Nyre biopsi, en metode for påvisning av smittebærende stamfisk. Øyvind J. Brevik Fiskesykdomsgruppen

Transkript

1 Nyre biopsi, en metode for påvisning av smittebærende stamfisk Øyvind J. Brevik Fiskesykdomsgruppen

2 Sykdommer i villfisk, stamfisk og oppdrettsfisk Bakterielle Francisellose, Fransicella piscicida syn. F. noatunensis Vibriose, Listonella anguillarum Atypisk furunkulose, Aeromonas salmonicida subsp. achromogenes Vintersår, Moritella viscosa/al. wodanis Div: Vibrio spp. Pseudoaltermonas spp. Virus Viral nervøs nekrose (NNV/noda virus) (vertikal smitte) IPN lignende (Birnavirus) (vertikal smitte) Hemorragisk virus septikemi (VHS virus) Behandling og profylakse Antibiotika Vibriose vaksine Ikke for francisellose og virus Alle sykdommer i oppdrett finnes også i villfisk

3 Diagnostiske verktøy Bakteriologiske tester Antistoff Elisa Immunohistokjemi Agglutinerings tester Histologi PCR\sekvensering Sanntids RT-PCR Påviser arvestoff fra smittestoff Nyre-vev standard vev F. piscicida, noda virus, VHS virus, IPN virus Sensitive metode

4 Hvor kommer stamfisken fra? To stamfisk program 2 generasjon 3 generasjon En rekke andre aktører Geografisk spredt Stamfisk er i stor grad villfanget Skrei og lokale kyst stammer Villfisk kan være smittet

5 Stamfisk screening av torsk Villfisk som skal benyttes settes i karantene Klinisk sykdom=forkastes Tilstedeværelse av smittestoff er ikke ensbetydende med sykdom Samme individ benyttes flere sesonger Obduksjons prøve ikke mulig

6 Problem; asymptomatisk bærere Friske bærere av smittestoff Oppblomstring av smittestoff ved redusert immunforsvar Kjønnsmodning/gyting Miljø stress Mekanisk stress Skille ut smittestoff økt smittepress Horisontal smitte Smittestoff introduseres i Stamfiskpopulasjon Anlegg Vertikal smitte Egg/melke/embryo Smittestoff ut til oppdrett Teoretiske kandidater; Intracellulære VHSV, noda, IPN, F. piscicida

7 Konsekvens av vertikal smitte Økonomiske Smitte press igjennom hele livssyklus Mer sykdom Økte tap Økologiske Transport av smittestoffer Store geografiske områder Introduksjon av sykdom til naive områder Oppdrett Villfisk populasjoner

8 Oppsummering sykdomsproblematikk i stamfisk Alle sykdommer i oppdrett er tilstede i villfisk Stor andel av stamfisk er villfanget Ingen metode for påvisning av bærere Karantene ikke tilstrekkelig Embryo ikke tilstrekkelig Nyreobduksjon ikke praktisert på stamtorsk Bruk av smittebærere kan spre smitte Horisontal stamfisk populasjon Vertikal anlegg og miljø med embryo/larver

9 Stamfisk screening prosjekt Biopsi metode Ikke skade fisken Kunne påvise smittestoff hos bærere Fiskepatogene bakterier og virus Enkel og rimelig i bruk

10 Pilot Populasjon med 70% prevalens F. piscicida Biopsi kandidater; Skjegg tråd Endetarms svab Residualrogn Nyre Tilgjengelighet og vevstropisme

11 Utstyr Nyre biopsi Biopsinål (GTA Guillotine MET 14-10) Engangssprøyte, (kanyle 20 ml, 14 G, 80 mm)

12 Metakain-bedøvet, MS 222 Fiskestørrelse: cm Individmerking Nyrebiopsi Obduksjonsprøve tatt etter 14 dager Sammenlignet biopsi og obduksjonsprøver Gjennomføring

13 Nyre biopsi Bak gjellelokket, øvre del mot nakke. Mørkt punkt Inn mot nedre del av ryggsøyle

14

15

16 Analyser Vev fiksert med RNAlater RNA Ekstrahert med trizol Renhet og kvantitet kontrollert med NanoDrop Endogen og eksogenkontroll Elongeringsfaktor 1α Spiking (Halobacterium salinarum) Sanntids RT-PCR Fc50, EF-1A, SAL

17 Sammenligning av prøver F. piscicida kan detekteres like godt i nyrevev med biopsiprøver som obduksjonsprøver

18 Oppsummering En rekke viktige smittestoff kan detekteres i nyre vev Nyrebiopsi mulig på stamtorsk Likt deteksjonsnivå som standard nyreprøve Nyrebiopsi muliggjør mål om smittefri stamfisk populasjon

19 Svakheter med metoden 10-25% dødelighet Kvelning Blødning Svart skalle Nerveskader

20 Forbedringspotensialet Biopsiutstyr Nåler Bedøvelse Alternativ til MS 222? Sedativer? Håndteringsrutiner Kort oppholdstid på land

21 Samarbeidspartnere Trond E. Isaksen, UiB Paul J. Midtlyng, VESO Oslo Synnøve Helland, Nofima Marin MarineBreed Sunndalsøra Egil Karlsbakk HI epost: