240 Tests P/N: cobas 4800 System Wash Buffer Kit 960 Tests P/N: c4800 WB

Transkript

1 cobas 4800 HPV Test FOR BRUK TIL IN VITRO-DIAGNOSTIKK. cobas 4800 System Sample Preparation Kit c4800 SMPL PREP 960 Tests P/N: Tests P/N: cobas 4800 HPV Amplification/Detection Kit c4800 HPV AMP/DET 960 Tests P/N: Tests P/N: cobas 4800 HPV Controls Kit c4800 HPV CTLS 10 Sets P/N: cobas 4800 System Liquid Cytology Preparation Kit c4800 LIQ CYT 960 Tests P/N: Tests P/N: cobas 4800 System Wash Buffer Kit 960 Tests P/N: c4800 WB 240 Tests P/N: MERK: Kjøp av dette produktet gir kjøperen tillatelse til å bruke det for amplifikasjon og deteksjon av nukleinsyresekvenser ved polymerasekjedereaksjon (PCR) og relaterte prosesser for in vitro-diagnostikk på humane prøver. Kjøpet gir ingen generelle patent- eller andre lisensrettigheter bortsett fra bruksretten til dette produktet. TILTENKT BRUK cobas 4800 humant papillomavirus-testen (HPV-testen) er en kvalitativ in vitro-test for deteksjon av humant papillomavirus i pasientprøver. Testen bruker amplifikasjon av mål-dna med polymerasekjedereaksjon (PCR) og nukleinsyrehybridisering for deteksjon av 14 høyrisiko (HR) HPV-typer i en enkelt analyse. Testen identifiserer spesifikt HPV 16 og HPV 18, samtidig som den detekterer høyrisikotypene (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 og 68) ved klinisk relevante infeksjonsnivåer. Prøver er begrenset til cervikale celler som er innsamlet i cobas PCR celleinnsamlingsmedium (Roche Molecular Systems, Inc.), PreservCyt -løsning (Hologic Corp.) og SurePath TM -konserveringsvæske (BD Diagnostics-TriPath). Indikasjoner for bruk av cobas 4800 HPV-testen er: (a) cobas 4800 HPV-testen er indikert for bruk ved screening av pasienter med ASC-US cervikale cytologiresultater (atypiske skvamøse celler med usikker signifikans) for å avgjøre om det er behov for henvisning til kolposkopi. (b) cobas 4800 HPV-testen er indikert for bruk ved screening av pasienter med ASC-US cervikale cytologiresultater for å vurdere tilstedeværelse eller fravær av høyrisiko-hpv-typene 16 og 18. (c) cobas 4800 HPV-testen er indikert for bruk sammen med cervikal cytologi for å vurdere tilstedeværelse av høyrisiko HPV-typer. (d) cobas 4800 HPV-testen er indikert for bruk sammen med cervikal cytologi for å vurdere tilstedeværelse av HPV-typer 16 og 18. (e) cobas 4800 HPV-testen er indikert for bruk ved førstelinjes primær screeningtest til å identifisere kvinner med økt risiko for utvikling av livmorhalskreft eller tilstedeværelse av høygradig sykdom. (f) cobas 4800 HPV-testen er indikert for bruk som førstelinjes primær screeningtest for å vurdere tilstedeværelse av HPV-typer 16 og 18. Resultatene fra cobas HPV-testen, sammen med legens vurdering av cytologisk historikk, andre risikofaktorer og profesjonelle retningslinjer, kan brukes som en veiledning i pasientbehandlingen. Resultatene av cobas HPV-testen er ikke ment å hindre kvinner i å gå videre til kolposkopi. OPPSUMMERING OG FORKLARING AV TESTEN Persisterende infeksjon med humant papillomavirus (HPV) er den årsaken til livmorhalskreft og forstadiet cervikal intraepitelial neoplasi (CIN) 1 3. Tilstedeværelsen av HPV er blitt knyttet til mer enn 99 % av tilfellene av cervikale kreftformer over hele verden 3. HPV er et lite, ikke-innkapslet, dobbelttrådet DNA-virus med et genom på omtrent 8000 nukleotider. Det finnes mer enn 118 forskjellige typer av HPV 4,5 og omtrent 40 forskjellige HPV-er som kan infisere anogenitale slimhinner hos mennesker 6,7. Men bare en mindre gruppe på 13 til 18 av disse typene anses som høyrisikotyper for utvikling av livmorhalskreft og lesjonene i forstadiet 3,8-13. I en analyse av data fra en flersenters kasuskontrollstudie utført av International Agency of Research on Cancer (IARC), var den poolede oddsratioen (OR) for livmorhalskreft med skvamøse celler med HPV-infeksjon 158,2 da analysen var begrenset til studier der det ble benyttet godt validerte teknikker for HPV-deteksjon 12. I denne studien var oddsratioen for livmorhalskreft fra 109 til 276 i studier fra ulike deler av verden 12. Selv om persisterende infeksjon med høyrisiko (HR) HPV er en forutsetning for livmorhalskreft og lesjonene i forstadiet, er det bare en liten prosentandel av infeksjonene som utvikles til slike sykdomsstadier. Seksuelt overførbare infeksjoner med HPV er ekstremt vanlig; det er estimert at opptil 75 % av alle kvinner på et eller annet tidspunkt blir eksponert for HPV 14. Imidlertid vil > 90 % av infiserte kvinner aktivere en effektiv immunrespons og bli kvitt infeksjonen i løpet av 6 til 24 måneder uten noen langsiktige helsekonsekvenser En infeksjon med hvilken som helst HPV-type kan produsere cervical intraepitelial neoplasi (CIN), selv om dette også vanligvis vil elimineres når HPV-infeksjonen er borte 21. I utviklede land med screeningprogrammer for livmorhalskreft er PAP-utstryk blitt brukt siden midten av 1950-tallet som den viktigste metoden for å oppdage tidlige tegn på livmorhalskreft. Selv om den har senket dødstallene grunnet livmorhalskreft dramatisk i disse landene, krever PAP-metoden at resultatene tolkes av svært godt øvede cytopatologer, og det er en relativt unøyaktig test med høy andel av falske negative resultater. Cytologiske uregelmessigheter som blir funnet med PAP-metoden, er som regel forårsaket av infeksjon med HPV, men diverse inflammatoriske variasjoner eller prøvetakingsvariasjoner kan forårsake falske positive PAP-resultater. Utredning av en uregelmessig PAP-test omfatter gjentatt testing, kolposkopi og biopsi. En histologisk bekreftet høygradig lesjon må fjernes kirurgisk for å hindre utviklingen av invasiv livmorhalskreft. Avsnittet for informasjon om dokumentrevisjon er plassert ved slutten av dette dokumentet NO 1 Doc Rev. 14.0

2 Papillomavirus er svært vanskelig å dyrke in vitro, og ikke alle pasienter med HPV har en påvisbar antistoffrespons. Nukleinsyre (DNA)-testing av PCR er en ikke-invasiv metode for å påvise tilstedeværelsen av en cervikal HPV-infeksjon. Implementering av HPV DNA-testing har økt effektiviteten av screeningprogrammer for livmorhalskreft ved å oppdage høyrisiko-lesjoner tidligere hos kvinner fra 30 år og oppover med NILM-cytologi og ved å redusere behovet for unødvendig kolposkopi og behandling hos pasienter fra 21 år og oppover med ASC-US-cytologi. Videre har den overlegne sensitiviteten til HPV-testing over PAP-utstryk for påvisning av høygradig sykdom i en screeningpopulasjon blitt godt dokumentert 22,23. Med fastslått overlegen sensitivitet, har HPV DNA-testing som en førstelinjes primær screeningtest blitt foreslått og tatt i bruk i noen screeningprogrammer. TESTPRINSIPPER cobas 4800 HPV-testen er basert på to hovedprosesser: (1) automatisk prøvepreparering for samtidig ekstraksjon av HPV og cellulært DNA, (2) PCRamplifikasjon 24 av mål-dna-sekvenser ved bruk av både HPV og -globinspesifikke komplementære primerpar og sanntidsdeteksjon av splittede fluorescensmerkede HPV- og -globinspesifikke oligonukleotid-deteksjonsprober. Samtidig ekstraksjon, amplifikasjon og deteksjon av -globin i cobas 4800 HPV-testen overvåker hele testprosessen. Master Mix-reagenset for cobas 4800 HPV-testen inneholder primerpar og prober som er spesifikke for de 14 høyrisiko HPV-typene og -globin DNA. Deteksjonen av amplifisert DNA (amplikon) utføres under termosykliske trinn ved bruk av oligonukleotidprober som er merket med fire ulike fluoroforer. Det amplifiserte signalet fra tolv høyrisiko HPV-typer (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 og 68) detekteres ved hjelp av samme fluorofor, mens HPV16-, HPV18- og -globinsignalene detekteres med sine egne dedikerte fluoroforer. Prøvepreparering Prøveprepareringen for cobas 4800 HPV-testen er automatisk og skjer med bruk av cobas x 480-instrumentet. Livmorhalsprøver som er tatt i cobas PCR celleinnsamlingsmedium, PreservCyt -løsning eller SurePath TM -konserveringsvæske, opptas under denatureringsforhold ved høye temperaturer og lyseres deretter under tilstedeværelse av kaotropisk reagens. Frigjorte HPV-nukleinsyrer, sammen med -globin-dna som fungerer som prosesskontroll, blir renset ved absorpsjon til magnetiske glasspartikler, vasket og til slutt separert fra disse partiklene, slik at de er klargjorte for PCR-amplifikasjon og deteksjon. PCR-amplifikasjon Valg av mål cobas 4800 HPV-testen bruker primere for å definere en sekvens med ca. 200 nukleotider innenfor den polymorfe L1-regionen av HPV-genomet. En pool med HPV-primere som er til stede i Master Mix, amplifiserer HPV-DNA fra 14 høyrisikotyper (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 og 68) 3,8-13,25. Fluorescerende oligonukleotidprober bindes til de polymorfe regionene i sekvensen som er definert av disse primerne. Et ekstra primerpar og probe er rettet mot det humane -globin-genet (330 bp-amplikon) for å gi en prosesskontroll. Målamplifikasjon EagleZ05 DNA-polymerase 26, en kjemisk modifisert versjon av Thermus species Z05 DNA-polymerase 27, benyttes til "hot start"-amplifikasjon av HPVmålene og -globinkontroll. Først varmes PCR-reaksjonsblandingen opp for å aktivere EagleZ05 DNA-polymerase for å denaturere virus-dna og genomisk DNA og for å eksponere primermålsekvensene. Når blandingen kjøles ned, hybridiseres oppstrøms- og nedstrømsprimere til mål-dnasekvensene. I nærvær av divalent metallion og dntp i overskudd forlenger EagleZ05 DNA-polymerase primeren(e), og en ny DNA-tråd syntetiseres. Dette avslutter den første PCR-syklusen og gir en dobbelttrådet DNA-kopi av målregionen for HPV-genomet og -globin-genet. DNA-polymerase forlenger de hybridiserte primerne langs måltemplatene og produserer et dobbelttrådet HPV mål-dna-molekyl med ca. 200 basepar, eller et -globin DNA-molekyl med ca. 330 basepar, som kalles et amplikon. Denne prosessen gjentas i et bestemt antall sykluser, der hver syklus effektivt dobler mengden amplikon-dna. Amplifikasjon skjer kun i den delen av HPV-genomet og/eller -globin-genet som ligger mellom de tilsvarende primerparene. Hele genomet blir ikke amplifisert. Automatisk sanntidsdeteksjon cobas 4800 HPV-testen anvender sanntids 29,30 PCR-teknologi. Hver oligonukleotidprobe i reaksjonen er merket med et rapporteringsfluorofor og et slukkerfluorofor, som slukker fluorescensutstrålingene fra fluoroforet i en intakt probe. Etter hvert som amplifikasjonen skjer, bindes prober som er komplementære til amplikonet, til spesifikke enkelttrådete DNA-sekvenser og splittes av 5 til 3 -nukleaseaktivitet hos EagleZ05 DNA-polymerasen. Så snart rapporteringsfluoroforet er separert fra slukkerfluoroforet av denne nukleaseaktiviteten, sender det ut fluorescens med en karakteristisk bølgelengde når det eksiteres av riktig lysspektrum. Denne karakteristiske bølgelengden for hvert fluorofor gjør det mulig å måle HPV16-amplikon, HPV18-amplikon, andre HR-amplikoner (31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 og 68) og -globin-kontrollen uavhengig, siden probene som er spesifikke for disse sekvensene, er merket med ulike fluoroforer. Selektiv amplifikasjon Selektiv amplifikasjon av målnukleinsyre fra den kliniske prøven oppnås i cobas 4800 HPV-testen ved hjelp av AmpErase-enzym (uracil-nglykosylase) og deoksyuridintrifosfat (dutp). AmpErase-enzymet gjenkjenner og katalyserer destruksjon av DNA-tråder som inneholder deoksyuridin 28, men ikke DNA som inneholder deoksytymidin. Deoksyuridin finnes ikke i naturlig forekommende DNA, men finnes alltid i amplikon som følge av bruken av deoksyuridintrifosfat i stedet for tymidintrifosfat som en av dntp-ene i Master Mix-reagenset. Derfor er det kun amplikon som inneholder deoksyuridin. Deoksyuridin gjør kontaminerende amplikon mottakelig for destruksjon ved hjelp av AmpErase-enzymet forut for amplifikasjon av mål- DNA. AmpErase-enzymet, som inngår i Master Mix-reagenset, katalyserer nedbrytning av DNA som inneholder deoksyuridin, ved å bryte deoksyuridingruppens deoksyribosekjede i C1-posisjonen. Ved temperaturøkning i det første varmetrinnet brytes amplikon-dna-kjeden der deoksyuridinet finnes, noe som igjen fører til at DNA ikke lenger er amplifiserbart. AmpErase-enzymet er inaktivt ved temperaturer over 55 C, dvs. gjennom alle termosykliske trinn, og derfor blir ikke målamplikon ødelagt. AmpErase-enzym i cobas 4800 HPV-testen har vist seg å kunne inaktivere minst 10 3 kopier av deoksyuridin-inneholdende HPV-amplikon per PCR NO 2 Doc Rev. 14.0

3 REAGENSER cobas 4800 System Sample Preparation Kit Prøveprepareringskit for cobas 4800-systemet (P/N: ) MGP (Magnetiske glasspartikler for cobas 4800-systemet) Magnetiske glasspartikler 93 % isopropanol Xi 93 % (vekt per vekt) isopropanol c4800 SMPL PREP 240 tester 10 x 4,5 ml F Irriterende 93 % (vekt per vekt) isopropanol Meget brannfarlig R: , S: /25-26 EB (Elueringsbuffer for cobas 4800-systemet) Tris-HCl-buffer 0,09 % natriumazid cobas 4800 System Sample Preparation Kit Prøveprepareringskit for cobas 4800-systemet (P/N: ) MGP (Magnetiske glasspartikler for cobas 4800-systemet) Magnetiske glasspartikler 93 % isopropanol Xi 93 % (vekt per vekt) isopropanol c4800 SMPL PREP 10 x 18 ml 960 tester 10 x 13,5 ml F Irriterende 93 % (vekt per vekt) isopropanol Meget brannfarlig R: , S: /25-26 EB (Elueringsbuffer for cobas 4800-systemet) Tris-HCl-buffer 0,09 % natriumazid cobas 4800 System Wash Buffer Kit Vaskebufferkit for cobas 4800-systemet (P/N: ) WB (Vaskebuffer for cobas 4800-systemet) Natriumsitratdihydrat 0,05 % N-metylisotiazolon-HCl cobas 4800 System Wash Buffer Kit Vaskebufferkit for cobas 4800-systemet (P/N: ) WB (Vaskebuffer for cobas 4800-systemet) Natriumsitratdihydrat 0,05 % N-metylisotiazolon-HCl c4800 WB c4800 WB 10 x 18 ml 240 tester 10 x 55 ml 960 tester 10 x 200 ml NO 3 Doc Rev. 14.0

4 cobas 4800 System Liquid Cytology Preparation Kit Prepareringskit for flytende cytologiske prøver for cobas 4800-systemet (P/N: ) PK (cobas 4800 proteinase K) Tris-HCl-buffer < 0,05 % EDTA Glyserol Kalsiumklorid Kalsiumacetat < 2 % proteinase K Xn < 2 % (vekt per vekt) proteinase K c4800 LIQ CYT 240 tester 10 x 0,9 ml Helseskadelig SDS (SDS-reagens for cobas 4800-systemet) Tris-HCl-buffer 0,2 % SDS 0,09 % natriumazid LYS (Lyseringsbuffer for cobas 4800-systemet) Tris-HCl-buffer 37 % guanidin HCl < 5 % polydokanol Xn 37 % (vekt per vekt) guanidin-hcl 10 x 3 ml 10 x 10 ml Helseskadelig R: 22-36/38, S: N < 5 % (vekt per vekt) polydokanol Miljøfarlig R: , S: cobas 4800 System Liquid Cytology Preparation Kit Prepareringskit for flytende cytologiske prøver for cobas 4800-systemet (P/N: ) PK (cobas 4800 proteinase K) Tris-HCl-buffer < 0,05 % EDTA Glyserol Kalsiumklorid Kalsiumacetat < 2 % proteinase K Xn < 2 % (vekt per vekt) proteinase K c4800 LIQ CYT 960 tester 20 x 1,2 ml Helseskadelig SDS (SDS-reagens for cobas 4800-systemet) Tris-HCl-buffer 0,2 % SDS 0,09 % natriumazid 10 x 9 ml NO 4 Doc Rev. 14.0

5 LYS (Lyseringsbuffer for cobas 4800-systemet) Tris-HCl-buffer 37 % guanidin HCl < 5 % polydocanol Xn 37 % (vekt per vekt) guanidin-hcl 10 x 36 ml Helseskadelig R: 22-36/38, S: N < 5 % (vekt per vekt) polydokanol Miljøfarlig R: , S: cobas 4800 HPV Amplification/Detection Kit HPV-amplifikasjons/deteksjonskit for cobas 4800 (P/N: ) HPV MMX (cobas 4800 HPV Master Mix) Trisinbuffer Kaliumacetat Kaliumhydroksid Glyserol < 0,13 % datp, dctp, dgtp, dutp < 0,01 % Oppstrøms- og nedstrøms HPV-primere < 0,01 % Oppstrøms- og nedstrøms -globin-primere < 0,01 % Fluorescensmerkede HPV-prober < 0,01 % Fluorescensmerkede -globin-prober < 0,10 % EagleZ05 DNA-polymerase (mikrobiell) < 0,10 % AmpErase-enzym (uracil-n-glykosylase) (mikrobielt) 0,09 % Natriumazid HPV Mg/Mn (cobas 4800 HPV Mg/Mn-løsning) Magnesiumacetat Manganesacetat < 0,02 % Iseddik 0,09 % natriumazid cobas 4800 HPV Amplification/Detection Kit HPV-amplifikasjons/deteksjonskit for cobas 4800 (P/N: ) HPV MMX (cobas 4800 HPV Master Mix) Trisinbuffer Kaliumacetat Kaliumhydroksid Glyserol < 0,13 % datp, dctp, dgtp, dutp < 0,01 % Oppstrøms- og nedstrøms HPV-primere < 0,01 % Oppstrøms- og nedstrøms -globin-primere < 0,01 % Fluorescensmerkede HPV-prober < 0,01 % Fluorescensmerkede -globin-prober < 0,10 % EagleZ05 DNA-polymerase (mikrobiell) < 0,10 % AmpErase-enzym (uracil-n-glykosylase) (mikrobielt) 0,09 % Natriumazid HPV Mg/Mn (cobas 4800 HPV Mg/Mn-løsning) Magnesiumacetat Manganesacetat < 0,02 % Iseddik 0,09 % natriumazid c4800 HPV AMP/DET c4800 HPV AMP/DET 240 tester 10 x 0,5 ml 10 x 1,0 ml 960 tester 20 x 1,0 ml 10 x 1,0 ml NO 5 Doc Rev. 14.0

6 cobas 4800 HPV Controls Kit c4800 HPV CTLS 10 sett HPV-kontrollkit for cobas 4800 (P/N: ) HPV (+) C 10 x 0,5 ml (HPV-positiv kontroll for cobas 4800) Tris-HCl-buffer EDTA 0,05 % natriumazid < 0,00001 % Poly ra RNA (syntetisk) < 0,00001 % ikke-infeksiøst plasmid-dna (mikrobielt) som inneholder HPV 16, 18, 39 sekvenser < 0,00001 % ikke-infeksiøst plasmid-dna (mikrobielt) som inneholderhumane -globin-sekvenser ( ) C 10 x 0,5 ml (Negativ kontroll for cobas 4800-systemet) Tris-HCl-buffer EDTA 0,05 % natriumazid < 0,00001 % Poly ra RNA (syntetisk) MERK: Merking av produktsikkerhet følger primært EUs GHS-retningslinjer. MERK: Se den riktige operatørmanualen ved behov. Brukere av programvareversjon 2.1 og nyere skal se manualen for cobas 4800-systemet og operatørmanualen for cobas HPV-testen. ADVARSLER OG FORHOLDSREGLER A. FOR BRUK TIL IN VITRO-DIAGNOSTIKK. B. Denne testen skal brukes til livmorhalsprøver som er tatt med cobas PCR celleinnsamlingsmedium, PreservCyt -løsning og SurePath TM - konserveringsvæske. C. Ikke bruk munnpipettering. D. Ikke spis, drikk eller røyk i laboratoriets arbeidsområder. Bruk beskyttende engangshansker, laboratoriefrakk og vernebriller når du håndterer prøver og reagenser. Vask hendene nøye etter håndtering av prøver og reagenser. E. Unngå mikrobiell kontaminering og DNA-kontaminering av reagenser. F. Kasser ubrukte reagenser og avfall i samsvar med nasjonale, regionale og lokale forskrifter. G. Bruk ikke reagenser etter utløpsdatoen. H. Ikke bland reagenser fra ulike kilder. I. Dataark om materialsikkerhet (MSDS) kan på forespørsel sendes fra ditt lokale Roche-kontor. J. Hansker må brukes, og de må byttes mellom håndtering av prøver og cobas 4800-reagenser for å unngå kontaminering. K. Prøver må håndteres som smittebærende, og sikre laboratorierutiner må følges. Disse er beskrevet i Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories 31 og i CLSI-dokumentet M29-A3 32. L. LYS inneholder guanidinhydroklorid. Guanidinhydroklorid må ikke komme i direkte kontakt med natriumhypokloritt (blekemiddel) eller andre svært reaktive reagenser, som syrer eller baser. Slike blandinger kan produsere en giftig gass. Hvis væske som inneholder guanidinhydroklorid, søles, må du rengjøre med passende laboratorierengjøringsmiddel og vann. Hvis det søles væske med potensielt infeksiøse agens, rengjør det affiserte området FØRST med laboratorierengjøringsmiddel og vann, og deretter med 0,5 % natriumhypokloritt. M. MGP inneholder isopropanol og er svært brennbart. Hold det unna åpen ild og omgivelser der det kan produseres gnister. N. EB, SDS, HPV MMX, HPV Mg/Mn, ( ) C og HPV (+) C inneholder natriumazid. Natriumazid kan reagere med bly- og kobberrør og danne svært eksplosive metallazider. Hvis løsninger som inneholder natriumazid, helles ned i avløp i laboratoriet, må de skylles ned med store mengder vann for å unngå opphopning av azider. O. Bruk vernebriller, laboratoriefrakk og engangshansker ved håndtering av reagenser. Unngå kontakt med hud, øyne eller slimhinner. Skyll umiddelbart med mye vann hvis slik kontakt oppstår. Hvis kontaktstedet ikke blir behandlet, kan det oppstå brannskade. Fortynn med vann før du tørker opp eventuelt søl. P. Alt forbruksmateriell er laget for bare å brukes én gang. Skal ikke gjenbrukes. Q. Bruk ikke natriumhypoklorittløsning (klormiddel) til å rengjøre cobas x 480-instrumentet eller cobas z 480-analysatoren. Rengjør cobas x 480- instrumentet eller cobas z 480-analysatoren i samsvar med prosedyrene som er beskrevet i den relevante operatørmanualen for cobas R. For ytterligere advarsler, forholdsregler og prosedyrer for å redusere risikoen for kontaminasjon av cobas x 480-instrumentet eller cobas z 480- analysatoren, se den relevante operatørmanualen for cobas OPPBEVARING OG HÅNDTERING A. Ikke frys reagenser. B. Oppbevar MGP, EB, PK, SDS, LYS, HPV MMX, HPV Mg/Mn, HPV (+) C og ( ) C ved 2-8 C. Disse reagensene er stabile inntil angitt utløpsdato. C. Oppbevar WB ved C. Dette reagenset er stabilt inntil angitt utløpsdato NO 6 Doc Rev. 14.0

7 MATERIELL SOM MEDFØLGER A. cobas 4800 System Sample Preparation Kit c4800 SMPL PREP 240 tester Prøveprepareringskit for cobas 4800-systemet (P/N: ) MGP (Magnetiske glasspartikler for cobas 4800-systemet) EB (Elueringsbuffer for cobas 4800-systemet) B. cobas 4800 System Sample Preparation Kit 960 tester Prøveprepareringskit for cobas c4800 SMPL PREP 4800-systemet (P/N: ) MGP (Magnetiske glasspartikler for cobas 4800-systemet) EB (Elueringsbuffer for cobas 4800-systemet) C. cobas 4800 System Wash Buffer Kit c4800 WB 240 tester Vaskebufferkit for cobas 4800-systemet (P/N: ) WB (Vaskebuffer for cobas 4800-systemet) D. cobas 4800 System Wash Buffer Kit c4800 WB 960 tester Vaskebufferkit for cobas 4800-systemet (P/N: ) WB (Vaskebuffer for cobas 4800-systemet) E. cobas 4800 HPV Amplification/Detection Kit c4800 HPV AMP/DET 240 tester HPV-amplifikasjons/deteksjonskit for cobas 4800 (P/N: ) HPV MMX (cobas 4800 HPV Master Mix) HPV Mg/Mn (cobas 4800 HPV Mg/Mn-løsning) F. cobas 4800 HPV Amplification/Detection Kit c4800 HPV AMP/DET 960 tester HPV-amplifikasjons/deteksjonskit for cobas 4800 (P/N: ) HPV MMX (cobas 4800 HPV Master Mix) HPV Mg/Mn (cobas 4800 HPV Mg/Mn-løsning) G. cobas 4800 System Liquid Cytology Preparation Kit c4800 LIQ CYT 240 tester Prepareringskit for flytende cytologiske prøver for cobas 4800-systemet (P/N: ) PK (cobas 4800 proteinase K) SDS (SDS-reagens for cobas 4800-systemet) LYS (Lyseringsbuffer for cobas 4800-systemet) H. cobas 4800 System Liquid Cytology Preparation Kit c4800 LIQ CYT 960 tester Prepareringskit for flytende cytologiske prøver for cobas 4800-systemet (P/N: ) PK (cobas 4800 proteinase K) SDS (SDS-reagens for cobas 4800-systemet) LYS (Lyseringsbuffer for cobas 4800-systemet) NO 7 Doc Rev. 14.0

8 I. cobas 4800 HPV Controls Kit c4800 HPV CTLS 10 sett HPV-kontrollkit for cobas 4800 (P/N: ) HPV (+) C (HPV-positiv kontroll for cobas 4800) ( ) C (Negativ kontroll for cobas 4800-systemet) MATERIELL SOM KREVES, MEN SOM IKKE MEDFØLGER Håndtering av prøver og reagenser cobas PCR celleinnsamlingsmedium (Roche P/N , valgfritt) CO-RE-spisser, 1000 µl, stativ med 96 (Roche P/N eller Hamilton P/N ) 50 ml reagensreservoar (Roche P/N ) 200 ml reagensreservoar (Roche P/N ) For HPV ASAP v2.0.1, bruk ekstraksjonsplate for cobas 4800 System (dypbrønn) 1,6 ml (Roche P/N ) For HPV ASAP v2.1, bruk ekstraksjonsplate for cobas 4800 System (dypbrønn) 2,0 ml (Roche P/N: ) AD-plate (mikrobrønnplate) 0,3 ml og forseglingsfilm for cobas 4800-systemet (Roche P/N ) Pose for fastavfall [Roche P/N (liten) eller (stor)] Hamilton STAR plastsjakt (Roche P/N ) Rør 13 ml rundbunnet (Roche P/N ), for bruk som sekundærprøverør Hetter, nøytral farge (Roche P/N , for å sette hetter på prøver etter analysering i 13 ml rundbunnede rør) Engangshansker, uten pudder Instrumentering og programvare cobas x 480-instrumentet cobas z 480-analysatoren cobas 4800-systemets kontrollenhet med systemprogramvareversjon 2.1 eller nyere cobas 4800-systemet cobas HPV AP programvareversjon 2.0 eller nyere Tilleggsutstyr og materiell cobas -prøveklargjøringsbuffer (Roche P/N ; tris-hcl buffer, 0,4 % SDS, 0,09 % natriumazid) Pipetter: kapasitet for å levere 1000 µl Aerosolbarriere DNase-frie spisser: kapasitet for å levere 1000 µl Sentrifuge med svingrotor med minimum RCF av 1500 Frittstående magnetplate (Roche P/N ) Vortexmixer (enkeltrør) Vortexmixer med flere rør [f.eks. VWR P/N ] Varmebestandige strekkodeetiketter (RACO Industries, kat.nr. RAC ) Termometer 20/150 C (VWR, kat.nr ) eller tilsvarende Digital varmeblokk 120 V (VWR, kat.nr ) eller tilsvarende Varmeblokkmodul med 12 hull, 16 mm (VWR, kat.nr ) eller tilsvarende TAKING, TRANSPORT OG OPPBEVARING AV PRØVER MERK: Alle prøver må behandles som om de er potensielt smittebærende. A. Taking av prøver Livmorhalsprøver som er tatt i cobas PCR celleinnsamlingsmedium, PreservCyt -løsning eller SurePath TM -konserveringsvæske, er validert for bruk med cobas 4800 HPV-testen. Følg produsentens anvisninger for å ta livmorhalsprøver. B. Transport av prøver Livmorhalsprøver som er tatt i cobas PCR celleinnsamlingsmedium, PreservCyt -løsning eller SurePath TM -konserveringsvæske, kan transporteres ved 2-30 C. HPV-prøver må transporteres i samsvar med nasjonale, regionale, statlige og lokale forskrifter for transport av biologisk materiale 33. MERK: SurePath TM -prøver kan transporteres ved omgivelsestemperatur hvis total transporttid er 3 dager. Hvis SurePath TM - prøver transporteres ved omgivelsestemperatur i mer enn 3 dager, må prøvene forbehandles for å reversere matriksindusert tverrbinding før HPV-testing. C. Oppbevaring av prøver Livmorhalsprøver som er tatt i cobas PCR celleinnsamlingsmedium og PreservCyt -løsning, kan oppbevares ved 2-30 C i inntil 6 måneder etter prøvetakingsdatoen. Livmorhalsprøver som er tatt i SurePath TM -konserveringsvæske, kan oppbevares ved 2-8 C i inntil 6 måneder etter prøvetakingsdatoen. Cervikale prøver som er tatt i SurePath TM -konserveringsvæske, kan oppbevares ved C i opptil 6 uker etter prøvetakingsdatoen forutsatt at matriksinduserte kryssbindinger i SurePath TM -konserveringsvæske reverseres ved behandling med cobas -prøveklargjøringsbuffer før utførelse av HPV-tester (se avsnittet Prøver og prøvestabilitet-resultatene) NO 8 Doc Rev. 14.0

9 BRUKSANVISNING MERK: Alle reagenser unntatt HPV MMX og HPV Mg/Mn må ha romtemperatur før innlasting i cobas x 480-instrumentet. HPV MMX og HPV Mg/Mn kan tas direkte fra kjølelagringen på 2-8 C da de vil bli temperert til romtemperatur på cobas x 480-instrumentet innen de brukes i prosessen. MERK: Prøver i cobas PCR celleinnsamlingsmediuer, PreservCyt -løsning og SurePath TM -konserveringsvæske må ha romtemperatur før de lastes inn i cobas x 480-instrumentet. MERK: Se den relevante operatørmanualen for cobas 4800 for detaljert bruksanvisning. Størrelse på analyseserier: cobas 4800-systemet er utformet for å støtte cobas 4800 HPV-testen med analyseserier med omfang på 1 til 94 prøver pluss kontroller (inntil 96 analyser per analyseserie). Hvert prøveprepareringskit for cobas 4800-systemet, prepareringskit for flytende cytologiske prøver for cobas systemet og vaskebufferkit for cobas 4800-systemet inneholder nok reagenser til 10 analyseserier med enten 24 tester (240 tester per kit) eller 96 tester (960 tester per kit). Hvert cobas 4800 HPV-amplifikasjons/deteksjonskit inneholder nok reagenser til 10 analyseserier med enten 24 tester (240 tester per kit) eller 96 tester (960 tester per kit). Flere kit for 240 tester kan brukes for å optimalisere utbyttet av reagenser for 48 eller 72 tester. cobas 4800 HPVkontrollkit inneholder nok reagenser for til sammen 10 analyseserier (10 sett per kit). Den minste analyseseriestørrelsen på cobas 4800-systemet er 1 prøve pluss kontroller. Ett replikat av den negative kontrollen for cobas 4800-systemet [( ) C] og ett replikat av den HPV-positive kontrollen for cobas 4800 [HPV (+) C] er påkrevd for hver analyseserie (se avsnittet "Kvalitetskontroll"). Arbeidsflyt: MERK: Et prøveprepareringskit for 960 tester kan brukes i en 24-analyseserie og HPV-amplifikasjons/deteksjonskit for 960 tester kan brukes for en analyseserie på 24, 48 eller 72 selv om dette ikke er optimal bruk av reagenser. HPV-testen med cobas 4800 kan kjøres med en av de to arbeidsflytene som kalles "Full workflow" eller "Recovery workflow" i cobas programvaren. HPV Full Workflow: "HPV Full Workflow" består av prøvepreparering i cobas x 480-instrumentet etterfulgt av amplifikasjon/deteksjon i cobas z 480-analysatoren. Størrelsen på analyseserien kan være et 24-testformat (fra 1 til 22 prøver pluss 2 kontroller) eller et 96-testformat (fra 1 til 94 prøver pluss 2 kontroller). Se avsnittet "Utføre en Full Workflow" nedenfor og den relevante operatørmanualen for cobas 4800-systemet for ytterligere informasjon. HPV Recovery Workflow: "HPV Recovery Workflow" består av manuelt PCR-plateoppsett og bruker eluat fra den preparerte dypbrønnsplaten etterfulgt av amplifikasjon/deteksjon på cobas z 480-analysatoren. Se avsnittet "Utføre en Recovery Workflow" nedenfor og den relevante operatørmanualen for cobas 4800-systemet for ytterligere informasjon. Prøver: Det er tre typer livmorhalsprøver som kan analyseres med cobas 4800 HPV-testen: a) livmorhalsprøver i PreservCyt -løsning, b) livmorhalsprøver i cobas PCR celleinnsamlingsmedium og c) livmorhalsprøver i SurePath TM -konserveringsvæske. Prøver i PreservCyt -løsning og cobas PCRcelleinnsamlingsmedium kan behandles direkte fra en riktig strekkodet primærbeholder eller fra et riktig strekkodet rundbunnet rør på 13 ml i cobas x 480-instrumentet. SurePath -prøver som ikke trenger å forbehandles med cobas -prøveklargjøringsbuffer, kan behandles direkte ut fra de riktig strekkodede primærbeholderne (uten plastinnsatser) eller et riktig strekkodet rundbunnet rør på 13 ml i cobas x 480-instrumentet. Prøver i SurePath TM -konserveringsvæske i primærbeholdere med plastinnsatser kan ikke behandles direkte fra primærbeholderne. Slike SurePath -prøver må overføres til et riktig strekkodet, rundbunnet rør på 13 ml for behandling i cobas x 480-instrumentet. Se den relevante operatørmanualen for cobas 4800 for informasjon om riktige strekkodeprosedyrer og en liste over godkjente strekkoder for cobas 4800-systemet. MERK: Ingen ytterligere behandling av SurePath -prøver er nødvendig hvis prøvene testes innen 6 måneder med lagring ved 2-8 C. Hvis SurePath -prøvene har vært lagret ved C, må de behandles for å reversere matriksinduserte tverrbindinger før HPV-testing på cobas 4800-systemet. MERK: HPV-testing direkte fra SurePath -primærbeholdere uten plastinnsatser kan kun gjøres før cytologitesting. Testing av SurePath -prøver etter cytologi krever overføring av minst 1 ml prøve til et riktig strekkodet rundbunnet rør på 13 ml. Behandling av SurePath -primærprøver med cobas -prøveprepareringsbuffer for reversering av matriksinduserte tverrbindinger MERK: Varmebestandige strekkoder kreves for rør som brukes til å reversere matriksinduserte tverrbindinger (se avsnittet Tilleggsutstyr og -materiell). MERK: Det anbefales at trinn B, C, G og H nedenfor utføres i et biologisk kabinett for å minimere mulig krysskontaminering. A. Klargjør et strekkodet 13 ml rundbunnet rør med 0,5 ml cobas -prøveklargjøringsbuffer for hver SurePath -prøve som skal testes. B. Vortex SurePath -prøver i 10 sekunder før overføring. Overfør 0,5 ml av hver SurePath -prøve i et 13 ml rundbunnet rør som ble klargjort i trinn A. Sett på ny kork på hvert rør før du går videre til neste. Bytt alltid pipettespiss for hver prøve. C. Vortex hvert rør i 1 sekund. D. Overfør rørene til varmeenheten (se avsnittet Tilleggsutstyr og -materiell). Opptil 48 rør kan behandles per serie. E. Varm opp til 120 C i 20 minutter. F. Etter oppvarming fjerner du rørene og plasserer dem i et innsamlingsstativ. La prøvene kjøles ned i omgivelsestemperatur i 10 minutter. G. Vortex hvert rør i 5 sekunder. H. Overfør rørene til cobas 4800-prøvestativ med 24 posisjoner, kast korkene og behandle prøvene på cobas 4800-systemet for HPV-testing NO 9 Doc Rev. 14.0

10 SurePath -prøver som har blitt behandlet med cobas -prøveklargjøringsbuffer, kan oppbevares for fremtidig HPV-testing hvis det for eksempel er nødvendig med en cytologivurdering først. Følgende prosedyre skal følges: A. Følg behandlingsprosedyren ovenfor frem til trinn G. B. Rør med SurePath -prøver som ble behandlet med cobas -prøveklargjøringsbuffer oppbevares ved 2 30 C i opptil 4 uker før HPV-testing på cobas 4800-systemet. MERK: Minimumsvolumet som er påkrevd i cobas PCR celleinnsamlingsmedium og primærbeholdere med PreservCyt - løsning, er 3,0 ml. Minimumsvolumet som er påkrevd i SurePath -primærbeholdere uten plastinnsatser, er 5,0 ml. Når det brukes 13 ml rundbunnede sekundærrør, skal de fylles til et minimumsvolum på 1,0 ml og et maksvolum på 10 ml. MERK: Bruk kun cobas PCR celleinnsamlingsmedium, PreservCyt -løsning og SurePath -konserveringsvæske for å ta livmorhalsprøver for cobas 4800 HPV-testen. cobas 4800 HPV-testen er ikke validert med annet prøvetakingsutstyr eller andre medietyper. Hvis cobas 4800 HPV-testen brukes med andre prøvetakingsenheter og/eller medietyper, kan det føre til falske negative, falske positive og/eller ugyldige resultater. MERK: Det kan være nødvendig å avpipettere prøver i strekkodede, rundbunnet rør på 13 ml for behandling i cobas x 480- instrumentet. Bruk pipetter med aerosolbarriere- eller "positive displacement"-spiss for å håndtere prøver. For å unngå krysskontaminering av behandlede prøver, skal det brukes andre hetter med en annen farge (nøytral: se avsnittet Materiell som kreves, men som ikke medfølger) på slike rør for å korke slike prøver etter behandling. MERK: Vær forsiktig når du overfører prøver fra primærrør til 13 ml rundbunnede sekundærrør. Vortex primærprøver før overføring. Bytt pipettespiss etter hver prøve. MERK: Ikke behandle prøver som ser blodige ut eller har mørk brun farge. En enkel analyseserie kan ha alle kombinasjoner av prøver (cobas PCR celleinnsamlingsmedium, PreservCyt -løsning og/eller SurePath TM - konserveringsvæske), og hver prøve kan testes med enten deltestene HPV High Risk eller HPV High Risk Plus Genotyping. Arbeidsflyter Utføre en Full Workflow: A. cobas 4800 HPV-testen kan brukes til 1 til 94 prøver pluss en cobas 4800-system negativ kontroll og en cobas 4800 HPV positiv kontroll. B. Utfør prosedyrene for systemoppstart og vedlikehold i samsvar med instruksjonene i den relevante operatørmanualen for cobas C. Start en ny analyseserie ved å klikke på knappen "New run". D. I vinduet "Selection test" velger du arbeidsflyttype "Full" og velger testen "HPV". E. Legg inn et analyseserienavn eller la standardnavnet på analyseserien stå. Klikk deretter på "OK" for å fortsette. F. Følg programveiviseren for å laste inn prøver. MERK: Prøver kan lastes inn i strekkodede primær- eller sekundærrør i hvilken som helst rekkefølge. MERK: Hvis det brukes primærbeholdere for å behandle prøver i cobas PCR celleinnsamlingsmedium, PreservCyt -løsning eller SurePath -konserveringsvæske (SurePath -primærbeholdere uten plastinnsatser), må prøven vortexes før innlasting. Velg en prøvetype for hver prøve. Velg "PC" for å bestille PreservCyt -løsning eller cobas PCR celleinnsamlingsmedieprøver. Velg "SP" for å bestille prøver i SurePath -konserveringsvæske. G. Forespør resultat for hver prøve. Velg forespurt resultat "HPV High Risk Panel" for å rapportere testresultater for én av eller en kombinasjon av høyrisiko-hpv-typene 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. Velg forespurt resultat "HPV High Risk Panel Plus Genotyping" for å rapportere testresultater for én av eller en kombinasjon av høyrisiko-hpvtypene 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 og for å rapportere testresultater for høyrisiko-hpv-type 16 og høyrisiko-hpv-type 18 separat. H. Følg programveiviseren for å laste alt forbruksmateriell. I. Følg programveiviseren for å laste alle reagenser. MERK: Kontrollene [HPV (+) C og ( ) C] lastes ikke sammen med prøver. De settes i reagensholderen på samme tid som reagensene lastes. To posisjoner (A1 og B1) på hver ekstraksjonsplate og mikrobrønnplate er reservert for henholdsvis kontrollen HPV (+) og ( ). MERK: cobas 4800-systemet har en intern klokke som overvåker hvor lenge reagensene er i systemet. Når WB er skannet, tillates 1 time til å fullføre skanneprosessen og klikke på "Start"-knappen. En nedtellingstidtaker vises på fanen "Workplace". Systemet starter ikke analyseserien hvis tiden er utgått. MERK: For å sikre nøyaktig overføring av MGP, vortex MGP-røret før dispensering i reagensreservoaret, eller rist det kraftig. K. Las inn prøveprepareringsreagensene (WB, MGP, EB, SDS og LYS) i de strekkodede reagensreservoarene ved hjelp av "scan-scan-pour-place"- metoden: Skann strekkoden på reagensflasken. Skann strekkoden på reagensreservoaret. Hell reagens i reservoaret. Plasser det fylte reagensreservoaret i angitt posisjon på reagensholderen. L. Reagensreservoarene leveres i to størrelser: 200 ml og 50 ml. Følg programveiviseren for å velge reagensreservoar med riktig størrelse. Strekkodene for reagensreservoarene må vende mot høyre i holderen. MERK: Amplifikasjons-/deteksjonsreagensene (HPV MMX og HPV Mg/Mn), kontrollene [HPV (+) C og ( ) C] og PK lastes direkte i reagensholderen og skannes av cobas x 480-instrumentet automatisk NO 10 Doc Rev. 14.0

11 MERK: Alle reagenser og reagensreservoarer er strekkodet og utformet for å brukes én gang. cobas 4800-programvaren sporer bruken av reagenser og reagensreservoarer og avviser delvis brukte reagenser og tidligere brukte reagensreservoarer. Programvaren kontrollerer også at det er lastet nok reagenser på instrumentet. MERK: cobas 4800-softwaren sporer utløpsdatoen for alle reagenser. Reagenser med overskredet utløpsdato blir ikke godkjent for bruk på cobas 4800-systemet. M. Start prøveprepareringen ved å klikke på "Start Run". N. Når prøveprepareringen er fullført, klikk på **"Unload" for å laste ut plateholderen. ** Statusen for prøveprepareringen kan gjennomgås nå, før du klikker "Unload". Se den relevante operatørmanualen for cobas 4800-systemet. O. Følg instruksjonene i den relevante operatørmanualen for cobas 4800 for å forsegle mikrobrønnplaten, transportere platen til cobas z 480- analysatoren og starte amplifikasjons- og deteksjonskjøringen. MERK: cobas 4800-systemet har en intern klokke som overvåker hvor lang tid det går mellom tilsetning av de preparerte prøvene til Working Master Mix. Amplifikasjon og deteksjon bør startes så snart som mulig, men senest 90 minutter etter at kjøringen i cobas x 480-instrumentet er ferdig. En nedtellingstidtaker vises på fanen "Workplace". P. Når amplifikasjons- og deteksjonskjøringen er fullført, laster du ut mikrobrønnplaten fra cobas z 480-analysatoren. Q. Følg instruksjonene i den relevante operatørmanualen for cobas 4800 for å gjennomgå og godta resultatene. Utføre en Recovery Workflow: MERK: "Recovery Workflow" er tilgjengelig som et gjenopprettingsalternativ i fall den komplette arbeidsflyten ikke kan fullføres på grunn av omstendigheter som er utenfor brukerens kontroll (f.eks. strømbrudd under amplifikasjons-/deteksjonskjøringen). MERK: Kun prøver som har gjennomgått en vellykket analyse på cobas x 480-instrumentet, kan brukes til amplifikasjon/deteksjon ved bruk av en Recovery-analyseserie. Systemovervåkingen av reagenser og forbruksmateriell er begrenset under Recovery-analyseserien. Det er ingen sporing av prøveposisjon ved bruk av Recovery Workflow. Sluttbrukeren må sikre at prøvens reelle posisjon på mikrobrønnplaten tilsvarer posisjonen som er angitt i arbeidsbestillingsfilen Recovery Plate Layout Report. Brukeren må være ekstremt forsiktig når han/hun klargjør mikrobrønnplaten for å sikre riktig PCR-oppsett og unngå kontaminering. MERK: Prøver som er behandlet i cobas x 480-instrumentet, har begrenset stabilitet. De må amplifiseres/detekteres ved bruk av Recovery Workflow innen 24 timer hvis de er oppbevart ved 2 C til 30 C. A. Start en Recovery-analyseserie ved å klikke på knappen "New run". B. I vinduet "Test Selection" velger du "Recovery" og velger testtype "HPV". C. Legg inn et analyseserienavn eller la standardnavnet på analyseserien stå. Klikk deretter på "OK" for å fortsette. D. Velg en analyseserie som skal gjenopprettes. E. Hvis du bruker HPV ASAP v2.1, skann den originale DWP-ID-en fra arbeidsflyten for en full analyseserie. F. Legg inn ny MWP-ID. G. Legg inn Master Mix og metallion-id-er for alle amplifikasjons- og deteksjonsreagensene i kitet. H. Preparer cobas 4800 HPV Working Master Mix: 1. For et 240-testkit, tilsett 240 µl HPV Mg/Mn i ett rør med HPV MMX (0,5 ml-rør fra 240-testkit). 2. For et 960-testkit, tilsett 450 µl HPV Mg/Mn i hvert av de to rørene med HPV MMX (1,0 ml-rør fra 960-testkit). MERK: Recovery-analyseserien må startes innen 90 minutter etter at HPV Mg/Mn ble tilsatt i HPV MMX. Systemet overvåker ikke hvor lang tid som er gått etter at de preparerte prøvene ble tilsatt Working Master Mix i arbeidsflyten Recovery. Sluttbrukeren må sørge for at amplifikasjon og deteksjon startes innen den angitte tiden. I. Bland Working Master Mix grundig ved å vende røret/rørene forsiktig. Ikke vortex Working Master Mix. J. Overfør 25 µl Working Master Mix til de ønskede brønnene i mikrobrønnplaten. K. Plasser ekstraksjonsplaten fra analyseserien som skal gjentas, på den frittstående magnetplaten. L. Overfør 25 µl eluat manuelt fra ekstraksjonsplatebrønnene til de tilsvarende brønnene i mikrobrønnplaten. Sørg for at brønnposisjonene opprettholdes (f.eks. at eluatet i A1-brønnen i ekstraksjonsplaten overføres til A1 i mikrobrønnplaten). Påse at ikke noe MGP overføres til mikrobrønnplaten. M. Følg instruksjonene i den relevante operatørmanualen for cobas 4800 for å forsegle mikrobrønnplaten. N. Sentrifuger mikrobrønnplaten i en svingrotor i minst 5 sekunder ved 1500 RCF. O. Transporter platen til cobas z 480-analysatoren og start amplifikasjons- og deteksjonskjøringen. P. Når amplifikasjons- og deteksjonskjøringen er fullført, last ut mikrobrønnplaten fra cobas z 480-analysatoren. Q. Følg instruksjonene i den relevante operatørmanualen for cobas 4800 for å gjennomgå og godta resultatene NO 11 Doc Rev. 14.0

12 Tolking av resultater MERK: All analyse- og analyseserievalidering utføres av cobas 4800-programvaren. MERK: En gyldig analyseserie kan omfatte både gyldige og ugyldige prøveresultater. Prøveresultater fra gyldige analyseserier tolkes som vist i Tabell 1 og 2: Tabell 1 Tolkning av resultater med cobas 4800 HPV-testen for å bestemme tilstedeværelse av HPV-DNA cobas 4800 HPV Test Resultatrapport og tolkning Forespurt resultat "HPV High Risk Panel": Høyrisiko-HPV-positiv POS HR HPV Prøven er positiv for DNA for én av eller en kombinasjon av følgende høyrisiko-hpv-typer: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. Høyrisiko-HPV-negativ* NEG HR HPV DNA for HPV-typene 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 og 68 ble ikke detektert eller var under den forhåndsinnstilte grensen. Høyrisiko-HPV ugyldig Resultatene for HR HPV er ugyldige. For PreservCyt -prøver skal den originale prøven ikke testes på nytt mer enn to Invalid HR HPV ganger for å oppnå gyldige resultater. Hvis resultatene fremdeles er ugyldige, skal det innhentes en ny prøve. For SurePath -prøver skal den originale prøven testes på nytt hvis det er tilstrekkelig volum igjen. Hvis resultatene fremdeles er ugyldige, skal det innhentes en ny prøve. Ingen resultat for prøve Failed Se den relevante operatørmanualen for cobas 4800 for instruksjoner om gjennomgang av flagg for analyseserier og anbefalte tiltak. Den originale prøven bør testes på nytt for å få gyldig resultat. Forespurt resultat "HPV High Risk Panel Plus Genotyping": Andre høyrisiko-hpv-positiv POS Other HR HPV Prøven er positiv for DNA for én av eller en kombinasjon av følgende høyrisiko-hpv-typer: 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. Andre høyrisiko-hpv negativ* NEG Other HR HPV DNA for HPV-typene 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 og 68 ble ikke detektert eller var under den forhåndsinnstilte grensen. Ugyldig annet høyrisiko-hpv Resultatene for andre HR-HPV er ugyldige. For PreservCyt -prøver skal den originale prøven ikke testes på nytt mer Invalid Other HR HPV enn to ganger for å oppnå gyldige resultater. Hvis resultatene fremdeles er ugyldige, skal det innhentes en ny prøve. For SurePath -prøver skal den originale prøven testes på nytt hvis det er tilstrekkelig volum igjen. Hvis resultatene fremdeles er ugyldige, skal det innhentes en ny prøve. HPV16 positiv POS HPV16 Prøven er positiv for DNA for HPV-type 16. HPV16 negativ* NEG HPV16 DNA for HPV-type 16 ble ikke detektert eller var under den forhåndsinnstilte grensen. Ugyldig HPV16 Resultatet for HPV16 er ugyldig. For PreservCyt -prøver skal den originale prøven ikke testes på nytt mer enn to Invalid HPV16 ganger for å oppnå gyldige resultater. Hvis resultatene fremdeles er ugyldige, skal det innhentes en ny prøve. For SurePath -prøver skal den originale prøven testes på nytt hvis det er tilstrekkelig volum igjen. Hvis resultatene fremdeles er ugyldige, skal det innhentes en ny prøve. HPV18 positiv POS HPV18 Prøven er positiv for DNA for HPV-type 18. HPV18 negativ* NEG HPV18 DNA for HPV-type 18 ble ikke detektert eller var under den forhåndsinnstilte grensen. Ugyldig HPV18 Resultatet for HPV18 er ugyldig. For PreservCyt -prøver skal den originale prøven ikke testes på nytt mer enn to Invalid HPV18 ganger for å oppnå gyldige resultater. Hvis resultatene fremdeles er ugyldige, skal det innhentes en ny prøve. For SurePath -prøver skal den originale prøven testes på nytt hvis det er tilstrekkelig volum igjen. Hvis resultatene fremdeles er ugyldige, skal det innhentes en ny prøve. Ingen resultat for prøve Failed Se den relevante operatørmanualen for cobas 4800 for instruksjoner om gjennomgang av flagg for analyseserier og anbefalte tiltak. Den originale prøven bør testes på nytt for å få gyldige resultater. * Et negativt resultat utelukker ikke tilstedeværelsen av HPV-infeksjon, fordi resultatene er avhengig av korrekt prøvetaking, fravær av inhibitorer og tilstrekkelig DNA til at det kan påvises NO 12 Doc Rev. 14.0

13 Tabell 2 Tolkning av resultater med cobas 4800 HPV-testen for pasienter med cytologiske anomalier Resultater NEG Other HR HPV*, NEG HPV16, NEG HPV18 POS Other HR HPV*, NEG HPV16, NEG HPV18 Tolkning Svært liten sannsynlighet for underliggende CIN2. Økt sannsynlighet for at underliggende CIN2 vil bli detektert med kolposkopi. POS HPV16 og/eller POS HPV18 Høyest sannsynlighet for at underliggende CIN2 vil bli detektert med kolposkopi 34,35. *Andre HR HPV-DNA inkluderer følgende typer: 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. MERK: HPV-negative resultater betyr ikke at kvinner ikke skal gå videre til kolposkopi. MERK: I tillegg til resultatene i tabellene ovenfor, er også ugyldige resultater for én eller flere kombinasjoner mulig. Hvis det oppnås et slikt resultat, for eksempel: Other HR HPV NEG, HPV16 POS, HPV18 Invalid Positive og negative resultater skal tolkes som vist i Tabell 1. I dette eksemplet er HPV 18-resultatene ugyldige. De originale prøvene skal ikke testes på nytt mer enn to ganger for å oppnå gyldige resultater. Hvis resultatene fremdeles er ugyldige, skal det innhentes en ny prøve. MERK: Negative resultater indikerer at HPV-DNA-konsentrasjoner ikke ble detektert eller var under den forhåndsinnstilte grensen. MERK: Positive testresultater indikerer tilstedeværelse av én eller flere av høyrisikotypene, men siden pasienter ofte også er infisert med lavrisikotyper, utelukker det ikke tilstedeværelse av lavrisikotyper hos pasienter med blandede infeksjoner. MERK: Testresultatene skal bare tolkes i sammenheng med opplysninger fra klinisk vurdering av pasienten og pasientanamnesen. KVALITETSKONTROLL Ett sett med positive og negative kontroller for cobas 4800-HPV-testen er inkludert i hver analyseserie. For alle analyseserier må det innhentes resultater for både den positive og den negative kontrollen for at cobas 4800-programvaren skal kunne vise de rapporterbare resultatene for cobas 4800 HPV-testen for den aktuelle analyseserien. Positiv kontroll Resultatet av HPV (+)-kontrollen må være "Valid". Hvis resultatene for HPV (+)-kontrollen konsekvent er ugyldige, kontakt ditt lokale Roche-kontor for teknisk assistanse. Negativ kontroll Resultatene av ( )-kontrollen må være "Valid". Hvis resultatene for ( )-kontrollen konsekvent er ugyldige, kontakt ditt lokale Roche-kontor for teknisk assistanse. FORSIKTIGHETSREGLER Som for andre laboratorieprosedyrer er god laboratorieteknikk essensielt for å sikre optimal ytelse for denne analysen. På grunn av testens høye analytiske sensitivitet må det utvises aktsomhet for å sikre at reagenser og amplifikasjonsblandinger ikke kontamineres. TESTENS BEGRENSNINGER 1. cobas 4800 HPV-testen detekterer DNA for høyrisikotypene 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 og 68. Denne testen detekterer ikke DNA for HPV-lavrisikotyper (f.eks. 6, 11, 42, 43, 44), siden det ikke er noen klinisk nytteverdi i å teste for lavrisiko-hpv-typer cobas 4800 HPV-testen for deteksjon av humant papillomavirus type 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 og 68 anbefales ikke for evaluering av mistenkt seksuelt overgrep. 3. Ytelsen til cobas 4800 HPV-testen er ikke tilstrekkelig godt fastslått for personer som er vaksinert mot HPV Prevalensen av HPV-infeksjon i en populasjon kan påvirke ytelsen. Positive, prediktive verdier synker ved testing av populasjoner med lav prevalens eller individer uten risiko for smitte. 5. HPV-infeksjon er ingen indikasjon på cytologisk HSIL eller underliggende høygradig CIN, og betyr heller ikke at det vil utvikles CIN2-3 eller kreft. De fleste kvinner som er smittet med én eller flere høyrisiko-hpv-typer, vil ikke utvikle CIN2-3 eller kreft. 6. Et negativt resultat av testing for høyrisiko-hpv utelukker ikke muligheten for fremtidig cytologisk HSIL eller underliggende CIN2-3 eller kreft. 7. Test kun de angitte prøvematerialene. cobas 4800 HPV-testen er bare validert for bruk med livmorhalsprøver tatt i cobas PCRcelleinnsamlingsmedium, PreservCyt -løsning eller SurePath TM -konserveringsvæske. 8. SurePath -primærrør med en deleinnsats av plast, kan ikke lastes inn direkte i cobas x 480-instrumentet. Prøver som er tatt i slike rør, må overføres til et sekundært 13 ml-rør for innsetting for prøvebehandling i cobas x 480-instrumentet. 9. Deteksjon av høyrisiko-hpv er avhengig av antall kopier som er til stede i prøven, og kan påvirkes av prøvetakingsmetode, pasientfaktorer, infeksjonsstadium og tilstedeværelse av interfererende substanser. 10. Beta-globin-amplifikasjon og -deteksjon er inkludert i cobas 4800 HPV-testen for å differensiere HPV-negative prøver fra prøver som ikke viser HPV-signaler på grunn av utilstrekkelig cellemasse i prøven. Alle HPV-negative prøver må ha et gyldig beta-globin-signal innenfor et forhåndsdefinert område for å kunne identifiseres som gyldige negative resultater av cobas 4800-systemet. 11. Pålitelige resultater er avhengig av adekvat prøvetaking, transport, oppbevaring og håndtering. Følg prosedyrene i dette pakningsvedlegget og den relevante operatørmanualen for cobas NO 13 Doc Rev. 14.0

14 12. Tilsetning av AmpErase-enzym i cobas 4800 HPV Master Mix muliggjør selektiv amplifikasjon av mål-dna. Kontaminering av reagensene kan imidlertid bare unngås gjennom gode laboratorierutiner og ved å følge prosedyrene som er spesifisert i dette pakningsvedlegget nøye. 13. Dette produktet må kun brukes av personell som er opplært i PCR-teknikk og bruken av cobas 4800-systemet. 14. Kun cobas x 480-instrumentet og cobas z 480-analysatoren er validert for bruk med dette produktet. Ingen andre prøveprepareringsinstrumenter eller PCR-systemer kan brukes med dette produktet. 15. På grunn av iboende forskjeller mellom teknologier anbefales det at brukerne utfører metodekorrelasjonsstudier i laboratoriet for å bestemme de teknologiske forskjellene før en ny teknologi tas i bruk. 16. Effekten av andre mulige variabler, som f.eks. utflod, tampongbruk, utskylling osv., samt prøvetakingsvariabler, er ikke evaluert. 17. Selv om det er sjelden, kan mutasjoner innenfor de høykonserverte regionene av det genomiske DNA for humant papillomavirus som cobas 4800 HPV-testens primere og/eller prober er rettet mot, resultere i manglende evne til å detektere tilstedeværelse av virusets DNA. 18. Tilstedeværelse av PCR-hemmere kan føre til falske negative eller ugyldige resultater. 19. Cervikale prøver har ofte visuelt detekterbare nivåer av fullblod med rosa eller lysebrun farge. Slike prøver behandles på cobas 4800-systemet på normal måte. Hvis konsentrasjoner av fullblod overskrider 2 % (mørkerød eller -brun farge) i cobas PCR-celleinnsamlingsmedier, PreservCyt - løsning eller SurePath TM -konserveringsvæske, eller overskrider 4 % i SurePath TM -konserveringsvæske behandlet med cobas -prøveklargjøringsbuffer, er det en sannsynlighet for at man får falskt-negative resultater. Se interferensresultater for detaljer. 20. Bruk av Replens vaginalgel er forbundet med falske negative resultater i SurePath TM -konserveringsvæske. 21. Fjerning av røde blodceller fra PreservCyt - eller SurePath -prøver ved behandling med iseddik (GAA) er ikke validert med cobas 4800 HPVtesten. Eventuell GAA-behandling med cobas 4800 HPV-testen må valideres av testlaboratoriet. YTELSESKARAKTERISTIKA Ytelsessammenligning med en CE-merket komparator-hpv-test Klinisk sensitivitet og spesifisitet for sykdomsstatus ( CIN2) ble bestemt for cobas 4800 HPV-testen og en CE-merket komparator-hpv-test 38 i en populasjon av kvinner fra 21 år og oppover med ASC-US-cytologiresultater, som ble bestemt ved rutinemessig screening for livmorhalskreft. Alle testene ble utført med livmorhalsprøver i PreservCyt -løsning. Til sammen 1578 kvinner med et initialt ASC-US-cytologiresultat gjennomgikk kolposkopi, og hadde gyldige resultater for HPV-tester og cervikal biopsi. Kvinnenes sykdomsstatus ble bekreftet av et sentralt patologigranskningspanel fra biopsiprøvene som ble tatt under kolposkopi. Resultatene for en ASC-US-populasjon er oppsummert i tabell 3 og viser at testytelsen til cobas 4800 HPV var sammenlignbar med komparatortesten. Tabell 3 Sammenligning av ytelsen til cobas 4800 HPV-testen og en CE-merket komparator-hpv-test for deteksjon av CIN2 og CIN3 i ASC-US-populasjonen cobas 4800 HPV-test CE-merket HPV-test Punktestimat 95 % CI Punktestimat 95 % CI CIN2 Sensitivitet (%) 90,0 (72/80) (81,5, 94,8) 87,2 (68/78) 1 (78,0, 92,9) Spesifisitet (%) 70,5 (1056/1498) (68,1, 72,7) 71,1 (1056/1485) 2 (68,8, 73,4) PPV (%) 14,0 (72/514) (12,8, 15,3) 13,7 (68/497) (12,4, 15,1) NPV (%) 99,2 (1056/1064) (98,6, 99,6) 99,1 (1056/1066) (98,3, 99,5) Prevalens (%) 5,1 (80/1578) (4,1, 6,3) 5,0 (78/1563) (4,0, 6,2) CIN3 Sensitivitet (%) 93,5 (43/46) (82,5, 97,8) 91,3 (42/46) (79,7, 96,6) Spesifisitet (%) 69,3 (1053/1517) (66,9, 71,5) 70,0 (1062/1517) (67,7, 72,3) PPV (%) 8,4 (43/514) (7,6, 9,2) 8,5 (42/497) (7,6, 9,4) NPV (%) 99,7 (1061/1064) (99,2, 99,9) 99,6 (1062/1066) (99,0, 99,9) Prevalens (%) 2,9 (43/1578) (2,2, 3,9) 3,0 (46/1563) (2,2, 3,9) 1 Resultater for to personer med en CIN2-diagnose kunne ikke fastsettes med CE-merket komparator-hpv-test på grunn av utilstrekkelig volum som følge av gjentatt testing. 2 Resultater for tretten personer med en < CIN2-diagnose kunne ikke fastsettes med CE-merket komparator-hpv-test på grunn av utilstrekkelig volum som følge av gjentatt testing. Hos kvinner 30 år med normal cytologi er risikoen for livmorhalssykdom ( CIN2) 7,29 ganger høyere med et høyrisiko-positivt resultat med cobas 4800 HPV-testen enn med et negativt resultat med cobas 4800 HPV-testen. Relative risikoestimater og deres 95 % konfidensintervaller vises i Tabell NO 14 Doc Rev. 14.0

15 For kvinner fra 30 år og oppover kan cobas 4800 HPV-testen brukes til å vurdere tilstedeværelse eller fravær av HPV-genotypene 16 og 18. Risikoen for livmorhalssykdom ( CIN2) er 13,71 ganger høyere med et HPV16- og/eller HPV18-positivt resultat med cobas 4800 HPV-testen enn med et negativt resultat, og risikoen er 2,51 ganger høyere med et HPV16- og/eller HPV18-positivt resultat med cobas 4800 HPV-testen sammenlignet med et positivt resultat for de 12 andre høyrisikotypene med cobas 4800 HPV-testen. I alle tilfellene overskrider den nedre grensen for 95 %- konfidensintervallet 1, noe som antyder en statistisk høyere risiko for å utvikle livmorhalssykdom med et positivt resultat med HPV-testen. Tabell 4 Relativ risiko for livmorhalssykdom ( CIN2 med sentral patologigranskning) hos kvinner 30 år med normal cytologi* HPV-resultat Estimat av relativ risiko 95 % CI* Pos. vs. neg. 7,29 (3,99, 22,11) 16+/18+ vs. neg. 13,71 (7,31, 41,92) 16+/18+ vs. 12 andre HR+ 2,51 (1,73, 3,61) Merk: 0,5 ble lagt til en nullcelle av estimert antall syke individer i hvilke som helst av de 1000 bootstrap-prøvene * 95 % CI er 2,5 og 97,5 persentil av bootstrap-ci basert på 1000 bootstrap-prøver NILM-populasjon ( 30 år) Vurdering av ytelse For NILM-populasjonen ( 30 år) er estimater for sensitivitet og spesifisitet sammen med 95 % konfidensintervaller (KI) for HR HPV-positiv vs. HR HPVnegativ presentert i tabell 5 for ikke-justerte resultater. Den ikke-justerte sensitiviteten og spesifisiteten for testen for CIN2-histologi var henholdsvis 83,2 % (109/131) med 95 % KI: 75,9 % til 88,6 % og 60,4 % (2492/4127) med 95 % KI: henholdsvis 58,9 % til 61,9 %. Den ikke-justerte sensitiviteten og spesifisiteten for cobas HPV-testen for deteksjon av CIN3- histologi var henholdsvis 90,0 % (72/80) med 95 % KI: 81,5 % til 94,8 % og henholdsvis 60,0 % (2506/4178) med 95 % KI: 58,5 % til 61,5 %. Tabell 5 Ytelsen til cobas 4800 HPV-testen for NILM-populasjonen ( 30 år) (ikke-justerte estimater) CPR-diagnose Ytelse Estimat 95 % konfidensintervall CIN2 Sensitivitet (%) 83,2 (109/131) (75,9, 88,6) Spesifisitet (%) 60,4 (2492/4127) (58,9, 61,9) PPV (%) 6,3 (109/1744) (5,8, 6,8) NPV (%) 99,1 (2492/2514) (98,7, 99,4) Prevalens (%) 3,1 (131/4258) (2,6, 3,6) CIN3 Sensitivitet (%) 90,0 (72/80) (81,5, 94,8) Spesifisitet (%) 60,0 (2506/4178) (58,5, 61,5) PPV (%) 4,1 (72/1744) (3,8, 4,5) NPV (%) 99,7 (2506/2514) (99,4, 99,8) Prevalens (%) 1,9 (80/4258) (1,5, 2,3) Samlet ( 25 år) populasjon Sammenligning av ytelsen til HPV-testing vs. cytologi Den kliniske ytelsen til cobas HPV-testen og væskebasert cytologi (PreservCyt ) ble bestemt for en populasjon med kvinner fra 25 år og oppover, uavhengig av cytologistatus (samlet populasjon). For den samlede populasjonen ( 25 år) er estimater for sensitivitet og spesifisitet for cobas HPV-testen vs. cytologi for deteksjon av CIN2 og CIN3 vist 38 i tabell 6. De ikke-justerte sensitivitetene for cobas HPV-testen og cytologi for deteksjon av CIN2 var henholdsvis 88,2 % (380/431) med 95 % KI 84,8-90,9 % og 51,5 % (222/431) med KI 46,8-56,2 %. De ikke-justerte sensitivitetene for cobas HPV-testen og cytologi for deteksjon av CIN3 var henholdsvis 92,0 % (252/274) med 95 % KI 88,1-94,6 og 53,3 % (146/274) med KI 47,4-59,1 %. Spesifisiteter justert for verifiseringsskjevhet for cobas HPV-testen og cytologi for deteksjon av CIN2 var henholdsvis 90,5 % (36343/40163) med KI 90,2-90,8 % og 94,1 % (37811/40163) med KI 93,9-94,4 % NO 15 Doc Rev. 14.0

16 Tabell 6 Sammenligning av ytelsen til cobas 4800 HPV-testen og cytologi for deteksjon av CIN2 og CIN3 i den samlede populasjonen ( 25 år) Cytologi cobas HPV-test % (n) 95 % konfidensintervall % (n) 95 % konfidensintervall CIN2 Sensitivitet 51,5 (222/431) (46,8 56,2) 88,2 (380/431) (84,8 90,9) Spesifisitet 73,4 (5428/7392) (72,4 74,4) 57,8 (4270/7392) (56,6 58,9) PPV 10,2 (222/2186) (9,3 11,1) 10,9 (380/3502) (10,4 11,3) NPV 96,3 (5428/5637) (95,9 96,6) 98,8 (4270/4321) (98,5 99,1) CIN3 Sensitivitet 53,3 (146/274) (47,4 59,1) 92,0 (252/274) (88,1 94,6) Spesifisitet 73,0 (5509/7549) (72,0 74,0) 56,9 (4299/7549) (55,8 58,1) PPV 6,7 (146/2186) (6,0 7,4) 7,2 (252/3502) (6,9 7,5) NPV 97,7 (5509/5637) (97,4 98,0) 99,5 (4299/4321) (99,2 99,7) Deteksjonsgrense Deteksjonsgrensen (LOD) for høyrisiko-hpv-genotypene HPV16, HPV18 og HPV31 ble bestemt for cobas 4800 HPV-testen. Deteksjonsgrensene ble vurdert ved bruk av 1) plasmider av HPV31, HPV16 og HPV18 i bakgrunnen av poolede HPV-negative pasientprøver som var tatt i PreservCyt -løsning og SurePath TM -konserveringsvæske, og 2) HPV-positive cellelinjer SiHa (HPV16) og HeLa (HPV18) i PreservCyt -løsning og SurePath TM - konserveringsvæske som inneholdt en bakgrunn med HPV-negativ cellelinje (HCT-15). Plasmid og cellelinjer ble fortynnet til konsentrasjonene nedenfor, over og ved de forventede deteksjonsgrensenivåene. Et minimum på 60 replikater ble testet for hvert plasmid eller hvert cellelinjenivå i både PreservCyt -løsning og SurePath TM -konserveringsvæske for hver av de 3 reagenslotene. Resultatene som ble oppnådd med SurePath TM - konserveringsvæske oppgis med og uten behandling med cobas -prøveklargjøringsbuffer. Deteksjonsgrensen er nivået av HPV-DNA i prøven som har positive testresultater minst 95 % av tiden. Tabell 7, 8 og 9 viser resultatene fra reagensloten som produserte den mest konservative (høyeste) deteksjonsgrensen i analysen for henholdsvis PreservCyt -løsning og SurePath TM -konserveringsvæske. Tabell 7 Deteksjonsgrensenivåer for HPV-type 31, 16, 18 og cellelinjene SiHa (HPV16) og HeLa (HPV18) i PreservCyt -løsning Titer 95 % konfidensintervall HPV-type (kopier eller Antall positive/testede % positive celler/ml) Nedre Øvre / % 94 % 100 % /61 97 % 89 % 100 % /60 82 % 70 % 90 % / % 94 % 100 % / % 94 % 100 % /61 90 % 80 % 96 % / % 94 % 100 % / % 94 % 100 % /61 69 % 56 % 80 % SiHa (HPV 16) / % 95 % 100 % SiHa (HPV 16) /65 98 % 92 % 100 % SiHa (HPV 16) 50 57/60 95 % 86 % 99 % HeLa (HPV 18) 80 60/ % 94 % 100 % HeLa (HPV 18) 40 60/ % 94 % 100 % HeLa (HPV 18) 20 56/60 93 % 84 % 98 % NO 16 Doc Rev. 14.0

17 Tabell 8 Deteksjonsgrensenivåer for HPV-type 31, 16, 18 og cellelinjene SiHa (HPV16) og HeLa (HPV18) i SurePath TM -konserveringsvæske Titer 95 % konfidensintervall HPV-type (kopier eller Antall positive/testede % positive celler/ml) Nedre Øvre / % 94 % 100 % /60 95 % 86 % 99 % /60 77 % 64 % 87 % / % 94 % 100 % / % 94 % 100 % /60 85 % 73 % 93 % 18 1,500 60/ % 94 % 100 % / % 94 % 100 % /60 93 % 84 % 98 % SiHa (HPV 16) /60 98 % 91 % 100 % SiHa (HPV 16) 50 57/60 95 % 86 % 99 % SiHa (HPV 16) 25 42/60 70 % 57 % 81 % HeLa (HPV 18) 80 60/ % 94 % 100 % HeLa (HPV 18) 40 60/ % 94 % 100 % HeLa (HPV 18) 20 59/60 98 % 91 % 100 % Tabell 9 Deteksjonsgrensenivåer for HPV-type 31, 16, 18 samt cellelinjene SiHa (HPV16) og HeLa (HPV18) i SurePath TM - konserveringsvæske ved bruk av behandling med cobas -prøveklargjøringsbuffer Titer 95 % konfidensintervall HPV-type (kopier eller Antall positive/testede % positive celler/ml) Nedre Øvre / % 94 % 100 % / % 94 % 100 % /60 90 % 80 % 96 % / % 94 % 100 % /60 98 % 91 % 100 % /60 67 % 53 % 78 % / % 94 % 100 % / % 94 % 100 % /59 93 % 84 % 98 % SiHa (HPV 16) / % 94 % 100 % SiHa (HPV 16) / % 94 % 100 % SiHa (HPV 16) /60 92 % 82 % 97 % HeLa (HPV 18) 80 60/ % 94 % 100 % HeLa (HPV 18) 40 59/60 98 % 91 % 100 % HeLa (HPV 18) 20 43/60 72 % 59 % 83 % NO 17 Doc Rev. 14.0

18 Inklusivitetsverifisering For å verifisere at cobas 4800 HPV-testen er i stand til å detektere nøyaktig alle HPV-risikogenotyper, ble deteksjonsgrensen (LOD) bestemt (tabell 10, 11 og 12) for genotypene 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66 og 68. Sensitiviteten for cobas 4800 HPV-testen for HPV-genotypene 16, 18 og 31 ble bestemt i deteksjonsgrensestudien som er beskrevet ovenfor i dette pakningsvedlegget. Kvantifiserte plasmidstammer av hver HPV-genotype ble fortynnet i enten PreservCyt -løsning eller SurePath TM -konserveringsvæske som inneholdt HPV-negative HCT-15-celler i konsentrasjoner under, over og ved de forventede deteksjonsgrensenivåene. Én reagenslot ble brukt for å produsere minst 48 replikater for hvert positive nivå i hvert medium. Bakgrunnsmateriale fra cervikale prøver som ble tatt i SurePath TM -konserveringsvæske, ble klargjort for testing i SurePath TM -konserveringsvæske ved bruk av behandling med cobas -prøveklargjøringsbuffer (tabell 12). Materialet ble testet som 24 replikater hver med to reagenslot. For hver HPV-type ble den rapporterte deteksjonsgrensen definert som den laveste testkonsentrasjonen som hadde en positiv treffrate på 95 % der alle høyere konsentrasjoner hadde en treffrate på minst 95 %. Tabell 10 Sammendrag av deteksjonsgrenser for høyrisikogenotyper for studien av HPV-genotypeinklusivitet for cobas 4800 (PreservCyt -løsning) HPV-DNA-type LOD (kopier/ml) Antall positive/testede Treffrate 95 % konfidensintervall Nedre Øvre /48 96 % 86 % 99 % / % 93 % 100 % / % 93 % 100 % /48 96 % 86 % 99 % /48 96 % 86 % 99 % / % 93 % 100 % / % 93 % 100 % /48 98 % 89 % 100 % /48 96 % 86 % 99 % / % 93 % 100 % / % 93 % 100 % Tabell 11 Sammendrag av deteksjonsgrenser for høyrisikogenotyper for studien av HPV-genotypeinklusivitet for cobas 4800 (SurePath TM -konserveringsvæske) HPV-DNA-type LOD (kopier/ml) Antall positive/testede Treffrate 95 % konfidensintervall Nedre Øvre /49 96 % 93 % 100 % / % 93 % 100 % / % 93 % 100 % / % 93 % 100 % /48 98 % 89 % 100 % / % 93 % 100 % / % 93 % 100 % / % 93 % 100 % /48 96 % 86 % 99 % /48 98 % 89 % 100 % / % 93 % 100 % NO 18 Doc Rev. 14.0

19 Tabell 12 Sammendrag av deteksjonsgrenser for høyrisikogenotyper for studien av HPV-genotypeinklusivitet for cobas 4800 HPV (SurePath TM -konserveringsvæske ved bruk av behandling med cobas -prøveklargjøringsbuffer) HPV-DNA-type LOD (kopier/ml) Antall positive/testede Treffrate 95 % konfidensintervall Nedre Øvre / % 93 % 100 % / % 89 % 100 % / % 93 % 100 % / % 93 % 100 % /48 96 % 86 % 99 % / % 93 % 100 % /48 96 % 86 % 99 % / % 93 % 100 % / % 93 % 100 % / % 93 % 100 % / % 93 % 100 % Presisjon Den interne presisjonen ble undersøkt med panelprøver som var preparert for deteksjonsgrensestudien som er beskrevet i dette pakningsvedlegget. Nivåer ved og over deteksjonsgrensen ble brukt for presisjonsanalysen. Panelene ble preparert ved å spike plasmidene for HPV31, HPV16 og HPV18 i bakgrunnen av poolede HPV-negative pasientprøver som var tatt i PreservCyt -løsning og SurePath TM -konserveringsvæske. De positive treffratene for panelprøvene (PreservCyt -løsning og SurePath TM -konserveringsvæske) ved og over deteksjonsgrensen vises i henholdsvis Tabell 13 og 14. Treffratene var over 95 % for alle plasmidpanelnivåer. Variansen i testens Ct-verdi ble analysert, og bidrag fra vilkårlige faktorer for reagenslot, systemer, serie-til-serie og innen-serie ble beregnet og er oppsummert i Tabell 15 for PreservCyt -løsning og i Tabell 16 for SurePath TM - konserveringsvæske. Tabell 17 viser Ct-verdien SD og % CV av variasjonskomponenter i PreservCyt -løsning. Tabell 18 viser Ct-verdien SD og % CV av variasjonskomponenter i SurePath TM -konserveringsvæske. Tabell 13 Sammendrag av treffrater for cobas 4800 HPV presisjonsstudie ved eller over deteksjonsgrense (i PreservCyt -løsning) Målorganisme HPV31 HPV16 HPV18 Panelnivå Konsentrasjon (kopier eller celler/ml) N tester N pos Treffrate 95 % CI for treffrate Nedre Øvre > LOD % 98 % 100 % = LOD % 95 % 100 % > LOD % 98 % 100 % = LOD % 98 % 100 % > LOD % 98 % 100 % = LOD % 98 % 100 % Tabell 14 Sammendrag av treffrater for cobas 4800 HPV presisjonsstudie ved eller over deteksjonsgrense (i SurePath TM -konserveringsvæske) Målorganisme HPV31 HPV16 HPV18 Panelnivå Konsentrasjon (kopier eller celler/ml) N tester N pos Treffrate 95 % CI for treffrate Nedre Øvre > LOD % 98 % 100 % = LOD % 94 % 99 % > LOD % 98 % 100 % = LOD % 98 % 100 % > LOD % 98 % 100 % = LOD % 98 % 100 % NO 19 Doc Rev. 14.0

20 Tabell 15 Analyse av Ct-verdivarianskomponenter for cobas 4800 HPV presisjonsstudiens panelnivåer som var preparert i PreservCyt -løsning Målorganisme Panelnivå N HPV16 HPV18 HPV31 Gjennomsnittlig knekkpunkt > LOD ,3 = LOD ,5 > LOD ,6 = LOD ,8 > LOD ,5 = LOD ,6 Varianskomponenter/prosentvis bidrag Reagenslot System Analyseserie Tilfeldig Totalt 0, ,111 0,079 0, % 0 % 49 % 35 % 100 % 0, ,042 0,161 0, % 0 % 18 % 71 % 100 % 0, ,149 0,067 0, % 0 % 58 % 26 % 100 % 0, ,050 0,184 0, % 0 % 19 % 71 % 100 % 0,003 0,002 0,105 0,187 0,297 1 % 1 % 35 % 63 % 100 % 0, ,157 0,489 0,666 3 % 0 % 24 % 73 % 100 % Tabell 16 Analyse av Ct-verdivarianskomponenter for cobas 4800 HPV presisjonsstudiens panelnivåer som var preparert i SurePath TM -konserveringsvæske Målorganisme Panelnivå N HPV16 HPV18 HPV31 Gjennomsnittlig knekkpunkt > LOD ,2 = LOD ,2 > LOD ,3 = LOD ,7 > LOD ,2 = LOD ,1 Varianskomponenter/prosentvis bidrag Reagenslot System Analyseserie Tilfeldig Totalt 0, ,039 0,157 0,209 7 % 0 % 18 % 75 % 100 % 0 0 0,090 0,316 0,405 0 % 0 % 22 % 78 % 100 % 0, ,119 0,073 0,204 5 % 0 % 58 % 36 % 100 % 0 0 0,148 0,219 0,366 0 % 0 % 40 % 60 % 100 % 0 0 0,099 0,393 0,493 0 % 0 % 20 % 80 % 100 % 0,026 0,015 0,038 0,684 0,764 3 % 2 % 5 % 90 % 100 % Tabell 17 Analyse av Ct-verdi-SD og % CV cobas 4800 HPV presisjonsstudiens panelnivåer som var preparert i PreservCyt -løsning Målorganisme Panelnivå N HPV16 HPV18 HPV31 Gjennomsnittlig knekkpunkt > LOD ,3 = LOD ,5 > LOD ,6 = LOD ,8 > LOD ,5 = LOD ,6 SD-komponenter/%CV Reagenslot System Analyseserie Tilfeldig Totalt 0,19 0 0,33 0,28 0,48 0,50 % 0,00 % 0,90 % 0,80 % 1,30 % 0,16 0 0,20 0,40 0,48 0,40 % 0,00 % 0,50 % 1,10 % 1,30 % 0,21 0 0,39 0,26 0,51 0,60 % 0,00 % 1,10 % 0,70 % 1,40 % 0,16 0 0,22 0,43 0,51 0,40 % 0,00 % 0,60 % 1,10 % 1,30 % 0,05 0,05 0,32 0,43 0,54 0,10 % 0,10 % 0,90 % 1,20 % 1,50 % 0,14 0 0,40 0,70 0,82 0,40 % 0,00 % 1,10 % 1,90 % 2,20 % NO 20 Doc Rev. 14.0

21 Tabell 18 Analyse av Ct-verdi-SD og % CV cobas 4800 HPV presisjonsstudiens panelnivåer som var preparert i SurePath TM -konserveringsvæske Målorganisme Panelnivå N HPV16 HPV18 HPV31 Gjennomsnittlig knekkpunkt > LOD ,2 = LOD ,2 > LOD ,3 = LOD ,7 > LOD ,2 = LOD ,1 SD-komponenter/%CV Reagenslot System Analyseserie Tilfeldig Totalt 0,12 0 0,20 0,40 0,46 0,30 % 0,00 % 0,50 % 1,10 % 1,20 % 0 0 0,30 0,56 0,64 0,00 % 0,00 % 0,80 % 1,50 % 1,70 % 0,11 0 0,34 0,27 0,45 0,30 % 0,00 % 1,00 % 0,70 % 1,20 % 0 0 0,38 0,47 0,61 0,00 % 0,00 % 1,00 % 1,20 % 1,60 % 0 0,02 0,32 0,63 0,70 0,00 % 0,10 % 0,80 % 1,70 % 1,90 % 0,16 0,12 0,20 0,83 0,87 0,40 % 0,30 % 0,50 % 2,20 % 2,30 % Analytisk spesifisitet Et panel med bakterier, sopp og virus, inkludert slike som er vanlige i den kvinnelige urogenitalkanalen, samt flere human papillomavirustyper som er klassifisert som lavrisiko eller ubestemt risiko, ble testet med cobas 4800 HPV-testen for å vurdere analytisk spesifisitet. Organismene som er oppført i Tabell 19, ble spiket ved høye konsentrasjoner ( 1 x 10 3 enheter/reaksjon) i HPV-negativ prøvebakgrunn i PreservCyt -løsning og i HPV-negative prøver i PreservCyt -løsning som var spiket med plasmid-dna for HPV 31, HPV16 og HPV18 ved 3 ganger deteksjonsgrensen. Organismer merket med en stjerne ble også testet i prøvebakgrunn i SurePath TM -konserveringsvæske under samme forhold. Organismer merket med en dobbel stjerne ble kun testet i SurePath -prøvebakgrunn. All testing i SurePath -prøvebakgrunn ble utført ved bruk av behandling med cobas -prøveklargjøringsbuffer. Resultatene viste at ingen av disse organismene forstyrret deteksjon av plasmid-dna for HPV31, HPV16 og HPV18 eller produserte falske positive resultater i den HPVnegative prøven. Tabell 19 Mikroorganismer som ble testet for analytisk spesifisitet Achromobacter xerosis Haemophilus ducreyi Streptococcus agalactiae* Acinetobacter calcaceticus Hepatitt B-virus (HBV) Streptococcus anginosus Acinetobacter lwoffi Herpes simpleksvirus 1* Streptococcus faecalis** Acinetobacter sp. genospecies 3 Herpes simpleksvirus 2* Streptococcus pyogenes* Actinomyces isrealii Humant immunsviktvirus (HIV-1) Streptococcus sanguis Adenovirus* Kingella kingae SV40 Aerococcus viridans Klebsiella pneumoniae ss ozaenae* Treponema pallidum Alcaligenes faecalis Lactobacillus acidophilus* Trichomonas vaginalis* Bacillus thuringiensis Lactobacillus crisptus Ureaplasma urealyticum Bacteroides caccae** Lactobacillus delbrueckii s. lactis Veillonella parvula Bacteroides fragilis Lactobacillus jensenii Vibrio parahaemolyticus Bacteroides ureolyticus Lactobacillus vaginalis Weissella paramesenteroides Bifidobacterium longum Lactococcus lactis cremoris Yersinia enterocolitica Bifidobacterium adolescentis* Legionella pneumophila HPV 6* Bifidobacterium brevi Micrococcus luteus HPV 11* Campylobacter jejuni Mobiluncus curtisii s. curtisii HPV 26* Candida albicans* Moraxella osloensis HPV 30** Chlamydia trachomatis* Morganella morganii HPV 34** Chromobacter violaceum Mycobacterium avium HPV 40 Citrobacter braakii Mycobacterium smegmatis HPV 42 Clostridium adolescentis Mycoplasma genitalium HPV 53** Clostridium beijerinckii** Mycoplasma hominis HPV 54 Clostridium perfringens Neisseria gonorrhoeae* HPV 55B Corynebacterium genitalium** Neisseria meningitidis serogruppe A HPV 61 Corynebacterium glutamicum Pasteurella multocida HPV NO 21 Doc Rev. 14.0

22 Cytomegalovirus* Pediococcus acidilactici HPV 64 Eikenella corrodens Peptostreptococcus anaerobius* HPV 67* Enterobacter aerogenes** Propionibacterium acnes HPV 69* Enterobacter cloacae Proteus mirabilis* HPV 70* Enterococcus faecalis Proteus vulgaris HPV 71 Enterococcus faecium* Providencia stuartii HPV 72 Epstein-Barr-virus* Pseudomonas aeruginosa HPV 73* Erysipelothrix rhusiopathiae Pseudomonas fluorescens** HPV 81 Escherichia coli* Ruminococcus productus HPV 82* Ewingella americana Salmonella minnesota HPV 83 Fusobacterium nucleatum Serratia marcescens HPV 84 Fusobacterium varium** Staphylococcus aureus* HPV 85** Gemella morbillorum Staphylococcus epidermidis* HPV 89 (CP6108) Gardnerella vaginalis Staphylococcus saprophyticus * Testet i både PreservCyt - og SurePath -prøvebakgrunn ** Testet kun i SurePath -prøvebakgrunn Interfererende substanser HPV-positive og HPV-negative livmorhalsprøver samt fiktive prøver ble brukt for å vurdere effektene av endogene og eksogene interfererende substanser som potensielt kunne finnes i livmorhalsprøvene. Testmaterialene som ble brukt i denne studien, er beskrevet i Tabell 20. Konsentrasjonen av endogene og eksogene substanser som ble testet, representerer forhold som kan oppstå under prøvetaking. Fullblod, mononukleære celler fra perifert blod (PBMC) og mukus fra livmorhalsen ble testet som potensielt endogene interfererende substanser som finnes i livmorhalsprøver. Nivåene av hver potensielt interfererende substans som ble testet, og ytelsesobservasjonene er beskrevet i Tabell 21. Det ble ikke sett noen interferens for PBMC eller mukus fra livmorhalsen på alle nivåene som ble testet. Fullblod viste ingen interferens da det fantes i visuelt detekterbare mengder på opptil 2 % i cobas PCR-celleinnsamlingsmedier, PreservCyt -løsning og SurePath TM -konserveringsvæske. Fullblod viste ingen interferens da det fantes i visuelt detekterbare mengder på opptil 4 % i SurePath TM -konserveringsvæske behandlet med cobas -prøveklargjøringsbuffer. Tabell 20 Beskrivelser av interferenstestingprøver Prøvetype Beskrivelse HPV-positive livmorhalsprøver HPV-negative livmorhalsprøver Fiktive HPV-positive livmorhalsprøver 3x LOD pooler i PreservCyt - løsning og SurePath TM - konserveringsvæske 10 individuelle HPV-positive prøver i PreservCyt -løsning ble avpipettert for testing med og uten endogene interfererende substanser 10 individuelle HPV-negative prøver i PreservCyt -løsning ble avpipettert for testing med og uten endogene interfererende substanser HPV-positive (kanal1) prøver i PreservCyt -løsning ble fortynnet med HPV-negative prøver til et omtrentlig nivå på 3 ganger deteksjonsgrense. Plasmider for HPV-type 16 (kanal 2) og 18 (kanal 3) ble deretter tilsatt ved ~ 3 x LOD. Plasmider for HPV-type 31, 16 og 18 ble fortynnet til 3 x LOD i pooler med negative prøver i PreservCyt -løsning og SurePath TM - konserveringsvæske. SurePath -prøvemateriale ble testet med og uten behandling med cobas -prøveklargjøringsbuffer. Interfererende substans som ble testet Fullblod Tabell 21 Resultater av interferenstesting med endogene interfererende substanser Konsentrasjon som ble testet 1 %, 1,5 %, 2 %, 3 %, 4 %, 6 %, 8 % vekt per vekt PreservCyt Observert interferens SurePath SurePath behandlet med cobas - prøveklargjøringsbuffer Over 2 % Over 2 % Over 4 % PBMC 10 4, 10 5, 10 6 celler/ml Ingen Ingen Ingen Cervikal mukus Mukus innhentet ved en standard cervikal rengjøringsprosedyre Ingen Ingen Ingen NO 22 Doc Rev. 14.0

23 Til sammen 18 reseptfrie produkter (OTC-produkter), deriblant hygieneprodukter for kvinner og prevensjonsmidler ble testet som potensielt interfererende substanser. Typer potensielle interfererende substanser som ble testet, og ytelsesobservasjoner i PreservCyt -løsning og SurePath TM - konserveringsvæske 3 x LOD-pooler er beskrevet i Tabell 22. Tabell 22 Resultater av interferenstesting med eksogene interfererende substanser Beskrivelse av interfererende substans Observert interferens Prevensjonsgeler, -skum Ingen Vaginale glidemidler *Ja Vaginale skyllemidler Ingen Soppdrepende kremer som inneholder 1 % klotrimazol, fenazopyridin hydrokhlorid, 1 % hydrokortison, 2 % mikonazolnitrat, Ingen 6,5 % tiokonazolsalve, 20 % benzokain * Replens (topisk fuktighetsgel) produserte negative resultater i replikater av 3 x LOD-poolen i SurePath TM -konserveringsvæske. Denne interferensen ble også observert når SurePath materiale ble behandlet med cobas -prøveklargjøringsbuffer. Matrikskomparabilitet Til sammen ble 1752 kvinner innmeldt for å innhente par med cervikale prøver som ble tatt i PreservCyt -løsning og SurePath TM -konserveringsvæske. Hvert par med cervikale prøver ble analysert med cobas 4800 HPV-testen for å vurdere resultatsamsvaret. SurePath -prøver ble testet uten behandling med cobas -prøveklargjøringsbuffer. I Tabell 23 ble prøver med positive resultater i én eller flere av de tre HPV-deteksjonskanalene ansett som positive. Prøver med negative resultater i alle de tre HPV-deteksjonskanalene ble ansett som negative. Det positive samsvaret mellom prøver i SurePath TM -konserveringsvæske og PreservCyt -løsning var 96,4 %. Det negative samsvaret var 95,1 %, og det samlede samsvaret var 95,4 %. Tabell 23 Sammendrag av resultater med cobas 4800 HPV-testen for prøver som ble tatt samtidig i PreservCyt -løsning og SurePath TM -konserveringsvæske, med testresultatet "HPV High Risk Panel" Livmorhalsprøvepar N = 1752 SurePath TM -konserveringsvæske (10 ml) Positivt samsvar = 407/422 = 96,4 % (95 % CI 94,2 %, 98,0 %) Negativt samsvar = 1265/1330 = 95,1 % (95 % CI 93,8 %, 96,2 %) Totalt samsvar = 1672/1752 = 95,4 % (95 % CI 94,3 %, 96,4 %) PreservCyt -løsning (20 ml) Positive Negative Totalt Positive Negative Totalt Studieresultatene fra disse 1752 kvinnene ble også analysert ved å kombinere resultatene fra alle de tre HPV-deteksjonskanalene. I denne analysen (Tabell 24) ble resultatene fra hver av kanalene 1-3 kombinert. Det positive samsvaret mellom prøver i SurePath TM -konserveringsvæske og PreservCyt - løsning var 96,9 %. Det negative samsvaret var 98,0 %, og det samlede samsvaret var 97,9 %. Tabell 24 Sammendrag av resultater med cobas 4800 HPV-testen for prøver som ble tatt samtidig i PreservCyt -løsning og SurePath TM -konserveringsvæske, med testresultatet "High Risk Panel Plus Genotyping" Livmorhalsprøvepar N = 5256 SurePath TM -konserveringsvæske (10 ml) Positivt samsvar = 492/508 = 96,9 % (95 % CI 94,9 %, 98,2 %) Negativt samsvar = 4654/4748 = 98,0 % (95 % CI 97,6 %, 98,4 %) Totalt samsvar = 5146/5256 = 97,9 % (95 % CI 97,5 %, 98,3 %) PreservCyt -løsning (20 ml) Positive Negative Totalt Positive Negative Totalt NO 23 Doc Rev. 14.0

24 SurePath -prøvestabilitet i 6 uker ved 2 30 C ved bruk av behandling med cobas -prøveklargjøringsbuffer Tre SurePath -pooler med HPV-negative prøver ble tilsatt HPV-type 51-positivt SurePath -prøvemateriale for å gi positive, høye positive og lave positive prøvepooler. Den lave positive poolen var på ~deteksjonsgrensen (LOD) for testen på dag 0 før behandling med cobas -prøveklargjøringsbuffer. Disse poolene ble oppbevart ved 32 C og testet ved intervaller på opptil 6 uker. Poolmaterialet ble behandlet for å reversere matriksinduserte tverrbindinger etterfulgt av en analyse med cobas 4800 HPV-testen på hvert av tidspunktene. Alle tre pooler opprettholdt Ct-gjennomsnittsverdier under den kliniske cutoff-verdien for HPV-type 51 (40,0 for kanal 1) i løpet av den 6 ukers lange oppbevaringsperioden (se tabell 25). Tabell 25 Resultater for SurePath -prøvestabilitet i 6 uker ved bruk av cobas -prøveklargjøringsbuffer SurePath -pooler Gjennomsnittlige Ct-verdier* Dag 0 Uke 1 Uke 3 Uke 4 Uke 6 Høye positive 28,7 30,1 30,3 30,6 31,1 Positive 32,9 33,5 34,1 33,9 34,6 Lave positive (~LOD) 36,9 37,9 38,0 38,8 38,7 * Lave positive tidspunkter testet som 40 replikater; positive tidspunkter som 30 replikater; høye positive tidspunkter som 20 replikater NO 24 Doc Rev. 14.0

25 REFERANSER 1. Burd, Eileen M Human Papillomavirus and Cervical Cancer. Clinical Microbiology Reviews. 16: zur Hausen, H Papillomaviruses and Cancer: From Basic Studies to Clinical Application. Nat Rev Cancer. 2(5): Walboomers, Jan M.M., Jacobs, Marcel V., Manos, M.M., et al Human Papillomavirus is a Necessary Cause of Invasive Cervical Cancer Worldwide. Journal of Pathology. 189: Bernard HU. Review: The clinical importance of the nomenclature, evolution and taxonomy of human papillomaviruses. J Clin Virol. 2005; 32S, S Molijn A, Kleter B, Quint W, van Doorn, L. Review: Molecular diagnosis of human papillomavirus (HPV) infections. J Clin Virol. 2005; 32S:S zur Hausen H. Roots and perspectives of contemporary papillomavirus research. J Cancer Res Clin Oncol. 1996; 122: de Villiers EM, Fauguet C, Broker TR, Bernard HU, zur Hausen H. Classification of papillomaviruses. Virology. 2004; 324: Franco EL, Rohan TE, Villa LL. Epidemiologic evidence and human papillomavirus infection as a necessary cause of cervical cancer. J Natl Cancer Inst. 1999; 91: Lorincz AT, Reid R, Jenson AB, et al. Human papillomavirus infection of the cervix: relative risk associations of 15 common anogenital types. Obstet Gynecol. 1992; 79: Bosch, F.X., Manos, M.M., Munoz, N., et al International Biological Study on Cervical Cancer (IBSCC) Study Group. Prevalence of Human Papillomavirus in Cervical Cancer: a Worldwide Perspective. Journal of the National Cancer Institute, Vol. 87, No. 11: Bosch, F.X., A. Lorincz, N. Muñoz, C.J.L.M. Meijer, K.V. Shah (2002) The causal relation between human papillomavirus and cervical cancer J Clin Path 55: Muñoz N, F.X. Bosch, S. de Sanjosé, R. Herrero, X. Castellsagué, K.V. Shah, P.J.F. Snijders, and Chris J.L.M. Meijer, for the International Agency for Research on Cancer Multicenter Cervical Cancer Study Group. (2003) Epidemiologic Classification of Human Papillomavirus Types Associated with Cervical Cancer N Engl J Med 348(6): Clifford GM, Smith JS, Plummer M, Muñoz N, Franceschi S. Human papillomavirus types in invasive cervical cancer worldwide: a meta-analysis. Br J Cancer. 2003; 88: Koutsky, L Epidemiology of genital human papillomavirus infection. American Journal of Medicine. 102(5A): Winer RL, Kiviat NB, Hughes JP, et al. Development and duration of human papillomavirus lesions, after initial infection. J Infect Dis. 2005;191: Moscicki, A, Schiffman M, Kjaer S, Villa L. Updating the natural history of HPV and anogenital cancer. Vaccine 2006; 24(S3); Moscicki AB, Ellenberg JH, Farhat S, Xu J. Persistence of human papillomavirus infection in HIV-infected and uninfected adolescent girls: risk factors and differences, by phylogenetic type. J Infect Dis Jul 1;190(1): Palmer Castle PE, Schiffman M, Herrero R, Hildesheim A, Rodriguez AC, Bratti MC, Sherman ME, Wacholder S, Tarone R, Burk RD. A prospective study of age trends in cervical human papillomavirus acquisition and persistence in Guanacaste, Costa Rica. J Infect Dis Jun 1;191(11): Zielinski GD, Snijders PJF, Rozendaal l, et al. High-risk HPV testing in women with borderline and mild dyskaryosis; long term follow-up data and clinical relevance. J Pathol 2001;195: Holowaty P, Miller AB, Rohan T, To T. Natural history of dysplasia of the uterine cervix, J Natl Cancer Inst 1999; 91: Nobbenhuis MA, Helmerhorst TJ, van den Brule AJ, Rozendaal L, Voorhorst FJ, Bezemer PD, Verheijen RH, Meijer CJ. Cytological regression and clearance of high-risk human papillomavirus in women with an abnormal cervical smear. Lancet. 2001;358(9295): Cuzick J, Clavel C, Petry KU, et al. Overview of the European and North American studies on HPV testing in primary cervical cancer screening. Int J Cancer 2006;119: Whitlock EP, Vesco KK, Eder M, Lin JS, Senger CA, Burda BU. Liquid-based cytology and human papillomavirus testing to screen for cervical cancer: a systematic review for the U.S. Preventive Services Task Force. Ann Intern Med 2011;155:687,697, W Myers, T.W. and Gelfand, D.H Reverse transcription and DNA amplification by a Thermus thermophilus DNA polymerase. Biochemistry. 30: Davies, P., Kornegay, J., Iftner, T Current methods of testing for human papillomavirus. Best Practice and Research Clinical Obstetrics and Gynaecology. Vol. 15, No. 5: Birch, D.E., et al The use of a thermally activated DNA polymerase PCR gives improved specificity, sensitivity and product yield without additives or extra process steps. Nature. Vol 381, No 6581: Meng, Q., et al Automated Multiplex Assay System for Simultaneous Detection of Hepatitis B Virus DNA, Hepatitis C Virus RNA, and Human Immunodeficiency Virus Type 1 RNA. J Clin Microbiol. Vol 39, No 8: Longo, M.C., Berninger, M.S. and Hartley, J.L Use of uracil DNA glycosylase to control carry-over contamination in polymerase chain reactions. Gene. 93: NO 25 Doc Rev. 14.0

26 29. Higuchi, R., Dollinger, G., Walsh, P.S., and Griffith, R Simultaneous amplification and detection of specific DNA sequences. Bio/Technology 10: Heid, C.A., Stevens, J., Livak, J.K., and Williams, P.M Real time quantitative PCR. Genome Research 6: Richmond, J.Y. and McKinney, R.W. eds Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. HHS Publication Number (CDC) Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections. Approved Guideline- Third Edition. CLSI Document M29-A3 Villanova, PA:CLSI, International Air Transport Association. Dangerous Goods Regulations, 48 th Edition Wheeler, C.M., Hunt, W.C., Joste, N.E., Key, C.R., Quint, W.G.V. and Castle, P.E Human Papillomavirus Genotype Distributions: Implications for Vaccination and Cancer Screening in the United States. J Natl Cancer Inst. 101: Khan, M.J., Castle, P.E., Lorincz, A.T., Wacholder, S., Sherman, M., Scott, D.R., Rush, B.B., Glass, A.G. and Schiffman, M The Elevated 10-Year Risk of Cervical Precancer and Cancer in Women With Human Papillomavirus (HPV) Type 16 and 18 and the Possible Utility of Type-Specific HPV Testing in Clinical Practice. J Natl Cancer Inst. 97: Wright TC, Jr., Massad LS, Dunton CJ, Spitzer M, Wilkinson EJ, and Solomon D Consensus Guidelines for the Management of Women with Abnormal Cervical Cancer Screening Tests, Am J Obstet Gynecol 197 (4); Saslow D, Runowicz CD, Solomon D, Moscicki A-B, Smith RA, Eyre HJ, Cohen C. 2002, American Cancer Society Guideline for the Early Detection of Cervical Neoplasia and Cancer. CA Can Jour Clin 53: Stoler MH, Wright TC Jr, Sharma A, Apple R, Gutekunst K, Wright TL; ATHENA(Addressing THE Need for Advanced HPV Diagnostics) HPV Study Group. High-risk human papillomavirus testing in women with ASC-US cytology: results from the ATHENA HPV study. Am J Clin Pathol Mar;135(3): NO 26 Doc Rev. 14.0

27 Informasjon om dokumentrevisjon Doc Rev /2015 Doc Rev /2016 Doc Rev /2016 Revidert AVSNITT B: Inkludert ekstraksjonsplate (dypbrønn) 2,0 ml i avsnittet MATERIELL SOM KREVES, MEN SOM IKKE MEDFØLGER. Lagt til trinn i avsnittet Utføre en Recovery Workflow for å skanne DWP-ID hvis man bruker HPV ASAP v2.1. Oppdatert beskrivelsene av den harmoniserte symbolsiden på slutten av pakningsvedlegget. Kontakt din lokale Roche-representant hvis du har noen spørsmål. Avsnittene TAKING, TRANSPORT OG OPPBEVARING AV PRØVER, BRUKSANVISNING og YTELSESKARAKTERISTIKA er revidert med nye instruksjoner for oppbevaring og håndtering av SurePath-prøver. Avsnitt A er fjernet i tråd med obligatorisk oppgradering til programvareversjon 2.2. Kontakt din lokale Roche-representant hvis du har noen spørsmål. Lagt til "Roche P/N ". Lagt til "Roche P/N , for å sette hetter på prøver etter analysering i 13 ml rundbunnede rør". Fjernet "Sarstedt" overalt. Fjernet "Sarstedt P/N: ". Fjernet "Sarstedt: P/N ". Kontakt din lokale Roche-representant hvis du har noen spørsmål NO 27 Doc Rev. 14.0

28 Roche Molecular Systems, Inc US Highway 202 South Branchburg, NJ USA Distributed by Roche Diagnostics (Schweiz) AG Roche Diagnostics Industriestrasse 7 2, Avenue du Vercors 6343 Rotkreuz, Switzerland Meylan, France Roche Diagnostics GmbH Distributore in Italia: Sandhofer Strasse 116 Roche Diagnostics S.p.A Mannheim, Germany Viale G. B. Stucchi Monza, Milano, Italy Roche Diagnostics, SL Avda. Generalitat, Distribuidor em Portugal: E Sant Cugat del Vallès Roche Sistemas de Diagnósticos Lda. Barcelona, Spain Estrada Nacional, Amadora, Portugal Roche Diagnostics 201, boulevard Armand-Frappier Roche Diagnostica Brasil Ltda. H7V 4A2 Laval, Québec, Canada Av. Engenheiro Billings, 1729 (For Technical Assistance call: Jaguaré, Building 10 Pour toute assistance technique, São Paulo, SP Brazil appeler le: ) Varemerker og patenter Se Roche Molecular Systems, Inc. 08/2016 ( ENGL) Doc Rev NO 28 Doc Rev. 14.0

29 Følgende symboler brukes nå ved merking for Roche PCR-diagnostiske produkter. Tilleggsprogramvare In-Vitro-diagnostisk medisinsk utstyr Autorisert representant i EF Produsent Lotnummer Oppbevares på et mørkt sted Biologisk risiko Inneholder tilstrekkelig til <n> tester Katalognummer Temperaturbegrensning Vennligst se brukerveiledningen Testdefinisjonsfil Innhold i kitet Utløpsdato Distribuert av Globalt handelsnummer Dette produktet innfrir kravene til Europaparlamentets Rådsdirektiv 98/79/ EF om in vitro-diagnostisk medisinsk utstyr. Teknisk support for kunder i USA NO 29 Doc Rev. 14.0