240 Tests P/N: cobas 4800 HPV Controls Kit 10 Sets P/N: c4800 HPV CTLS. c4800 LIQ CYT

Transkript

1 cobas 4800 HPV Test FOR BRUK TIL IN VITRO-DIAGNOSTIKK. cobas 4800 System Sample Preparation Kit c4800 SMPL PREP 960 Tests P/N: Tests P/N: cobas 4800 HPV Amplification/Detection Kit c4800 HPV AMP/DET 960 Tests P/N: Tests P/N: cobas 4800 HPV Controls Kit 10 Sets P/N: c4800 HPV CTLS cobas 4800 System Liquid Cytology Preparation Kit c4800 LIQ CYT 960 Tests P/N: Tests P/N: cobas 4800 System Wash Buffer Kit 960 Tests P/N: c4800 WB 240 Tests P/N: MERK: Kjøp av dette produktet gir kjøperen tillatelse til å bruke det for amplifikasjon og deteksjon av nukleinsyresekvenser ved polymerasekjedereaksjon (PCR) og relaterte prosesser for in vitro-diagnostikk på humane prøver. Kjøpet gir ingen generelle patent- eller andre lisensrettigheter bortsett fra bruksretten til dette produktet. TILTENKT BRUK cobas 4800 humant papillomavirus-testen (HPV-testen) er en kvalitativ in vitro-test for deteksjon av humant papillomavirus i pasientprøver. Testen bruker amplifikasjon av mål-dna med polymerasekjedereaksjon (PCR) og nukleinsyrehybridisering for deteksjon av 14 høyrisiko (HR) HPV-typer i en enkelt analyse. Testen identifiserer spesifikt (typer) HPV16 og HPV18, samtidig som den detekterer resten av høyrisikotypene (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 og 68) ved klinisk relevante infeksjonsnivåer. Prøver er begrenset til cervicale celler som er innsamlet i cobas PCR celleinnsamlingsmedium (Roche Molecular Systems, Inc.), PreservCyt -løsning (Cytyc Corp.) og SurePath -konserveringsvæske (BD Diagnostics-TriPath). Indikasjoner for bruk av cobas 4800 HPV-testen er: (a) cobas 4800 HPV-testen er indikert for bruk ved screening av pasienter med Pap-testresultater for ASC-US (atypiske skvamøse celler med usikker signifikans) for å avgjøre om det er behov for henvisning til kolposkopi. Resultatene av denne testen er ikke ment å hindre kvinner i å gå videre til kolposkopi. (b) Hos kvinner fra 30 år og eldre kan cobas 4800 HPV-testen brukes med Pap som tilleggsscreening for å vurdere tilstedeværelse av høyrisiko HPV-typer. Denne informasjonen kan brukes som en veiledning i pasientbehandlingen sammen med legens vurdering av cytologisk historikk, andre risikofaktorer og profesjonelle retningslinjer. (c) Hos kvinner fra 30 år og eldre kan cobas 4800 HPV-testen brukes for å vurdere tilstedeværelse eller fravær av HPV-genotyper 16 og 18. Denne informasjonen kan brukes som en veiledning i pasientbehandlingen sammen med legens vurdering av cytologisk historikk, andre risikofaktorer og profesjonelle retningslinjer. (d) cobas 4800 HPV-testen skal brukes for pasienter med ASC-US cervikale cytologiresultater for å vurdere tilstedeværelse eller fravær av høyrisiko-hpv-typene 16 og 18. Denne informasjonen kan brukes som en veiledning i pasientbehandlingen sammen med legens vurdering av cytologisk historikk, andre risikofaktorer og profesjonelle retningslinjer. Resultatene av denne testen er ikke ment å hindre kvinner i å gå videre til kolposkopi. OPPSUMMERING OG FORKLARING AV TESTEN Persisterende infeksjon med humant papillomavirus (HPV) er den viktigste årsaken til livmorhalskreft og forstadiet cervikal intraepitelial neoplasi (CIN) 1 3. Tilstedeværelsen av HPV er blitt knyttet til mer enn 99 % av tilfellene av cervikale kreftformer over hele verden 3. HPV er et lite, ikke-innkapslet, dobbelttrådet DNA-virus med et genom på omtrent 8000 nukleotider. Det finnes mer enn 118 forskjellige typer av HPV 4,5 og omtrent 40 forskjellige HPV-er som kan infisere anogenitale slimhinner hos mennesker 6,7. Men bare en mindre gruppe på 13 til 18 av disse typene anses som høyrisikotyper for utvikling av livmorhalskreft og lesjonene i forstadiet 3,8-13. I en analyse av data fra en flersenters kasuskontrollstudie utført av International Agency of Research on Cancer (IARC), var den poolede oddsratioen (OR) for livmorhalskreft med skvamøse celler med HPV-infeksjon 158,2 da analysen var begrenset til studier der det ble benyttet godt validerte teknikker for HPV-deteksjon 12. I denne studien var oddsratioen for livmorhalskreft fra 109 til 276 i studier fra ulike deler av verden 12. Selv om persisterende infeksjon med høyrisiko (HR) HPV er en forutsetning for livmorhalskreft og lesjonene i forstadiet, er det bare en liten prosentandel av infeksjonene som utvikles til slike sykdomsstadier. Seksuelt overførbare infeksjoner med HPV er ekstremt vanlig; det er estimert at opptil 75 % av alle kvinner på et eller annet tidspunkt blir eksponert for HPV 14. Imidlertid vil > 90 % av infiserte kvinner aktivere en effektiv immunrespons og bli kvitt infeksjonen i løpet av 6 til 24 måneder uten noen langsiktige helsekonsekvenser En infeksjon med hvilken som helst HPV-type kan produsere cervical intraepitelial neoplasi (CIN), selv om dette også vanligvis vil elimineres når HPV-infeksjonen er borte 21. I utviklede land med screeningprogrammer for livmorhalskreft er PAP-utstryk blitt brukt siden midten av 1950-tallet som den viktigste metoden for å oppdage tidlige tegn på livmorhalskreft. Selv om den har senket dødstallene grunnet livmorhalskreft dramatisk i disse landene, krever PAP-metoden at resultatene tolkes av svært godt øvede cytopatologer, og det er en relativt unøyaktig test med høy andel av falske negative resultater. Cytologiske uregelmessigheter som blir funnet med PAP-metoden, er som regel forårsaket av infeksjon med HPV, men diverse inflammatoriske variasjoner eller prøvetakingsvariasjoner kan forårsake falske positive PAP-resultater. Utredning av en uregelmessig PAP-test omfatter gjentatt testing, kolposkopi og biopsi. En histologisk bekreftet høygradig lesjon må fjernes kirurgisk for å hindre utviklingen av invasiv livmorhalskreft. Papillomavirus er svært vanskelig å dyrke in vitro, og ikke alle pasienter med HPV har en påvisbar antistoffrespons. Derfor er nukleinsyre (DNA)-testing av PCR en sensitiv og ikke-invasiv metode for å påvise tilstedeværelsen av en aktiv, cervikal HPV-infeksjon. Implementering av nukleinsyretesting for HPV forventes å kunne øke sensitiviteten og kostnadseffektiviteten av screeningprogrammer for livmorhalskreft ved å oppdage høyrisikolesjoner tidligere og redusere behovet for unødvendig kolposkopi og behandling. Avsnittet for informasjon om dokumentrevisjon er plassert ved slutten av dette dokumentet NO 1 Doc Rev. 3.0

2 TESTPRINSIPPER cobas 4800 HPV-testen er basert på to hovedprosesser: (1) automatisk prøvepreparering for samtidig ekstraksjon av HPV og cellulært DNA, (2) PCRamplifikasjon 22 av mål-dna-sekvenser ved bruk av både HPV og β-globinspesifikke komplementære primerpar og sanntidsdeteksjon av splittede fluorescensmerkede HPV- og β-globinspesifikke oligonukleotid-deteksjonsprober. Samtidig ekstraksjon, amplifikasjon og deteksjon av β-globin i cobas 4800 HPV-testen overvåker hele testprosessen. Master Mix-reagenset for cobas 4800 HPV-testen inneholder primerpar og prober som er spesifikke for de 14 høyrisiko HPV-typene og β-globin DNA. Deteksjonen av amplifisert DNA (amplikon) utføres under termosykliske trinn ved bruk av oligonukleotidprober som er merket med fire ulike fluoroforer. Det amplifiserte signalet fra tolv høyrisiko HPV-typer (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 og 68) detekteres ved hjelp av samme fluorofor, mens HPV16-, HPV18- og β-globinsignalene detekteres med sine egne dedikerte fluoroforer. Prøvepreparering Prøveprepareringen for cobas 4800 HPV-testen er automatisk og skjer med bruk av cobas x 480-instrumentet. Livmorhalsprøver som er tatt i cobas PCR celleinnsamlingsmedium, PreservCyt-løsning eller SurePath-konserveringsvæske, opptas under denatureringsforhold ved høye temperaturer og lyseres deretter under tilstedeværelse av kaotropisk reagens. Frigjorte HPV-nukleinsyrer, sammen med β-globin-dna som fungerer som prosesskontroll, blir renset ved absorpsjon til magnetiske glasspartikler, vasket og til slutt separert fra disse partiklene, slik at de er klargjorte for PCR-amplifikasjon og deteksjon. PCR-amplifikasjon Valg av mål cobas 4800 HPV-testen bruker primere for å definere en sekvens med ca. 200 nukleotider innenfor den polymorfe L1-regionen av HPV-genomet. En pool med HPV-primere som er til stede i Master Mix, amplifiserer HPV-DNA fra 14 høyrisikotyper (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 og 68) 3,8-13,23. Fluorescerende oligonukleotidprober bindes til de polymorfe regionene i sekvensen som er definert av disse primerne. Et ekstra primerpar og probe er rettet mot det humane β-globin-genet (330 bp-amplikon) for å gi en prosesskontroll. Målamplifikasjon EagleZ05 DNA-polymerase 24, en kjemisk modifisert versjon av Thermus species Z05 DNA-polymerase 25, benyttes til "hot start"-amplifikasjon av HPVmålene og β-globinkontroll. Først varmes PCR-reaksjonsblandingen opp for å aktivere EagleZ05 DNA-polymerase for å denaturere virus-dna og genomisk DNA og for å eksponere primermålsekvensene. Når blandingen kjøles ned, hybridiseres oppstrøms- og nedstrømsprimere til mål-dnasekvensene. I nærvær av divalent metallion og dntp i overskudd forlenger EagleZ05 DNA-polymerase primeren(e), og en ny DNA-tråd syntetiseres. Dette avslutter den første PCR-syklusen og gir en dobbelttrådet DNA-kopi av målregionen for HPV-genomet og β-globin-genet. DNA-polymerase forlenger de hybridiserte primerne langs måltemplatene og produserer et dobbelttrådet HPV mål-dna-molekyl med ca. 200 basepar, eller et β-globin DNA-molekyl med ca. 330 basepar, som kalles et amplikon. Denne prosessen gjentas i et bestemt antall sykluser, der hver syklus effektivt dobler mengden amplikon-dna. Amplifikasjon skjer kun i den delen av HPV-genomet og/eller β-globin-genet som ligger mellom de tilsvarende primerparene. Hele genomet blir ikke amplifisert. Automatisk sanntidsdeteksjon cobas 4800 HPV-testen anvender sanntids 27,28 PCR-teknologi. Hver oligonukleotidprobe i reaksjonen er merket med et rapporteringsfluorofor og et slukkerfluorofor, som slukker fluorescensutstrålingene fra fluoroforet i en intakt probe. Etter hvert som amplifikasjonen skjer, bindes prober som er komplementære til amplikonet, til spesifikke enkelttrådete DNA-sekvenser og splittes av 5 til 3 -nukleaseaktivitet hos EagleZ05 DNA-polymerasen. Så snart rapporteringsfluoroforet er separert fra slukkerfluoroforet av denne nukleaseaktiviteten, sender det ut fluorescens med en karakteristisk bølgelengde når det eksiteres av riktig lysspektrum. Denne karakteristiske bølgelengden for hvert fluorofor gjør det mulig å måle HPV16-amplikon, HPV18-amplikon, andre HR-amplikoner (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 og 68) og β-globin-kontrollen uavhengig, siden probene som er spesifikke for disse sekvensene, er merket med ulike fluoroforer. Selektiv amplifikasjon Selektiv amplifikasjon av målnukleinsyre fra den kliniske prøven oppnås i cobas 4800 HPV-testen ved hjelp av AmpErase-enzym (uracil-nglykosylase) og deoksyuridintrifosfat (dutp). AmpErase-enzymet gjenkjenner og katalyserer destruksjon av DNA-tråder som inneholder deoksyuridin 26, men ikke DNA som inneholder deoksytymidin. Deoksyuridin finnes ikke i naturlig forekommende DNA, men finnes alltid i amplikon som følge av bruken av deoksyuridintrifosfat i stedet for tymidintrifosfat som en av dntp-ene i Master Mix-reagenset. Derfor er det kun amplikon som inneholder deoksyuridin. Deoksyuridin gjør kontaminerende amplikon mottakelig for destruksjon ved hjelp av AmpErase-enzymet forut for amplifikasjon av mål- DNA. AmpErase-enzymet, som inngår i Master Mix-reagenset, katalyserer nedbrytning av DNA som inneholder deoksyuridin, ved å bryte deoksyuridingruppens deoksyribosekjede i C1-posisjonen. Ved temperaturøkning i det første varmetrinnet brytes amplikon-dna-kjeden der deoksyuridinet finnes, noe som igjen fører til at DNA ikke lenger er amplifiserbart. AmpErase-enzymet er inaktivt ved temperaturer over 55 C, dvs. gjennom alle termosykliske trinn, og derfor blir ikke målamplikon ødelagt. AmpErase-enzym i cobas 4800 HPV-testen har vist seg å kunne inaktivere minst 10 3 kopier av deoksyuridin-inneholdende HPV-amplikon per PCR NO 2 Doc Rev. 3.0

3 REAGENSER cobas 4800 System Sample Preparation Kit Prøveprepareringskit for cobas 4800-systemet (P/N: ) MGP (Magnetiske glasspartikler for cobas 4800-systemet) Magnetiske glasspartikler 93 % isopropanol Xi 93 % (vekt per vekt) isopropanol c4800 SMPL PREP 240 tester 10 x 4,5 ml F Irriterende 93 % (vekt per vekt) isopropanol Meget brannfarlig R: , S: /25-26 EB (Elueringsbuffer for cobas 4800-systemet) Tris-HCl-buffer 0,09 % natriumazid cobas 4800 System Sample Preparation Kit Prøveprepareringskit for cobas 4800-systemet (P/N: ) MGP (Magnetiske glasspartikler for cobas 4800-systemet) Magnetiske glasspartikler 93 % isopropanol Xi 93 % (vekt per vekt) isopropanol c4800 SMPL PREP 10 x 18 ml 960 tester 10 x 13,5 ml F Irriterende 93 % (vekt per vekt) isopropanol Meget brannfarlig R: , S: /25-26 EB (Elueringsbuffer for cobas 4800-systemet) Tris-HCl-buffer 0,09 % natriumazid cobas 4800 System Wash Buffer Kit Vaskebufferkit for cobas 4800-systemet (P/N: ) WB (Vaskebuffer for cobas 4800-systemet) Natriumsitratdihydrat 0,05 % N-metylisotiazolon-HCl cobas 4800 System Wash Buffer Kit Vaskebufferkit for cobas 4800-systemet (P/N: ) WB (Vaskebuffer for cobas 4800-systemet) Natriumsitratdihydrat 0,05 % N-metylisotiazolon-HCl c4800 WB c4800 WB 10 x 18 ml 240 tester 10 x 55 ml 960 tester 10 x 200 ml NO 3 Doc Rev. 3.0

4 cobas 4800 System Liquid Cytology Preparation Kit Prepareringskit for flytende cytologiske prøver for cobas 4800-systemet (P/N: ) PK (cobas 4800 proteinase K) Tris-HCl-buffer < 0,05 % EDTA Glyserol Kalsiumklorid Kalsiumacetat < 2 % proteinase K Xn < 2 % (vekt per vekt) proteinase K c4800 LIQ CYT 240 tester 10 x 0,9 ml Helseskadelig SDS (SDS-reagens for cobas 4800-systemet) Tris-HCl-buffer 0,2 % SDS 0,09 % natriumazid LYS (Lyseringsbuffer for cobas 4800-systemet) Tris-HCl-buffer 37 % guanidin HCl < 5 % polydokanol Xn 37 % (vekt per vekt) guanidin-hcl 10 x 3 ml 10 x 10 ml Helseskadelig R: 22-36/38, S: N < 5 % (vekt per vekt) polydokanol Miljøfarlig R: , S: cobas 4800 System Liquid Cytology Preparation Kit Prepareringskit for flytende cytologiske prøver for cobas 4800-systemet (P/N: ) PK (cobas 4800 proteinase K) Tris-HCl-buffer < 0,05 % EDTA Glyserol Kalsiumklorid Kalsiumacetat < 2 % proteinase K Xn < 2 % (vekt per vekt) proteinase K c4800 LIQ CYT 960 tester 20 x 1,2 ml Helseskadelig SDS (SDS-reagens for cobas 4800-systemet) Tris-HCl-buffer 0,2 % SDS 0,09 % natriumazid LYS (Lyseringsbuffer for cobas 4800-systemet) Tris-HCl-buffer 37 % guanidin HCl < 5 % polydocanol Xn 37 % (vekt per vekt) guanidin-hcl 10 x 9 ml 10 x 36 ml Helseskadelig R: 22-36/38, S: NO 4 Doc Rev. 3.0

5 N < 5 % (vekt per vekt) polydokanol Miljøfarlig R: , S: cobas 4800 HPV Amplification/Detection Kit HPV-amplifikasjons/deteksjonskit for cobas 4800 (P/N: ) HPV MMX (cobas 4800 HPV Master Mix) Trisinbuffer Kaliumacetat Kaliumhydroksid Glyserol < 0,13 % datp, dctp, dgtp, dutp < 0,01 % Oppstrøms- og nedstrøms HPV-primere < 0,01 % Oppstrøms- og nedstrøms β-globin-primere < 0,01 % Fluorescensmerkede HPV-prober < 0,01 % Fluorescensmerkede β-globin-prober < 0,10 % EagleZ05 DNA-polymerase (mikrobiell) < 0,10 % AmpErase-enzym (uracil-n-glykosylase) (mikrobielt) 0,09 % Natriumazid HPV Mg/Mn (cobas 4800 HPV Mg/Mn-løsning) Magnesiumacetat Manganesacetat < 0,02 % Iseddik 0,09 % natriumazid cobas 4800 HPV Amplification/Detection Kit HPV-amplifikasjons/deteksjonskit for cobas 4800 (P/N: ) HPV MMX (cobas 4800 HPV Master Mix) Trisinbuffer Kaliumacetat Kaliumhydroksid Glyserol < 0,13 % datp, dctp, dgtp, dutp < 0,01 % Oppstrøms- og nedstrøms HPV-primere < 0,01 % Oppstrøms- og nedstrøms β-globin-primere < 0,01 % Fluorescensmerkede HPV-prober < 0,01 % Fluorescensmerkede β-globin-prober < 0,10 % EagleZ05 DNA-polymerase (mikrobiell) < 0,10 % AmpErase-enzym (uracil-n-glykosylase) (mikrobielt) 0,09 % Natriumazid HPV Mg/Mn (cobas 4800 HPV Mg/Mn-løsning) Magnesiumacetat Manganesacetat < 0,02 % Iseddik 0,09 % natriumazid cobas 4800 HPV Controls Kit HPV-kontrollkit for cobas 4800 (P/N: ) HPV (+) C (HPV-positiv kontroll for cobas 4800) Tris-HCl-buffer EDTA 0,05 % natriumazid < 0,002 % Poly ra RNA (syntetisk) < 0,001 % ikke-infeksiøst plasmid-dna (mikrobielt) som inneholder HPV 16, 18, 39 sekvenser < 0,001 % ikke-infeksiøst plasmid-dna (mikrobielt) som inneholderhumane β-globin-sekvenser c4800 HPV AMP/DET c4800 HPV AMP/DET c4800 HPV CTLS 240 tester 10 x 0,5 ml 10 x 1,0 ml 960 tester 20 x 1,0 ml 10 x 1,0 ml 10 sett 10 x 0,5 ml NO 5 Doc Rev. 3.0

6 ( ) C 10 x 0,5 ml (Negativ kontroll for cobas 4800-systemet) Tris-HCl-buffer EDTA 0,05 % natriumazid < 0,002 % Poly ra RNA (syntetisk) ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER A. FOR BRUK TIL IN VITRO-DIAGNOSTIKK. B. Denne testen skal brukes til livmorhalsprøver som er tatt med cobas PCR celleinnsamlingsmedium, PreservCyt-løsning og SurePathkonserveringsvæske. C. Ikke bruk munnpipettering. D. Ikke spis, drikk eller røyk i laboratoriets arbeidsområder. Bruk beskyttende engangshansker, laboratoriefrakk og vernebriller når du håndterer prøver og reagenser. Vask hendene nøye etter håndtering av prøver og reagenser. E. Unngå mikrobiell kontaminering og DNA-kontaminering av reagenser. F. Kasser ubrukte reagenser og avfall i samsvar med nasjonale, regionale og lokale forskrifter. G. Bruk ikke reagenser etter utløpsdatoen. H. Ikke bland reagenser fra ulike kilder. I. Dataark om materialsikkerhet (MSDS) kan på forespørsel sendes fra ditt lokale Roche-kontor. J. Hansker må brukes, og de må byttes mellom håndtering av prøver og cobas 4800-reagenser for å unngå kontaminering. K. Prøver må håndteres som smittebærende, og sikre laboratorierutiner må følges. Disse er beskrevet i Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 29 og i CLSI-dokumentet M29-A3 30. L. LYS inneholder guanidinhydroklorid. Guanidinhydroklorid må ikke komme i direkte kontakt med natriumhypokloritt (blekemiddel) eller andre svært reaktive reagenser, som syrer eller baser. Slike blandinger kan produsere en giftig gass. Hvis væske som inneholder guanidinhydroklorid, søles, må du rengjøre med passende laboratorierengjøringsmiddel og vann. Hvis det søles væske med potensielt infeksiøse agens, rengjør det affiserte området FØRST med laboratorierengjøringsmiddel og vann, og deretter med 0,5 % natriumhypokloritt. M. MGP inneholder isopropanol og er svært brennbart. Hold det unna åpen ild og omgivelser der det kan produseres gnister. N. EB, SDS, HPV MMX, HPV Mg/Mn, ( ) C og HPV (+) C inneholder natriumazid. Natriumazid kan reagere med bly- og kobberrør og danne svært eksplosive metallazider. Hvis løsninger som inneholder natriumazid, helles ned i avløp i laboratoriet, må de skylles ned med store mengder vann for å unngå opphopning av azider. O. Bruk vernebriller, laboratoriefrakk og engangshansker ved håndtering av reagenser. Unngå kontakt med hud, øyne eller slimhinner. Skyll umiddelbart med mye vann hvis slik kontakt oppstår. Hvis kontaktstedet ikke blir behandlet, kan det oppstå brannskade. Fortynn med vann før du tørker opp eventuelt søl. P. Alt forbruksmateriell er laget for bare å brukes én gang. Skal ikke gjenbrukes. Q. Bruk ikke natriumhypoklorittløsning (klormiddel) til å rengjøre cobas x 480-instrumentet eller cobas z 480-analysatoren. Rengjør cobas x 480- instrumentet eller cobas z 480-analysatoren i samsvar med prosedyrene som er beskrevet i operatørmanualen for cobas 4800-systemet. R. For ytterligere advarsler, forholdsregler og prosedyrer for å redusere risikoen for kontaminasjon av cobas x 480-instrumentet eller cobas z 480- analysatoren, se operatørmanualen for cobas 4800-systemet. OPPBEVARING OG HÅNDTERING A. Ikke frys reagenser. B. Oppbevar MGP, EB, PK, SDS, LYS, HPV MMX, HPV Mg/Mn, HPV (+) C og ( ) C ved 2-8 C. Disse reagensene er stabile til angitt utløpsdato. C. Oppbevar WB ved C. Dette reagenset er stabilt til angitt utløpsdato. MATERIELL SOM MEDFØLGER A. cobas 4800 System Sample Preparation Kit 240 tester Prøveprepareringskit for cobas c4800 SMPL PREP 4800-systemet (P/N: ) MGP (Magnetiske glasspartikler for cobas 4800-systemet) EB (Elueringsbuffer for cobas 4800-systemet) B. cobas 4800 System Sample Preparation Kit 960 tester Prøveprepareringskit for cobas c4800 SMPL PREP 4800-systemet (P/N: ) MGP (Magnetiske glasspartikler for cobas 4800-systemet) EB (Elueringsbuffer for cobas 4800-systemet) NO 6 Doc Rev. 3.0

7 C. cobas 4800 System Wash Buffer Kit c4800 WB 240 tester Vaskebufferkit for cobas 4800-systemet (P/N: ) WB (Vaskebuffer for cobas 4800-systemet) D. cobas 4800 System Wash Buffer Kit c4800 WB 960 tester Vaskebufferkit for cobas 4800-systemet (P/N: ) WB (Vaskebuffer for cobas 4800-systemet) E. cobas 4800 HPV Amplification/Detection Kit c4800 HPV AMP/DET 240 tester HPV-amplifikasjons/deteksjonskit for cobas 4800 (P/N: ) HPV MMX (cobas 4800 HPV Master Mix) HPV Mg/Mn (cobas 4800 HPV Mg/Mn-løsning) F. cobas 4800 HPV Amplification/Detection Kit c4800 HPV AMP/DET 960 tester HPV-amplifikasjons/deteksjonskit for cobas 4800 (P/N: ) HPV MMX (cobas 4800 HPV Master Mix) HPV Mg/Mn (cobas 4800 HPV Mg/Mn-løsning) G. cobas 4800 System Liquid Cytology Preparation Kit c4800 LIQ CYT 240 tester Prepareringskit for flytende cytologiske prøver for cobas 4800-systemet (P/N: ) PK (cobas 4800 proteinase K) SDS (SDS-reagens for cobas 4800-systemet) LYS (Lyseringsbuffer for cobas 4800-systemet) H. cobas 4800 System Liquid Cytology Preparation Kit c4800 LIQ CYT 960 tester Prepareringskit for flytende cytologiske prøver for cobas 4800-systemet (P/N: ) PK (cobas 4800 proteinase K) SDS (SDS-reagens for cobas 4800-systemet) LYS (Lyseringsbuffer for cobas 4800-systemet) I. cobas 4800 HPV Controls Kit c4800 HPV CTLS 10 sett HPV-kontrollkit for cobas 4800 (P/N: ) HPV (+) C (HPV-positiv kontroll for cobas 4800) ( ) C (Negativ kontroll for cobas 4800-systemet) MATERIELL SOM KREVES, MEN SOM IKKE MEDFØLGER Håndtering av prøver og reagenser cobas PCR celleinnsamlingsmedium (Roche P/N , valgfritt) CO-RE-spisser, 1000 μl, stativ med 96 (Roche P/N eller Hamilton P/N ) 50 ml reagensreservoar (Roche P/N ) 200 ml reagensreservoar (Roche P/N ) Ekstraksjonsplate for cobas 4800-systemet (dypbrønn) (Roche P/N ) AD-plate (mikrobrønnplate) 0,3 ml og forseglingsfilm for cobas 4800-systemet (Roche P/N ) Pose for fastavfall [Roche P/N (liten) eller (stor)] Hamilton STAR plastsjakt (Roche P/N ) NO 7 Doc Rev. 3.0

8 Rør 13 ml rundbunnet, (Sarstedt P/N ) for bruk som sekundærprøverør Hetter, nøytral farge (Sarstedt P/N ; for å sette hetter på prøver etter analysering i 13 ml rundbunnede Sarstedt-rør) Engangshansker, uten pudder Instrumentering og programvare cobas x 480-instrumentet cobas z 480-analysatoren cobas 4800-systemets kontrollenhet med systemprogramvare versjon 1.0 eller nyere cobas 4800 Work Order Editor versjon eller nyere Tilleggsutstyr og materiell Pipetter: kapasitet for å levere 1000 μl Aerosolbarriere DNase-frie spisser: kapasitet for å levere 1000 μl Sentrifuge med svingrotor med minimum RCF av 1500 Frittstående magnetplate (Roche P/N ) Vortexmixer (enkeltrør) Vortexmixer med flere rør [f.eks. VWR P/N ] TAKING, TRANSPORT OG OPPBEVARING AV PRØVER MERK: Alle prøver må behandles som om de er potensielt smittebærende. A. Taking av prøver Livmorhalsprøver som er tatt i cobas PCR celleinnsamlingsmedium, PreservCyt-løsning eller SurePath-konserveringsvæske, er validert for bruk med cobas 4800 HPV-testen. Følg produsentens anvisninger for å ta livmorhalsprøver. B. Transport av prøver Livmorhalsprøver som er tatt i cobas PCR celleinnsamlingsmedium, PreservCyt-løsning eller SurePath-konserveringsvæske, kan transporteres ved 2-30 C. HPV-prøver må transporteres i samsvar med nasjonale, regionale, statlige og lokale forskrifter for transport av biologisk materiale 31. C. Oppbevaring av prøver Livmorhalsprøver som er tatt i cobas PCR celleinnsamlingsmedium og PreservCyt-løsning, kan oppbevares ved 2-30 C i inntil 6 måneder etter prøvetakingsdatoen. Livmorhalsprøver som er tatt i SurePath-konserveringsvæske, kan oppbevares ved 2-8 C i inntil 6 måneder, og ved C i inntil 14 dager etter prøvetakingsdatoen. BRUKSANVISNING MERK: Alle reagenser unntatt HPV MMX og HPV Mg/Mn må ha romtemperatur før innlasting i cobas x 480-instrumentet. HPV MMX og HPV Mg/Mn kan tas direkte fra kjølelagringen på 2-8 C da de vil bli temperert til romtemperatur på cobas x 480-instrumentet innen de brukes i prosessen. MERK: Prøver i cobas PCR celleinnsamlingsmediuer, PreservCyt-løsning og SurePath-konserveringsvæske må ha romtemperatur før de lastes inn i cobas x 480-instrumentet. MERK: Se operatørmanualen for cobas 4800-systemet for detaljert bruksanvisning. Størrelse på analyseserier: cobas 4800-systemet er utformet for å støtte cobas 4800 HPV-testen med analyseserier med omfang på 1 til 22 prøver pluss kontroller (inntil 24 analyser per analyseserie) og omfang på 1 til 94 prøver pluss kontroller (inntil 96 analyser per analyseserie). Hver prøveprepareringskit for cobas 4800-systemet, hver prepareringskit for flytende cytologiske prøver for cobas 4800-systemet, hver hver vaskebufferkit for cobas 4800-systemet og hver cobas 4800 HPV-amplifikasjons-/ deteksjonskit inneholder nok reagenser til 10 analyseserier med enten 24 tester (240 tester per kit) eller 96 tests (960 tester per kit). HPV-kontrollkitet for cobas 4800 inneholder nok reagenser for til sammen 10 analyseserier på enten 24 eller 96 tester (10 sett per kit). Den minste analyseseriestørrelsen på cobas 4800-systemet er 1 prøve pluss kontroller. Ett replikat av den negative kontrollen for cobas 4800-systemet [( ) C] og ett replikat av den HPV-positive kontrollen for cobas 4800 [HPV (+) C] er påkrevd for hver analyseserie (se avsnittet "Kvalitetskontroll"). Arbeidsflyt: MERK: Et 960-kit kan brukes i en 24-analyseserie selv om dette ikke er optimal bruk av reagenser. MERK: For å maksimere behandlingskapasiteten skal det totale antallet pasientprøver pluss kontroller kunne deles på åtte. HPV-testen med cobas 4800 kan kjøres med en av de to arbeidsflytene som kalles "Full workflow" eller "PCR only workflow" i cobas programvaren. HPV Full Workflow: "HPV Full Workflow" består av prøvepreparering i cobas x 480-instrumentet etterfulgt av amplifikasjon/deteksjon i cobas z 480-analysatoren. Størrelsen på analyseserien kan være et 24-testformat (fra 1 til 22 prøver pluss 2 kontroller) eller et 96-testformat (fra 1 til 94 prøver pluss 2 kontroller). Se avsnittet "Utføre en Full Workflow" nedenfor og operatørmanualen for cobas 4800-systemet for ytterligere informasjon. HPV PCR Only Workflow: Arbeidsflyten "HPV PCR Only Workflow" består av amplifikasjon/deteksjon i cobas z 480-analysatoren. Størrelsen på analyseserien kan være fra 1 til 94 prøver pluss 2 kontroller. Se avsnittet "Utføre en PCR Only-arbeidsflyt" nedenfor og operatørmanualen for cobas 4800-systemet for ytterligere informasjon NO 8 Doc Rev. 3.0

9 Prøver: Det er tre typer livmorhalsprøver som kan analyseres med cobas 4800 HPV-testen: a) livmorhalsprøver i PreservCyt-løsning, b) livmorhalsprøver i cobas PCR celleinnsamlingsmedium og c) livmorhalsprøver i SurePath-konserveringsvæske. PreservCyt-løsning og cobas PCR celleinnsamlingsmedium kan behandles direkte fra riktig strekkodet primærbeholder på 20 ml eller fra et riktig strekkodet rundbunnet Sarstedt-rør på 13 ml i cobas x 480-instrumentet. Prøver i SurePath-konserveringsvæske må overføres til et riktig strekkodet, rundbunnet Sarstedt-rør på 13 ml for behandling i cobas x 480-instrumentet. Se operatørmanualen for cobas 4800-systemet for informasjon om riktige strekkodeprosedyrer og en liste over godkjente strekkoder for cobas 4800-systemet. MERK: Minimumsvolumet som er påkrevd i cobas PCR celleinnsamlingsmedium og primærbeholdere med PreservCyt-løsning, er 3,0 ml. Når det brukes 13 ml rundbunnede sekundærrør, skal de fylles til et minimumsvolum på 1,0 ml og et maksvolum på 10 ml. MERK: Bruk kun cobas PCR celleinnsamlingsmedium, PreservCyt-løsning og SurePath-konserveringsvæske for å ta livmorhalsprøver for cobas 4800 HPV-testen. cobas 4800 HPV-testen er ikke validert med annet prøvetakingsutstyr eller andre medietyper. Hvis cobas 4800 HPV-testen brukes med andre prøvetakingsenheter og/eller medietyper, kan det føre til falske negative, falske positive og/eller ugyldige resultater. MERK: Det kan være nødvendig å avpipettere prøver i strekkodede, rundbunnet Sarstedt-rør på 13 ml for behandling i cobas x 480-instrumentet. Bruk pipetter med aerosolbarriere- eller "positive displacement"-spiss for å håndtere prøver. For å unngå krysskontaminering av behandlede prøver, skal det brukes andre hetter med en annen farge (nøytral: se avsnittet MATERIELL SOM KREVES, MEN SOM IKKE MEDFØLGER) på slike rør for å korke slike prøver etter behandling. MERK: Vær forsiktig når du overfører prøver fra primærrør til 13 ml rundebunnede sekundærrør. Vortex primærprøverør før overføring. Bytt pipettespiss etter hver prøve. MERK: Ikke behandle prøver som ser blodige ut eller har mørk brun farge. En enkel analyseserie kan ha alle kombinasjoner av prøver (cobas PCR celleinnsamlingsmedium, PreservCyt-løsning og/eller SurePathkonserveringsvæske), og hver prøve kan testes med enten deltestene HPV High Risk eller HPV High Risk Plus Genotyping. Arbeidsflyter Utføre en Full Workflow: A. cobas 4800 HPV-testen kan brukes for analyseserier på 1 til 22 prøver pluss én cobas 4800-system negativ kontroll og én cobas 4800 HPVpositiv kontroll (24-testformat) og fra 1 til 94 prøver pluss én cobas 4800-system negativ kontroll og én cobas 4800 HPV-positiv kontroll (96-testformat). B. Utfør prosedyrene for systemoppstart og vedlikehold i samsvar med instruksjonene i avsnittet Betjening i operatørmanualen for cobas systemet. C. Opprett en arbeidsbestillingsfil for en full analyseserie i samsvar med instruksjonene i operatørmanualen for cobas 4800-systemet. En arbeidsbestillingsfil er ikke påkrevd hvis det brukes en LIS. D. Velg medietype for hver prøve. Velg "PreservCyt" for å bestille PreservCyt-løsning eller cobas PCR celleinnsamlingsmedieprøver i arbeidsbestillingsfilen. Velg "SurePath" for å bestille SurePath-konserveringsvæskeprøver i arbeidsbestillingsfilen. E. Velg deltest "HPV High Risk Panel" for å rapportere testresultater for én av eller en kombinasjon av høyrisiko-hpv-typene 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. F. Velg deltest "HPV High Risk Panel Plus Genotyping" for å rapportere én av eller en kombinasjon av høyrisiko-hpv-typene 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 og for å rapportere testresultater for høyrisiko-hpv-type 16 og høyrisiko-hpv-type 18 separat. G. Start den nye analyseserien i samsvar med programveiviseren. Velg testtypen som "HPV workflow". H. Følg programveiviseren for å laste inn prøver og arbeidsbestillingsfilen. MERK: Prøver kan lastes inn i strekkodede primær- eller sekundærrør i hvilken som helst rekkefølge så lenge strekkodene samsvarer med strekkodene i arbeidsbestillingen. MERK: Hvis det brukes primærbeholdere for cobas PCR celleinnsamlingsmediumsprøver eller PreservCyt-løsningsprøver til behandling, vortex før innlasting. I. Følg programveiviseren for å laste alt forbruksmateriell. J. Følg programveiviseren for å laste alle reagenser. MERK: Kontrollene [HPV (+) C og ( ) C] lastes ikke sammen med prøver. De settes i reagensholderen på samme tid som reagensene lastes. To posisjoner (A1 og B1) på hver ekstraksjonsplate og mikrobrønnplate er reservert for henholdsvis kontrollen HPV (+) og ( ). MERK: cobas 4800-systemet har en intern klokke som overvåker hvor lenge reagensene er i systemet. Når WB er skannet, tillates 1 time til å fullføre skanneprosessen og klikke på "Start"-knappen. En nedtellingstidtaker vises i fliken "Workplace". MERK: For å sikre nøyaktig overføring av MGP, vortex MGP-røret før dispensering i reagensreservoaret, eller rist det kraftig. K. Las inn prøveprepareringsreagensene (WB, MGP, EB, SDS og LYS) i de strekkodede reagensreservoarene ved hjelp av "scan-scan-pour-place"- metoden: Skann strekkoden på reagensflasken. Skann strekkoden på reagensreservoaret. Hell reagens i reservoaret. Plasser det fylte reagensreservoaret i angitt posisjon på reagensholderen NO 9 Doc Rev. 3.0

10 L. Reagensreservoarene leveres i to størrelser: 200 ml og 50 ml. Følg programveiviseren for å velge reagensreservoar med riktig størrelse. Strekkodene for reagensreservoarene må vende mot høyre i holderen. MERK: Amplifikasjons-/deteksjonsreagensene (HPV MMX og HPV Mg/Mn), kontrollene [HPV (+) C og ( ) C] og PK lastes direkte i reagensholderen og skannes av cobas x 480-instrumentet automatisk. MERK: Alle reagenser og reagensreservoarer er strekkodet og utformet for å brukes én gang. cobas 4800-programvaren sporer bruken av reagenser og reagensreservoarer og avviser delvis brukte reagenser og tidligere brukte reagensreservoarer. Programvaren kontrollerer også at reagenser fra kit med riktig størrelse er lastet i instrumentet, dvs. hindrer at reagenser for kit med 240 tester kan brukes i en analyseserie med mer enn 22 pasientprøver. MERK: cobas 4800-softwaren sporer utløpsdatoen for alle reagenser. Reagenser med overskredet utløpsdato blir ikke godkjent for bruk på cobas 4800-systemet. M. Start prøveprepareringen ved å klikke på "Start Run". N. Når prøveprepareringen er fullført, klikk på **"Unload" for å laste ut plateholderen. ** Statusen for prøveprepareringen kan gjennomgås nå, før du klikker på "Unload". Se operatørmanualen for cobas 4800-systemet. O. Følg instruksjonene i operatørmanualen for cobas 4800-systemet for å forsegle mikrobrønnplaten, transportere platen til cobas z 480- analysatoren og starte amplifikasjons- og deteksjonskjøringen. MERK: cobas 4800-systemet har en intern klokke som overvåker hvor lang tid det går mellom tilsetning av de preparerte prøvene til Working Master Mix. Amplifikasjon og deteksjon bør startes så snart som mulig, men senest 90 minutter etter at kjøringen i cobas x 480-instrumentet er ferdig. En nedtellingstidtaker vises i fliken "Workplace". P. Når amplifikasjons- og deteksjonskjøringen er fullført, last ut mikrobrønnplaten fra cobas z 480-analysatoren. Q. Følg instruksjonene i operatørmanualen for cobas 4800-systemet for å gjennomgå og godta resultatene. Utføre en PCR Only-arbeidsflyt MERK: Arbeidsflyten "PCR Only" er tilgjengelig som et gjenopprettingsalternativ i fall den komplette arbeidsflyten ikke kan fullføres på grunn av omstendigheter som er utenfor brukerens kontroll (f.eks. strømbrudd under amplifikasjons-/ deteksjonskjøringen). MERK: Kun prøver som har gjenomgått en vellykket analyse på cobas x 480-instrumentet, kan brukes for amplifikasjon/ deteksjon ved bruk av en "PCR Only"-analyseserie. Systemovervåkingen av reagenser og forbruksmateriell er begrenset under PCR Only-analyseserien. Det er ingen sporing av prøveposisjon ved bruk av arbeidsflyten "PCR Only". Sluttbrukeren må sikre at prøvens reelle posisjon på mikrobrønnplaten tilsvarer posisjonen som er angitt i arbeidsbestillingsfilen. Brukeren må være ekstremt forsiktig når han/hun klargjør mikrobrønnplaten, for å sikre riktig PCR-oppsett og unngå kontaminering. MERK: Prøver som er behandlet i cobas x 480-instrumentet, har begrenset stabilitet. De må amplifiseres/detekteres ved bruk av arbeidsflyten "PCR Only" innen 24 timer hvis de er oppbevart ved 15 C til 30 C, og innen 7 dager hvis de er oppbevart ved 2 C til 8 C. MERK: Følg instruksjonene i operatørmanualen for cobas 4800-systemet for å gi nytt navn til strekkoder for positive og negative kontroller. A. Opprett en arbeidsbestillingsfil for arbeidsflyten "PCR Only" i samsvar med instruksjonene i operatørmanualen for cobas 4800-systemet. a. Se resultatutskriften eller resultateksportfilen for informasjon om prøvestrekkoder, medietyper, deltesttyper og posisjoner i cobas ekstraksjonsplaten for analyseserien som krever gjentatt amplifikasjon/ deteksjon. b. For positive og negative kontroller, rediger minst 4 sifre for å identifisere gjenbruk av kontrollstrekkodene for arbeidsflyten for kun amplifikasjon og deteksjon, i samsvar med instruksjonene i operatørmanualen for cobas 4800-systemet. B. Preparer cobas 4800 HPV Working Master Mix: a. For en analyseserie med inntil 24 tester, tilsett 240 μl HPV Mg/Mn i ett rør med HPV MMX (0,5 ml-rør fra 240-testkit). b. For en analyseserie med inntil 96 tester, tilsett 450 μl HPV Mg/Mn i hvert av de to rørene med HPV MMX (1,0-ml-rør fra 960-testkit). MERK: Analyseserien "PCR only" må startes innen 90 minutter etter at HPV Mg/Mn ble tilsatt i HPV MMX. Systemet overvåker ikke hvor lang tid som er gått etter at de preparerte prøvene ble tilsatt Working Master Mix i arbeidsflyten PCR Only. Sluttbrukeren må sørge for at amplifikasjon og deteksjon startes innen den angitte tiden. C. Bland Working Master Mix grundig ved å vende røret/rørene forsiktig. Ikke vortex Working Master Mix. D. Overfør 25 μl Working Master Mix til de ønskede brønnene i mikrobrønnplaten. E. Plasser ekstraksjonsplaten fra analyseserien som skal gjentas, på den frittstående magnetplaten. F. Overfør 25 μl eluat manuelt fra ekstraksjonsplatebrønnene til de tilsvarende brønnene i mikrobrønnplaten. Sørg for at brønnposisjonene opprettholdes (f.eks. at eluatet i A1-brønnen i ekstraksjonsplaten overføres til A1 i mikrobrønnplaten). Påse at ikke noe MGP overføres til mikrobrønnplaten. G. Følg instruksjonene i operatørmanualen for cobas 4800-systemet for å forsegle mikrobrønnplaten. H. Sentrifuger mikrobrønnplaten i en svingrotor i minst 5 sekunder ved 1500 RCF. I. Transporter platen til cobas z 480-analysatoren og start amplifikasjons- og deteksjonskjøringen. J. Når amplifikasjons- og deteksjonskjøringen er fullført, last ut mikrobrønnplaten fra cobas z 480-analysatoren. K. Følg instruksjonene i operatørmanualen for cobas 4800-systemet for å gjennomgå og godta resultatene NO 10 Doc Rev. 3.0

11 Tolking av resultater MERK: All analyse- og analyseserievalidering utføres av cobas 4800-programvaren. MERK: En gyldig analyseserie kan omfatte både gyldige og ugyldige prøveresultater. Prøveresultater fra gyldige analyseserier tolkes som vist i Tabell 1 og 2: Tabell 1 Tolkning av resultater med cobas 4800 HPV-testen for å bestemme tilstedeværelse av HPV-DNA cobas 4800 HPV Test Resultatrapport og tolkning Deltest "HPV High Risk Panel": Høyrisiko-HPV-positiv HR HPV POS Prøven er positiv for DNA for én av eller en kombinasjon av følgende høyrisiko-hpv-typer: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. Høyrisiko-HPV-negativ* HR HPV NEG DNA for HPV-typene 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 og 68 ble ikke detektert eller var under den forhåndsinnstilte grensen. Høyrisiko-HPV ugyldig Invalid Resultatene er ugyldige. Den originale prøven bør testes på nytt for å få gyldig resultat. Ingen resultat for prøve Failed Se operatørmanualen for cobas 4800-systemet for instruksjoner om gjennomgang av flagg for analyseserier og anbefalte tiltak. Den originale prøven bør testes på nytt for å få gyldig resultat. Deltest "HPV High Risk Panel Plus Genotyping": Other HR HPV POS, HPV16 POS, HPV18 POS Other HR HPV POS, HPV16 POS, HPV18 NEG Other HR HPV POS, HPV16 NEG, HPV18 POS Other HR HPV POS, HPV16 NEG, HPV18 NEG Other HR HPV NEG, HPV16 POS, HPV18 POS Other HR HPV NEG, HPV16 NEG, HPV18 POS Other HR HPV NEG, HPV16 POS, HPV18 NEG Other HR HPV NEG, HPV16 NEG, HPV18 NEG Invalid Failed Andre høyrisiko-hpv-positive, HPV16-positive, HPV18-positive. Prøven er positiv for DNA for HPV-type 16 og 18 og for DNA for én av eller en kombinasjon av følgende høyrisiko- HPV-typer: 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. Andre høyrisiko-hpv-positive, HPV16-positive, HPV18-negative*. Prøven er positiv for DNA for HPV-type 16 og for DNA for én av eller en kombinasjon av følgende høyrisiko-hpvtyper: 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. DNA for HPV-type 18 ble ikke detektert eller var under den forhåndsinnstilte grensen. Andre høyrisiko-hpv-positive, HPV16-negative*, HPV18-positive. Prøven er positiv for DNA for HPV-type 18 og for DNA for én av eller en kombinasjon av følgende høyrisiko-hpvtyper: 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. DNA for HPV-type 16 ble ikke detektert eller var under den forhåndsinnstilte grensen. Andre høyrisiko-hpv-positive, HPV16-negative*, HPV18-negative*. Prøven er positiv for DNA for én av eller en kombinasjon av følgende høyrisiko-hpv-typer: 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. DNA for HPV-type 16 og 18 ble ikke detektert eller var under den forhåndsinnstilte grensen. Andre høyrisiko-hpv-negative*, HPV16-positive, HPV18-positive. DNA for HPV-typene 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 og 68 ble ikke detektert eller var under den forhåndsinnstilte grensen. Prøven er positiv for DNA for HPV-type 16 og 18. Andre høyrisiko-hpv-negative*, HPV16-negative*, HPV18-positive. DNA for HPV-typene 16, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 og 68 ble ikke detektert eller var under den forhåndsinnstilte grensen. Prøven er positiv for DNA for HPV-type 18. Andre høyrisiko-hpv-negative*, HPV16-positive, HPV18-negative*. DNA for HPV-typene 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 og 68 ble ikke detektert eller var under den forhåndsinnstilte grensen. Prøven er positiv for DNA for HPV-type 16. Andre høyrisiko-hpv-negative*, HPV16-negative*, HPV18-negative*. DNA for HPV-typene 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 og 68 ble ikke detektert eller var under den forhåndsinnstilte grensen. Ugyldig. Resultatene er ugyldige. Den originale prøven bør testes på nytt for å få gyldige resultater. Ingen resultat for prøve Se operatørmanualen for cobas 4800-systemet for instruksjoner om gjennomgang av flagg for analyseserier og anbefalte tiltak. Den originale prøven bør testes på nytt for å få gyldige resultater. * Et negativt resultat utelukker ikke tilstedeværelsen av HPV-infeksjon, fordi resultatene er avhengig av korrekt prøvetaking, fravær av inhibitorer og tilstrekkelig DNA til at det kan påvises NO 11 Doc Rev. 3.0

12 Tabell 2 Tolkning av resultater med cobas 4800 HPV-testen for pasienter med cytologiske anomalier Resultater Tolkning Other HR HPV* NEG, HPV16 NEG, HPV18 NEG Svært liten sannsynlighet for underliggende CIN2. Other HR HPV* POS, HPV16 NEG, HPV18 NEG Økt sannsynlighet for at underliggende CIN2 vil bli detektert med kolposkopi. HPV16 POS and/or HPV18 POS Høyest sannsynlighet for at underliggende CIN2 vil bli detektert med kolposkopi 32, 33. * Andre HR HPV-DNA inkluderer følgende typer: 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. MERK: HPV-negative resultater betyr ikke at kvinner ikke skal gå videre til kolposkopi. MERK: I tillegg til resultatene i tabellene ovenfor, er også ugyldige resultater for én eller flere kombinasjoner mulig. Hvis det oppnås et slikt resultat, for eksempel: Other HR HPV NEG, HPV16 POS, HPV18 Invalid Det positive og negative resultatet skal tolkes som vist i Tabell 1. I dette eksemplet er HPV 18-resultatene ugyldige. Den originale prøven bør testes på nytt for å få gyldige resultater. MERK: Negative resultater indikerer at HPV-DNA-konsentrasjoner ikke ble detektert eller var under den forhåndsinnstilte grensen. MERK: Positive testresultater indikerer tilstedeværelse av én eller flere av høyrisikotypene, men siden pasienter ofte også er infisert med lavrisikotyper, utelukker det ikke tilstedeværelse av lavrisikotyper hos pasienter med blandede infeksjoner. MERK: Testresultatene skal bare tolkes i sammenheng med opplysninger fra klinisk vurdering av pasienten og pasientanamnesen. KVALITETSKONTROLL Ett sett med positive og negative kontroller for cobas 4800-HPV-testen er inkludert i hver analyseserie. For alle analyseserier må det innhentes resultater for både den positive og den negative kontrollen for at cobas 4800-programvaren skal kunne vise de rapporterbare resultatene for cobas 4800 HPV-testen for den aktuelle analyseserien. Positiv kontroll Resultatet av HPV (+)-kontrollen må være "Valid". Hvis resultatene for HPV (+)-kontrollen konsekvent er ugyldige, kontakt ditt lokale Roche-kontor for teknisk assistanse. Negativ kontroll Resultatene av ( )-kontrollen må være "Valid". Hvis resultatene for ( )-kontrollen konsekvent er ugyldige, kontakt ditt lokale Roche-kontor for teknisk assistanse. FORSIKTIGHETSREGLER Som for andre laboratorieprosedyrer er god laboratorieteknikk essensielt for å sikre optimal ytelse for denne analysen. På grunn av testens høye analytiske sensitivitet må det utvises aktsomhet for å sikre at reagenser og amplifikasjonsblandinger ikke kontamineres. TESTENS BEGRENSNINGER 1. cobas 4800 HPV-testen detekterer DNA for høyrisikotypene 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 og 68. Denne testen detekterer ikke DNA for HPV-lavrisikotyper (f.eks. 6, 11, 42, 43, 44), siden det ikke er noen klinisk nytteverdi i å teste for lavrisiko-hpv-typer cobas 4800 HPV-testen for deteksjon av humant papillomavirus type 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 og 68 anbefales ikke for evaluering av mistenkt seksuelt overgrep. 3. Ytelsen til cobas 4800 HPV-testen er ikke tilstrekkelig godt fastslått for personer som er vaksinert mot HPV Prevalensen av HPV-infeksjon i en populasjon kan påvirke ytelsen. Positive, prediktive verdier synker ved testing av populasjoner med lav prevalens eller individer uten risiko for smitte. 5. HPV-infeksjon er ingen indikasjon på cytologisk HSIL eller underliggende høygradig CIN, og betyr heller ikke at det vil utvikles CIN2-3 eller kreft. De fleste kvinner som er smittet med én eller flere høyrisiko-hpv-typer, vil ikke utvikle CIN2-3 eller kreft. 6. Et negativt resultat av testing for høyrisiko-hpv utelukker ikke muligheten for fremtidig cytologisk HSIL eller underliggende CIN2-3 eller kreft. 7. Test kun de angitte prøvematerialene. cobas 4800 HPV-testen er bare validert for bruk med livmorhalsprøver tatt i cobas PCRcelleinnsamlingsmedium, PreservCyt-løsning eller SurePath-konserveringsvæske. 8. Deteksjon av høyrisiko-hpv er avhengig av antall kopier som er til stede i prøven, og kan påvirkes av prøvetakingsmetode, pasientfaktorer, infeksjonsstadium og tilstedeværelse av interfererende substanser. 9. Beta-globin-amplifikasjon og -deteksjon er inkludert i cobas 4800 HPV-testen for å differensiere HPV-negative prøver fra prøver som ikke viser HPV-signaler på grunn av utilstrekkelig cellemasse i prøven. Alle HPV-negative prøver må ha et gyldig beta-globin-signal innenfor et forhåndsdefinert område for å kunne identifiseres som gyldige negative resultater av cobas 4800-systemet. 10. Pålitelige resultater er avhengig av adekvat prøvetaking, transport, oppbevaring og håndtering. Følg prosedyrene i dette pakningsvedlegget, pakningsvedleggene for cobas PCR-celleinnsamlingsmedium og operatørmanualen for cobas 4800-systemet. 11. Tilsetning av AmpErase-enzym i cobas 4800 HPV Master Mix muliggjør selektiv amplifikasjon av mål-dna. Kontaminering av reagensene kan imidlertid bare unngås gjennom gode laboratorierutiner og ved å følge prosedyrene som er spesifisert i dette pakningsvedlegget nøye. 12. Dette produktet må kun brukes av personell som er opplært i PCR-teknikk og bruken av cobas 4800-systemet. 13. Kun cobas x 480-instrumentet og cobas z 480-analysatoren er validert for bruk med dette produktet. Ingen andre prøveprepareringsinstrumenter eller PCR-systemer kan brukes med dette produktet NO 12 Doc Rev. 3.0

13 14. På grunn av iboende forskjeller mellom teknologier anbefales det at brukerne utfører metodekorrelasjonsstudier i laboratoriet for å bestemme de teknologiske forskjellene før en ny teknologi tas i bruk. 15. Effekten av andre mulige variabler, som f.eks. utflod, tampongbruk, utskylling osv., samt prøvetakingsvariabler, er ikke evaluert. 16. Selv om det er sjelden, kan mutasjoner innenfor de høykonserverte regionene av det genomiske DNA for humant papillomavirus som cobas 4800 HPV-testens primere og/eller prober er rettet mot, resultere i manglende evne til å detektere tilstedeværelse av virusets DNA. 17. Tilstedeværelse av PCR-hemmere kan føre til falske negative eller ugyldige resultater. 18. Cervikale prøver har ofte synlige, detekterbare nivåer av fullblod, som vises som rosa eller lysebrun farge. Slike prøver behandles på normal måte i cobas 4800-systemet. Hvis konsentrasjonen av fullblod overskrider 2 % (mørkerød eller brun farge) i cobas PCR celleinnsamlingsmedium eller PreservCyt-løsning, er det sannsynlighet for at det vil oppnås et falskt negativt resultat. 19. Bruk av Replens vaginalgel er forbundet med falske negative resultater i SurePath-konserveringsvæske. EVALUERING AV ANALYTISK YTELSE Ytelsessammenligning med en CE-merket komparator-hpv-test Klinisk sensitivitet og spesifisitet for sykdomsstatus ( CIN2) ble bestemt for cobas 4800 HPV-testen og en CE-merket komparator-hpv-test i en populasjon av kvinner fra 21 år og oppover med ASC-US-cytologiresultater, som ble bestemt ved rutinemessig screening for livmorhalskreft. Alle testene ble utført med livmorhalsprøver i PreservCyt-løsning. Til sammen 855 kvinner med et initialt ASC-US-cytologiresultat gjennomgikk kolposkopi. Kvinnenes sykdomsstatus ble bekreftet med et sentralt patologigranskningspanel fra biopsiprøvene som ble tatt under kolposkopi. Resultatene for en ASC-US-populasjon er oppsummert i Tabell 3. Tabell 3* Beregninger av sensitivitet og spesifisitet for livmorhalssykdom ( CIN2 med sentral patologigranskning) for cobas 4800 HPV-testen og en CE-merket komparator-hpv-test i en ASC-US-populasjon Parameter Sensitivitet (N = 42) Spesifisitet (N = 813) cobas 4800 HPV-test CE-merket komparator-hpv-test Estimat (%) 95 % CI Estimat (%) 95 % CI 92,9 (81,0; 97,5) 83,3 (69,4; 91,7) 71,0 (67,8; 74,0) 72,0 (68,8; 74,9) * Pasientdataene i Tabell 3 er utarbeidet ut fra et delsett av pasientpopulasjonen som ble brukt ved den amerikanske kliniske HPV-studien (evaluering av cobas 4800 HPV-testen for deteksjon av høygradig livmorhalssykdom hos kvinner som gjennomgikk rutinemessig screening for livmorhalskreft). Hos kvinner 30 år med normal cytologi er risikoen for livmorhalssykdom ( CIN2) 7,9 ganger høyere med et høyrisiko-positivt resultat med cobas 4800 HPV-testen enn med et negativt resultat med cobas 4800 HPV-testen. Relative risikoestimater og deres 95 % konfidensintervaller vises i Tabell 4. For kvinner fra 30 år og oppover kan cobas 4800 HPV-testen brukes til å vurdere tilstedeværelse eller fravær av HPV-genotypene 16 og 18. Risikoen for livmorhalssykdom ( CIN2) er 14,4 ganger høyere med et HPV16- og/eller HPV18-positivt resultat med cobas 4800 HPV-testen enn med et negativt resultat, og risikoen er 2,4 ganger høyere med et HPV16- og/eller HPV18-positivt resultat med cobas 4800 HPV-testen sammenlignet med et positivt resultat for de 12 andre høyrisikotypene med cobas 4800 HPV-testen. I alle tilfellene overskrider den nedre grensen for 95 %- konfidensintervallet 1, noe som antyder en statistisk høyere risiko for å utvikle livmorhalssykdom med et positivt resultat med HPV-testen. Tabell 4 Relativ risiko for livmorhalssykdom ( CIN2 med sentral patologigranskning) hos kvinner 30 år med normal cytologi** Bootstrap-estimater HPV-resultat Estimat av relativ 95 % CI LL 95 % CI UL risiko Pos. vs. neg. 7,9 3,6 136,2 16+/18+ vs. neg. 14,4 6,0 240,0 16+/18+ vs. 12 andre HR+ 2,4 1,4 3,8 ** Pasientdataene i Tabell 4 er utarbeidet ut fra et delsett av pasientpopulasjonen som ble brukt ved den amerikanske kliniske HPV-studien (evaluering av cobas 4800-testen for deteksjon av høygradig livmorhalssykdom hos kvinner som gjennomgikk rutinemessig screening for livmorhalskreft). Deteksjonsgrense Deteksjonsgrensen (LOD) for høyrisiko-hpv-genotypene HPV16, HPV18 og HPV31 ble bestemt for cobas 4800 HPV-testen. Deteksjonsgrensene ble vurdert ved bruk av 1) plasmider av HPV31, HPV16 og HPV18 i bakgrunnen av poolede HPV-negative pasientprøver som var tatt i PreservCyt-løsning og SurePath-konserveringsvæske, og 2) HPV-positive cellelinjer SiHa (HPV16) og HeLa (HPV18) i PreservCyt-løsning og SurePath-konserveringsvæske som inneholdt en bakgrunn med HPV-negativ cellelinje (HCT-15). Plasmid og cellelinjer ble fortynnet til konsentrasjonene nedenfor, over og ved de forventede deteksjonsgrensenivåene. Et minimum på 60 replikater ble testet for hvert plasmid eller hvert cellelinjenivå i både PreservCyt-løsning og SurePath-konserveringsvæske for hver av de 3 reagenslotene. Deteksjonsgrensen er nivået av HPV-DNA i prøven som har positive testresultater minst 95 % av tiden. Tabell 5 og 6 viser resultatene fra reagensloten som produserte den mest konservative (høyeste) deteksjonsgrensen i analysen for henholdsvis PreservCyt-løsning og SurePath-konserveringsvæske NO 13 Doc Rev. 3.0