eller uten tilsetning av forbindelser ifølge oppfinnelsen, ble separasjon av bundet og fri ligand utført ved filtrering over glassfiberfiltre. Radioaktivitet på filteret ble målt ved scintillasjonstelling. K i -verdier ble beregnet fra IC 50 ved anvendelse av Cheng-Prusoff-ligningen. Tabell 2: CB1 og CB2 reseptor-affinitet Forbindelse CB1 reseptoraffinitet [K i iμm] CB2 reseptoraffinitet [K i i μm] 5-(3,4-diklor-fenyl)-N-((1R,2R)-2-hydroksy- sykloheksyl)-6-(2,2,2-trifluor-etoksy)- nikotinamid 1,3 >10
13 Forbindelse CB1 reseptoraffinitet [K i iμm] CB2 reseptoraffinitet [K i i μm] 5-(3,4-diklor-fenyl)-N-((1S,2R)-2-hydroksy- sykloheksyl)-6-(2,2,2-trifluor-etoksy)- nikotinamid 5-(4-klor-fenyl)-N-((1R,2R)-2-hydroksy- sykloheksyl)-6-(2,2,2-trifluor-etoksy)- nikotinamid >10 >10 0,028 >10 Eksempel 3 Fremstilling av 5-(3,4-diklor-fenyl)-N-((1R,2R)-2-hydroksy-sykloheksyl)-6- (2,2,2-trifluor-etoksy)-nikotinamid a) 5-brom-6-(2,2,2-trifluor-etoksy)-nikotinsyre 5-brom-6-klor-3-pyridinkarboksylsyre (68,0 g, 0,288 mol, CAN 29241-62-1) ble oppløst i DMSO (1000 ml). Til denne løsningen ble det under omrøring tilsatt kaliumhydroksid (48,25 g, 0,86 mol) og etter 10 minutter med omrøring ved romtemperatur ble 2,2,2-trifluoretanol (26,9 ml, 0,374 mol) tilsatt. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 24 timer. Vann (1000 ml) og konsentrert saltsyre (107 ml, 1280 mmol, 37 %) ble tilsatt og suspensjonen ble omrørt kraftig i 4 timer. Presipitatet ble filtrert, vasket med vann (4x 100 ml) og vakuumtørket over natten, hvilket gir tittelforbindelsen (80,4 g) som et gråhvitt, fast stoff; MS (EI) 299, 301 (M) +. b) 5-brom-N-((1R,2R)-2-hydroksy-sykloheksyl)-6-(2,2,2-trifluor-etoksy)-nikotinamid 5-brom-6-(2,2,2-trifluor-etoksy)-nikotinsyre (50,0 g, 0,166 mol) ble oppløst i DMF (600 ml). Til løsningen ble det tilsatt TBTU (58,9 g, 0,183 mol), N,N-diisopropyletylamin (142,6 ml, 0,83 mol) og (1R,2R)-2-amino-sykloheksanol (21,1 g, 0,183 mol). Reaksjonsblandingen ble omrørt i 3 timer ved romtemperatur. Løsningsmidlet ble
14 avdampet in vakuo, residuet ble oppløst i en blanding av etylacetat (1200 ml) og THF (300 ml). Løsningen ble vasket to ganger med vann (700 ml) og vannfasene ble ekstrahert med etylacetat (600 ml). Organiske faser ble samlet, tørket med MgSO4 og konsentrert til ca. 900 ml. Produktet ble utfelt ved omrøring og avkjøling til 0 C. Filtrering, vasking med etylacetat/n-heptan (1:1) og tørking i vakuum ga tittelforbindelsen (53,1 g) som et hvitt, fast stoff; MS (ISP) 397, 399 (M) +. c) 5-(3,4-diklor-fenyl)-N-((1R,2R)-2-hydroksy-sykloheksyl)-6-(2,2,2-trifluor-etoksy)- nikotinamid 5-brom-N-((1R,2R)-2-hydroksy-sykloheksyl)-6-(2,2,2-trifluor-etoksy)-nikotinamid (59,8 g, 151 mmol) ble oppløst i toluen (2500 ml) og DMF (200 ml). Til denne løsningen ble det tilsatt under omrøring [1,1'-bis(difenylfosfino)ferrocen]-diklorpalladium(II) CH 2 Cl 2 (6,15 g, 7,5 mmol), 3,4-diklorfenylboronsyre (30,2 g, 158 mmol) og natriumkarbonatløsning (2M, 150 ml). Denne blandingen ble oppvarmet til 90 C i 2 timer, avkjølt til romtemperatur og filtrert gjennom diatoméjord. Filterkaken ble grundig vasket med etylacetat (3000 ml). Filtratene ble samlet, vasket to ganger med vann (2x2000 ml) og vannfasene ble ekstrahert med etylacetat (2x1500 ml). Organiske faser ble samlet, tørket med MgSO4 og de flyktige stoffene fjernet in vakuum. Residuet ble renset ved filtrering gjennom silika (500 g) med etylacetat. Løsningsmidlet ble fjernet og residuet ble utgnidd med dietyleter, hvilket etter tørking in vakuum gir tittelforbindelsen (45,6 g) som et gråaktig fast stoff; MS 463,079, 465,077 (M+H) +. Eksempel 4 Fremstilling av 5-(3,4-diklor-fenyl)-N-((1S,2R)-2-hydroksy-sykloheksyl)-6- (2,2,2-trifluor-etoksy)-nikotinamid a) 5-brom-N-((1SR,2RS)-2-hydroksy-sykloheksyl)-6-(2,2,2-trifluor-etoksy)-nikotinamid 5-brom-6-(2,2,2-trifluor-etoksy)-nikotinsyre (75,0 g, 0,25 mol) ble oppløst i DMF (850 ml). Til løsningen ble det tilsatt TBTU (91,0 g, 0,275 mol), N,N-diisopropyletylamin (214 ml, 1,25 mol) og (1SR,2RS)-2-amino-sykloheksanol-hydroklorid (41,7 g, 0,275
15 mol). Reaksjonsblandingen ble omrørt i 1,5 time ved romtemperatur. Løsningsmidlet ble avdampet in vakuo, residuet ble fordelt mellom etylacetat (2500 ml) og 1 N natriumhydroksid-løsning (2000 ml), vannfasen ble separert, ekstrahert én gang til med etylacetat (1000 ml) og de organiske fasene ble vasket 2 ganger med vann (2x1500 ml). Organiske faser ble samlet, tørket med MgSO4 og konsentrert til ca. 900 ml. Produktet ble utfelt ved omrøring og avkjøling til 0 C. Filtrering, vasking med etylacetat/n-heptan (1:1) og tørking i vakuum ga tittelforbindelsen (81,1 g) som et hvitt, fast stoff; MS (ISP) 397, 399 (M) +. b) 5-brom-N-((1S,2R)-2-hydroksy-sykloheksyl)-6-(2,2,2-trifluor-etoksy)-nikotinamid 5-brom-N-((1SR,2RS)-2-hydroksy-sykloheksyl)-6-(2,2,2-trifluor-etoksy)- nikotinamid (91,3 g, 0,23 mol) ble underlagt preparativ HPLC på ChiralPak AD (250x110 mm kolonne) ved anvendelse av n-heptan/isopropanol 85/15 som mobil fase. Baselinje separasjon ble oppnådd og tittelforbindelsen (43,6 g) ble isolert som fargeløst, fast stoff fra første topp; MS (ISP) 395,2, 397,2 (M-H); ORD (589 nm, 20 C, CHCl3) - 21,6. c) 5-(3,4-diklor-fenyl)- N-((1S,2R)-2-hydroksy-sykloheksyl)-6-(2,2,2-trifluor-etoksy)- nikotinamid 5-brom-N-((1S,2R)-2-hydroksy-sykloheksyl)-6-(2,2,2-trifluor-etoksy)-nikotinamid (42,0 g, 106 mmol) ble oppløst i toluen (1900 ml) og DMF (100 ml). Til denne løsningen ble det tilsatt under omrøring [1,1'-bis(difenylfosfino)ferrocen]-diklorpalladium(II) CH 2 Cl 2 (0,9 g, 1,06 mmol), 3,4-diklorfenylboronsyre (20,2 g, 106 mmol) og natriumkarbonatløsning (2M, 106 ml). Denne blandingen ble oppvarmet til 90 C i 2 timer, avkjølt til romtemperatur og fordelt mellom etylacetat (1000 ml) og vann (2000 ml), vannfasen ble separert, ekstrahert to ganger til med etylacetat (2x 1000 ml) og de organiske fasene ble vasket én gang med vann og én gang med saltløsning (1000 ml hver). Organiske faser ble samlet, tørket med MgSO4 og de flyktige stoffene fjernet in vakuo. Residuet ble oppløst i dietyleter (500 ml) og filtrert gjennom diatoméjord. Tittelforbindelsen ble utfelt når n-heptan (500 ml) ble tilsatt dråpevis til dietyleter-løsningen, ble filtrert fra og tørket i vakuum, hvilket gir 33,3 g av tittelforbindelsen som et gråhvitt, fast stoff; MS 463,079 (M+H) +. Eksempel 5 Filmdrasjerte tabletter inneholdende de følgende bestanddelene kan fremstilles på konvensjonell måte:
16 Bestanddeler Pr. tablett Kjerne: Forbindelse med formel (I) 10,0 mg 200,0 mg Mikrokrystallinsk cellulose 23,5 mg 43,5 mg Laktose vannholdig 60,0 mg 70,0 mg Povidon K30 12,5 mg 15,0 mg Natriumstivelsesglykolat 12,5 mg 17,0 mg Magnesiumstearat 1,5 mg 4,5 mg (Kjerne Vekt) 120,0 mg 350,0 mg Filmdrasjering: Hydroksypropylmetylcellulose 3,5 mg 7,0 mg Polyetylenglykol 6000 0,8 mg 1,6 mg Talkum 1,3 mg 2,6 mg Jernoksid (gult) 0,8 mg 1,6 mg Titandioksid 0,8 mg 1,6 mg Den aktive ingrediensen blir siktet og blandet med mikrokrystallinsk cellulose og blandingen blir granulert med en løsning av polyvinylpyrrolidon i vann. Granulatet blir deretter blandet med natriumstivelsesglykolat og magnesiumstearat og sammenpresset, hvilket gir kjerner på 120 eller 350 mg henholdsvis. Kjernene blir lakkert med en vandig løsning / suspensjon av ovennevnte filmdrasjering. Eksempel 6 måte: Kapsler inneholdende de følgende bestanddelene kan fremstilles på konvensjonell Bestanddeler Forbindelse med formel (I) Laktose Maisstivelse Talkum Pr. kapsel 25,0 mg 150,0 mg 20,0 mg 5,0 mg
17 Komponentene blir siktet og blandet og fylt inn i kapsler av størrelse 2. Eksempel 7 Injeksjonsløsninger kan ha følgende sammensetning: Forbindelse med formel (I) Polyetylenglykol 400 3,0 mg 150,0 mg Eddiksyre q.s. ad ph 5,0 Vann for injeksjonsløsninger ad 1,0 ml Den aktive ingrediensen blir oppløst i en blanding av Polyetylenglykol 400 og vann for injeksjon (del). ph blir justert til 5,0 ved tilsetning av eddiksyre. Volumet blir justert til 1,0 ml ved tilsetning av den gjenværende mengden av vann. Løsningen blir filtrert, fylt i medisinglass ved anvendelse av en passende overskytende mengde og sterilisert.
18 Patentkrav 1. Forbindelse med formelen og stereoisomerer og farmasøytisk akseptable salter derav. 2. Forbindelse med formel I ifølge krav 1, hvori forbindelsen er 5-(3,4-diklor-fenyl)- N-((1R,2R)-2-hydroksy-sykloheksyl)-6-(2,2,2-trifluor-etoksy)-nikotinamid. 3. Forbindelse med formel I ifølge krav 1, hvori forbindelsen er 5-(3,4-diklor-fenyl)- N-((1S,2R)-2-hydroksy-sykloheksyl)-6-(2,2,2-trifluor-etoksy)-nikotinamid. 4. Farmasøytisk preparat, omfattende en forbindelse med formel I ifølge hvilke som helst av kravene 1 til 3 og en farmasøytisk akseptabel bærer og/eller adjuvans. 5. Farmasøytisk preparat ifølge krav 4 for behandling og/eller forebygging av sykdommer som kan behandles med HDL-kolesteroløkende midler. 6. Forbindelse med formel I ifølge hvilke som helst av kravene 1 til 3 for anvendelse som medikament. 7. Forbindelse med formel I ifølge krav 6 for anvendelse som medikament for behandling og/eller forebygging av aterosklerose, perifer vaskulær sykdom, dyslipidemi, hyperbetalipoproteinemi, hypoalfalipoproteinemi, hyperkolesterolemi, hypertriglyseridemi, familiær hyperkolesterolemi, kardiovaskulære sykdommer så som angina, iskemi, hjerteiskemi, slag, myokardialt infarkt, reperfusjonsskade, angioplastikk restenose, hypertensjon og vaskulære komplikasjoner ved diabetes, fedme eller endotoksemi. 8. Forbindelse med formel I ifølge krav 6 for anvendelse som medikament for behandling og/eller forebygging av dyslipidemi.
19 9. Forbindelse med formel I ifølge krav 6 for anvendelse som medikament for behandling og/eller forebygging av aterosklerose. 10. Forbindelse med formel I ifølge krav 6 for anvendelse som medikament for behandling og/eller forebygging av kardiovaskulære sykdommer. 11. Anvendelse av en forbindelse med formel I ifølge hvilke som helst av kravene 1 til 3 for fremstilling av medikamenter for behandling og/eller forebygging av sykdommer som kan behandles med HDL-kolesteroløkende midler. 12. Anvendelse ifølge krav 11 for fremstilling av medikamenter for behandling og/eller forebygging av aterosklerose, perifer vaskulær sykdom, dyslipidemi, hyperbetalipoproteinemi, hypoalfalipoproteinemi, hyperkolesterolemi, hypertriglyseridemi, familiær hyperkolesterolemi, kardiovaskulære sykdommer så som angina, iskemi, hjerteiskemi, slag, myokardialt infarkt, reperfusjonsskade, angioplastikk restenose, hypertensjon og vaskulære komplikasjoner ved diabetes, fedme eller endotoksemi. 13. Anvendelse ifølge krav 11 for fremstilling av medikamenter for behandling og/eller forebygging av dyslipidemi, aterosklerose og kardiovaskulære sykdommer. 14. Fremgangsmåte for fremstilling av forbindelser med formel I som definert i hvilke som helst av kravene 1 til 3, hvilken fremgangsmåte omfatter å binde en forbindelse med formelen hvor X er halogen, til en aryl metall-spesie med formelen
20 hvor M betyr boronsyre eller en boronsyreester, i nærvær av en Pd-katalysator under basiske betingelser, og eventuelt separere isomerene på en kiral HPLC-kolonne, og, om ønsket, omdanne den resulterende forbindelsen ifølge formel I til et farmasøytisk akseptabelt salt derav.