Assistert befrktning A.R.T Assisted Reprodctive Techniqes Lov om hmanmedisinsk brk av bioteknologi (bioteknologiloven) 1987 Reglerer ART, forskning på befrktede egg, kloning, genetisk testing før og etter implantasjon og genterapi lovdata.no Ritsa Storeng Nasjonalt kompetansesenter for kvinnehelse Kvinne- og barneklinikken Oslo niversitetssykehs - Rikshospitalet 4. mai 2011 Assistert befrktning- milepæler Mer enn 4 millioner barn er født i hele verden ved hjelp av ART Mer enn 3,0% av barn født i Norge (ca 1500 / år) 1978 - Første test tbe baby eller prøverørsbarn 1982 Test tbe tvillinger 1983 Første fødsel etter frossen/tint embryotransfer 1984 - Første norske prøverørsbarn 1985 - Srrogatibarn 1988 - Første embryoscreening (PGD) 1992 - Første barn født etter ICSI 1995 - Først donorbarn (donorsædcelle & donoregg) 1996 - Første norske ICSI-barn 1997 - Første frossen egg barn 1999 - Laserassistert-hatching 1999 - Kromosomscreening 2004 - Første barn født etter ovarialvev kryopreservering (Belgia) 2010 - Nobelpris i medisin tildeles Bob Edwards 1
British IVF pioneer Robert Edwards wins Nobel prize BRITISH SCIENTIST ROBERT EDWARDS, THE MAN WHO DEVISED THE FERTILITY TREATMENT IVF, HAS BEEN AWARDED THIS YEAR'S NOBEL PRIZE FOR MEDICINE 4 OCTOBER 2010 LAST UPDATED AT 10:47 GMT,BBCnews ROBERT EDWARDS WITH THE FIRST "TEST TUBE BABY" LOUISE BROWN AND HER OWN CHILD Metafase II oocytt TODAY, ROBERT EDWARDS' VISION IS A REALITY AND BRINGS JOY TO INFERTILE PEOPLE ALL OVER THE WORLD THE NOBEL ASSEMBLY Modne sædceller ART Intraterin inseminasjon (IUI) COH Kontrollert ovarial hyperstimlering IUI - intraterint inseminasjon IVF- in vitro fertilisering ICSI intracytoplasmisk spermieinjection Frysing / tining / ET Srrogati Donasjon av sædceller Donasjon av oocytter /embryoer MESA /PESA/TESA/TESE metoder for testiklær sædcelleaspirasjon / ekstraksjon + IVF/ICSI PGD - Preimplantasjonsgenetisk diagnostikk Frysing & lagring av ovarialvev Gonadotropinbehandling for å stimlere modning av 1-2 follikler Monitorering av follikkeltviklingen med ltralyd Ovlasjonsindksjon med hcg Sædpreparering og intraterin inseminasjon på ovlasjonsdagen 2
In vitro fertilisering - IVF Hovedprinsipper Nedreglering av ovarialfnksjonen med GnRH-agonist Hormonstimlering med FSH - eggløsningsindksjon med hcg Oocyttaspirasjon - Embryotransfer Kontrollert ovarial hyperstimlering med hormoner (COH) Monitorering av folikkeltviklingen med ltralyd og ovlasjonsindksjon Oocyttthenting (OPU) Sædprøvepreparering Inseminering av oocytter med den preparerte sædprøven Embryodyrking / evalering Transvaginal embryotransfer til terinhlen hcg prøve /monitorering av graviditet FSH = Follikkelstimlerende hormon OPU = Oocytt "pick-p" hcg = Hman chorionic gonadotropin ET = Embryotransfer Day 1 2 GnRH-agonist 10 14 Daglig FSH-injekjsoner Nedreglering Menstrasjon 2-3 ker (LH & Estradiol inhiberes) hcg OPU ET Prosedyrer 1. Oocyttthenting ved folikkelaspirasjon 1. Eggthenting (OPU) 2. Sædpreparering 3. IVF eller ICSI 4. Embryotransfer 5. Kryopreservering Folikkelvæske 3
Oocyte cmls complex Folikkelvæske Korona radiata Zona pellcida oocytt 1.pollegeme Modent oocytt (MII) 100mm diameter Kltrmedier Kommersielt tilgjengelige, kjemisk definerte medier til: Folikkel-aspirasjon IVF ICSI Frysing sædpreparering Sædpreparering Swim-p 3. Inseminasjon av oocytter Anvendes ved normal sædprøve 0,5 ml. sæd deponeres nder medim i 10ml prøverør Inkberes ved 37 o C, 45 min, swim-p 0,5ml av toppfasen som inneholder de levende sædcellene pipetteres av Sentrifgeres, 500g, 5 min. Pelleten løses i 0,5ml sædpreparerings medim 5 l prøve analyseres i et Compter Assisted Sperm Analysis (CASA) apparat Ca. 100.000 spermatozoa tilsettes hvert oocytt + + 4
Metafase II egg ICSI Mikroinjeksjon 3a. Inseminasjon av oocytten ved ICSI Immobilisering av sædcellen Mitokondrier inaktiveres Spermfaktor oscillin initierer befrktingsprosessen 16-18 timer Holding pipette Sædcelle i injeksjonspipette Holding av egget Befrktet egg (Zygote) Sædcellekilden ved ICSI Ejaklat PESA Perctaneos epididymal sperm aspiration (obstrktiv azoospermi) TESA Testiclar sperm aspiration (ikke-obstrktiv azoospermi) DONOR sædceller Modent oocytt Fertilisering av egget Zygote (befrktet oocytt) Pollegemer Cellemembran pronklei oocytt 16-18 timer etter inseminasjonen ved IVF eller ICSI Zona pellcida 5
Cleavage stage embryo 8-celle embryo på dag 3 Morfologisk normale () & normale (n) befrktede & befrktede oocytter og embryo Mitose (celledeling) i det befrktede egget 2-celle embryo på dag 2 Morla på dag 4 Hatching blastocyst på dag 5-6 4-celle embryo på dag 2 Blastocyst på dag 5 n n n n Embryotransfer IVF prosedyrer The Process of IVF. * Embryotransfer etter IVF eller ICSI tføres som regel på dag 2 etter eggthenting, embryo er på 4-cellestadiet 1 eller 2 embryoer transfereres til ters. Elective single embryo transfer eset * Kriterier for valg av embryo : morfologi celledelingshastighet * Progesteron (ltealfasestøtte) Van Voorhis BJ. N Engl J Med 2007;356:379-386 6
5. Kryopreservering av overtallige preimplantasjonembryo Faktorer som påvirker resltatet av behandling med ART Inkbasjon av embryo med kryoprotektant (PrOH) Nedkjøling (0,3 o C/min) Lagring i flytende nitrogen (- 196 o C) 5 år (Bioteknologiloven) Kvinnens alder Varigheten på infertiliteten Tidligere fødsler Infertilitetsdiagnose Antall tidligere IVF-behandlinger Antall/kvalitet av/på aspirerte oocytter Antall/kvalitet av/på de overførte embryoer Oocytt aneploidier som fnksjon av kvinnens alder aneploide Tining Fortynning og fjerning av kryoprotektanten Dyrking Embryotransfer normale Preimplantasjonsgenetisk diagnostikk PGD Prosedyren som brkes for å ndersøke om oocytter eller embryoer er genetisk normale FØR embryotransfer til ters Pollegemebiopsi fra et befrktet og et befrktet egg Blastomerbiopsi fra en 8-celle embryo Diagnostisering av aneploidier med FISH og monogenisk sykdom med PCR Mnné 2006 En blastomer med trisomi 21 detektert med FISH Fertilitetsbevarende behandling ved kryopreservering av ovarialvev Kreft hos fertile kvinner Kreft hos prepbertale piker Benign sykdom (Sickle cell anemi, thalassemi,aplastic anemi, benigne ovariale svlster) >50% sannsynlighet for infertilitet Høy sannsynlighet for at kvinnen blir frisk etter kreftbehandlingen Nr.1 Donnez et al., Lancet, 24.09.2004 + 14 barn født i: Denmark Belgim Israel France Spania 7
I Norge Følgende prosedyrer er tillatt Kryopreservering av oocytter Kryopreservering av ovarialvev IVF/ICSI med donorsædceller PGD Forskning på overtallige embryoer Embryonale stamceller IVF for lesbiske par Følgende prosedyrer er fremdeles IKKE tillatt Srrogati Oocytt / embryo donasjon IVF for HIV-positive par Terapetisk kloning IVF for homofile menn 21+1 ways to make a baby. 1. Artificial insemination -- of mother with father's sperm 2. Artificial insemination -- of mother with donor sperm 3. Artificial insemination -- with egg and sperm donors, sing srrogate mother 4. In vitro fertilization (IVF) -- sing egg and sperm of parents 5. IVF -- with Intra-Cytoplasmic Sperm Injection (ICSI) 6. IVF -- with frozen embryos 7. IVF -- with Preimplantation Genetic Diagnosis (PGD) 8. IVF -- with egg donor 9. IVF -- with sperm donor 10. IVF -- with egg and sperm donor 11. IVF -- with srrogate sing parents' egg and sperm 12. IVF -- with srrogate and egg donor 13. IVF -- with srrogate and sperm donor 14. IVF -- with srrogate sing her egg, sperm from baby's father 15. IVF -- with srrogate sing egg and sperm donors 16. Cytoplasmic transfer (from yong eggs to old eggs) 17. Nclear transfer and cloning 18. TESA( testiclar sperm aspiration) & ICSI 19. PESA ( perctaneos epididymal sperm aspiration) & ICSI 20. Assisted hatching and embryo fragment removall Takk! 21. IVF after ovarian tisse cryopreservation 22. first time sed in Paradise! 8