TEST 099 NYHETSAVIS NR. 1/2014 April 2014 INNHOLD: Informasjon Sentrifugering av prøver Nødvendige opplysninger ved rekvirering av genetiske analyser Tyreoideahormonresistens (THRB) mutasjonsundersøkelse Klinikk Diskordans i tyreoideafunksjonsprøver Biologisk variasjon av serumnivået av CTX-I Analysenytt Ny metode for bestemmelse av alkalisk fosfatase (benspesifikk) Skifte av leverandør til kit for testosteron bestemmelse Ny metode for bestemmelse av aldosteron Osteokalsin (Intakt + N-terminal mid) ny metode Androstendion midlertidig overgang til ikke akkreditert metode Oppdatert oversikt over akkrediterte analyser foreligger på: http://www.hormonlaboratoriet.no Hormonlaboratoriet Klinikk for diagnostikk og intervensjon MBK Oslo universitetssykehus, Aker 1
INFORMASJON Sentrifugering av prøver Det er viktig for kvaliteten på prøvematerialet at prøveglass som skal sentrifugeres behandles korrekt. Vend glassene slik det er anbefalt av glassleverandør og sentrifuger ved korrekt hastighet for aktuell glasstype. Feilbehandling kan medføre at gelen bli utett og/eller skjev. Dette kan igjen gå utover kvaliteten på prøvematerialet ved forsendelse. Skjev gel kan også skape problemer i forbindelse med at utstyr på instrumenter kommer ned i gelen. Vi anbefaler derfor at prøven avpipetteres dersom det visuelt oppdages ujevn gel eller utett gel. Nødvendige opplysninger ved rekvirering av genetiske analyser Hormonlaboratoriet utfører en rekke genetiske analyser. For fullstendig oversikt, se under analyser på vår hjemmeside, eller Norsk portal for medisinsk genetikk www.genetikkportalen.no. I forkant av rekvirering kan legen kontakte oss for råd om en aktuell genanalyse. Dersom rekvirenten ønsker flere gentester, må det følge med opplysninger om ønsket prioritering, da kun én genanalyse utføres om gangen. Det er da ønskelig at rekvirenten tar kontakt på forhånd, slik at vi kan avtale den praktiske håndteringen av de ønskede analysene. Ved rekvirering av genetiske prøver kreves det at rekvirerende lege oppgis med navn og kontaktinformasjon på rekvisisjonen. Det må også følge med kliniske opplysninger og nødvendige prøvesvar på pasienten, slik at rekvisisjonen og analysesvaret kan vurderes best mulig. THRB-mutasjonsundersøkelse Undersøkelse med tanke på tyreoideahormonresistens (THRB) er indisert ved normal TSH og TBG og forhøyet FT 4, T 4, FT 3 og T 3. Insidens 1/40000. Da immunologiske metoder kan gi falskt forhøyde svar på tyreoideafunksjonsprøver, ønsker vi serum tilsendt for konfirmerende testing. Til genanalysen trenges 3 ml EDTA-fullblod fra pasienten.. KLINIKK Diskordans i tyreoideafunksjonsprøver Ved primær tyreoideasykdom er det negativ korrelasjon mellom TSH og FT 4. Ved uventede blodprøvesvar kan en ikke straks konkludere med sjeldne tilstander som sykdom i hypofyse eller hypotalamus. En må først overveie om svaret kan bero på laboratoriefeil eller analysetekniske problemer. Antistoffer hos pasienten kan interferere med analysemetoden og gi falskt for høyt eller for lavt svar. Endringer i mengden av bindeproteiner for tyroksin påviker konsentrasjonen av fritt og bundet tyroksin. HCG i første del av svangerskapet, sult og alvorlig sykdom påvirker tyreoideafunksjonen. Tabellen under viser hvordan slik diskordans kan påvirke analysesvaret ved utredning av tyreoidea relaterte sykdommer. 2
Diskordans i tyreoideafunksjonsprøver Analytter Tilstand TSH FT 4 TT 4 FT 3 TT 3 rt 3 TBG Revmatoid faktor ( ) N N N N N Tyreoideahormonantistoff N ( )N ( )N Heterofile antistoffer ( )N ( )N EDTA/ Citrat-blod N N Lipemisk serum N N N Hyper -TBG-emi N Hypo - TBG-emi N *) FDH - mutasjon i albumin N ( ) N N N( ) **) TTR-avik- mutasjon i prealbumin N ( ) N N N Lav næringstilgang N N N Hyperemesis gravidarum N N Tyreoideahormon - resistens THRB N Prøve tatt rett etter Levaxin-inntak N N Liotyronin- T 3 - behandling N N N N *) Familiær dysalbuminetisk hyperthyroksinemi N -normal eller upåvirket høy lav **)Transthyretin- mutasjon (prealbumin) N - Delfia metode ( ) ECL - metode fra Roche 3
Biologisk variasjon av serumnivået av CTX-I Ved å ta hensyn til biologisk variasjon kan man bruke resultatene i diagnostikk og behandling på en sikrere måte. Kollagen I er en viktig bestanddel av bein. Hastigheten i beinnedbygning kan bestemmes ved å måle serumkonsentrasjonen av bein formasjonsmarkøren prokollagen type I N propeptid (PINP) og/eller bein resorpsjonsmarkøren karboksyterminalt telopetid fra type I kollagen (CTX-I). Forlengelsespeptidet PINP som dannes i den N-terminale enden av prokollagen, frigjøres enzymatisk under dannelsen av bein matriks til blodet. CTX-I frigjøres på lignende vis under nedbrytning av bein matriks collagen fra den C-terminale av Kollagen type I. Se figuren under. Bestemmelse av CTX-I er spesifikk ved at peptidet inneholder en spesifikk epitop som inkluderer beta isomer av asparaginsyre. To peptidkjeder må være koblet sammen med pyridinium. Se figuren nedfor: 4
Litt generelt om bruk av beinomsetningsmarkører (BTM). Ved Hormonlaboratoriet tilbyr vi pr. i dag måling av CTX-I (beinresorpsjonsmarkør) samt PINP, beinspesifikk alkalisk fosfatase (B-ALP) og osteokalsin (beinformasjonsmarkører). Alle BTM analysene utføres i serumprøver. Biokjemiske BTM gjenspeiler metabolsk aktivitet i bein. Det er bl.a. vist at BTM kan predikere frakturrisiko hos postmenopausale kvinner og at størrelsen på fallet i BTM predikerer grad av reduksjon i frakturrisiko ved bruk av antiresorptiv behandling, begge uavhengig av beintetthetsmåling (BMD). Som kjent benyttes DXA som hjelpemiddel når man vurderer BMD ved oppstart av beinspesifikk behandling ved osteoporose, men i grensetilfeller brukes BTM aktivt i vurderingen. Ved sykdommer som kan gi økt beinomsetningshastighet, som hypertyreose og primær hyperparatyreose, kan BTM gi et indirekte mål på om dette er tilfelle hos den enkelte pasient. Nytten av dette bruksområdet er dårligere dokumentert. I disse situasjonene anbefaler vi måling av CTX-I og PINP. Mest brukt er markørene i monitorering av behandling / vurdering av etterlevelse av osteoporosebehandling. Vi anbefaler bruk av CTX-I til monitorering av antiresorptiv behandling (bisfosfanater, østrogener mm.) og PINP til monitorering av anabol behandling som f. eks. paratyroideahormon (PTH). B-ALP bør bl.a benyttes ved mistanke og oppfølging av Mb. Paget og osteomalaci. Osteokalsin brukes i andre sjeldne tilfeller. 5
CTX-I og biologisk variasjon Ikke kontrollerbare faktorer: CTX-I øker med alderen, ved menopause og ligger noe høyere hos eldre kvinner enn menn. Dette er det tatt høyde for i referanseområdet. Ved graviditet stiger verdiene fra tidlig i 2. trimester, og verdiene ved fødsel ligger de 2-3 ganger høyere enn utgangsverdien. Verdiene normaliseres ila 6-12 mnd. avhengig av laktasjon og menstruasjonsstatus. Verdiene ligger høyere etter frakturer avhengig av fraktursted og alder. Kontrollerbare faktorer: Det er viktig å være klar over at CTX-I har betydelig døgnvariasjon med høyeste verdi på etternatten og med gradvis fall utover dagen mot laveste verdi på ettermiddagen. Høyeste verdi kan være mer enn dobbelt så høy som laveste verdi. Vi vet også at verdien faller etter måltider (ca 20 % etter frokost). Om man har samme døgnvariasjon ved metabolske beinsykdommer med økt beinomsetningshastighet (f. eks. primær hyperparatyreose og hypertyreose) er ikke kjent. Når det gjelder monitorering med CTX-I hos pasienter som bruker antiresorptiv behandling, vil døgnvariasjonen være mye mindre. Pga redusert utskillelse stiger CTX-I ved nyresvikt og er derfor ikke egnet til vurdering av beinsykdom i slike tilfeller. Benspesifikk ALP bestemmelse bør da benyttes. Tidspunkt for prøvetaking? National Osteoporocis Foundation sier i sine guidelines fra 2013 at det beste er å benytte fastende morgenprøve. Vi kan ikke gå ut med noen generell anbefaling om bruk av fastende prøve da vi benytter og har bekreftet produsentens referanseområde som ikke er basert på fastende prøver. Hormonlaboratoriet anbefaler at prøven tas tidlig på dagen (kl 08.00 10.00). Ved oppfølging av en pasient bør man i størst mulig grad benytte samme prøvetidspunkt ved gjentatte prøvetakinger. ANALYSENYTT Ny metode for bestemmelse av alkalisk fosfatase (benspesifikk) ble tatt i bruk 11/3-2014 Den nye metoden er en kompetitiv kjemiluminescens assay (CLIA) som utføres på Liaison XL analysemaskin fra DiaSorin, Saluggia, Italia. Den nye metode bestemmer konsentrasjonen av benspesifikk alkalisk fosfatase i motsetning til den tidligere metoden som målte enzymaktiviteten av alkalisk fosfatase Klinisk relevans: Benspesifikk alkalisk fosfatase er et godt mål på beinnydannelse og osteoblastaktivitet. Målingen er uavhengig av pasientens nyrefunksjon. Prøvemateriale: 0,5 ml serum. 6
Regresjon og korrelasjon mot tidligere metode: Y (ny) = 0,38X (gammel) 2,2, r = 0,95 Total assay variasjon: CV% < 7 Funksjonell sensitivitet: 1,5 μg/l Antiserum kryssreaksjon: Ingen kjente kryssreaksjoner Nytt referanseområde: Voksne: 5,5 24,6 μg/l Skifte av leverandør til testosteron bestemmelse medio april 2014 Orion Diagnostica, Espoo, Finland har stoppet sin produksjon av testosteron RIA og har solgt reagensene til CisBio, Codolet, Frankrike. Reagensene fra CisBio gir identiske svar sammenlignet med reagensene fra Orion. Regresjon og korrelasjon mot tidligere metode:y(cisbio) = 0,22 + 0,98X(Orion), r = 1,00. Ny metode for bestemmelse av aldosteron i serum, EDTA-plasma og urin tatt i bruk 7. februar 2014 Den nye metoden er en kompetitiv kjemiluminescens assay (CLIA) som utføres på Liaison XL analysemaskin fra DiaSorin, Saluggia, Italia. Klinisk relevans: Prøvemateriale: Utredning av primær og sekundær aldosteronisme 0,5 ml serum eller 10 ml døgnurin Regresjon og korrelasjon mot tidligere metode: Serum: Y (ny) = 0.88X (gammel) + 65, r = 0,92 Urin: Y (ny) = 0.88X (gammel) + 0,07, r = 95 Interassay variasjon: Serum: 163 pmol/l: CV% = 11 Urin : 205 pmol/l: CV% = 10 Funksjonell sensitivitet: Serum: 53 pmol/l Urin: 78 pmol/l Antiserum kryssreaksjon: Ingen kjente kryssreaksjoner Referanseområde: Voksne (>21 år) oppegående: 61 1086 pmol/l Voksne (>21 år) sengeliggende: <653 pmol/l Urin: 3 78 nmol/l Ny metode for bestemmelse av osteokalsin i serum, tatt i bruk mars 2014 Den nye metoden er en ikke kompetitiv kjemiluminescens assay (CLIA) som utføres på Liaison XL analysemaskin fra DiaSorin, Saluggia, Italia. Den måler summen av intakt og N-terminal mid osteokalsin (1-43) som er det viktigste nedbrytningsproduktet. Dermed er analysen mindre påvirket av nedbrytning. Den tidligere metoden målte kun intakt osteokalsin. 7
Klinisk relevans: Serumnivået reflekterer osteoblastfunksjonen og beinomsetningshastigheten. Prøvemateriale: 0,5 ml frosset serum. Regresjon og korrelasjon mot tidligere metode (Invitrogen): Y (ny) = 1,26X (gammel) + 0,99, r = 0,97 Interassay variasjon: 1,18 nmol/l: CV% = 5 7,16 nmol/l: CV% = 4 Funksjonell sensitivitet: 0,5 nmol/l Antiserum kryssreaksjon: Osteokalsin 1-43 fragment: 100 % Referanseområde: Menn: 0,8 11,2 nmol/l Kvinner - fertil alder: 1,0-7,2 nmol/l Kvinner menopausale: 0,9-10,1 nmol/l Midlertidig overgang til ikke akkreditert metode for androstendion fra 23/12 2013. På grunn av reagensproblemer overføres androstendion i serum fra Immulite til RIA med ekstraksjon og kromatografi. Dette medfører midlertidig avakkreditering og mindre endringer i referanseområdene. Prøvemateriale: 1 ml serum. Regresjon og korrelasjon mot tidligere metode: Y (ny) = 1,21X (gammel) 0,61, r = 0,93 Interassay variasjon: CV% < 11 Referanseområde: Kvinner - Follikelfase 1,9 7,1 nmol/l -Midtsyklisk <9,3 nmol/l - Lutealfase 1,9 7,1 nmol/l - Graviditet ved term 2,4 12,2 nmol/l - Postmenopausale <4,0 nmol/l - Prepuberale <1,7 nmol/l Menn - Voksne 1,6 6,8 nmol/l - Prepuberale < 1,7 nmol/l Postadresse: Hormonlaboratoriet, OUS, Postboks 4959 Nydalen, 0424 Oslo. Gateadresse: Bygg 23, Aker sykehus, Trondheimsveien 235, Oslo Telefon: 22 89 47 08, Telefaks: 22 15 87 96 E-post: h-lab@h-lab.no Internett: http://www.hormonlaboratoriet.no 8