Mikrobiologisk diagnostikk ved ebolainfeksjon Susanne G. Dudman, overlege dr. med. Avdeling for virologi, FHI Ebola seminar, Oslo kongress senter 10. desember 2014
Filovirus Marburg (1967) Ebola (1976) Sudan og Zaire Tai Forest (1994) Bundibugyo(2008) Reston
Viruset GP, transmembrant overflateprotein Membranen Humane proteiner VP 40 og VP 24 Major og minor matrix proteiner -SenseRNA pakket i NP protein L, Large Ebola protein, polemyrasen. VP 35 og VP 30 Budding viral particle
Reservoir for viruset
Hvordan smitter ebolaviruset?
Ebolavirus smitte fra person til person
Dråpesmitte og luftsmitte ebolavirus er ikke et luftveisvirus i motsetning til influensavirus
Ebola smittemåte Ebolavirus smitter ved at virusholdig kroppsvæske kommer i kontakt med en annen persons slimhinner, via sår og rifter i huden eller ved stikkskader med sprøytespisser og andre redskaper som inneholder virusholdig væske Følgende tilsier at skal det tas ekstra forholdsregler ved risiko for ebolasmitte: En liten mengde infeksiøst materiale er teoretisk tilstrekkelig for å gi infeksjon Det kan være store mengder virusi kroppsvæsker til syke personer (høy viremi) En ebolavirusinfeksjon er en svært alvorlig tilstand med høy dødelighet Laboratoriesmitte har skjedd ved stikkskader eller bitt av infiserte forsøksdyr
Ebolavirus: blood, sweat and tears Blod: 10 6-10 8 kopier per milliliter Svette: ikke funnet infeksiøse EBOV hos mennesker bare EBOV RNA i enkelttilfeller, ebolavirus antigen funnet hos apesvette Tårer: EBOV RNA i tårer fra ett humant tilfelle og i øyeeple hos aper Spytt: infeksiøs EBOV funnet hos 67% av syke menneskers spytt
Fra smitte til sykdom WHO Ebola Response Team. N Engl J Med 2014;371:1481-1495.
Prøvetaking Prøvetaking for diagnostikk og overvåking (monitorering) reduseres til det mest nødvendige Pasientnære hurtigtester for malaria og dengue anbefales brukt initialt Unngå tykk dråpe malariapreparat og evt vurder om blodutstryk kan utsettes til ebolamistanken er avkreftet. Malaria hurtigtest som kan gjøres pasientnært initialt, eller PCR på inaktivert materiale, er alternative tester. Blodprøver tas av helsearbeider med god rutine og erfaring med blodprøvetaking Personlig beskyttelsesutstyr skal brukes ved prøvetaking Aktuelt prøvemateriale initialt er EDTA-blod (plasma, serum) evt blodkultur Andre typer prøvematerialer er avhengig av klinisk bilde. Det anbefales å sikre at både akutt og rekonvalesensserum tas Til bruk for PCR undersøkelse anbefales EDTA-rør tilsatt lysisbuffer tatt samtidig med vanlig ikkeinaktivert blodprøve som også egner seg til antistoffundersøkelser All prøvetaking skal være avtalt med laboratoriet på forhånd, og prøver skal være tilstrekkelig merket Prøverør/beholdere desinfiseres før de pakkes i dobbel emballasje for transport til laboratoriet: bruk ikke rørpost eller blodprøverør av glass
Ebolavirus-diagnostikk på ikkeinaktivert prøvemateriale Etter en lokal risikovurdering kan undersøkelse for ebola-pcr på ikke-inaktivert materiale gjøres på inneslutningsnivå 3 Serologisk diagnostikk krever at man har både akuttfaseprøve og prøve tatt etter 10-14 dager, evt. etter 3 uker fra sykdomsdebut. Utvikling av antistoffer kan ha prognostisk verdi. Antistoffpåvisning ved nøytralisasjonstest skjer hos Folkhälsomyndigheten som har nødvendig sikkerhetsnivå for denne analysen (BSL-4) Dyrkning av ebolavirus krever også BSL-4 sikkerhetsnivå Analyser for andre kategori A virale hemoragiske febersykdommer, f.eks. lassafeber som er en aktuell differensialdiagnose i Vest-Afrika, gjøres ved Folkhälsomyndigheten i Stockholm. Slike analyser gjøres etter avtale i EDTA- blod (ikke inaktivert) og krever kategori A- forsendelse. De medisinske mikriobiologiske laboratoriene i Norge har personer som er opplært til å sende prøver i kategori A
Eboladiagnostikk ved FHI RealStar Filoscreen RT-PCR (Altona, Germany) RealStar Filo Typing RT-PCR (Altona) Ebola in-house realtime PCR (FHI) ENIVD kvant. Ebola standard preparasjon FHI kan motta prøver både for screening og bekreftelse av ebola Bekreftelse krever positivt resultat i to ulike PCR med målområde i to forskjellige deler av ebolagenomet.
Påvisning av ebola ved PCR Først når symptom opptrer er det mulig å påvise ebolavirus Oftest høygradig viremi blod er det foretrukne prøvemateriale men kan være under deteksjonsnivå de første døgn Negativ ebola PCR i første prøve kan være pga: Pasienten har annen infeksjon f.eks malaria Falsk negativ pga hemming i PCR reaksjonen Virusnivå er lavt og ligger under deteksjonsnivå Ny prøve for kontroll etter 48 t (evt. tidligere hvis forverring av sykdomsbilde)
Algoritme for ebola testing
FHI kan tilby: Avdeling for virologi kan bekrefte tilfeller som har testet positivt i screening test og påvise hvilket ebolavirus (el. Marburg) som foreligger, samt kvantitering og sekvensering av viruset Mikrobiologisk beredskapsvakt ved FHI tar imot prøver og kjører screening PCR for ebola i en 24/7 ordning ved kontakt på tlf. 95214993 Avdeling for virologi lager og distribuerer til sykehusene EDTA-glass med lysisbuffer samt prosedyre og sjekkliste for bruk