Væskebasert celleprøvetaking fordeler og utfordringer Fagdag Masseundersøkelsen mot livmorhalskreft 25. mars 2014

Transkript

1 Væskebasert celleprøvetaking fordeler og utfordringer Fagdag Masseundersøkelsen mot livmorhalskreft 25. mars 2014 Maj Liv Eide, St. Olavs Hospital, Universitetssykehuset i Trondheim

2 Screeningprogram mot livmorhalskreft Konvensjonelle utstryk > væskebasert cytologi Cytologi som primær screeningsmetode og HPVtesting som triage til ASC US/LSIL HPV testing som primær screeningsmetode i fremtiden> cytologi som triage til hrhpvpositive kvinner HPV vaksinering 2

3 Væskebasert cervixcytologi 3

4 Væskebasert cervixcytologi (VBC) VÅTFIKSERING Celler direkte i fikseringsvæske eliminerer tørkeartefakter Cellene fikseres fra alle kanter Børsten må røres rundt i væsken med en gang for åfåfrigjort cellematerialet og kastes deretter (gjelder ThinPrep) 4

5 Konvensjonelt utstryk med sprayfiksering 5

6 Konvensjonell prøve versus væskebasert prøve

7 Prøvetaking fra cervix til cytologisk undersøkelse med ThinPrep Pap Test Endocervical børste/spatel protokoll Ta en prøve fra ektocervix ved åføre en plastikkspatel med den pekende enden inn i cervikalåpningen. Drei 360 i en retning, samtidig mens du trykker lett mot ektocervix. Skyll spatelen så raskt som mulig i beholderen med PreservCytløsningen ved å rotere spatelen kraftig i beholderen 10 ganger. Kast spatelen. Ta en prøve fra endocervix ved åbruke en endocervikal børste. Før børsten inn i cervikalåpningen til kun det nederste av børsten vises. Roter sakte 1/4 eller 1/2 omdreining i en retning. Bruk børste og spatel eller en kombibørste unngå blødning ved prøvetaking Cervexbrush Combi protokoll Cervex børste protokoll Skyll børsten så raskt som mulig i PreservCyt løsningen ved å rotere denne i løsningen 10 ganger mot beholderens vegg. Rist tilslutt børsten i væsken for åfrigjøre alt materiale. Kast børsten umiddelbart. LA ALDRI BØRSTEN BLI STÅENDE I VÆSKEN FØR ROTERING, fordi dette vil føre til at cellematerialet fikseres fast til børsten. Ta en tilstrekkelig prøve fra ecto og endocervix i en operasjon, ved å bruke en Cervex Brush Combi. Før tuppen av børsten inn i cervikalkanalen til de korteste bustene på børsten får kontakt med ectocervix. Trykk lett, mens du roterer børsten i urviserretningen to ganger. Skyll børsten så raskt som mulig i beholderen med PreservCyt løsning Ved å trykke børsten mot bunnen 10 ganger slik at bustene går fra hverandre. Til slutt, roter børsten i væsken for åfrigjøre alt materiale. Kast børsten umiddelbart. LA ALDRI BØRSTEN BLI STÅENDE I VÆSKEN, fordi dette vil føre til at cellematerialet fikseres fast til børsten.

8 Væskebasert cytologi ThinPrep versus Surepath ThinPrep Pap Test BD SurePath Pap Test Endocervikal børste/spatel eller kombibørste. Børsten vispes i væsken umiddelbart etter prøvetaking og kastes deretter Væsken inneholder: 50 % metanol i en bufret løsning Filtermetode Børstehodet knekkes av etter prøvetaking og overføres til prøvebeholder Væsken inneholder: etanol (15 20%), < 1 %, isopropylalkohol, < 1 % metanol og 0,1 % formaldehyd Sentrifugeringsmetode

9 ThinPrep Pap Test prepareringsprosess Celleblanding: Spinning av cellemateriale blander celleprøven og løser opp blod, slim og debris Celleinnsamling: Væsken suges opp gjennom filtermembranen og ett lett vakuum på innsiden av filteret samler cellene på ytre del av filtermembranen. Celleoverføring: Filteret snus og presses lett mot objektglasset. Celler overføres pga den naturlige tiltrekkingen mellom cellene og glasset Resultat: Jevnt fordelte celler innenfor et område på 20 mm Ulempe: Blod, slim, eksplorasjonskrem og leukocytter, konkurrerer med epitelcellene om plassen påfilteret

10 BD SurePath væskebasert Pap test Cellesuspensjonen i prøvebeholder vortekses for å løsne cellene fra børstehodet trapped debris is removed enriched cell pellet Sentrifugal sedimentering i ulike sjikt, som delvis fjerner ikke diagnostisk debris og overflødige inflammatoriske celler ages/bloody_vial.gif Etter sentrifugering overføres cellepelletten i reagensrøret til et kammer med et montert objektglass Automatisk farging vha en modifisert Pap farging i en PrepStain slide processor Resultat: Jevnt fordelte celler innenfor et område på 13 mm

11 Hvordan vurdere minimumsantallet plateepitelceller i Thinprep og Surepath? Retningslinjer i Bethesdaklassifikasjonen Det skal telles gjennomsnittsantall celler/synsfelt i minimum 10 synsfelt langs en diameter som går gjennom sentrum av prepareringen (ikke 10 påfølgende synsfelt eller 10 tilfeldige synsfelt i ringen) ThinPrep (diameter 20 mm) Minimum antall celler pr. synsfelt Totalt 5000 celler SurePath (diameter 13 mm) Minimum antall celler pr. synsfelt 5000 celler FN 20/ 10 x objektiv ,3 FN 20/ 40 x objektiv 3,1 7,4 FN 22/ 10 x objektiv 60,5 143,2 FN 22/ 40 x objektiv 3,8 9 I England bruker mange nån minimumsantall plateepitelceller: eller celler

12 Fordeler med VBC Alt cellemateriale overført til prøvebeholder Bedre bevarte celler og eliminasjon av lufttørking Cellene er jevnere fordelt og mindre overlapping Mindre område å screene: Kortere screeningtid Rapid pre eller rescreening Restmateriale: HPV testing og preparat til undervisning bl.a

13 Kasus: HSIL (CIN 3) VBC Konvensjonell

14 Deteksjon og behandling av forstadier til kreft CYTOLOGI FORSTADIUM TIL KREFT(CIN 3) HISTOLOGISK BEKREFTELSE BEHANDLING MED KONISERING Available from 14

15 VBC og andel uegnede cervixcytologiske prøver i England, Danmark og Norge Andel uegnede i England (100 % VBC) : 2,4 % Andel uegnede i Danmark 2011 (ca 70 % VBC): 2,3 % Andel uegnede i Norge 2013 ( ca 40 % VBC): 4,5 % totalt og 6,4 % for lab. med VBC Hvorfor har andelen uegnede prøver i Norge, økt ved konvertering til VBC i motsetning til andre land?

16 Andel uegnede cervixprøver ver i Norge 2013 LAB NR Totalt uegnet Andel uegnet konvensjonell Andel uegnet væskebasert Andel av prøvene som er væskebasert 1 6,4 6,1 8,5 13,1 3 2,2 2,2 7 4,7 3,7 6,7 34,5 8 5,1 6,5 5,1 99,6 10 1,7 1,0 2,8 37,1 11 1,6 1,6 12 7,3 18,9 7,2 99,1 13 7,1 2,5 7,5 90,7 14 3,2 3,1 3,4 34,1 15 2,9 2,9 16 3,4 3,4 17 0,8 0,8 18 8,9 8,9 19 7,8 5,3 7,8 99,9 20 7,6 3,0 7,6 98,8 21 3,6 3,8 0,4 6,2 23 3,2 3,0 3,3 78,5 26 6,4 6,4 Total 4,5 3,3 6,4 40,2

17 Årsaker til uegnede prøver med ThinPrep metoden Prøvetakingsfeil Ikke optimal overføring av prøvemateriale til prøvebeholder Blod, slim og eksplorasjonskrem konkurrer med cellene om plassen på filtermembranen Kriterier for cytologisk vurdering av minimumsantall plateepitel brukes feil

18 Uegnede ThinPrep prøver pga epitelcellenes konkurrenter om plassen påp filteret: Blod Granulocytter slim Ulike typer eksplorasjonskrem

19 ThinPrep Pap Test: Blodige prøver For sparsomt med plateepitelceller pga blodtilblandet prøvemateriale Preparering etter lysering av blod med eddiksyre Erfaring ved St.Olavs Hospital: % blir representative etter lysering av blod, men vi utfører denne prosedyren i dag på ca 10 % av prøvene

20 Hvordan nå frem med info om prøvetaking til prøvetaker???

21 Tips til prøvetaker Følg instruksjonen i pakningsvedlegget for antall omdreininger i endoog ectocervix. Dette varierer etter type prøvetakingsutstyr. Skyll prøvematerialet over i beholderen umiddelbart (ThinPrep), ikke la børsten stå i beholderen før skylling Ikke ta prøve under menstruasjon Dersom spatel brukes, skal det være plastikkspatel. Ikke bruk trespatel Dersom mye slim, tørk dette forsiktig av før prøvetaking Ikke bruk smøremiddel

22 Masseundersøkelse mot livmorhalskreft Endring i primærscreeningsmetode rscreeningsmetode kommer.. Normal LSIL HSIL Cancer Schiffman M, Castle PE. N Engl J Med 2005; 353: Fra CYTOLOGI til HPV DNA test som primærscreeningmetode for kvinner år med 5 års screeningintervall, cytologi som oppfølging til HPV positive kvinner CYTOLOGI vedvarer foreløpig som primærscreeningsmetode for kvinner år med 3 års screeningintervall Væskebasert cytologi er forutsetningen for HPV i primærscreening Uavhengig om den væskebaserte prøven skal benyttes til HPVtesting eller cytologi er det viktig at prøvetakingen er optimal 22

23 Takk for oppmerksomheten