ProSpecT TM C. difficile toksin A/B mikroplateanalyse

Transkript

1 ProSpecT TM C. difficile toksin A/B mikroplateanalyse R tester 1 BRUKSOMRÅDE ProSpecT Clostridium difficile toksin A/B mikroplateanalyse er en kvalitativ enzymimmunanalyse (EIA) for påvisning av C. difficile toksin A and B i humane fecesprøver fra pasienter med mistenkt Clostridium difficile-sykdom. Testen er beregnet på bruk som hjelpemiddel i diagnostiseringen av Clostridium difficile-tilknyttet sykdom (CDAD). 2 SAMMENDRAG Clostridium difficile, en grampositiv anaerob sporedannende stavbakterie, er den vanligste identifiserbare årsaken til antibiotikarelatert diarésykdom 1,2. Sykdommen oppstår når behandling med bredspektret antibiotikum undertykker bakterier i den normale tarmfloraen, og tillater opportunistisk vekst av toksigene stammer av Clostridium difficile. Toksinene produsert av Clostridium difficile, angitt som toksin A og toksin B, har henholdsvis kraftige enterotoksiske og cytotoksiske virkninger. Sykdommens alvorlighetsgrad kan strekke seg fra ukomplisert diaré til en tilstand kjent som pseudomembranøs kolitt (PMC), som kjennetegnes av kvalme, magesmerter, vannaktig diaré, dehydrering, lett feber og gult forhøyet plakk på de kolorektale slimhinnene. Fulminant kolitt kan være fatalt hvis det ikke behandles. Nosokomiale infeksjoner med Clostridium difficile gastrointestinal sykdom og tilbakefall kan inntreffe 11. Antibiotikabehandling rettet mot Clostridium difficile kan hjelpe med å helbrede tilstanden. Diagnostisering utføres normalt ved påvisning av en eller begge Clostridium difficile-toksinene 3,12. En cellekulturbasert cytotoksinanalyse anses som referansemetode, men er relativt tidskrevende å utføre. Immunanalyser som påviser enten bare toksin A eller både toksin A og B har blitt etablerte verktøy i diagnostiseringen av Clostridium difficilesykdom 4,5. Forekomsten av ikke-toksigene varianter av Clostridium difficile støtter bruken av toksinbaserte analyser for definitiv diagnostisering. Nukleinsyreprobe-baserte analyser er brukt eksperimentelt, men kan kompliseres av at organismene kan finnes asymptomatisk hos ca. 50 % av spedbarn, % av innlagte pasienter og i 2-3 % av friske voksne 6,7. Den kliniske signifikansen av at både toksin A og B påvises er fremdeles ikke helt forstått. Selv om de fleste sykdomsfremkallende stammer produserer begge toksiner som kan fungere synergistisk, antyder dokumenterte tilfeller av sykdom forårsaket av kun toksin B-stammer av Clostridium difficile at det er klinisk viktig å analysere for både toksin B 8,9,10. 3 PRINSIPPET FOR TESTEN ProSpecT Clostridium difficile toksin A/B mikroplateanalyse er en fastfase-immunanalyse for påvisning av toksin A og toksin B i kliniske avføringsprøver ved bruk av spesifikke antistoffer. En avføringsprøve kan fortynnes i prøvefortynningsvæske eller brukes direkte hvis den forhåndsfortynnes i modifisert Cary Blair-medium. Prøver tilsettes i avbrekkbare mikroplatebrønner som antistoffer mot monoklonalt toksin A fra mus og antistoffer mot toksin B fra kanin er bundet til. Hvis toksiner er til stede, fanges de av det bundne antistoffet. Brønnene inkuberes og vaskes deretter for å fjerne ubundet materiale. Enzymkonjugatet (antistoff mot toksin A fra geit og antistoff mot toksin B fra kanin merket med pepperrotperoksidaseenzym) tilsettes. Brønnene inkuberes og vaskes deretter for å fjerne ubundet enzymkonjugat. I en positiv reaksjon binder det bundne toksinet enzymkonjugatet til brønnen. Substratet for enzymet, 3,3,5,5 -tetrametylbenzidin (TMB), tilsettes. I en positiv reaksjon, konverterer enzymet som er bundet til brønnen substratet til et farget reaksjonsprodukt. Fargeutvikling kan påvises visuelt eller spektrofotometrisk. I en negativ reaksjon er det ikke noe toksin eller et utilstrekkelig nivå av toksin til stede til å binde enzymkonjugatet, og det utvikles ikke noe farget reaksjonsprodukt. 4 SYMBOLDEFINISJONER Katalognummer In vitro-diagnostisk medisinsk utstyr Innholder tilstrekkelig til <n> tester NO Se bruksanvisningen Temperaturbegrensning (oppbevaringstemp.) Batchkode (lotnummer) Brukes innen (utløpsdato) Produsent Fortynnet prøve 5 INNHOLD I SETTET, KLARGJØRING FOR BRUK OG OPPBEVARING ProSpecT C. difficile toksin A/B mikroplateanalyse inkluderer nok reagenser til å utføre 96 tester. Se også Forholdsregler, avsnitt 6. Utløpsdatoen for hvert sett er angitt på etiketten. Oppbevar alle komponenter ved 2 til 8 C. Før bruk skal alle reagenser ha romtemperatur (20-25 C) og blandes forsiktig. Sett de ubrukte reagensene i kjøleskapet etter bruk. Alle reagenser unntatt vaskebufferen leveres blandet til bruksstyrke. Reagenser kan dispenseres rett fra dråpeflaskene eller helles ut for bruk med flerkanalpipetter. Hvis det helles for mye reagens, skal det overflødige kastes. Overflødig reagens må ikke helles tilbake i flasken. Bruksanvisning Overføringspipetter Holder og deksel for mikroplaterad Prosedyrekort Mikroplate* (8 brønner / rad) 12 rader belagt med antistoff mot toksin A fra mus og antistoff mot toksin B fra kanin. Ubrukte mikroplaterader skal oppbevares i folieposen som inneholder tørkemiddel for å stenge ute fukt. Enzymkonjugat* Én dråpeflaske som inneholder 25 ml pepperrotperoksidasemerket antistoff mot toksin A fra geit og antistoff mot toksin B fra kanin, samt antimikrobielle stoffer. Positiv kontroll Én dråpeflaske som inneholder 4 ml C. difficile toksin A og toksin B kultursupernatant, samt antimikrobielle stoffer. Negativ kontroll Én dråpeflaske som inneholder 4 ml av en bufret løsning med rødt fargestoff og 0,1 % natriumazid Prøvefortynningsvæske Én flaske som inneholder 120 ml av en bufret løsning, rødt fargestoff og 0,1 % natriumazid Vaskebuffer Én flaske som inneholder 120 ml (x10) konsentrert bufret løsning med antimikrobielle stoffer. Fortynn (10x) vaskebufferkonsentrat til (x1) ved å tilsette 1 del konsentrat til 9 deler destillert eller deionisert vann. Fortynnet vaskebuffer er stabil i 1 måned når den oppbevares ved 2-8 C. Fargesubstrat Én dråpeflaske som inneholder 25 ml 3,3,5,5 - tetrametylbenzidin (TMB) i buffer. Fargesubstratet skal oppbevares i og brukes fra den lysbeskyttede flasken som det leveres i. Hvis en alikvot av en eller annen grunn fjernes fra originalflasken, skal ikke det ubrukte fargesubstratet returneres til originalflasken. 1

2 Stoppløsning Én dråpeflaske som inneholder 12 ml 0,46 mol/l svovelsyre. *Merk: Bytt ikke ut reagenser med reagenser med andre lotnumre. 6 FORHOLDSREGLER Reagensene er kun til in vitro-diagnostisk bruk. Kun til yrkesbruk. Vennligst se databladet for materialsikkerhet (MSDS) og produktmerkingen for informasjon om potensielt farlige komponenter. HELSE- OG SIKKERHETSINFORMASJON 6.1 Reagenser tilberedes fra biologisk materiale og skal håndteres som potensielt smittefarlig materiale. Kasseres ved bruk av egnede prosedyrer for biologisk farlig avfall. 6.2 Ikke pipetter med munnen. Bruk engangshansker og vernebriller når prøvene håndteres og analysen utføres. Vask hendene grundig når du er ferdig. 6.3 Prøver kan inneholde potensielt smittefarlige stoffer og skal håndteres ved biosikkerhetsnivå 2 som anbefalt i CDC/NIHhåndboken, Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, 5. utgave. 6.4 Vaskebuffer inneholder potensielt hudsensibiliserende stoff (< 1 % v/v). Unngå hudkontakt. Bruk vinyl- eller nitrilhansker til engangsbruk. 6.5 Kasser brukt vaskebuffer i egnede beholdere for biologisk farlig avfall. 6.6 Prøvefortynningsvæsken og den negative kontrollen i settet inneholder 0,1 % natriumazid, som klassifiseres i henhold til gjeldende EØF-direktiver som skadelig (Xn). Den aktuelle risikofrasen (R) er som følger. Xn R22 Skadelig ved svelging Vær klar over at azider kan reagere med kopper og bly i enkelte rørsystemer og danne eksplosive salter. Mengdene som brukes i dette settet er små, men når materiale som inneholder azid avhendes, skal det likevel skylles vekk med relativt store mengder vann. ANALYTISKE FORHOLDSREGLER 6.7 Les og følg alle instruksjonene i denne bruksanvisningen. 6.8 Reagensene leveres ved de nødvendige bruksstyrkene, med unntak av vaskebufferkonsentratet. Ikke fortynn reagenser, bortsett fra når det er anvist. 6.9 Ikke bruk reagensene etter utløpsdatoene. Utløpsdatoene er trykt på hver reagensetikett. Dersom reagenser brukes etter utløpsdatoen kan det påvirke nøyaktigheten av resultatene Følgende vanlige reagenser kan brukes på tvers av ProSpecTproduktutvalget: Vaskebuffer, fargesubstrat og stoppløsning Mikrobiell kontaminasjon av reagenser kan redusere nøyaktigheten av analysen. Unngå mikrobiell kontaminasjon av reagensene ved å bruke sterile engangspipetter når alikvoter fjernes fra reagensflasker La alle reagenser og prøver nå romtemperatur (20-25 C) før bruk Mikroplaterader må oppbevares i de forseglbare folieposene med tørkemiddel, for å beskytte mikroplatebrønnene mot fukt Avføringsprøver må blandes grundig før prøvebehandling for å sørge for nøyaktig representasjon av prøven. IKKE KONSENTRER PRØVER FØR TESTING Fargesubstrat er følsomt overfor lyseksponering. Hvis reagensen eksponeres for lys og utvikler farge, må reagensen kasseres Personer som er fargeblinde eller har nedsatt syn vil kanskje ikke kunne lese testen og må bruke spektrofotometriske avlesninger for å tolke resultater Tilsett reagenser i testbrønnene i samme rekkefølge gjennom prosedyren. Kontaminasjon unngås ved å ikke berøre væsken i brønnene med flaskemunningene Ta tiden på hver inkubasjon nøyaktig. Start tidtakingen når reagensen er tilsatt i den siste brønnen på hver mikroplate som skal testes. Nøyaktig tidtaking sikres ved å behandle maksimalt tre plater med 96 brønner på én gang. Avvik fra den fastsatte prosedyren kan endre analysens utførelse Det er viktig at dråpeflaskene holdes vertikalt og at dråpen dannes ved flaskemunningen. Hvis flaskemunningen blir våt, vil en dråpe med feil volum dannes rundt enden i stedet for ved spissen. Hvis dette skjer, må munningen tørkes før du fortsetter. 7 INNSAMLING AV FECESPRØVER Standard prosedyrer for innsamling og håndtering av avføringsprøver for hvert laboratorium er egnet. FERSK Ubehandlede prøver skal oppbevares ved 2-8 C og testes innen 48 timer. Ferske prøver fortynnet i prøvefortynningsvæsken som leveres med settet kan oppbevares ved romtemperatur i opptil 8 timer eller nedkjølt i opptil 72 timer før testing. NEDFRYST Hvis ferske prøver ikke kan testes innen 48 timer, skal de fryses ned ved -20 C eller kaldere og testes innen 2 måneder. Unngå gjentatte fryse-/tinesykluser som kan føre til at toksinene brytes ned. CARY BLAIR Prøver konservert i modifisert Cary Blair-transportmedium med indikator (eller tilsvarende) kan oppbevares ved romtemperatur (20-25 C) i opptil 5 dager før testing. Avføringsprøver som har blitt konsentrert eller behandlet med 10 % formalin, SAF eller PVA-fiksativer, er ikke egnet til bruk. 8 TESTPROSEDYRE NØDVENDIG MATERIALE SOM FØLGER MED Se Innhold i settet, avsnitt 5 NØDVENDIG MATERIALE SOM IKKE MEDFØLGER Beholder for innsamling av avføringsprøver Prøverør til engangsbruk av plast eller glass Tidtaker som måler minutter Vaskeflaske for vaskebuffer Destillert eller deionisert vann VALGFRITT MATERIALE SOM IKKE FØLGER MED Mikroplateleser som kan lese 450/620 eller 620 nm Applikatorpinner med bomulls- eller rayonspiss Mikropipette til levering av volum opptil 200 µl Vorteksblander med plateadapter eller rister Modifisert Cary Blair-transportmedium PROSEDYRE 8.1 Prøveklargjøring: Klargjør prøvene med en av de tre klargjøringsmetodene nedenfor. A Dannede avføringsprøver 1. Merk ett rør for hver prøve. 2. Tilsett 0,8 ml prøvefortynningsvæske (SD) i hvert rør. 3. Tilsett 0,2 g prøve (på størrelse med en liten ert) prøve med en applikatorpinne av tre. 4. Rør prøven kraftig inn i fortynningsvæsken. 5. Sett en overføringspipette i røret og bland ved å trekke opp og ned én gang. 6. La overføringspipettene bli værende i rørene. 7. FORTSETT TIL TRINN 8.2 B Flytende og halvfast avføring 1. Merk ett rør for hver prøve. 2. Tilsett 0,8 ml fortynningsvæske i hvert rør. 3. Bland prøver ved å riste prøvetakingsbeholderne. 4. Trekk opp 0,2 ml (andre merke fra pipettespissen) ved bruk av overføringspipetter. 5. Press ut prøven inn i fortynningsvæsken. 6. Bland ved å trekke opp og ned én gang. 7. La overføringspipettene bli værende i rørene. 8. FORTSETT TIL TRINN 8.2

3 C Cary-Blair-avføringsprøver 1. Vend transportflasken flere ganger for å blande prøven grundig. 2. Det er ikke nødvendig å fortynne prøven ytterligere. 3. FORTSETT TIL TRINN Åpne folieposen, fjern det ønskede antall mikroplaterader og plasser i en holder for mikroplaterader. Bruk én brønn for den negative kontrollen og én brønn for den positive kontrollen. Hvis du bruker mindre enn 8 brønner, bryter du løs ønsket antall brønner fra raden og legger ubrukte brønner tilbake i folieposen med tørkemiddel. FORSEGLE POSEN GODT FOR Å STENGE UTE FUKT OG SETT DEN TILBAKE I KJØLESKAPET. 8.3 Tilsett 4 dråper (200 µl) negativ kontroll i brønn A1. Tilsett 4 dråper (200 µl) positiv kontroll i brønn B Tilsett 0,2 ml (andre merke fra pipettespissen) av hver prøve i en brønn ved bruk av overføringspipetter. Merk: Plasser overføringspipettens åpning rett innenfor brønnene for å unngå sprut i tilstøtende brønner. 8.5 Dekk mikroplaten og inkuber ved romtemperatur (20-25 C) i 60 minutter. Start tidtakingen når den siste prøven er tilsatt. 8.6 Rist ut eller aspirer innholdet i brønnene. Vask ved å fylle hver brønn fullstendig med fortynnet vaskebuffer (~ µl/brønn). Rist ut eller aspirer all væske fra brønnene etter hver vask. Vask 3 ganger totalt. Etter siste vask skal du fjerne innholdet og dunke platen mot rene papirhåndklær eller aspirere. Fjern så mye vaskebuffer som mulig, men ikke la brønnene tørke ut på noe tidspunkt. 8.7 Tilsett 4 dråper (200 µl) enzymkonjugat i hver brønn. 8.8 Dekk mikroplaten og inkuber ved romtemperatur (20-25 C) i 30 minutter. 8.9 Rist ut eller aspirer og vask hver brønn 5 ganger som i trinn Tilsett 4 dråper (200 µl) fargesubstrat i hver brønn Dekk mikroplaten og inkuber ved romtemperatur (20-25 C) i 10 minutter Tilsett 1 dråpe (50 µl) stoppløsning i hver brønn. Bank eller vend brønnene til gulfargen er jevnt fordelt. Les av reaksjonene innen 10 minutter etter at stoppløsningen er tilsatt. Les av visuelt eller spektrofotometrisk ved 450/620 til 650 nm (dobbel bølgelengde). 9 KVALITETSKONTROLL Positive og negative kontroller må inkluderes hver gang testen utføres. De positive og negative kontrollene fungerer som både reagens- og prosedyrekontroller. Hensikten med kontrollene er å kontrollere og avsløre eventuelle vesentlige feil i reagensene. Den positive kontrollen sikrer ikke presisjon ved analysens cut-off. Den optiske tettheten (O.T.) for den negative kontrollen skal være < 0,080 ved 450/620 til 650 nm, og skal være fargeløs (< 1+ intensitet) ved visuell avlesning. Hvis gulfarge tilsvarende 1+ eller høyere på prosedyrekortet er til stede i den negative kontrollen, skal testen gjentas med særlig oppmerksomhet på vaskeprosedyren. O.T. for den positive kontrollen skal være 0,500 ved 450/620 til 650 nm, og skal være lik eller høyere enn 2+ reaksjon når den leses visuelt. Hvis gulfargen i den positive kontrollen er mindre enn 2+ på prosedyrekortet, må du oppsøke teknisk støtte. 10 RESULTATER Se det vedlagte prosedyrekortet for fargetolkninger. VISUELT 10.1 Les testresultatene ved å sammenligne med reaksjonsfargene på prosedyrekortet. Positiv: gulfarge med minst 1+ intensitet Negativ: fargeløs 10.2 Tolkning av visuelle resultater: Positiv: Hvis en gulfarge på minst 1+ intensitet utvikles i prøvebrønnen, inneholder prøven toksin A eller B eller begge, og testen er positiv. Merk: Tester med svak gulfarge (mindre enn 1+) skal gjentas. Negativ: En fargeløs reaksjon er et negativt testresultat og angir at ingen toksin A eller B eller et upåviselig nivå av toksin er til stede i den testede prøven. SPEKTROFOTOMETRISK 10.3 Les resultater ved dobbel (450/620 til 650 nm) bølgelengde Les av den optiske tettheten (O.T.) for den negative kontrollen. O.T. skal være < 0,080 for 450/620 til 650 nm. Hvis O.T. er høyere enn 0,080, er resultatene ugyldige, og testen må gjentas med særlig oppmerksomhet på vaskeprosedyren O.T. for den positive kontrollen skal være 0,500 ved 450/620 til 650 nm Les testresultatene: Positiv: O.T. for 0,080 Negativ: O.T. for < 0, Tolkning av spektrofotometriske resultater: Positiv: Positiv for C. difficile toksin A og/eller B. En positiv test betyr ikke at det finnes sykdom. Resultater skal brukes i sammenheng med andre kliniske funn for å bestemme en diagnose. Negativ: Negativ for C. difficile toksin A og/eller B. Infeksjon kan ikke utelukkes siden toksinet i prøven kan være under testens påvisningsgrense. *Merk: Brønner som er visuelt klare, men gir en O.T.-avlesning som ikke stemmer overens med den visuelle tolkningen, skal anses som avvikende avlesninger og inspiseres for bobler, små partikler i brønnene eller en ugjennomsiktig hinne på bunnen av brønnen. Hinnen fjernes ved å tørke undersiden av brønnene og lese av O.T. på nytt. Hvis uoverensstemmelsen mellom de visuelle og O.T.-avlesningene vedvarer, må testen gjentas. 11 UTFØRELSESGRENSER Validiteten for resultatene med ProSpecT Cryptosporidium difficile toksin A/B mikroplateanalyse avhenger av at kontrollreaksjonen fungerer som ventet. Se Kvalitetskontroll, avsnitt 9. En positiv test betyr ikke at det finnes sykdom. Testen påviser forekomst av toksin A og/eller B i fecesprøver. Resultater skal brukes i sammenheng med andre kliniske funn for å bestemme en diagnose. Et negativt testresultat utelukker ikke muligheten av det finnes C. difficile toksin A eller toksin B, og kan inntreffe når toksinnivået i prøven er under testens påvisningsnivå. Toksinnivået er ikke påvist å ha sammenheng med verken forekomst eller alvorlighetsgrad av sykdom. Som med alle IN VITRO-diagnostiske tester, skal resultater tolkes av klinikeren i sammenheng med kliniske funn og/eller andre laboratorieresultater. Riktig prøvetaking og -behandling er avgjørende for optimal utførelse av analysen. Optimale testresultater oppnås fra prøver som testes innen 48 timer etter innsamling. Se Innsamling av fecesprøver, avsnitt 7. Utførelsesegenskapene for denne testen er ikke vurdert i barnepopulasjoner. 12 FORVENTEDE VERDIER C. difficile-kolitt oppstår mye oftere hos pasienter som er innlagt på sykehus, og er den fjerde vanligste nosokomiale sykdommen rapportert til Centres for Disease Control and Prevention. C. difficile er ansvarlig for % av antibiotikarelatert diaré og mer enn 90 % av pseudomembranøs kolitt. Forekomsten av nosokomial CDAD kan være forskjellig i ulike sykehuspopulasjoner, og påvirkes av forekomsten av disposisjonsfaktorer, som for eksempel høyere pasientalder, type og varighet av antimikrobiell behandling, alvorlighetsgrad av underliggende sykdom(mer) og sykehusoppholdets varighet. C. difficile finnes i 3-5 % av friske voksne, og opptil 50 % av spedbarn og unge voksne er asymptomatiske bærere av både bakterien og dens toksiner UTFØRELSESEGENSKAPER SAMMENLIGNET MED VEVSKULTUR- CYTOTOKSISITETANALYSE Testing ble gjennomført ved tre kliniske laboratorier i Nord-Amerika. For alle vurderte prøver var den samlede sensitiviteten for ProSpecT Clostridium difficile toksin A/B mikroplateanalyse ved sammenligning med vevskultur-cytotoksisitetsanalyse (CTA) 90,3 % (149/165), og den samlede spesifisiteten ved sammenligning med CTA var 96,2 % (576/599). CTA-resultater SAMLET + - ProSpecT EIA-resultater Total ,3 % Sensitivitet (149/165); 95 % CI = 84,7 % - 94,4 % 96,2 % Spesifisitet (576/599); 95 % CI = 94,3 % - 97,5 %

4 VISUELL TOLKNING AV TEST Visuelt avleste data ble samlet inn ved to av de tre laboratoriene for totalt 586 prøver. Den samlede sensitiviteten ved sammenligning med CTA var 85,0 %, og den samlede spesifisiteten var 95,5 %. De visuelt avleste resultatene var i 99,0 % (580/586) overensstemmelse med de spektrofotometriske resultatene fra hver prøve. CTA-resultater + - ProSpecT Visuelle EIA-resultater Total ,0 % Sensitivitet (85/100); 95 % CI = 76,5 % - 91,4 % 95,5 % Spesifisitet (464/486); 95 % CI = 93,2 % - 97,1 % UTFØRELSE SAMMENLIGNET MED PREDIKATENHET ProSpecT Clostridium difficile toksin A/B mikroplateanalyse ble sammenlignet med to kommersielt tilgjengelige enzymimmunanalyser (predikatenheter). Utførelsen til ProSpecT Clostridium difficile toksin A/ B mikroplateanalyse og predikatenhetene ved sammenligning med en CTA (med de samme prøvene) er som følger: Utførelse kontra CTA EIA Sensitivitet Spesifisitet # % # % ProSpecT 33/40 82,5 263/268 98,1 Predikat 1 33/40 82,5 260/268 97,0 ProSpecT 115/124 92,7 302/320 94,4 Predikat 2 98/124 79,0 309/320 96,6 ANALYTISK SENSITIVITET ProSpecT Clostridium difficile toksin A/B mikroplateanalyse påviser toksin A ved nivåer på 0,20 ng/ml og toksin B ved nivåer på 0,61 ng/ml. REPRODUSERBARHET Testing av reproduserbarhet ble gjennomført ved tre steder på tre separate dager med fire blinde prøver. Hvert sted testet åtte gjentatte brønner for hver prøve på hver testdag (n=288). Prøver inkluderte én negativ prøve og tre positive prøver med forskjellige reaktivitetsnivåer. Gjennomsnittlig variasjonskoeffisient (CV) mellom analyser eller mellom serier for en prøve i midtre område var 18,9 %. Gjennomsnittlig CV innen analyse eller innen serie for et prøve i midtre område var 7,7 %. KRYSSREAKTIVITET Førti mikroorganismer ble vurdert med ProSpecT Clostridium difficile toksin A/B mikroplateanalyse. Bakterie- og gjærisolater ble testet ved 10 8 kolonidannende enheter per ml. Virusisolater ble testet ved konsentrasjoner på 10 4 TCID 50 /ml (Tissue Culture Infectious Dose per millimeter). Ingen kryssreaktivitet ble observert. Det var ingen kryssreaktivitet mot den testede stammen av Clostridium sordellii (ATCC 9714). Publisert litteratur angir imidlertid at enkelte stammer av C. sordellii kan produsere toksiner som kan være kryssreaktive med antistoffer mot C. difficile toksin A og B. Følgende organismer ble testet i ProSpecT Clostridium difficile toksin A/B mikroplateanalyse. Adenovirus Type 40 Enterobacter cloacae Adenovirus Type 41 Enterococcus faecalis Aeromonas hydrophilia Escherichia coli Bacillus cereus Klebsiella pneumoniae Bacillus subtilis Peptostreptococcus anaerobius Bacteroides fragilis Porphyromonas asaccharolytica Campylobacter coli Proteus vulgaris Campylobacter jejuni Pseudomonas aeruginosa Candida albicans Rotavirus Clostridium beijerinckii Salmonella choleraesuis Clostridium difficile (ikke-toksigen) Serratia liquefaciens Clostridium haemolyticum Shigella dysenteriae Clostridium histolyticum Shigella flexneri Clostridium novyi (toksin A) Shigella sonnei Clostridium perfringens (type A) Staphylococcus aureus Clostridium septicum Staphylococcus aureus (Cowan) Clostridium sordellii Staphylococcus epidermidis Clostridium sporogenes Vibrio cholerae Clostridium tetani Vibrio parahaemolyticus Enterobacter aerogenes Yersinia enterocolitica INTERFERERENDE STOFFER Følgende stoffer ble testet med ProSpecT Clostridium difficile toksin A/ B mikroplateanalyse: Vancomycin (12,5 mg/ml), metronidazol (12,5 mg/ml), blod, slim, fecesfett og følgende reseptfri produkter mot diaré: Pepto-Bismol, Imodium A-D, Kaopectate (virkestoffer: henholdsvis vismutsubsalicylat, loperamid HCl og attapulgitt). Det ble ikke observert interferens med positive eller negative prøver. 14 BIBLIOGRAFI 1. Bartlett, J.G., N. Engl. J. Med. 346(5): Kelly, C.P. and J.T. LaMont, Ann. Rev. Med. 49: Wilkins, T. and D.M. Lyerly, J. Clin. Microbiol. 41: O Connor, D., P. Hynes, M. Cormican, E. Collins, G. Corbette-Feeney and M. Cassidy, J. Clin. Microbiol. 39: Turgeon, D.K., T.J. Novicki, J. Quick, L. Carlson, P. Miller, B. Ulness, A. Cent, R. Ashley, A. Larson, M. Coyle, A.P. Limaye, B.T. Cookson and T.R. Fritsche, J. Clin. Microbiol. 41: Gumerlock, P.H., Y.J. Tang, J.B. Weiss and J. Silva Jr., J. Clin. Microbiol. 31: Belanger, S.D., M. Boissinot, N. Clairoux, F.J. Picard and M.G. Bergeron, J. Clin. Microbiol. 41: Limaye, A.P., D.K. Turgeon, B.T. Cookson and T.R. Fritsche, J. Clin. Microbiol. 38: Alfa, M.J., A. Kabani, D. Lyerly, S. Moncrief, L.M. Neville, A. Al-Barrak, G.K.H. Harding, B. Dyck, K. Olekson and J.M. Embil, J. Clin. Microbiol. 38: Barbut, F., V. Lalande, B. Burghoffer, H.V. Thien, E. Grimprel and J. Petit, J. Clin. Microbiol. 40: Lyerly, D.M., L.M. Neville, D.T. Evans, J. Fill, S. Allen, W. Greene, R. Sautter, P. Hnatuck, D.J. Torpey, and R. Schwalbe J. Clin. Microbiol. 36: Nicholson, G., and M. Jones Br. J. Biomed. Sci. 56: Mandell, G.L., J.E. Bennett, and R. Dolin Mandell, Douglas, and Bennett s Principles and Practices of Infectious Diseases. 5th ed. Churchill Livingstone. New York, NY. ProSpecT TM er et registrert varemerke ATCC er et registrert varemerke som tilhører American Type Culture Collection Pepto-Bismol, Imodium og Kaopectate er registrerte varemerker som tilhører henholdsvis Procter & Gamble, McNeil Consumer & Specialty Pharmaceuticals og Pharmacia & Upjohn Company Oxoid Ltd Wade Road Basingstoke Hants, RG24 8PW Storbritannia Kontakt din lokale forhandler for teknisk støtte. Bruksanvisning X7593, revidert 30. oktober, 2008 Trykt i Storbritannia 4

5 5