PROTEINKINASEINHIBITORER

Transkript

1 1 PROTEINKINASEINHIBITORER De svært homologe syklinavhengige kinasene (CDK ene) CDK4 og CDK6, i kombinasjon med syklin D, er nøkkelregulatorer av transisjonen gjennom restriksjonspunktet R mellom G 1 (vekst) og S (DNA-replikasjon)-fasene i cellesyklusen. CDK4/6 utøver deres effekter ved fosforylering av retinoblastomproteinet (prb). Når det er fosforylert mister prb dets inhibitoriske effekt på transkripsjonen av gener som fremmer inngangen til S-fasen. 1 I motsetning til dette resulterer spesifikk inhibering av CDK4/6 kinaseaktivitet ved den endogene proteinmodulatoren p16 INK4 eller ved småmolekylære inhibitorer, i hypofosforylert prb og arrest av cellene ved G 1 -restriksjonspunket. Som den primære mekanismen for å regulere G1-restriksjonspunktet blir reaksjonsveien som reguleres av disse kinasene endret i et bredt spekter av humane tumorer og således har inhibering av CDK4/CDK6 i disse tumorene en terapeutisk fordel ved å forhindre celledeling. Pim-1 er en serin/treonin kinase som regulerer forskjellige biologiske funksjoner, inkludert cellesyklusprogresjon, transkripsjons/signaltransduksjonsreaksjonsveier og apoptose, og dens uttrykk er koblet til flere krefttyper, inkludert hematologiske, prostata og orale tumorer (Bachmann, M. and T. Moroy, Int. J. Biochem. Cell Biol., 0. 37(4): s ). 2 Kinaseinhibitorer er kjent i teknikken. WO 98/19 omtaler en rekke substituerte 2-pyrimidinaminaser og beskriver dem som kinaseinhibitorer, særlig kinasene p6 kk, ZAP-70 og proteinkinase C. WO 98/19 omtaler ikke inhibering av CDK er En rekke 2-(pyridin-2-ylamino)-pyrido [2,3-d] pyrimidin-7-oner beskrevet som å ha CDK4/6 inhiberende aktivitet, er omtalt i WO 03/ Disse forbindelsene er beskrevet som å være anvendbare i behandlingen av celleproliferative lidelser, så som kreft og restenose. Forbindelsene er imidlertid dårlig oppløselige i vandig løsning og viser ikke nevneverdig inhiberende aktivitet på andre (ikke- CDK) kinasemål.

2 2 WO 0/00426 omtaler polymorfer av isetionatsaltet av 6-acetyl-8- syklopentyl--metyl-2(-piperazin-1-yl-pyridin-2-ylamino)-8h-pyrido[2,3- d]pyrimidin-7-on som er beskrevet som en selektiv CDK4 inhibitor. 1 Det gjenstår et behov for å tilveiebringe CDK4/6 inhibitorer som kan anvendes i behandlingen av celleproliferative lidelser, så som kreft. Den foreliggende oppfinnelsen tilveiebringer CDK4/6 inhibitorer. Visse forbindelser ifølge den foreliggende oppfinnelsen er mer potente CDK4/6 inhibitorer enn visse forbindelser som er kjent i teknikken. I tillegg er det et behov for å tilveiebringe CDK4/6 inhibitorer som er selektive for CDK4/6 sammenlignet med andre CDK er og som således er i stand til å produsere spesifikk G 1 -arrest når de er tilstede i farmakologisk relevante konsentrasjoner. Den foreliggende oppfinnelsen tilveiebringer CDK4/6 inhibitorer som er i stand til å produsere spesifikk G 1 -arrest når de er tilstede i farmakologisk relevante konsentrasjoner. Det gjenstår også et behov for å tilveiebringe CDK4/6 inhibitorer med forbedret oppløselighet i vandig løsning. Visse forbindelser ifølge den foreliggende oppfinnelsen har forbedret oppløselighet i vandig løsning sammenlignet med visse forbindelser i teknikken. 2 Det er ytterligere et behov for å tilveiebringe CDK4/6 inhibitorer med forbedret distribusjon til hjernevev og som således kan anvendes for å behandle lidelser som forekommer i hjernen, for eksempel primære og metastatiske hjernetumorer. Visse forbindelser ifølge den foreliggende oppfinnelsen har forbedret distribusjon til hjernevev. 30 Det er også et behov for å tilveiebringe CDK4/6 inhibitorer med gode farmakokinetiske egenskaper, så som oral tilgjengelighet. Visse forbindelser ifølge den foreliggende oppfinnelsen har forbedret oral tilgjengelighet sammenlignet med visse forbindelser som er kjent i teknikken. 3 I tillegg er det et behov for å tilveiebringe kinaseinhibitorer som har sekundær inhibitoraktivitet av andre ikke-cdk kinaser, for eksempel Pim-1 kinase. Visse

3 3 forbindelser ifølge den foreliggende oppfinnelsen har dobbel CDK4/6 og Pim-1- kinaseinhibitoraktivitet. Den foreliggende oppfinnelsen tilveiebringer forbindelser med formelen: 1 hvori, R1 er C 3 -C -alkyl, C 3 -C sykloalkyl eller syklopropyl-metyl; R2 og R3 er H eller fluor hvori minst én av R2 eller R3 er fluor; R4 er H eller CH 3 ; R er C 1 -C 6 -alkyl eller -NR6R7 hvori R6 og R7 er C 1 -C 3 -alkyl; Q er CH 2, O, S eller en direkte binding; og W og Y er C eller N hvori minst én av W eller Y er N og hvori når Q er O eller S, er W = C; eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav. Den foreliggende oppfinnelsen tilveiebringer en farmasøytisk formulering som omfatter en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, og en farmasøytisk akseptabel bærer, fortynner eller hjelpestoff. 2 Den foreliggende oppfinnelsen tilveiebringer en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav for anvendelse i terapi. Den foreliggende oppfinnelsen tilveiebringer en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, for

4 4 behandling av kreft, særlig de krefttypene som er valgt fra gruppen som består av kolorektal kreft, brystkreft, lungekreft, spesielt ikke-småcellet lungekreft (eng.: non small cell lung cancer, NSCLC), prostatakreft, glioblastom, mantelcellelymfom (eng.: mantel cell lymphom, MCL), kronisk myeloid leukemi (eng.: chronic myeloid leukemia, CML) og akutt myeloid leukemi (eng.: acute myeloid leukemia, AML). 1 Den følgende oppfinnelsen tilveiebringer ytterligere en fremgangsmåte for å behandle kreft valgt fra gruppen som består av kolorektal kreft, brystkreft, lungekreft, spesielt ikke-småcellet lungekreft (NSCLC), prostatakreft, glioblastom, mantelcellelymfom, kronisk myeloid leukemi og akutt myeloid leukemi i et pattedyr, som omfatter å administrere til et pattedyr som har behov for slik behandling, en effektiv mengde av en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav. I tillegg tilveiebringer den foreliggende oppfinnelsen anvendelsen av en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, for produksjon av et medikament for behandling av kreft, særlig de kreftformene som er valgt fra gruppen som består av kolorektal kreft, lungekreft, spesielt ikke-småcellet lungekreft (NSCLC), prostatakreft, glioblastom, mantelcellelymfom, kronisk myeloid leukemi og akutt myeloid leukemi Dessuten tilveiebringer den foreliggende oppfinnelsen en farmasøytisk formulering for anvendelse i terapi som omfatter en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav og en farmasøytisk akseptabel bærer, fortynner eller hjelpestoff. Den foreliggende oppfinnelsen tilveiebringer også en farmasøytisk formulering for å behandle kolorektal kreft, brystkreft, lungekreft, spesielt ikke-småcellet lungekreft (NSCLC), prostatakreft, glioblastom, mantelcellelymfom, kronisk myeloid leukemi og akutt myeloid leukemi, som omfatter en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav og en farmasøytisk akseptabel bærer, fortynner eller hjelpestoff. 3 De generelle kjemiske betegnelsene som anvendes i formelen ovenfor har deres vanlige betydninger. For eksempel refererer betegnelsen "C 3 -C -alkyl" til en rett

5 eller forgrenet, monovalent, mettet alifatisk kjede med tre til fem karbonatomer og inkluderer, men er ikke begrenset til n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, sec-butyl og tert-butyl. Betegnelsen C 3 -C sykloalkyl refererer til et mettet karbonringsystem som inneholder tre til fem karbonatomer. 1 En leser med ferdigheter innen stoffet vil forstå at de fleste eller alle forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen er i stand til å danne salter. Forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen er aminer og reagerer følgelig med en rekke uorganiske og organiske syreaddisjonssalter og danner farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter. Slike farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter og vanlige fremgangsmåter for å fremstille dem, er velkjente I teknikken. Se f. eks. P. Stahl, et al., HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION AND USE, (VCHA/Wiley-VCH, 02); L.D. Bighley, S.M. Berge, D.C. Monkhouse, i "Ensyklopedia of Pharmaceutical Technology'. Utg. J. Swarbrick og J.C. Boylan, bind 13, Marcel Dekker, Inc., New York, Basel, Hong Kong 199, s ; S.M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol 66, nr. 1. januar Hydroklorid- og mesylatsaltene er foretrukket. Metylatsaltet er spesielt foretrukket Fortrinnsvis omfatter den foreliggende oppfinnelsen forbindelser med formel I hvori R1 er isopropyl, syklopropyl, syklopentyl eller syklopropyl-metyl. Mer foretrukket er R1 isopropyl. Fortrinnsvis omfatter den foreliggende oppfinnelsen forbindelser med formel I hvori R2 er fluor og R3 er hydrogen. Fortrinnsvis omfatter den foreliggende oppfinnelsen forbindelser med formel I hvori R2 er hydrogen og R3 er fluor. Mest foretrukket er både R2 og R3 fluor. Fortrinnsvis omfatter den foreliggende oppfinnelsen forbindelser med formel I hvori R4 er hydrogen. I et alternativ er R4 fortrinnsvis metyl. Mest foretrukket er R4 hydrogen. 3 Fortrinnsvis omfatter den foreliggende oppfinnelsen forbindelser med formel I hvori R er C 1 -C 3 -alkyl eller -NR6R7 hvori R6 og R7 er C 1 -C 3 -alkyl. Mest

6 6 foretrukket er R6 og R7 etyl. Mer foretrukket er R C 1 -C 3 -alkyl. Mest foretrukket er R etyl. Fortrinnsvis omfatter den foreliggende oppfinnelsen forbindelser med formel I hvori Q er CH 2 eller en direkte binding. Mest foretrukket er Q CH 2. Fortrinnsvis omfatter den foreliggende oppfinnelsen forbindelser med formel I hvori Y er N. Fortrinnsvis omfatter den foreliggende oppfinnelsen forbindelser med formel I hvori W er N. 1 Fortrinnsvis omfatter den foreliggende oppfinnelsen forbindelser med formel I hvori både W og Y er N. Foretrukne forbindelser ifølge oppfinnelsen inkluderer de med formelen: 2 hvori: R1 er isopropyl, syklopropyl, syklopentyl eller syklopropyl-metyl; R4 er H eller CH 3 ; R er C 1 -C 3 -alkyl; Q er CH 2, O eller en direkte binding; og W er C eller N hvori W er C når Q er O; eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav. Spesielt foretrukket er forbindelsene som er eksemplifisert heri eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav. Mer spesielt foretrukket er forbindelsen [-

7 7 (4-etyl-piperazin-1-ylmetyl)-pyridin-2-yl]-[-fluor-4-(7-fluor-3-isopropyl-2- metyl-3h-benzoimidazol--yl)-pyrimidin-2-yl]-amin eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav. [-(4-metyl-piperazin-1-ylmetyl)-pyridin-2-yl]-[-fluor-4- (7-fluor-3-isopropyl-2-metyl-3H-benzoimidazol--yl)-pyrimidin-2-yl]-amin kan navngis i alternativet som 2-pyrimidinamin, N-[-[(4-etyl-1-piperazinyl)metyl]- 2-pyridinyl]--fluor-4-[4-fluor-2-metyl-1-(1-metyletyl)-1H-benzimidazol-6-yl]-. 1 Spesielt foretrukket er [-(4-etyl-piperazin-1-ylmetyl)-pyridin-2-yl]-[-fluor-4- (7-fluor-3-isopropyl-2-metyl-3H-benzoimidazol--yl)-pyrimidin-2-yl]-amin krystallinsk form III karakterisert ved et røntgenpulver-diffraksjonsmønster (CuKα-stråling, λ = 1,406 Å) som omfatter en topp ved 21,29 (2θ ± 0,1 ) og valgfritt én eller flere topper valgt fra gruppen som omfatter 11,4,,91, og 12,13 (2θ±0,1). [-(4-etyl-piperazin-1-ylmetyl)-pyridin-2-yl]-[-fluor-4-(7- fluor-3-isopropyl-2-metyl-3h-benzoimidazol--yl)-pyrimidin-2-yl]-amin krystallinsk form III kan ytterligere karakteriseres ved et 13 C NMR-spekter som har de kjemiske skifttoppene ν(f1) [ppm] ved 112,7, 127,3 og 129,4. Forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen er spesifikke inhibitorer av CDK4 og CDK6, og de er derfor anvendbare i behandling av en sykdom eller lidelse som er karakterisert ved unormal celleproliferasjon. Særlig er forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen anvendbare i behandling av kreft CDK4 og CDK6 modulerer deres effekter på cellesyklusen gjennom fosforyleringen av prb. Forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen, som er potente inhibitorer av CDK4/6-aktivitet og således prb-fosforylering, forventes å inhibere celleproliferasjon (og derfor tumorvekst) i en hvilken som helst krefttype hvor cellene prolifererer og inneholder et intakt Rb1-gen (som koder for prb). Forbindelsene ifølge oppfinnelsen er derfor anvendbare i behandling av prb - -krefttyper, så som kolorektal kreft, brystkreft, lungekreft, prostatakreft, kronisk myeloid leukemi, akutt myeloid leukemi (Fry, D.W. et al., Mol. Cancer Ther. (04), 3(11), 1427), mantelcellelymfom (Marzec, M. et al., Blood (06), 8(), 1744), ovariekreft (Kim, T. M. et al., Cancer Research (1994), 4, 60), pankreaskreft (Schutte, M. et al., Cancer Research (1997), 7, 3126), malignt melanom og metastatisk malignt melanom (Maelandsmo, G.M. et al, British Journal of Cancer (1996), 73, 909) hos pattedyr. Forbindelsene ifølge

8 oppfinnelsen forventes også å være anvendbare i behandling av rhabdomyosarkom (Saab, R. et cal., Mol. Cancer Ther. (06), (), 1299) og myelomtose (Baughn, L.B. et al., Cancer Res. (06), 66(1), 7661)hos pattedyr. Der er foretrukket at pattedyret som skal behandles er et menneske. I tillegg utviser foretrukne forbindelser ifølge den foreliggende oppfinnelsen den fordelaktige egenskapen at de har forbedret distribusjon til hjernevev. For eksempel når den blir administrert i en rottemodell er hjerne:plasma eksponeringsforholdet for forbindelsen ifølge eksempel 16 (bestemt ved å anvende arealet under kurven (AUC) eller maksimale plasma og hjernekonsentrasjoner (Cmaks), se tabell 6c) om lag 1, noe som indikerer at forbindelsen ifølge eksempel 16 distribueres godt til hjernen. I motsetning til dette har de foreliggende oppfinnerne bestemt at en foretrukket forbindelse fra WO 03/ (6-acetyl-8-syklopentyl--metyl-2-(-piperazin-1-yl-pyridin-2- ylamino)-8h-pyrido[2,3-d]pyrimidin-7-on) viser hjerne:plasma distribusjonsforhold på 0,17 (AUC) og 0,1 (Cmaks), noe som indikerer at forbindelsen distribueres relativt dårlig til hjernevev i denne modellen. Foretrukne forbindelser ifølge den foreliggende oppfinnelsen er derfor i stand til å penetrere hjernen, og de er anvendbare i behandling av primære og metastatiske hjernetumorer hvor cellene prolifererer og inneholder et funksjonelt, intakt Rb1 gen. Eksempler på slike prb + hjernetumorer inkluderer glioblastom så vel som medulloblastom og astrocytom (Lee, W.-H. et al., Science (1987), 23, 1394). Temozolomid er et cytotoksisk DNA-alkylerende middel anvendt i behandlingen av hjernetumorer inkludert glioblastom og astrocytom (Friedman, H. S. et al., (00), Clin. Cancer Res. 6(7): 28-97), inkludert hjernemetastaser fra melanom, brystkreft og NSCLC (Siena, S. et al., (09) Annals of Oncology, doi:.93/annonc/mdp343). Temozolomid interagerer med DNA og forårsaker kjemisk modifisering/ødeleggelse (Marchesi, F., et al., (07), Pharmacol. Res. 6(4): 27-87). Forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan anvendes i kombinasjon med temozolomid i behandlingen av primære og metastatiske prb + hjernetumorer, så som glioblastom og astrocytom, for eksempel der slike metastaser er avledet fra melanom, brystkreft eller NSCLC. 3 Gemcitabin-HCl, en nukleosidanalog som utøver antitumoraktivitet, er 2'- deoksy-2',2'-difluorcytidinmonohydroklorid (β-isomer), også kjent som 2',2'-

9 9 difluor-2'-deoksycytidinmonohydroklorid eller som 1-(4-amino-2-okso-1Hpyrimidin-1-yl)-2-desoksy-2',2'-difluorribose. Gemcitabin-HCl er beskrevet i US patent Den strukturelle formelen er avbildet under: Gemcitabin-HCl er effektiv i behandlingen av ikke-småcellet lungekreft (NSCLC) (Sandler, A. og Ettinger, D.S., (1999), The Oncologist, 4, 241), pankreaskreft (Pino, S.M. et al., (04), Current Gastroenterology Reports, 6, 119), ovariekreft (Pfisterer, J. et al., (06), Journal of Clinical Oncology, 24(29), 4699) og metastatisk brystkreft (Chan, S., et al., (09), Journal of Clinical Oncology, 27(11), 173). Forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan anvendes i kombinasjon med gemcitabin-hcl for å behandle NSCLC, pankreaskreft, ovariekreft og metastatisk brystkreft Forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan anvendes i en fremgangsmåte for behandling av kreft, særlig krefttypene som er beskrevet ovenfor, i et pattedyr som omfatter å administrere til et pattedyr som trenger slik behandling, en effektiv mengde av en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen. I en foretrukket utførelsesform kan forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen anvendes i en fremgangsmåte for å behandle kreft valgt fra gruppen som består av kolorektal kreft, mantelcellelymfom, brystkreft, glioblastom, akutt myeloid leukemi og lungekreft, spesielt NSCLC. I an annen foretrukket utførelsesform kan forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen anvendes i en fremgangsmåte for å behandle en krefttype valgt fra gruppen som består av kolorektal kreft, glioblastom, akutt myeloid leukemi og lungekreft. I en annen foretrukket utførelsesform kan en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen anvendes i en fremgangsmåte for å behandle glioblastom eller astrocytom i et pattedyr som omfatter å administrere til et pattedyr som trenger det, en terapeutisk effektiv kombinasjon av en forbindelse ifølge oppfinnelsen og temozolomid. I en annen foretrukket utførelsesform kan en forbindelse ifølge oppfinnelsen anvendes i en fremgangsmåte for å behandle NSCLC,

10 pankreaskreft, ovariekreft eller metastatisk brystkreft i et pattedyr, som omfatter å administrere til et pattedyr som trenger det, en terapeutisk effektiv kombinasjon av en forbindelse ifølge oppfinnelsen og gemcitabin-hcl Forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan anvendes i behandlingen av kreft, særlig krefttypene som er beskrevet ovenfor. I en foretrukket utførelsesform kan forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen anvendes i behandlingen av en krefttype valgt fra gruppen som består av kolorektal kreft, mantelcellelymfom, brystkreft, glioblastom, akutt myeloid leukemi og lungekreft, spesielt NSCLC. I en annen utførelsesform kan forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen anvendes i behandlingen av en krefttype valgt fra gruppen som består av kolorektal kreft, glioblastom, akutt myeloid leukemi og lungekreft. I en annen foretrukket utførelsesform tilveiebringer oppfinnelsen en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen for anvendelse i samtidig, separat eller sekvensiell kombinasjon med temozolomid i behandlingen av glioblastom eller astrocytom. I en annen foretrukket utførelsesform tilveiebringer oppfinnelsen en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen for anvendelse i samtidig, separat eller sekvensiell kombinasjon med gemcitabin-hcl i behandlingen av NSCLC, pankreaskreft, ovariekreft eller metastatisk brystkreft. Videre kan forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen anvendes i fremstillingav et medikament for behandling av kreft, særlig krefttypene som er beskrevet ovenfor. I en foretrukket utførelsesform kan forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen anvendes i fremstillingav et medikament for behandling av en krefttype som er valgt fra gruppen som består av kolorektal kreft, mantelcellelymfom, brystkreft, glioblastom, akutt myeloid leukemi og lungekreft, spesielt NSCLC. I en annen foretrukket utførelsesform kan forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen anvendes i fremstillingav et medikament for behandling av en krefttype som er valgt fra gruppen som består av kolorektal kreft, glioblastom, akutt myeloid leukemi og lungekreft. I en annen foretrukket utførelsesform tilveiebringer oppfinnelsen anvendelsen av en forbindelse ifølge oppfinnelsen i fremstillingav et medikament for behandling av glioblastom eller astrocytom, hvori medikamentet også omfatter temozolomid eller det skal administreres samtidig, separat eller sekvensielt med temozolomid. I en annen foretrukket utførelsesform tilveiebringer oppfinnelsen anvendelsen av en forbindelse ifølge oppfinnelsen i fremstillingav et medikament for behandling

11 11 av NSCLC, pankreaskreft, ovariekreft eller metastatisk brystkreft, hvori medikamentet også omfatter gemcitabin-hcl eller det skal administreres samtidig, separat eller sekvensielt med gemcitabin-hcl. 1 2 Det tilveiebringes også en farmasøytisk formulering for å behandle kreft, særlig krefttypene som er beskrevet ovenfor, som omfatter en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav sammen med en farmasøytisk akseptabel bærer. I en foretrukket utførelsesform blir det også tilveiebrakt en farmasøytisk formulering for å behandle en krefttype som er valgt fra gruppen som består av kolorektal kreft, mantelcellelymfom, brystkreft, glioblastom, akutt myeloid leukemi og lungekreft, spesielt NSCLC, som omfatter en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav sammen med en farmasøytisk akseptabel bærer. I en foretrukket utførelsesform blir det også tilveiebrakt en farmasøytisk formulering for å behandle en krefttype som er valgt fra gruppen som består av kolorektal kreft, glioblastom, akutt myeloid leukemi og lungekreft, som omfatter en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav sammen med en farmasøytisk akseptabel bærer. I en annen foretrukket utførelsesform tilveiebringer oppfinnelsen en farmasøytisk formulering for å behandle glioblastom eller astrocytom, som omfatter en forbindelse ifølge oppfinnelsen og temozolomid sammen med en farmasøytisk akseptabel bærer. I en annen foretrukket utførelsesform tilveiebringer oppfinnelsen en farmasøytisk formulering for å behandle NSCLC, pankreaskreft, ovariekreft eller metastatisk brystkreft, som omfatter en forbindelse ifølge oppfinnelsen og gemcitabin-hcl, sammen med en farmasøytisk akseptabel bærer. 30 Oppfinnelsen tilveiebringer også en farmasøytisk formulering som omfatter en forbindelse ifølge oppfinnelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav og temozolomid, sammen med en farmasøytisk akseptabel bærer, fortynner eller hjelpestoff. 3 Oppfinnelsen tilveiebringer også en farmasøytisk formulering som omfatter en forbindelse ifølge oppfinnelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav og gemcitabin-hcl, sammen med en farmasøytisk akseptabel bærer, fortynner eller hjelpestoff.

12 12 Oppfinnelsen tilveiebringer ytterligere en farmasøytisk formulering som omfatter en forbindelse ifølge oppfinnelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, sammen med en farmasøytisk akseptabel bærer og valgfritt andre terapeutiske ingredienser. 1 2 Ytterligere foretrukne eksemplifiserte forbindelser er også inhibitorer av Pim-1. Som nevnt ovenfor er Pim-1 en serin/treoninkinase som er involvert i reguleringen av forskjellige biologiske funksjoner inkludert cellesyklusprogresjon, transkripsjons/signaltransduksjonsreaksjonsveier og apoptose og hvis uttrykk er koblet til flere krefttyper. særlig har det vært vist at inhibering av Pim-1 ved den småmolekylære inhibitoren K0013 svekker overlevelsen og klonogen vekst av en rekke humane akutt leukemiceller (Pogacic, V., et al., Cancer Res. (07). 67(14): s ). I tillegg har det vært vist at Pim-1 uttrykkes i neointima i halsdarterier hos ballongskadede rotter og i torakalaorta og koronare arterier som viser intimalfortykning. Spesifikk inhibering av Pim-1 funksjon undertrykket markert ytterligere både neointimadannelse etter ballongskade og også proliferasjonen av dyrkede vaskulære glatte muskelceller (eng.: cultured vascular smooth muscle cells, VSMCs), noe som tyder på at Pim-1 spiller en viktig rolle i proliferasjonen av slike celler. Proliferasjonen av VSMC er har vært involvert i patogenesen av okklusive vaskulære sykdommer, så som arteriosklerose og restenose og derfor er det forventet at inhibering av Pim-1 undertrykker VSMC proliferasjon, noe som således kan være anvendbart i behandlingen av okklusive vaskulære sykdommer (Katakami N., et al., JBC (04), 279(2), ) Følgelig kan foretrukne forbindelser ifølge den foreliggende oppfinnelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, anvendes i en fremgangsmåte for å behandle okklusiv vaskulær sykdom, så som aterosklerose eller restenose hos et pattedyr, som omfatter å administrere til et pattedyr som trenger slik behandling, en effektiv mengde av en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen. Foretrukne forbindelser kan ifølge den foreliggende oppfinnelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, anvendes i behandlingen av okklusiv vaskulær sykdom, så som aterosklerose eller restenose. Videre kan foretrukne forbindelser ifølge den foreliggende oppfinnelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, anvendes i produksjonen av et medikament for

13 13 behandling av okklusiv vaskulær sykdom, så som aterosklerose eller restenose. Det tilveiebringes også en farmasøytisk formulering for å behandle okklusiv vaskulær sykdom, så som aterosklerose eller restenose som omfatter en foretrukket forbindelse ifølge den foreliggende forbindelsen eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav. 1 Som anvendt heri refererer 't' til time eller timer, 'min' refererer til minutt eller minutter, 'CDK' refererer til syklinavhengig kinase, 'prb' refererer til retinoblastomprotein, 'MGL' refererer til mantelcellelymfom, 'AML' refererer til akutt myeloid leukemi, 'CML' refererer til kronisk myeloid leukemi, 'Boc' refererer til N-tert-butoksykarbonyl, 'EA' refererer til etylacetat, 'DCM' refererer til diklormetan, 'DMSO' refererer til dimetylsulfoksid, 'DMA' refererer til dimetylacetamid, 'THF' refererer til tetrahydrofuran, 'MtBE' refererer til metyl tert-butyleter, 'TEA' refererer til trietylamin, 'FBS' refererer til føtalt bovint serum, 'PBS' refererer til fosfatbufret saltvann, 'BSA' refererer til bovint serum albumin, 'RT' refererer til romtemperatur, 'mpk' betyr milligram pr kilogram, 'po' refererer til pr os (oral), 'qd' betyr dosering én gang pr dag, 'HPLC' betyr høytrykk væskekromatografi, 'q2d' betyr en enkel dose hver andre dag, 'q2dx' betyr en enkel dose hver andre dag ti ganger, 'VSMC' refererer til vaskulær glatt muskelcelle og 'XRD' refererer til røntgendiffraksjon Forbindelsene med formel I kan fremstilles av en person med vanlige ferdigheter innen teknikken ved å følge teknikk-anerkjente metoder og prosedyrer. Mer spesifikt kan forbindelser med formel I fremstilles som angitt i skjemaene, fremgangsmåtene og eksemplene angitt nedenunder. Det vil forstås av en person med vanlige ferdigheter innen teknikken at de individuelle trinnene i de følgende skjemaene kan varieres for å tilveiebringe forbindelsene med formel I. Reagensene og utgangsmaterialene er lett tilgjengelige for en person med vanlige ferdigheter innen teknikken. Med mindre annet er spesifisert er alle substituentene som tidligere definert. Forbindelsesnavnene til de følgende preparatene og eksemplene er generert ved å anvende ChemDraw Ultra.0. 3

14 14 Skjemaer Syntesen av forbindelser med formel I blir illustrert i både preparatene, eksemplene og skjemaene hvor R 1, R 2, R 3, R 4, R, Q, W og Y er som definert ovenfor. I den øverste reaksjonen i skjema 1 og når Z = R omsettes et pyrimidinylbenzimidazolklorid (A) med et pyridinylamin (B) i en palladium-katalysert reaksjon og gir direkte forbindelser med formel I. 1 I den nederste reaksjonen i skjema 1 og når Y-Z er N-tert-butoksykarbonyl (Boc), blir et pyridmidinylhalid (A) også koblet med et pyridinylamin (B), men Boc-gruppen fjernes i sterk syre for å gi det frie aminet (C). Til slutt blir aminet (C) alkylert under reduserende betingelser for å gi forbindelser med formel I.

15 1 Skjema 2 Fremstilling av pyrimidinyl-benzimidazoler (A) Pyrimidinyl-benzimidazoler (A) fremstilles ved hjelp av palladium (II)-katalyserte koblingsreaksjoner med kommersielt tilgjengelige pyrimidinyldiklorider (D) og benzimidazolboronater (E). Skjema 3 Fremstilling av benzimidazolboronater (E) 1 Benzimidazolboronater (E) fremstilles via Pd(II) katalysert boronylering av bromidet i benzimidazoler (H) med bis(pinakolato)dibor. Benzimidazoler (H) fremstilles igjen ved ringdannelse av amidinene (F) med kaliumbutoksid eller kondensering av benzendiaminene (G) med trietylortoacetat/eddiksyre. 2 Amidiner (F) fremstilles, så som kjent av en person med ferdigheter innen teknikken organisk syntese ved å kondensere 4-brom-2,6-difluor-fenylamin med mono-acetamid-derivatet av aminet R1-NH 2 i nærvær av fosforylklorid. Benzendiaminer (G) fremstilles i to trinn som er kjent av en person med ferdigheter innen teknikken organisk syntese ved å skifte ut brom i 2-posisjonen av 2,4-dibrom-nitrobenzen med aminet R1-NH 2 etterfulgt av reduksjon av nitrogruppen til en amingruppe.

16 16 Syntesen av pyridinylaminet (B) hvor Q er S eller O og W er C, oppnås ved å erstatte et -halid i pyridin (I) med det kommersielt tilgjengelige tiolet eller alkoholen (J). Hvis et nitropyridin (I) er nødvendig gjennomgår utskiftningsproduktet ytterligere et nitro-reduksjonstrinn for å gi (B). Det bør legges merke til at forbindelsene (I) er fleksible reagenser gjennom disse skjemaene, men kun noen er kommersielt tilgjengelige som pyridylaminer og noen som nitropyridiner. Det kommersielt tilgjengelige (I) kan ikke desto mindre omdannes via aminoksidering eller nitro-reduksjonsreaksjoner som er kjent i teknikken for sekvensene som er beskrevet her og nedenunder. Skjema Fremstilling av pyridinylaminer (B), hvor Q er CH 2 1 Syntesen av pyridinylaminer (B) hvor Q er CH 2 oppnås på to måter: 1) De kommersielt tilgjengelige karbaldehydene (K) gjennomgår reduktiv aminering med det frie aminet (L) etterfulgt av erstatning av pyridinbromidet ved Pd(0)-

17 17 katalysert deaminering med litium 1,1,1,3,3,3-heksametyl-disilazan eller flytende ammoniak og kopperoksid. 2) Kommersielt tilgjengelig 1- piperidinkarboksylsyre, 4-metylen-, 1,1-dimetyletylester (M) gjennomgår hydroborering etterfulgt av Pd (II)-kobling med pyridylamin (I). Skjema 6 Fremstilling av pyridinylaminer (B), hvor Q er en direkte binding 1 Preparat 1 4-(6-Amino-pyridin-3-ylsulfanyl)-piperidin-1-karboksylsyre tertbutylester Syntesen av pyridinylaminer (B) hvor Q er en direkte binding oppnås på to måter: 1) Kommersielt tilgjengelig 1(2H)-pyridinkarboksylsyre, 3,6-dihydro-4- (4,4,,-tetrametyl-1,3,2-dioksaborolan-2-yl)-, 1,1-dimetyletylester (N) gjennomgår palladium (II)-kobling med nitropyridin (I) etterfulgt av reduksjon av både nitrogruppen og dobbeltbindingen. 2) Bromidet i nitropyridin (I) blir erstattet med fritt amin (L) etterfulgt av nitrogruppe-reduksjon. 2 Tilsett toluen (6,06 ml) til en blanding av 2,9-dimetyl-1,-fenantrolin (76.2 mg), kopper(i)jodid (69,27 mg), natrium tert-butoksid (47,9 mg), 4- merkapto-piperidin-1-karboksylsyre tert-butylester(83, mg), magnesium (49, mg) og 2-amino--jodpyridin (0 mg). Boble nitrogen inn i blandingen med ultralyd og rør suspensjonen ved 1 C i et forseglet rør i 24 t. Avkjøl og filtrer gjennom celite. Vask med toluen og fjern løsemidlet under vakuum. Tilsett heksan/ea (1/1) og filtrer gjennom en celite/silikagel-pute, vask to

18 18 ganger med heksan/ea (1/1) og deretter EA. Fjern løsemidlet under vakuum. Rens med silikagelkolonnekromatografi ved å eluere med heksan/ EA (0-7 %) for å gi 630 mg av tittelforbindelsen. MS (ES + ): m/z= 3 (M+H) + Preparat 2 -Fluor-2-nitro-pyridin 1 Tilsett 2 % hydrogenperoksid (26,98 ml) til svovelsyre (46 ml) ved 0 C i friluft. Etter min, tilsett dråpevis en kald løsning av 2-amino--fluorpyridin (9 g) i konsentrert svovelsyre (46 ml) med en tilsetningstrakt. Rør den resulterende mørke løsningen ved 0 C til RT i badet over natt. Hell over 0 ml isvann og ekstraher med DCM. Vask de kombinerte organiske lagene med % vandig løsning av natriumbisulfitt og tørk over anhydrert natriumsulfat. Fjern løsemidlet under vakuum og rens med silikagel kolonnekromatografi ved å eluere med DCM for å gi 7, g av tittelforbindelsen. MS (ES + ): m/z= 143 (M+H) +. Fremstill det følgende i det vesentlige som beskrevet for -fluor-2-nitro-pyridin ved å anvende det tilsvarende aminet: Preparat Forbindelse MS (ES+): m/z (M+H)+ 3 3-Brom-2-metyl-6-nitro-pyridin 218 Preparat 4 1-Isopropyl-4-(2-metyl-6-nitro-pyridin-3-yl)-piperazin 2 30 Rør 3-brom-2-metyl-6-nitro-pyridin (2,46 g), 1-isopropyl-piperazin (2,74 g), tetra-n-butyl ammoniumjodid (418,69 mg) og kaliumkarbonat (1,72 g) i dimetylsulfoksid (DMSO, ml) ved 6 C over natt. Tilsett EA og vann, separer fasene og tørk det organiske laget over magnesiumsulfat og fjern løsemidlet under vakuum. Rens med kraftig ionebytterpatron ved å eluere med metanol og deretter metanol-nh 3 2 N for å gi 2,8 g av tittelforbindelsen. MS (ES + ): m/z= 26 (M+H) +.

19 19 Fremstill de følgende mellomproduktene i det vesentlige som beskrevet for 1- isopropyl-4-(2-metyl-6-nitro-pyridin-3-yl)-piperazin ved å anvende det tilsvarende brom-derivatet: Preparat Forbindelse MS (ES+): m/z (M+H) Preparat 7 -(4-Isopropyl-piperazin-1-yl)-6-metyl-pyridin-2-ylamin Rør 1-isopropyl-4-(2-metyl-6-nitro-pyridin-3-yl)-piperazin (2,2 g) og palladium over karbon % (600 mg) i metanol (38 ml) og EA (38 ml) under H 2 (ballong) over natt. Filtrer over en celitepute og fjern løsemidlet under vakuum. Rens med silikagelkolonnekromatografi ved å eluere med DCM/metanol (0- %) for å gi 2,23 g av tittelforbindelsen. MS (ES + ): m/z= 143 (M+H) +. 1 Fremstill de følgende mellomproduktene i det vesentlige som beskrevet for - (4-isopropyl-piperazin-1-yl)-6-metyl-pyridin-2-ylamin ved å anvende det tilsvarende nitro-derivatet: Preparat Forbindelse MS (ES+): m/z (M+H)+ 8 9 (2'-Metyl-6'-nitro-3,4,,6-tetrahydro-2H- [1,3']bipyridinyl-4-yl)-karbaminsyre tert-butylester (6'-Nitro-3,4,,6-tetrahydro-2H-[1,3']bipyridinyl-4- yl)-karbaminsyre tert-butylester (6'-Amino-2'-metyl-3,4,,6-tetrahydro-2H- [1,3']bipyridinyl-4-yl)-karbaminsyre tert-butylester (6'-Amino-3,4,,6-tetrahydro-2H-[1,3']bipyridinyl-4- yl)-karbaminsyre tert-butylester Preparat 4-(6-Nitro-pyridin-3-yloksy)-piperidin-1-karboksylsyre tert-butylester

20 Tilsett kalium tert-butoksid (4,84 g) til en løsning av tert-butyl 4-hydroksy-1- piperidin-karboksylat (8,76 g) i dimetylacetamid (DMA, 39 ml) ved 0 C under nitrogen. Rør i 1 t og tilsett dråpevis en løsning -fluor-2-nitro-pyridin ( g) i DMA (78 ml). La reaksjonen røre ved RT over natt. Tilsett vann og la stå i 1 t. Filtrer, vask med vann. Rens med silikagelkolonnekromatografi ved å eluere med DCM/EA (0-1 %) for å gi,6 g av tittelforbindelsen. MS (ES + ): m/z= 324 (M+H) +. Preparat 11 4-(6-Amino-pyridin-3-yloksy)-piperidin-1-karboksylsyre tert-butylester 1 Tilsett palladium over karbon % (0,6 g) til en suspensjon av 4-(6-nitropyridin-3-yloksy)-piperidin-1-karboksylsyre tert-butylester (,6 g) i en blanding av tetrahydrofuran (THF)/metanol (30/30 ml/ml). Hydrogenér i et Parr-apparat ved 2 atm over natt. Filtrer gjennom en celitepute, vask med DCM og metanol. Rens med silikagelkolonnekromatografi ved å eluere med DCM/metanol ( %)/ammoniakk (1 %) for å gi g av tittelforbindelsen. MS (ES + ): m/z= 294 (M+H) +. Preparat Amino-2-metyl-3',6'-dihydro-2'H-[3,4']bipyridinyl-1'-karboksylsyre tert-butylester 30 3 Boble nitrogen inn i en blanding av 4-(4,4,,-tetrametyl-[1,3,2]dioksaborolan- 2-yl)-3,6-dihydro-2H-pyridin-1-karboksylsyre tert-butylester (2,46 g) og - brom-6-metyl-pyridin-2-ylamin (1,49 g) i 1,4-dioksan (31,82 ml) i min, tilsett deretter kaliumfosfat trebasisk N-hydrat (,07 g), palladiumacetat (3,72 mg), disykloheksyl-(2',6'-dimetoksy-bifenyl-2-yl)-fosfan (134,69 mg)), vann (7,96 ml) og rør ved 90 C i 3 t. Fortynn med DCM og vask med vann. Tørk over natriumsulfat og fjern løsemidlet under vakuum. Rens med silikagelkolonnekromatografi ved å eluere med DCM/etanol %/NH 3 0,1 %,

21 21 etterfulgt av kraftig ionebytterpatron (SCX) ved å eluere med metanol og deretter metanol-nh 3 2 M for å gi 2,12 g av tittelforbindelsen. MS (ES + ): m/z= 292 (M+H) +. Preparat 13 6-Amino-2-metyl-3',4',',6'-tetrahydro-2'H-[3,4']bipyridinyl-1'- karboksylsyre tert-butylester 1 2 Rør en blanding av 6-amino-2-metyl-3',6'-dihydro-2'H-[3,4']bipyridinyl-1'- karboksylsyre tert-butylester (2,12 g) og palladium på karbon % våt (330 mg) i metanol (29,30 ml) under H 2 (4 psi) i 48 t. Filtrer over en celitepute og fjern løsemidlet under vakuum for å gi 2,07 g av tittelforbindelsen. MS (ES + ): m/z= 292 (M+H) +. Preparat 14 6-nitro-3',6'-dihydro-2'H-[3,4']bipyridinyl-1'-karboksylsyre tertbutylester Boble nitrogen inn i en blanding av 4-(4,4,,-tetrametyl-[1,3,2]dioksaborolan- 2-yl)-3,6-dihydro-2H-pyridin-1-karboksylsyre tert-butylester (19,6 g), -brom- 2-nitropyridin (12,87 g), 2 M natriumkarbonat i vann (63,39 ml) og bis(trifenylfosfin)palladium(ii)klorid (4,4 g) i 1,4-dioksan (316,94 ml) i min og rør ved 80 C i t. Fortynn med DCM og vask med vann. Tørk over magnesiumsulfat og fjern løsemidlet under vakuum. Rens med silikagelkromatografi ved å eluere med DCM/EA (0-40 %) for å gi 8,72 g av tittelforbindelsen. MS (ES + ): m/z= 306 (M+H) Preparat 1 6-Amino-3',4',',6'-tetrahydro-2'H-[3,4']bipyridinyl-1'-karboksylsyre tert-butylester 3 Oppløs 6-nitro-3',6'-dihydro-2'H-[3,4']bipyridinyl-1'-karboksylsyre tert-butylester (1,89 g) i etanol (123,80 ml). Hydrogener med palladium på karbon (H-Cube

22 22 instrument, 70 bar, 0 C, 1 ml/min) for å gi 1,72 g av tittelforbindelsen. MS (ES + ): m/z= 278 (M+H) +. Preparat 16 4-(6-Amino-pyridin-3-ylmetyl)-piperidin-1-karboksylsyre tert-butylester 1 Rør 4-metylen-piperidin-1-karboksylsyre tert-butylester (, g) i min under nitrogen og tilsett en 0, M THF løsning av 9-borabisyklo[3.3.1]nonan (77,49 ml). Rør ved 7 C under nitrogen i 1 t. Avkjøl og tilsett 2-amino--brompyridin (3,8 g), kaliumkarbonat (3,87 g) og 1,1'- bis(difenylfosfino)ferrocen)palladium(ii)klorid (38, mg) og en avgasset blanding av DMF (47,83 ml) og vann (4,78 ml). Rør ved 60 C i 4 t, deretter ved RT over helgen. Tilsett vann og EA. Separer og ekstraher det vandig laget med EA. Kombiner de organiske lagene og tørk over natriumsulfat og fjern løsemidlet under vakuum. Rens med silikagelkolonnekromatografi ved å eluere med DCM/metanol (1 %)/ammoniakk (0,1 %) til DCM/metanol (3 %)/ammoniakk (0,3 %). Triturer resten med EA for å gi 1,8 g av tittelforbindelsen. MS (ES + ): m/z= 292 (M+H) +. Fremstill det følgende i det vesentlige som beskrevet for 4-(6-amino-pyridin-3- ylmetyl)-piperidin-1-karboksylsyre tert-butylester ved å anvende det tilsvarende brom-derivatet: Preparat Forbindelse MS (ES+): m/z (M+H) (6-Amino-2-metyl-pyridin-3-ylmetyl)-piperidin-1- karboksylsyre tert-butylester Preparat 18 1-(6-Brom-pyridin-3-ylmetyl)-4-etyl-piperazin 30 Tilsett ublandet 1-etylpiperazin (221,44 ml) til en blanding av 6-brom-pyridin-3- karbaldehyd (300 g) og DCM (000 ml). Tilsett deretter natriumtriacetoksyborhydrid (372,09 g) i porsjoner og rør ved RT i 12 t. Tilsett DCM (00 ml) og vandig løsning av 2 N natriumhydroksid (0 ml). Separer

23 23 lagene og ekstraher det vandige laget to ganger med DCM (600 ml). Kombiner de organiske lagene og fjern løsemidlet under vakuum, tilsett EA og fordamp for å gi 41,3 g av tittelforbindelsen. MS (ES + ): m/z= 28 (M+H) +. ylmetyl)-4-etyl-piperazin ved å anvende det tilsvarende aminet: Preparat Forbindelse MS (ES+): m/z (M+H)+ 19 Fremstill det følgende i det vesentlige som beskrevet for 1-(6-brom-pyridin-3-4-(6-Brom-pyridin-3-ylmetyl)-piperazin-1- karboksylsyre tert-butylester 37 Preparat -(4-Etyl-piperazin-1-ylmetyl)-pyridin-2-ylamin 1 2 Tilsett litium 1,1,1,3,3,3-heksametyl-disilazan ( ml) langsomt til en avgasset blanding av 1-(6-brom-pyridin-3-ylmetyl)-4-etyl-piperazin ( g), disykloheksylfosfino)bifenyl (18,0 g), tris(dibenzylidenaceton)dipalladium (24,17 g) og THF ( ml) ved 0 C. Varm blandingen ved 6 C over natt. Avkjøl til 37 C og tilsett vann (00 ml). Fjern halvparten av løsemidlet under vakuum og tilsett DCM (2, l). Filtrer over en celitepute og fjern en del av løsemidlet. Tilsett metanol (300 ml) og metyl tert-butyleter (MtBE, 600 ml) til blandingen og avkjøl i et isbad. Tilsett deretter 2 M saltsyre i etyleter (800 ml) og en 32 % vandig løsning av saltsyre (0 ml). Fjern det organiske laget og tilsett en vandig løsning av 2 M natriumhydroksid (0 ml). Ekstraher den vandige fasen tre ganger med DCM og fjern løsemidlet under vakuum. Løs i 90 ml toluen ved 0 C inntil fullstendig oppløsning og tilsett deretter 80 ml MtBE. Rør over natt ved RT. Tilsett mer MtBE (0 ml) for fullstendig presipitering. Filtrer det faste stoffet og tørk for å gi 8,24 g av tittelforbindelsen. MS (ES + ): m/z= 221 (M+H) Fremstill det følgende i det vesentlige som beskrevet for -(4-etyl-piperazin-1- ylmetyl)-pyridin-2-ylamin ved å anvende det tilsvarende 2-brom-pyridinderivatet:

24 24 Preparat Forbindelse MS (ES+): m/z (M+H) (6-Amino-pyridin-3-ylmetyl)-piperazin-1- karboksylsyre tert-butylester 293 Preparat 22 2,4-Dibrom-1-nitro-benzen Tilsett dråpevis rykende salpetersyre (1,40 ml) til en løsning av 1,3- dibrombenzen (2,1 ml) i konsentrert svovelsyre (322,79 ml) og vann (62,39 ml) ved 0 C. Oppvarm til RT og rør i 12 t. Hell reaksjonen over i isvann (0 ml). Filtrer det resulterende gule, faste stoffet under vakuum og tørk for å gi 178,46 g av tittelforbindelsen. MS (ES + ): m/z= 281 (M+H) +. Preparat 23 (-Brom-2-nitro-fenyl)-syklopentyl-amin 1 Tilsett syklopentanamin (32 ml) til en løsning av 2,4-dibrom-1-nitro-benzen ( g) i 1-butanol (160 ml). Varm blandingen ved 0 C over natt. Fjern løsemidlet under vakuum, tilsett vann og ekstraher med EA. Vask det organiske laget sekvensielt med en vandig, mettet løsning av natriumbikarbonat og deretter vann. Tørk over magnesiumsulfat og fjern løsemidlet under vakuum for å gi 22 g av tittelforbindelsen. MS (ES + ): m/z= 286 (M+H) +. Preparat Brom-N2-syklopentyl-benzen-1,2-diamin Tilsett natriumditionit (7,47 g) til en løsning av -brom-2-nitro-fenyl)- syklopentyl-amin (22 g), THF ( ml), vann ( ml) og ammoniumhydroksid (30 ml). Rør blandingen ved RT over natt. Ekstraher to ganger med EA, tørk over magnesiumsulfat og fjern løsemidlet under vakuum for å gi 14,80 g av tittelforbindelsen. MS (ES + ): m/z= 26 (M+H) +. Preparat 2

25 2 6-Brom-1-syklopentyl-2-metyl-1H-benzoimidazol Varm en blanding av 4-brom-N2-syklopentyl-benzen-1,2-diamin (,6 g), trietyl ortoacetat (9, ml) og eddiksyre (6,3 ml) ved 0 C i 2, t. Fortynn med DCM og hell over i en vandig, mettet løsning av natriumbikarbonat. Tørk over natriumsulfat og fjern løsemidlet under vakuum. Rens med silikagelkolonnekromatografi ved å eluere med DCM/etanol- % NH 3 (0-3 %) for å gi,67 g av tittelforbindelsen. MS (ES + ): m/z= 280 (M+H) +. Preparat 26 N-Isopropyl-acetamid 1 Tilsett TEA (23,8 ml) til en løsning av 2-propanamin ( g) i DCM (0 ml) ved 0 C. Tilsett deretter forsiktig dråpevis eddiksyreanhydrid (16,1 ml). Rør ved RT over natt. Fjern løsemidlet under vakuum, fortynn med etyleter (eter) og filtrer det faste stoffet. Fjern løsemidlet under vakuum. Fortynn oljen med eter, tilsett kaliumkarbonat og rør over natt ved RT. Filtrer det faste stoffet og fjern løsemidlet under vakuum for å gi 1,62 g av tittelforbindelsen. NMR (CDC13) 4,06 (m, 1H), 1,94 (s, 3H), 1,14 (d, 6H). Fremstill de følgende amidene i det vesentlige som beskrevet for N-isopropylacetamid ved å anvende det tilsvarende aminet: Preparat Forbindelse 27 N-Syklopropyl-acetamid 28 N-Syklopropylmetyl-acetamid 29 N-Syklopentyl-acetamid 2 Preparat 30 N-(4-Brom-2,6-difluor-fenyl)-N'-isopropyl-acetamidin 30 Tilsett TEA (,0 ml) til en blanding av 4-brom-2,6-difluor-fenylamin (,0 g), N-isopropylacetamid (9,73 g), fosforylklorid (6,70 ml) i toluen ( ml). Varm

26 26 blandingen til tilbakestrømning i 3 t. Avkjøl blandingen og fjern løsemidlet under vakuum. Oppløs det urene i DCM, vask med en vandig, mettet løsning av natriumbikarbonat flere ganger for å fjerne alle spor av syre. Tørk over natriumsulfat og fjern løsemidlet under vakuum for å gi 14 g av tittelforbindelsen. MS (ES + ): m/z= 292 (M+H) +. Fremstill de følgende mellomproduktene i det vesentlige som beskrevet for N- (4-brom-2,6-difluor-fenyl)-N'-isopropyl-acetamidin ved å anvende det tilsvarende acetamidet: Preparat Forbindelse MS (ES+): m/z (M+H) N-(4-Brom-2,6-difluor-fenyl)-N'-syklopropylacetamidin N-(4-Brom-2,6-difluor-fenyl)-N'-syklopropylmetylacetamidin N-(4-Brom-2,6-difluor-fenyl)-N'-syklopentylacetamidin Preparat 34 6-Brom-4-fluor-1-isopropyl-2-metyl-1H-benzoimidazol 1 Tilsett kalium tert-butoksid (811,43 mg) til en løsning av N-(4-brom-2,6-difluorfenyl)-N'-isopropyl-acetamidin (2 g) i N-metyl formamid ( ml). Varm blandingen ved 0 C i 2 t. Avkjøl til RT, tilsett DCM ( ml), vask tre ganger med mettet vandig natriumklorid (saltløsning, 300 ml), tørk over magnesiumsulfat og fjern løsemidlet under vakuum. Tilsett heksan og rist med ultralyd i noen få minutter. Filtrer det faste stoffet, repeter tilsettingen av heksan/filtrering to ganger for å gi 1,86 g av tittelforbindelsen. MS (ES + ): m/z= 272 (M+H) +. 2 Fremstill de følgende mellomproduktene i det vesentlige som beskrevet for 6- brom-4-fluor--1-isopropyl-2-metyl-1h-benzoimidazol ved å anvende det tilsvarende acetamidinet:

27 27 Preparat Forbindelse MS (ES+): m/z (M+H) Preparat 38 6-Brom-1-syklopropyl-4-fluor-2-metyl-1Hbenzoimidazol 6-Brom-1-syklopropylmetyl-4-fluor-2-metyl-1Hbenzoimidazol 6-Brom-1-syklopentyl-4-fluor-2-metyl-1Hbenzoimidazol 4-Fluor-1-isopropyl-2-metyl-6-(4,4,,-tetrametyl-[1,3,2]dioksaborlan- 2-yl)-1H-benzoimidazol 1 Preparat Forbindelse MS (ES+): m/z (M+H) Boble nitrogen inn i en blanding av 6-brom-4-fluor-1-isopropyl-2-metyl-1Hbenzoimidazol (30,0 g), bis(pinakolato)dibor (42,1 g), trisykloheksylfosfin (,43 g), kaliumacetat (32,8 g) og DMSO (0 ml). Tilsett palladiumacetat (2,8 g) og varm i forhåndsvarmet oljebad ved 90 C i 1 t. Fortynn med EA (0 ml) og filtrer over en celitepute. Vask blandingen med saltvann (0 ml), tørk over natriumsulfat og fjern løsemidlet under vakuum. Triturer med heksan og filtrer det faste stoffet for å gi 27 g av tittelforbindelsen. MS (ES + ): m/z= 319 (M+H) +. Fremstill de følgende mellomproduktene i det vesentlige som beskrevet for 4- fluor-1-isopropyl-2-metyl-6-(4,4,,-tetrametyl-[1,3,2]dioksaborlan-2-yl)-1hbenzoimidazol ved å anvende de tilsvarende 6-brom-benzoimidazolderivatetene: 1-Syklopropyl-4-fluor-2-metyl-6-(4,4,,-tetrametyl- [1,3,2]dioksaborlan-2-yl)-1H-benzoimidazol 1-Syklopentyl-2-metyl-6-(4,4,,-tetrametyl- [1,3,2]dioksaborlan-2-yl)-1H-benzoimidazol Syklopropylmetyl-4-fluor-2-metyl-6-(4,4,,- 331

28 28 Preparat Forbindelse MS (ES+): m/z (M+H)+ 42 tetrametyl-[1,3,2]dioksaborlan-2-yl)-1h-benzoimidazol [1,3,2]dioksaborlan-2-yl)-1H-benzoimidazol 34 Preparat 43 1-Syklopentyl-4-fluor-2-metyl-6-(4,4,,-tetrametyl- 6-(2-Klor--fluor-pyrimidin-4-yl)-4-fluor-1-isopropyl-2-metyl-1Hbenzoimidazol 1 Boble nitrogen inn i en blanding av 2,4-diklor--fluor-pyrimidin (12,7 g), bis(trifenylfosfin)palladium(ii)klorid (4,9 g), 2 M natriumkarbonat i vann (3,7 ml) og 1,2-dimetoksyetan (1 ml). Varm i et forhåndsvarmet oljebad ved 80 C og tilsett dråpevis en løsning av 4-fluor-1-isopropyl-2-metyl-6-(4,4,,- tetrametyl-[1,3,2]dioksaborlan-2-yl)-1h-benzoimidazol (22 g) i 1,2- dimetoksyetan (0 ml). Rør blandingen ved 84 C i 1 t. Avkjøl til RT, tilsett EA (800 ml) og vask to ganger med saltløsning (0 ml). Tørk over magnesiumsulfat og fjern løsemidlet under vakuum. Triturer med acetonitril for å gi 14,4 g av tittelforbindelsen. MS (ES + ): m/z= 323 (M+H) +. Fremstill de følgende mellomproduktene i det vesentlige som beskrevet for 6- (2-klor--fluor-pyrimidin-4-yl)-4-fluor-1-isopropyl-2-metyl-1H-benzoimidazol ved å anvende de tilsvarende diklor-pyrimidin og boronat-derivatene: Preparat Forbindelse MS (ES+): m/z (M+H) (2-Klor--fluor-pyrimidin-4-yl)-1-syklopropyl-4- fluor-2-metyl-1h-benzoimidazol 6-(2-Klor--fluor-pyrimidin-4-yl)-1-syklopentyl-2- metyl-1h-benzoimidazol 6-(2-Klor--fluor-pyrimidin-4-yl)-1-syklopropylmetyl- 4-fluor-2-metyl-1H-benzoimidazol 6-(2-Klor-pyrimidin-4-yl)-1-syklopentyl-4-fluor-2- metyl-1h-benzoimidazol

29 29 Preparat Forbindelse MS (ES+): m/z (M+H) (2-Klor-pyrimidin-4-yl)-4-fluor-1-isopropyl-2- metyl-1h-benzoimidazol 30 Preparat Forbindelse MS (ES+): m/z (M+H) Fremstill de følgende mellomproduktene i det vesentlige som beskrevet for [- (4-etyl-piperazin-1-ylmetyl)-pyridin-2-yl]-[-fluor-4-(7-fluor-3-isopropyl-2- metyl-3h-benzoimidazol--yl)-pyrimidin-2-yl]-amin nedenfor ved å anvende de tilsvarende amin og klor-pyrimidin-derivatene: 4-{6-[-Fluor-4-(7-fluor-3-isopropy)-2-metyl-3H- benzoimidazol--yl)-pyrimidin-2-ylamino]-pyridin-3- ylmetyl}-piperazin-1-karboksylsyre tert-butylester 4-{6-[4-(3-Syklopropyl-7-fluor-2-metyl-3H- benzoimidazol--yl)--fluor-pyrimidin-2-ylamino]-pyridin- 3-ylmetyl}-piperidin-1-karboksylsyre tert-butylester {6-[-Fluor-4-(7-fluor-3-isopropyl-2-metyl-3H- 1 benzoimidazol--yl)-pyrimidin-2-ylamino]-2-metyl- pyridin-3-ylmetyl}-piperidin-1-karboksylsyre tert- 92 butylester [4-(3-Syklopentyl-2-metyl-3H-benzoimidazol--yl)-- fluor-pyrimidin-2-ylamino]-3',4',',6'-tetrahydro-2'h- [3,4']bipyridinyl-1'-karboksylsyre tert-butylester 6-[-Fluor-4-(7-fluor-3-isopropyl-2-metyl-3H- benzoimidazol--yl)-pyrimidin-2-ylamino]-2-metyl- 3',4',',6'-tetrahydro-2'H-[3,4']bipyridinyl-1'- karboksylsyre tert-butylester 4-{6-[-Fluor-4-(7-fluor-3-isopropyl-2-metyl-3H- benzoimidazol--yl)-pyrimidin-2-ylamino]-pyridin-3- yloksyl}-piperidin-1-karboksylsyre tert-butylester {6'-[-Fluor-4-(7-fluor-3-isopropyl-2-metyl-3H- 93

30 30 Preparat Forbindelse MS (ES+): m/z (M+H)+ 6 7 benzoimidazol--yl)-pyrimidin-2-ylamino]-2'-metyl- 3,4,,6-tetrahydro-2H-[1,3']bipyridinyl-4-yl}- karbaminsyre tert-butylester {6'-[4-(3-Syklopentyl-7-fluor-2-metyl-3H-benzoimidazol- -yl)-pyrimidin-2-ylamino]-3,4,,6-tetrahydro-2h- [1,3']bipyridinyl-4-yl}-karbaminsyre tert-butylester 4- {6-[4-(7-Fluor-3-isopropyl-2-metyl-3H-benzoimidazol- -yl)-pyrimidin-2-ylamino]-pyridin-3-ylsulfanyl}- piperidin-1-karboksylsyre tert-butylester Preparat 8 [-Fluor-4-(7-fluor-3-isopropyl-2-metyl-3H-benzoimidazol--yl)- pyrimidin-2-yl]-(-piperazin-1-ylmetyl-pyridin-2-yl)-amin 1 Tilsett 4 M saltsyre i dioksan (194 µl) til en blanding av 4-{6-[-fluor-4-(7-fluor- 3-isopropyl-2-metyl-3H-benzoimidazol--yl)-pyrimidin-2-ylamino]-pyridin-3- ylmetyl}-piperazin-1-karboksylsyre-tert-butylester ( mg) i DCM ( ml) og metanol ( ml). Rør i min og fjern løsemidlet under vakuum. Rens med kraftig ionebytterpatron (SCX) ved å eluere med metanol og deretter 2 M metanol-nh 3 etterfulgt av silikagelkolonnekromatografi ved å eluere med DCM/metanol-NH 3 2M (3 %) for å gi 1 mg av tittelforbindelsen. MS (ES + ): m/z= 479 (M+H) +.