Oppgave 16.2 fortsetter

Transkript

1 Oppgave 16.2 fortsetter Vask av presipiteringsgeler for å fjerne ikke-presipitert protein (bakgrunn): Vask 3 x 15 min + 10 min press i fysiologisk saltvann /evt. over natt + 10 min. press. eretter 1 x vask i dest. vann i 15 min + 10 min press el glassplate 15 min fuktet filterpapir 10 min cellestoff gel filterpapir N! elen kan løsne fra glassplaten i vaskekaret. Prøv da forsiktig å manøvrere gelen tilbake på glassplaten før den legges i press. Etter siste vask; ta forsiktig av filterpapiret, og legg gelen til tørk i inkubatoren i 1 time.

2 arging av gelene: Sett platene i holder 5 min i fargevæske (i avtrekk). La deretter fargen renne godt av og sett 3 min i første avfargingskar. ortsett på samme måte med 3 min i hvert avfargingskar til forhold mellom bakgrunn og presipitat er bra. Pass på å ikke avfarge for mye da dette kan fjerne svake presipiteringslinjer. ypp gelene i dest. vann. Tørk i inkubator gglutinasjon En agglutineringsreaksjon dannes ved å kryssbinde celler eller partikler med spesifikke antistoff. I agglutineringsreaksjoner dannes vanligvis synlige aggregater som kan ses med det blotte øye. irekte agglutineringsreaksjoner brukes bl.a. ved diagnose av noen sykdommer, og involverer direkte agglutinering av bakterie/celler med spesifikke antistoff. Hemagglutinering er direkte agglutinering av røde blodceller med antistoff mot overflatestrukturer. ruk av små syntetiske partikler er nå ofte brukt i agglutineringreaksjoner. isse partiklene består ofte av lateks, og kan dekkes enten med antigen eller antistoff, og gjør at man lettere kan se om en agglutineringreaksjon skjer. Eksempler på slike tester er: graviditets-tester, deteksjon av antistoffprodukter i infeksjoner, og i narkotika-testing.

3 Streptococcal grouping latex kit enytter seg av gruppe-spesifikke antigener fra celleveggen hos streptokokker. isse antigenene ekstraheres på en enkel måte. Kit et inneholder latekspartikler dekket med forskjellige antistoff mot disse forskjellige gruppespesifikke antigenene. gglutinering skjer da der latekspartikler med en type antistoff gjenkjenner sitt spesifikke antigen fra en bakterie. Streptococcus arter ruppe ruppe ruppe ruppe ruppe ruppe

4 Latekspartikler med antistoff mot Lancefield gruppe: Latex Latex Latex Latex Latex Latex Test-bakterie: gglutinering akteriene klassifiseres i Lancefield gruppe akterie 1: rypp en dråpe av latekspartikkelløsningen for hver Lancefield gruppe i hvert sitt sorte felt på brettet. rypp deretter en dråpe av hver bakterieløsning ved siden av. Rør sammen med pinne. akterie 2:

5 Positiv Vipp forsiktig på brettet og se etter aggregering av latekspartiklene I dette eksempelet viser testen at bakterien tilhører Lancefield gruppe ELIS Enzym linked immunosorbent assay (ELIS) er en metode med høy sensitivitet brukt til deteksjon av små mengder protein - ned til 1 ng/ml. To hoved-metoder: 1. ouble antibody sandwich assay rukes for deteksjon av antigen, ved at antistoff bindes i testbrønnen. 2. Indirect immunosorbent assay rukes til deteksjon av spesifikke antistoff i et testserum ved at antigenet festes i brønnen.

6 N! Utføres ikke på kurset Komplement fikseringstest Tidligere brukt bl.a. i diagnose av syfilis. rukes nå til diagnose av virus, sopp, og protozoa forårsakede sykdommer. aserer seg på interaksjon mellom c-delen (H2-Ig/IgM) av antistoff og komplementproteiner (1-kompleks). ette fører til en autokatalyse av 1r, som starter en proteolytisk kaskade-reaksjon som ender i dannelse av M (membrane attack complex). M er et porekompleks i målmembranen, bestående av komplementkomponentene: 5b, 6, 7, 8 og flere molekyler 9. Hvis M dannes på en erytrocytt-membran, vil man få hemolyse. ntigen + Pasientserum (med antistoff mot det spesifikke antigen) Komplement proteiner ntistoff binder antigen, og komplement fikseres til fcdelen av antistoff Positivt resultat: pasienten har antistoff mot det spesifikke antigenet. E Røde blodlegemer fra sau ntistoff mot sau Ingen hemolyse. Komplementproteiner er allerede fiksert, og kan ikke binde til fc-delen på antistoff mot sau, og dermed forårsake hemolyse av blodlegemer.

7 ntigen + Pasientserum (u/antistoff) Komplement proteiner Ikke antistoff som binder antigen, og komplement fikseres ikke. Negativt resultat: pasienten har ikke antistoff mot det spesifikke antigenet. E Røde blodlegemer fra sau ntistoff mot sau Hemolyse: Komplementproteiner fikseres til fc-delen på antistoff mot sau, og forårsaker dermed hemolyse av blodlegemer.