ctni-analyse Bruksanvisning

Transkript

1 ctni-analyse Bruksanvisning Singulex.com/IFUs TILTENKT BRUK Sgx Clarity ctni-analysen er en in vitro-immunanalysetest som kvantitativt måler hjertetroponin (ctni) i EDTA-plasma ved bruk av Sgx Clarity-systemet. -analysen er indisert for bruk i kombinasjon med klinisk evaluering for å utelukke hjerteiskemi hos pasienter med mistenkt koronararteriesykdom. BESKRIVELSE AV ANORDNINGEN -analysen består av følgende enkeltkomponenter (alle selges separat): - Reagent Pack (reagenspakke) - Calibrator Kit (kalibratorsett) - Sgx Clarity System Elution Buffer (elueringsbuffer) - Sgx Clarity System Wash Buffer Concentrate (vaskebufferkonsentrat) SAMMENDRAG OG FORKLARING AV TESTEN Koronararteriesykdom er en av de ledende årsakene til død verden over. 1 Tidlig deteksjon av koronararteriesykdom og stressindusert hjerteiskemi er avgjørende for den globale innsatsen for å redusere folkehelsebyrden av koronararteriesykdom. Hjertestresstesting er for tiden bærebjelken til ikke-invasiv diagnostikk av koronararteriesykdom. 2 Nukleær stresstesting med avbildning, slik som myokardperfusjonsavbildning med enkeltfotons datatomografi (MPI-SPECT), har begrensninger når det gjelder kostnader, tilgjengelighet og eksponering for kontrastmidler og stråling. 2-4 Derfor er det behov for enkle, trygge og bredt tilgjengelige alternative verktøy for å detektere stressindusert hjerteiskemi med en grad av nøyaktighet som gjør det mulig å ekskludere pasienter fra slike avbildningstester. I tillegg til å redusere helsepleiekostnadene vil et ekvivalent alternativt ekskluderingsverktøy redusere pasientens tilbrakte tid på helseinstitusjoner og antallet spesialisthenvisninger som trengs. Hjertetroponin I og T (ctnt) spiller en sentral rolle i diagnostisering og behandling av pasienter med mistenkt akutt koronarsyndrom. 5,6 Tidligere studier har demonstrert en forbindelse mellom ctni-nivåer og stressindusert hjerteiskemi. 7,8 Forbindelsen mellom hjertetroponin og stressindusert iskemi ble videre etablert i BASEL VIII-studien hvor det ble brukt en svært sensitiv ctni-analyse for kun forskningsbruk, fra Singulex, hos pasienter med mistenkt koronararteriesykdom som ble evaluert med MPI-SPECT totalt sett demonstrerte Singulex ctnianalysen (for kun forskningsbruk) høy diagnostisk nøyaktighet, spesielt for utelukkelse av hjerteiskemi og dermed utelukkelse av standard stressavbildningsprosedyrer. 9 Et separat delsett av EDTA-plasmakohorten fra BASEL VIII-studien ble brukt til å validere analysen opp mot sin tiltenkte bruk og fastslå diagnosetestegenskapene ved flere ctni-konsentrasjoner. TESTPRINSIPP -analysen er en ultrasensitiv immunanalyse som bruker enkeltfotons fluorescensdeteksjon for kvantifisering av hjertetroponin I (ctni) i EDTA-plasmaprøver. Prøven overføres av Sgx Clarity System til en Sgx Clarity Reaction Vessel (reaksjonsbrønnremse, RV) som deretter tilsettes ctni-spesifikke, antistoffbelagte, paramagnetiske mikropartikler (bindingsreagens) og fluorescensmerkede, ctni-spesifikke antistoffer (deteksjonsreagens). Reagensene inkuberes deretter ved 37 C i Reaction Vessel. Under inkubering bindes ctni som finnes i prøven, til både bindingsantistoffene og deteksjonsantistoffene, og danner et immunkompleks. Ubundet material i reaksjonsblandingen vaskes vekk under de etterfølgende vasketrinnene. Deretter tilsettes Elution Buffer (elueringsbuffer) for å dissosiere immunkompleksene (bundet analytt og deteksjonsantistoffer) fra de paramagnetiske mikropartiklene og frigjøre fluorescensmerkede antistoffer under det andre inkuberingstrinnet i protokollen. Etter dissosiasjon eksponeres blandingen for et magnetisk felt for å separere de paramagnetiske mikropartiklene fra de dissosierte merkede antistoffene. Det resulterende eluatet, som inneholder de dissosierte deteksjonsantistoffene, overføres til en Sgx Clarity Detection Vessel (deteksjonsbrønnplate, DV) hvor de merkede molekylene detekteres og telles. Resultatene av signaltellingen sammenlignes deretter med en kalibreringsjustert hovedkurve og konverteres til en ctni-konsentrasjon _NO 1 av 16

2 ANDRE RESSURSER For lotspesifikk informasjon, se pakningsvedlegget eller reagensetiketten knyttet til hver enkelt reagens. For detaljerte instruksjoner om betjening av Sgx Clarity System, se Sgx Clarity Systems brukerhåndbok. Hvis du vil laste ned elektroniske eksemplarer av brukerhåndboken, gå til singulex.com/ifus. Hvis du ønsker ytterligere trykte eksemplarer av Sgx Clarity Systems brukerhåndbok eller denne bruksanvisningen, ring REAGENSER Analysereagenser Reagent Description Associated Notices REF Bindingsreagens En HEPES-bufret løsning med paramagnetiske mikropartikler belagt med murine monoklonale antistoffer mot antitroponin I med proteinstabilisatorer og natriumazid som et konserveringsmiddel. Ingen DX-CTNKIT-001 Reagent Pack (reagenspakke) Deteksjonsreagens En HEPES-bufret løsning med fluorescensmerkede murine monoklonale antistoffer mot antitroponin I med proteinstabilisatorer og natriumazid som et konserveringsmiddel. Ingen DX-CTNKIT-001 Reagent Pack (reagenspakke) Calibrators (kalibratorer) Human serum- og plasmaproteinmatrise med buffere, antibiotika og stabilisatorer justert til kjente ctni-konsentrasjoner med nativt humant ctni. DX-CTNCAL-001 Calibrator Kit (kalibratorsett) Controls (kontroller) (valgfritt) Human serum- og plasmaproteinmatrise med buffere, antibiotika og stabilisatorer justert til kjente ctni-konsentrasjoner med nativt humant ctni. DX-CTNCTR-001, 002, 003, 004 Controls (kontroller) (nivåer 1-4) Systemreagenser Reagent Description Associated Notices REF Sgx Clarity System Elution Buffer (elueringsbuffer) Sgx Clarity System Wash Buffer Concentrate (vaskebufferkonsentrat) Vandig løsning med et glysinbuffersystem. DX-CLRELB-001 Sgx Clarity System Elution Buffer (elueringsbuffer) Boratbufferløsning med ProClin 950 som et konserveringsmiddel. Ingen DX-CLRWAS-001 Sgx Clarity System Wash Buffer Concentrate (vaskebufferkonsentrat) _NO 2 av 16

3 REAGENSOPPBEVARING OG -STABILITET Oppbevar reagensene som følger for bruk på Sgx Clarity System. For lotspesifikk informasjon, se pakningsvedlegget eller reagensetiketten for hver reagens. Alle uåpnede reagenser er stabile når de lagres som anvist, frem til utløpsdatoen på etiketten. For instruksjoner om bruk av Sgx Clarity System, se Sgx Clarity Systems brukerhåndbok. Reagens Reagent Pack (reagenspakke) Bindingsreagens og Deteksjonsreagens Sgx Clarity System Elution Buffer (elueringsbuffer) Oppbevares stående ved... Stabilitet etter åpning 56 timer ved romtemperatur etter første bruk eller til utløpsdatoen på etiketten, avhengig av hva som kommer først. (Se Stabilitets- og kalibreringsintervall for Reagent Pack (reagenspakken).) Merk: Med mindre noe annet er angitt, er romtemperatur definert som 15 C 30 C. Ikke relevant: Reagens til engangsbruk. Sgx Clarity System Wash Buffer Concentrate (vaskebufferkonsentrat) Calibrators (kalibratorer) (3 nivåer) Konsentrert: Frem til utløpsdatoen på etiketten. Tilberedt (fortynnet): 7 dager etter tilberedelse eller frem til utløpsdatoen på etiketten på Wash Buffer Concentrate (vaskebufferkonsentrat), avhengig av hva som kommer først. Ikke relevant: Reagens til engangsbruk. Controls (kontroller) (Singulex / 4 nivåer) 30 dager eller frem til utløpsdatoen på etiketten, avhengig av hva som kommer først. Merk: Sgx Clarity System holder ikke rede på stabiliteten etter åpning for Controls (kontroller). Personalet på stedet har ansvaret for å holde rede på dette etter første bruk. FORHOLDSREGLER For bruk til in vitro-diagnostikk. Bruk rutinemessige laboratorieforholdsregler, og ikke pipetter med munnen. Ikke spis, drikk eller røyk i arbeidsområdet på laboratoriet, og vask hendene grundig etter bruk. ADVARSEL Calibrators (kalibratorer) (3 nivåer) og Controls (kontroller) (4 nivåer, valgfritt) inneholder metanol og er gjenstand for følgende fare- og sikkerhetssetninger: - H303, Kan være skadelig ved svelging - H311, Kan være skadelig ved kontakt med hud - H331, Kan være skadelig ved innånding - P264, Vask hendene grundig etter håndtering - P270, Ikke spis, drikk eller røyk når du bruker dette produktet - P280, Bruk verneutstyr i form av hansker/beskyttelsesklær/vernebriller/maske - P261, Unngå innånding av støv/damp/spray - P271, Må kun brukes i et godt ventilert område Fareresponser: - P301 + P312, Ved svelging: Kontakt et giftinformasjonssenter eller lege ved ubehag - P330, Skyll munnen - P302 + P352, VED HUDKONTAKT: Vask skånsomt med rikelige mengder såpe og vann - P312, Kontakt et GIFTINFORMASJONSSENTER eller lege ved ubehag - P363, Vask kontaminerte klær før de brukes på nytt - P304 + P340, VED INNÅNDING: Flytt den berørte personen til frisk luft og sørg for at vedkommende hviler i en stilling som letter åndedrettet - P311, Kontakt et GIFTINFORMASJONSSENTER eller lege _NO 3 av 16

4 ADVARSEL Calibrators og Controls (hvis brukt) inneholder humane blodprodukter og skal anses som potensielt infeksiøse følg de samme forholdsreglene som brukes med pasientprøver. Reagent Packs (reagenspakker), Controls og Calibrators inneholder natriumazid, som kan reagere med kobber- og blyrør og danne eksplosive metallazider. Hvis kassering i avløp overholder lokale krav, skal reagensene skylles ut med store mengder vann for å unngå oppbygging av azider. Kassering Kasser biologiske risikomaterialer i henhold til retningslinjene på din institusjon. Kasser alle materialer på en trygg og akseptabel måte, og i samsvar med alle myndighetskrav. Sikkerhetsdatabladet for hver reagens er tilgjengelig på forespørsel. MATERIALER Materialer levert av Singulex Material Mengde/kapasitet REF eller delenr. Reagent Pack (reagenspakke) 1 pakke (kapasitet: 92 tester*) DX-CTNKIT-001 Eske med Sgx Clarity Detection Vessels (deteksjonsbrønnplater) Eske med Sgx Clarity Reaction Vessels (reaksjonsbrønnremser) 25 deteksjonsbrønnplater DX-CLRDVS reaksjonsbrønnremser DX-CLRRVS-001 Sgx Clarity System Elution Buffer (elueringsbuffer) ml DX-CLRELB-001 Sgx Clarity System Wash Buffer Concentrate (vaskebufferkonsentrat) 1 1 liter DX-CLRWAS-001 Calibrator Kit (kalibratorsett) (lotavstemt) Nivå 1 (1 0,75 ml) Nivå 2 (1 1,20 ml) Nivå 3 (1 0,75 ml) DX-CTNCAL-001 Sgx Clarity Spare Reagent Caps (reservereagenskorker) 250 DX-CLRCSM-001 Sgx Clarity Waste Blisters (blisterbokser for avfall) 40 (20 store og 20 små) DX-CLRCSM-002 Spare Bottles for RV Buffer (reserveflasker for reaksjonsbuffer) 12 DX-CLRCSM mm 75 mm Low Volume Sample Cup Holders (holdere for prøvekopper med lite volum) Low Volume Sample Cup (prøvekopp med lite volum) (0,5 ml) 1000 DX-CLRCSM DX-CLRCSM-005 Disposable Tips (engangsspisser, DiTi), 1000 μl Disposable Tips (engangsspisser, DiTi), 350 μl ,5 ml graderte overføringspipetter til engangsbruk Super Sani-Cloth bakteriedrepende servietter til engangsbruk 1 pakke (160 servietter) Q55172 Våtservietter 1 pakke (30 servietter) PS-919 Microcide SQ 3,78 L (1 gallon) MICROCIDE * Reagent Packs inneholder nok volum til å kjøre minst 92 tester under de fleste driftsforhold, men det faktiske antallet tester utledet fra en gitt pakke vil variere i henhold til variable fordampningshastigheter og samlet tid i åpen tilstand. Ved behandling ved den øverste akseptable temperaturgrensen gjennom hele stabilitetsperioden etter åpning kan det faktiske antallet tester utledet være så få som _NO 4 av 16

5 Nødvendige materialer som ikke leveres av Singulex Material Mengde REF eller delenr. Avionisert vann Ikke aktuelt Ikke aktuelt Valgfrie materialer Material Mengde Leverandør / Beskrivelse REF eller delenr. -kontrollnivå 1 6 x 3,0 ml Singulex DX-CTNCTR-001 -kontrollnivå 2 6 x 3,0 ml Singulex DX-CTNCTR-002 -kontrollnivå 3 6 x 3,0 ml Singulex DX-CTNCTR-003 -kontrollnivå 4 6 x 3,0 ml Singulex DX-CTNCTR-004 Fosfatbufret saltløsning, ingen ml Thermo Fisher / Gibco PBS, ph 7, tilsetningsstoffer (for fortynning, hvis påkrevd) ml Thermo Fisher / Gibco PBS, ph 7, tabletter Diagnostic BioSystems / ph 7,4 DMRE Sentrifugefilter, 500 μl kapasitet 100 VWR PROSEDYREMERKNADER Innsamling og håndtering av prøver EDTA-plasma er den tiltenkte prøvetypen for denne analysen. Følg produsentens instruksjoner for behandling av plasmainnsamlingsrør. Samle inn blodprøver i henhold til standard forholdsregler for venepunksjon. Vær forsiktig ved håndtering av pasientprøver for å unngå krysskontaminasjon. Bruk av pipetter eller pipettespisser til engangsbruk er anbefalt. Hold prøverørene lukket med kork så lenge de ikke er i bruk. Oppbevar prøverørene tett korket i kjøleskap ved 2 C 8 C. La prøvene nå romtemperatur før de behandles i Sgx Clarity System. Inspiser alle prøver med henblikk på bobler. Hvis det finnes bobler, må de fjernes før analyse, men vær forsiktig så du ikke fjerner for mye prøvevolum. Sentrifugerte prøver med et lipidlag på toppen må overføres til en Low Volume Sample Cup (provekopp med lite volum) eller et sekundært rør for behandling i Sgx Clarity System. Vær nøye med å overføre kun den avklarte prøven uten det lipemiske materialet. Håndtering av frosne prøver: - Prøvene skal fryses til -70 C for langtidsoppbevaring, med maksimalt 3 fryse/tine-sykluser. - Bland grundig ved å vende forsiktig etter tining, helt til prøvene er synlig homogene uten lagdeling eller stratifisering. - Frosne prøver må tines fullstendig og sentrifugeres ved G i 10 minutter før analyse. - Etter sentrifugering tilberedes og overføres supernatanten som følger: For prøver med lite volum ( 0,5 ml): Uten å forstyrre pelleten overføres supernatanten til en Low Volume Sample Cup og settes inn i Sgx Clarity System i en mm Low Volume Sample Cup Holder (holdere for provekopper med lite volum) i henhold til instruksjonene gitt i Sgx Clarity Systems brukerhåndbok. For prøver med større volum (> 0,5 ml): Uten å forstyrre pelleten overføres supernatanten til et rør av egnet størrelse. Pipetter opp og ned 10 ganger inne i røret for å blande grundig, og overfør deretter 300 μl til en Low Volume Sample Cup og sett inn i Sgx Clarity System i henhold til instruksjonene gitt i Sgx Clarity Systems brukerhåndbok. Eller: Ved behov: Hvis supernatanten har synlige partikler etter sentrifugering, kan det være nødvendig å filtrere prøvene. I så fall overføres supernatanten til et VWR-sentrifugefilter (se Valgfrie materialer på side 5) og sentrifugeres ved G i 10 minutter før prøven overføres til en Low Volume Sample Cup eller et rør, som beskrevet ovenfor _NO 5 av 16

6 - Før prøvene settes i systemet, må du sikre at prøvene er: fri for partikler fri for bobler Stabilitet -analysen har demonstrert stabilitet for EDTA-plasmaprøver i opptil 24 timer ved romtemperatur (20 C 25 C), i opptil 120 timer i kjøleskap (2 C 8 C) og i 12 måneder ved -70 C med opptil 3 fryse/tine-sykluser. Tilberedelse av reagens Reagens Reagent Pack (reagenspakke) Bindingsreagens og Deteksjonsreagens Sgx Clarity System Elution Buffer (elueringsbuffer) Sgx Clarity System Wash Buffer Concentrate (vaskebufferkonsentrat) Assay Calibrators (analysekalibratorer) (3 nivåer) Controls (kontroller) (Singulex / 4 nivåer) Tilberedelse Rørene i Reagent Pack (reagenspakken) skal være korket når de ikke er i bruk. Etter at reagensrørkorkene er fjernet for å kunne bruke reagenspakken i Sgx Clarity System, skal de erstattes med nye Sgx Clarity Spare Reagent Caps (reservereagenskorker) før reagenspakken settes tilbake på lageret. Ikke kombiner restvolum fra en Reagent Pack (reagenspakke) med en annen. Før reagenser settes inn i Sgx Clarity System: - Ta ut fra lageret og la stå i romtemperatur i 60 minutter. - Bland reagenspakken for hånd ved å vende den forsiktig minst 10 ganger før innsetting. - Åpne hvert enkelt reagensrør og kasser reagenskorkene (nye reagenskorker må brukes når reagenspakken settes tilbake på lageret). - Fjern bobler fra overflaten med en overføringspipette til engangsbruk som følger: Bruk separate pipetter til engangsbruk for hvert reagensrør. Vær forsiktig så du ikke aspirerer den flytende reagensen. Merk: -reagenspakker skal ikke oppbevares på arbeidsbenken eller i Sgx Clarity System de må alltid korkes og settes tilbake på lageret ved 2 C 8 C når de ikke er i bruk. Ta ut fra lageret og la stå i romtemperatur i 30 minutter. En arbeidsløsning tilberedes ved å fortynne Wash Buffer Concentrate (vaskebufferkonsentrat) 10X med avionisert vann (1 del Sgx Clarity Wash Buffer Concentrate / 9 deler avionisert vann), og bland deretter grundig. Forsiktig: Dersom Wash Buffer Concentrate (vaskebufferkonsentrat) ikke fortynnes som angitt ovenfor før bruk i Sgx Clarity System, kan det påvirke analyseresultatene. Ta ut fra lageret og la stå i romtemperatur i 30 minutter. Etter at romtemperatur er nådd, bland ved forsiktig vending (10 ganger minimum). Rørene skal alltid være korket når de ikke er i bruk. Ta ut fra lageret og la stå i romtemperatur i 30 minutter. Etter at romtemperatur er nådd, bland ved forsiktig vending (10 ganger minimum). Rørene skal alltid være korket når de ikke er i bruk. Stabilitets- og kalibreringsintervall for Reagent Pack (reagenspakken) Stabilitet for Reagent Pack: - Stabiliteten etter åpning for ctni Reagent Packs er 56 timer fra første skann i Sgx Clarity System, med forbehold om at ctnireagenspakkene umiddelbart korkes og settes tilbake på lageret når de ikke er i bruk. - Kasser Reagent Pack på slutten av stabilitetsintervallet. Stabilitet spores i Sgx Vision-programvaren se Sgx Clarity Systems brukerhåndbok for detaljer. Kalibreringsintervall: 7 dager - En ny kalibrering er påkrevd: ved bytte av lotnummer for -reagenspakker hvis kvalitetskontrollresultatene er utenfor det gyldige verdiområdet gjentatte ganger når kalibreringsintervallet er forfalt - For fullstendige detaljer om kalibreringskonseptet og instruksjoner om kalibrering av ctni-reagenspakker, se Sgx Clarity Systems brukerhåndbok _NO 6 av 16

7 Hovedstandardkurve Reagent Packs krever en ny lotspesifikk hovedkurve for hver nye reagenspakkelot. Hovedkurven finnes i pakningsvedlegget for Reagent Pack, og legges inn i løpet av reagenskalibreringen i henhold til instruksjonene i Sgx Clarity Systems brukerhåndbok. Kalibrering Tilbered og sett inn Calibrators i Sgx Clarity System i henhold til instruksjonene i Sgx Clarity Systems brukerhåndbok. Merk: Calibrators er lotavstemt med -reagenspakkelot, som angitt i de respektive pakningsvedleggene. Sgx Clarity ctni Reagent Packs kan bare kalibreres i Sgx Clarity System ved bruk av den avstemte Calibrators. Håndtering av Calibrators: - Calibrators er stabile når de oppbevares uåpnet ved 2 C 8 C frem til utløpsdatoen. - Kalibratorrørene skal alltid være korket når de ikke er i bruk. - Oppbevares stående. Merk: Bruk alltid en ny Reagent Pack (aldri blitt åpnet / innsatt i Sgx Clarity System) til å utføre reagenslotkalibrering. Se Sgx Clarity Systems brukerhåndbok for detaljerte kalibreringsinstruksjoner. Kvalitetskontroll Singulex anbefaler bruk av kvalitetskontrollmaterialer fra Singulex eller andre kommersielt tilgjengelige kvalitetskontrollmaterialer med minst fire nivåer. Et akseptabelt ytelsesnivå er oppnådd når de resulterende kontrollverdiene er innenfor det akseptable kontrollområdet, som definert i en formålstjenlig kvalitetskontrollplan internt på laboratoriet. I tillegg til kravene på bruksstedet kan påkrevde kontrollnivåer og hyppighet av kvalitetskontrollkjøringer være diktert av lokale myndigheters forskrifter eller akkrediteringskrav. Før bruk må kontrollot konfigureres av en bruker med administratornivå i Sgx Vision Software. For detaljerte instruksjoner om konfigurering av kontrollot, se Sgx Clarity Systems brukerhåndbok. Påkrevd kontrollvolum - Påkrevd kontrollvolum er avhengig av antallet replikater og det ekstra volumet som trengs for at Sgx Clarity System skal starte aspirasjon (dødvolum): Antall kontrollreplikater Dødvolum for Low Volume Sample Cup* Prøvebehandlingsvolum - Dispenser 300 μl (hvis kjørt enkeltvis) eller 400 μl (hvis kjørt i duplikat) av hvert kontrollnivå i en Low Volume Sample Cup og sett inn i Sgx Clarity System i henhold til instruksjonene gitt i Sgx Clarity Systems brukerhåndbok Konfigurer og sett inn alle kvalitetskontrollprøver i henhold til instruksjonene gitt i Sgx Clarity Systems brukerhåndbok. Hvis kvalitetskontrollresultatene ikke faller innenfor de forventede verdiene gitt av produsenten, eller hvis de ikke er innenfor laboratoriets etablerte verdier, skal pasientresultatene ikke rapporteres, og du skal gjøre følgende: - Kontroller at materialene ikke er utløpt. - Kontroller at det påkrevde vedlikeholdet ble utført på Sgx Clarity System. - Kontroller at analysen ble utført i henhold til denne bruksanvisningen. - Kjør analysen på nytt med ferske kontroller. - Utfør en ny kalibrering, og test kontrollene på nytt hvis en ny kjøring med ferske kontroller ikke består. - Kontakt om nødvendig Singulex teknisk brukerstøtte. Totalt kontrollvolum μl 100 μl 300 μl μl 200 μl 400 μl * 0,5 ml Nalgene -rør _NO 7 av 16

8 Prøvevolum Denne analysen krever 100 μl med prøve for en enkelt test. Dette volumet inkluderer ikke det ubrukelige volumet i prøvebeholderen eller det primære røret (dvs. dødvolumet). For det totale prøvevolumet som trengs for Sgx Clarity System (volum som må være til stede i røret for å sikre nøyaktig pipettering), se Sgx Clarity Systems brukerhåndbok. Prøvefortynning Pasientprøver med troponin I-nivåer rapportert som høyere enn pg/ml, må fortynnes og testes på nytt for å oppnå numeriske resultater dersom et numerisk resultat er påkrevd. - Hvis prøveresultatet er utenfor det rapporterbare verdiområdet til -analysen, skal prøven fortynnes med fosfatbufret saltløsning (fosfatbufret saltløsning er ikke inkludert se Valgfrie materialer for anbefalte fortynningsmidler). - En innledende fortynning på 1/10 anbefales (1 del prøve til 9 deler fosfatbufret saltløsning). - Oppgi fortynningsfaktoren ved innsetting i Sgx Clarity System i henhold til instruksjonene gitt i Sgx Clarity Systems brukerhåndbok. Hvis en fortynningsfaktor angis når testen planlegges, beregner Sgx Clarity System automatisk resultatet. Analyseprosedyre Alle behandlingstrinnene i -analysen er automatisert på Sgx Clarity System. Tilbered prøver og reagenser i henhold til instruksjonene gitt i denne bruksanvisningen, og sett dem deretter inn i Sgx Clarity System og start analysebehandling i henhold til instruksjonene gitt i Sgx Clarity Systems brukerhåndbok. ANALYTISKE PARAMETERE Sgx Clarity System rapporterer troponin I-resultatene i pg/ml. -analysens kvantitative område er 0,14 pg/ml pg/ml. BEGRENSNINGER Selv om -reagensene er formulert for å minimere heterofil interferens, kan heterofile antistoffer i humant plasma reagere med immunglobuliner i reagensene og forstyrre in vitro-diagnostiske immunanalyser. Pasienter som rutinemessig eksponeres for dyr eller animalske serum- eller plasmaprodukter, kan være utsatt for denne typen analyseinterferens, og unormale verdier kan observeres ved testing av prøver fra slike personer. Prøver fra pasienter som tar preparater med murine, monoklonale antistoffer for behandling eller diagnostikk, kan inneholde humane antimurine antistoffer (HAMA). Disse prøvene kan vise enten falskt forhøyede eller falskt reduserte verdier når de testes, selv om analysen er formulert til å minimere interferens fra HAMA. Den ultrasensitive ytelsen til denne analysen kan, i sjeldne tilfeller, føre til potensiell følsomhet overfor visse miljøforurensninger. Forholdsregler er tatt i utformingen av instrumentet og analysen for å redusere risikoen, men analyseresultater som ikke er konsistente med andre kliniske observasjoner, kan kreve ny testing for å bekrefte det innledende resultatet. Resultatene skal alltid vurderes i sammenheng med pasientens sykehistorie, klinisk undersøkelse og andre funn _NO 8 av 16

9 YTELSESEGENSKAPER Dataene gitt i dette avsnittet ble generert ved bruk av Sgx Clarity System. Analyseresultater som oppnås i individuelle laboratorier, kan avvike fra dataene som presenteres her. Presisjon/reproduserbarhet Presisjonen til -analysen ble testet ifølge en presisjonsstudie i to deler informert av kapittel 3 og 4 i CLSI-retningslinjen EP05-A3 for evaluering av nøyaktighet i kvantitative målingsprosedyrer. For den første delen av studien (tabell 1) testet 2 operatører på ett CLIA-sertifisert laboratorium 2 replikater per panelmedlem i et 10-medlemmers panel på ett Sgx Clarity-system daglig i 20 dager ved bruk av 3 forskjellige loter med -analysereagenser. For den andre delen av studien (tabell 2) testet 2 operatører ved hvert av de 3 CLIA-sertifiserte laboratoriene 1 lot med -analysereagenser i 5 dager med 3 replikater per panelmedlem i et panel med 10 medlemmer på ett enkelt Sgx Clarity-system. Panelet med 10 medlemmer hadde medlemmer i verdiområdet 1 pg/ml til pg/ml. Tabell 1. Presisjonsestimater for 20-dagers studie med flere lot på ett sted Panelmedlem (pg/ml) Lot Middelverdi N Dag-til-dag Repeterbarhet Standardavvik % CV Standardavvik % CV 1 A 1, ,04 4,07 0,09 8,94 B 0, ,02 2,05 0,08 7,98 C 0, ,03 2,84 0, A 5, ,25 4,58 0,37 6,8 B 5, ,25 4,74 0,3 5,64 C 5, ,22 4,26 0,29 5,8 10 A 10, ,54 4,89 0,6 5,45 B 10, ,26 2,48 0,47 4,45 C 10, ,46 4,39 0,53 5,02 15 A 17, ,19 6,91 B 16, ,24 1,45 0,69 4,15 C 16, ,38 2,3 0,78 4,79 20 A 21, ,05 4,78 0,97 4,43 B 21, ,47 2,21 1,02 4,84 C 20,7 80 0,59 2,83 1 4, A 107, ,4 4,07 4,94 4,57 B 96, ,13 2,21 3,73 3,86 C 100, ,46 4,43 4,35 4, A 239, ,36 5,57 20,95 8,74 B 224, ,25 2,78 15,53 6,92 C 218, ,3 5,16 15,3 6, A 572, ,85 3,82 22,92 4,01 B 527, ,96 1,7 16,67 3,16 C 543, ,49 4,32 24,03 4, A 1090, ,97 4,4 41,92 3,84 B 988, ,64 1,78 34,88 3,53 C 1046, ,33 4,23 50,99 4, A , ,46 3,69 545,35 4,91 B 9867, ,71 1,68 324,73 3,29 C , , ,64 3, _NO 9 av 16

10 Tabell 2. Presisjonsestimater for 5-dagers studie med flere lot på ett sted Panelmedlem (pg/ml) Sted Middelverdi Repeterbarhet Innenfor laboratoriet Reproduserbarhet Standardavvik CV (%) Standardavvi k CV (%) Standardavvi k CV (%) ,09 9 0, ,15 0,1 9 0, ,12 0,11 9,4 0,11 10 Alle steder 1,09 0,1 9,2 0, , ,39 0,28 5,3 0,34 6,3 2 5,98 0,38 6,3 0,45 7,5 3 6,21 0,54 8,7 0,55 8,8 Alle steder 5,86 0,42 7,1 0,45 7,7 0, ,7 0,52 4,9 0,6 5,6 2 11,88 0,68 5,7 0,77 6,5 3 11,52 0,42 3,7 0,52 4,5 Alle steder 11,36 0,55 4,8 0,64 5,6 0,87 7, ,94 0,93 5,5 0,97 5,7 2 17,95 0,98 5,4 0,98 5,4 3 17,96 1,03 5,7 1,22 6,8 Alle steder 17,62 0,99 5,6 1,06 6 1,18 6, ,44 1,2 5,6 1,36 6,3 2 22,52 1,02 4,5 1,18 5,3 3 22,18 1,46 6,6 1,7 7,7 Alle steder 22,04 1,25 5,7 1,43 6,5 1,49 6, ,13 4,08 4,2 5,84 6,1 2 96,97 6,33 6,5 6,41 6,6 3 97,57 4,89 5 5,27 5,4 Alle steder 96,89 5,22 5,4 5,77 6 5, ,62 16,3 7,3 17,3 7, ,23 16,4 7 16,9 7, , ,8 15,7 7,1 Alle steder 226,3 16 7,1 16,6 7,4 17,43 7, ,12 27,6 5,3 34,2 6, ,24 21,1 3,9 23,2 4, , ,8 22,2 4 Alle steder 539,79 23,7 4,4 27,1 5 29,49 5, ,14 40,6 4,1 44,8 4, ,8 68,9 6,8 82,4 8, ,4 41,4 4,1 42,3 4,2 Alle steder 1004,8 52,7 5,2 59 5,9 59,02 5, , , , , , ,8 Alle steder 9950, , ,5 551,9 5, _NO 10 av 16

11 Linearitet / rapporterbart område Lineariteten for -analysen kjørt på Sgx Clarity System ble evaluert i henhold til CLSI-retningslinjen EP6-A ved bruk av én reagenslot og ett Sgx Clarity-system som testet EDTA-plasmaprøver tilsatt nativ hjertetroponin I-analytt. Studien som er rapportert her, evaluerte lineariteten ved bruk av 11 prøvefortynninger med varierende analyttkonsentrasjoner i området 0,08 til pg/ml. Fire (4) replikater av hver av 11 fortynninger ble testet og analysert. I området 0,08 til ng/ml var de polynomiale passformene av 2. og 3. ordre ikke bedre enn en lineær passform til innenfor 10 % ikke-linearitet. Den akseptable lineariteten inkluderer derfor det rapporterbare området fra 0,14 til pg/ml ctni for -analysen. Prozoneffekt: -analysen demonstrerte at det ikke var noen høydose-prozoneffekt opptil 1000 ng/ml. Forventede verdier / sporbarhet -analysen er sporbar til NIST-standarden SRM2921. Calibrators og Controls er tilberedt fra kommersielt tilgjengelig humant hjertetroponinkompleks. Sgx Clarity ctni Calibrators og Controls er verditildelt mot en ctni-hovedstandardkurve som er sporbar til NIST SRM2921. Sensitivitet/deteksjonsgrense [LoD, LoB, LoQ] Studiene av blankgrensen (LoB) og deteksjonsgrensen (LoD) ble utført ifølge anbefalingene i EP17-A2. Testing ble utført over 3 dager ved bruk av 2 reagensloter, 1 instrument og 2 kalibreringssykluser. For å beregne blankgrensen ble 4 blanke prøver målt i replikater på 5 hver dag med testing over 3 dager for hver reagenslot. For å estimere deteksjonsgrensen ble 4 lavt ctni-positive EDTA-plasmaprøver målt i replikater på 5 hver dag med testing over 3 dager for hver reagenslot. Ved bruk av en ikke-parametrisk modell ble blankgrensen beregnet å være 0,02 pg/ml og deteksjonsgrensen ble beregnet å være 0,08 pg/ml. For å estimere kvantifiseringsgrensen (LoQ) ble 10 EDTA-plasmaprøver med lave nivåer av ctni-analytt målt i replikater på 4 over 3 dager på 1 instrument og 2 reagensloter. Kvantifiseringsgrensen ble beregnet ved bruk av en presisjonsprofil/funksjonssensitivitet-metode, og kvantifiseringsgrensen ved 20 % CV ble beregnet å være 0,14 pg/ml. Funksjonssensitivitet ved 10 % ble beregnet å være 0,53 pg/ml _NO 11 av 16

12 Analytisk spesifisitet Potensielt interfererende stoffer De følgende potensielt interfererende eksogene forbindelsene, ved de følgende konsentrasjonene (tabell 3), interfererte ikke med Sgx ctni-analysens ytelse på Sgx Clarity System (dvs. resulterte ikke i bias > 10 %). Tabell 3. Eksogene interfererende stoffer som ikke interfererer med -analysen Potensielt interfererende stoff Acetaminofen Acetylsalisylsyre Amlodipinbesylat Ampicillin Askorbinsyre Atenolol Koffein Kaptopril Kloramfenikol Digoksin Diltiazemhydroklorid Dopaminhydroklorid Enalaprilat Furosemid Hydroklortiazid Indometacin Lisinopril Nifedipin Kinidin Ramipril Spironolakton Teofyllin Verapamilhydroklorid Warfarin Konsentrasjon av interfererende stoff 1134 μmol/l 2,54 μmol/l 245 nmol/l 152 μmol/l 342 μmol/l 37,6 μmol/l 308 μmol/l 23 μmol/l 155 μmol/l 7,8 nmol/l 15 μmol/l 5,87 μmol/l 0,86 μmol/l 181 μmol/l 20,2 μmol/l 100 μmol/l 0,74 μmol/l 1156 nmol/l 37 μmol/l 28,8 μmol/l 1,44 μmol/l 222 μmol/l 4,4 μmol/l 32,5 μmol/l HAMA: Utførte studier indikerer at -analyseformelen reduserer virkningene av interferens fra heterofile antistoffer. De følgende potensielt interfererende endogene stoffene, ved konsentrasjonene oppført nedenfor, interfererte ikke med analysens ytelse på Sgx Clarity System (dvs. resulterte ikke i bias > 10 %). Tabell 4. Sammendrag av endogene interfererende stoffer som ikke interfererer med -analysen Potensielt interfererende stoff Biotin Kolesterol Ukonjugert bilirubin Konjugert bilirubin Triglyserider (intralipid) Konsentrasjon av interfererende stoff 290 ng/ml 13 mmol/l 342 μmol/l 342 μmol/l 37 mmol/l _NO 12 av 16

13 Følgende er inkludert som begrensninger: Prøver med synlige tegn på hemolyse kan forårsake interferens. Falskt reduserte resultater ble oppnådd ved bruk av prøver med hemoglobinkonsentrasjoner > 5 g/l, den laveste konsentrasjonen av hemoglobin som er testet. Den spesifikke mengden hemoglobin som kan være til stede uten å forårsake > 10 % bias, vil bli fastslått i senere studier. Prøver med høye proteinkonsentrasjoner som fører til økt prøveviskositet, kan forårsake interferens. Falskt reduserte resultater oppnås ved bruk av prøver med konsentrasjoner av bovint serumalbumin > 30 g/l, den laveste albuminkonsentrasjonen som er testet. Den spesifikke mengden albumin som kan være til stede uten å forårsake > 10 % bias, vil bli fastslått i senere studier. Kryssreaktivitet -analysen hadde ingen signifikant kryssreaktivitet (< 1 %) overfor hjerte-tni (ctni) da kryssreaktantene oppført i tabell 5 ble testet ved 1000 ng/ml. Tabell 5. Kryssreaktivitet Kryssreaktant testet Kilde til kryssreaktant % kryssreaktivitet Prøve 1 ( 2,5 pg/ml) % kryssreaktivitet Prøve 2 ( 50 pg/ml) Skjelett-troponin T-1 Rekombinant protein 0,00 % 0,00 % Skjelett-troponin T-3 Rekombinant protein 0,00 % 0,00 % Hjertetroponin C Renset protein 0,00 % 0,00 % Skjelett-troponin I Renset protein 0,00 % 0,00 % Hjertetroponin T Renset protein 0,21 % 0,21 % Tungkjedet hjertemyosin Renset protein 0,00 % 0,00 % Lettkjedet hjertemyosin Renset protein 0,08 % 0,08 % Hjertetropomyosin Renset protein 0,02 % 0,02 % Referanseområde Singulex utførte en referanseområdestudie basert på rettledning i dokumentet EP28-A3c fra Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Donorprøver ble innsamlet fra 5 steder i USA for å etablere 99. persentils øvre referansegrense i en populasjon med tilsynelatende friske voksne uten kjent sykdom i hjerte-karsystemet eller kronisk sykdom. Pasienter ble ekskludert fra referanseområdet dersom de hadde historie med hjerte-karsykdom, anginaklager, hjertesvikt, nyresykdom, diabetes, skjelett-muskelsykdom, leddgikt, karsykdom, kronisk betennelsessykdom, historie med hjerte-karsykdom i nærmeste familie, kreft, skjoldbrusksykdom, kronisk eller systematisk sykdom, nylig sykehusinnleggelse pga. hjerte-karsykdom, slag eller et unormalt blodprøveresultat for NTproBNP eller kreatinin. Ekstremsportutøvere og gravide kvinner ble også ekskludert. Resultatet av denne studien demonstrerte at den 99. persentils øvre referansegrense er < 8,67 pg/ml. Tabell persentils øvre referansegrense for en frisk populasjon N Aldersområde (år) 99. persentil < 8,67 pg/ml _NO 13 av 16

14 Kliniske resultater utelukke hjerteiskemi Ved bruk av prøver hentet fra Basel VIII-kohorten (Biokjemiske og elektrokardiografiske signaturer i deteksjon av mosjonsindusert myokardiskemi, NCT ) ble det utført en studie for å vurdere de diagnostiske testegenskapene til -analysen når det gjelder å utelukke myokardiskemi hos pasienter med mistenkt koronararteriesykdom. 555 etterfølgende pasienter med mistenkt stressindusert myokardiskemi og uten tidligere kjent koronararteriesykdom ble testet med myokardperfusjonsavbildning med enkeltfotons datatomografi (MPI-SPECT). Klinisk vurdering av sannsynligheten for stressindusert myokardiskemi ble utført av den behandlende kardiologen på en visuell analog skala (VAS; område: 0 % 100 %) før (prestress-vas) og etter (poststress-vas) MPI-SPECT. Venøst blod ble innsamlet før stress-mpi-spect-testing, og konsentrasjoner av hjertetroponin I (ctni) ble målt i EDTA-plasma ved bruk av -analysen. Diagnostisering av stressindusert myokardiskemi ble bedømt av to sertifiserte kardiologer basert på tolkning av MPI-SPECT-bilder kombinert med informasjon hentet fra elektiv koronar angiografi når tilgjengelig. Den observerte prevalensen av myokardiskemi var 19 %. Den negative prediktive verdien (NPV), den positive prediktive verdien (PPV), sensitiviteten og spesifisiteten for flere ctni-cutoffkonsentrasjoner er oppsummert i tabell 7. Tabell 7. Hjertetroponin I-måling ved bruk av -analysen: Diagnostiske egenskaper ved forhåndsspesifiserte cutoff-konsentrasjoner Cutoff-verdier for Sgx Clarity ctni-analysen (pg/ml) Pre-VAS-kriterier Kriterieforekomst n (%) Sensitivitet (95 %-KI) Spesifisitet (95 %-KI) NPV (95 %-KI) PPV (95 %-KI) < 3,0 I/A 479 (86) 30 (22 39) 90 (87 93) 85 (81 88) 41 (30 52) < 2,0 I/A 422 (76) 44 (35 54) 81 (77 84) 86 (83 89) 35 (27 43) < 1,0 I/A 243 (44) 76 (67 83) 48 (44 53) 90 (85 93) 25 (21 30) < 0,5 I/A 68 (12) 94 (88 97) 14 (11 17) 91 (82 96) 20 (17 24) < 1,0 < 30% 105 (19) 95 (89 98) 22 (19 26) 95 (89 98) 22 (18 26) < 0,5 < 30% 45 (8) 97 (92 99) 9 (7 12) 93 (82 98) 20 (17 24) Forkortelser brukt: ctni (hjertetroponin I); pre-vas (klinisk vurdering før stresstesting kvantifisert på en visuell analog skala); KI (konfidensintervall). Området under mottakerens driftskurve (AuROC) som predikerer stressindusert myokardiskemi ble fastslått for klinisk vurdering før og etter stresstesting (VAS), prestress-ctni og kombinasjonen av log-transformert prestress-ctni og VAS (tabell 8). Tabell 8. AUROC for predikering av stressindusert myokardiskemi hos 555 pasienter ved bruk av klinisk vurdering (VAS) og ctni-målinger med Sgx Clarity ctni-analysen. AuROC 95 %-KI P-verdi a P-verdi b Prestress-VAS% 0,684 0,628 0,741-0,996 Poststress-VAS% 0,704 0,644 0,764 0,996 - ctni 0,680 0,622 0,739 0,9170 0,5235 Prestress-VAS + log-ctni 0,728 0,675 0,782 0,0160 0,2973 a P-verdier for sammenligning med kombinasjonen av prestress-vas. b P-verdier for sammenligning med poststress-vas. Forkortelser brukt: AuROC (området under mottakerens driftskurve); KI (konfidensintervall); pre-vas (klinisk vurdering før stresstesting kvantifisert på en visuell analog skala); post-vas (klinisk vurdering etter stresstesting kvantifisert på en visuell analog skala); log-ctni (log-transformert hjertetroponin I) _NO 14 av 16

15 SYMBOLFORKLARING Temperaturgrense Biologisk fare Se bruksanvisningen CE-merking Inneholder n antall hver For bruk til in vitro-diagnostikk Katalognummer Til engangsbruk skal ikke brukes flere ganger Antall tester Utløpsdato Delenummer Produsent Partinummer Bindingsreagens Deteksjonsreagens Kalibrator REFERANSER 1. World Health Organization. World health statistics 2016: monitoring health for the SDGs, sustainable development goals. Hentet fra 2. Fihn SD, et al ACCF/AHA/ACP/AATS/ PCNA/SCAI/STS guideline for the diagnosis and management of patients with stable ischemic heart disease. Circulation. 2012; 126:e Montalescot G, et al ESC guidelines on the management of stable coronary artery disease: the Task Force on the management of stable coronary artery disease of the European Society of Cardiology. European Heart Journal. 2013; 34: Ladapo JA, et al. Physician decision making and trends in the use of cardiac stress testing in the United States: an analysis of repeated cross-sectional data. Annals of Internal Medicine. 2014; 161: Amsterdam EA, et al ACC/AHA guideline for the management of patients with non ST-elevation acute coronary syndromes: a report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines. Circulation. 2014; 130:e344 e Melanson SE, et al. Earlier detection of myocardial injury in a preliminary evaluation using a new troponin I assay with improved sensitivity. American Journal of Clinical Pathology. 2007; 128: Sabatine MS, et al. Detection of acute changes in circulating troponin in the setting of transient stress test-induced myocardial ischemia using an ultrasensitive assay: results from TIMI 35. European Heart Journal. 2009; 30: Røsjø H, et al. Troponin I measured by high-sensitivity assay in patients with suspected coronary artery disease: data from the Akershus Cardiac Examination (ACE) 1 study. Clinical Chemistry. 2012; 58: Tanglay Y, et al. Incremental value of a single high-sensitivity cardiac troponin I measurement to rule-out myocardial ischemia. The American Journal of Medicine. 2015; 128(6): _NO 15 av 16

16 Produsert for: Singulex, Inc Harbor Bay Parkway Alameda, CA USA Qarad BV Flight Forum DB Eindhoven Nederland TEKNISK BRUKERSTØTTE +1 (510) (855) Singulex, Inc. Med enerett. Singulex og Sgx Clarity er varemerker eller registrerte varemerker for Singulex, Inc _NO 16 av 16