VHSV Storfjord

Transkript

1 VHSV Storfjord Are Nylund Institutt for biologi Universitetet I Bergen 2008

2 VHS virus utbredelse

3 Group I: European inland waters and northern marine coastal areas Group II: Marine isolates from the baltic sea Group III: Isolates from the North sea Group IV: North America and Japan Einer-Jensen et al 2004

4 VHS virus Naturlige verter: Flere arter marin fisk (sild, brisling, torsk, øyepål etc,) og laksefisk. Spredning: Horisontal (Vertikal?) Forekomst: Vanlig hos marin fisk (forekomst i oppdrett er lite kjent). Naturlig spredning: Horisontalt i sjø (predasjon, gyting) Oppdrett: Horisontal spredning (kanskje vertikal?)

5

6 Prevalens av VHS virus Opshaugvik VHS virus 2/30 = 6,7 % + Aeromonas sp., Chlamydia spp., IPNV VHS virus 11/22 = 50 % VHS virus 1/35 = 2,8 % + IPN virus, + M.viscosa, V. wodanis, ++ Overåneset vest VHS virus 2/10 Overåneset sør VHS virus 4/10 + IPN virus

7

8

9 ? Vintersår

10 Chlamydia, Ny art

11 NB: Flere mulige årsaker til dødelighet i disse anleggene.

12 Gener N Nucleocapsid protein P Phosphoprotein M Matrix protein G- Glycoprotein NV- Non- virion protein L Large protein (polymerase)

13 L protein gene 71 CAB44726 NP AAF AAF04480 CAB59222 CAB59217 VHSV, G I 99 CAA08837 CAB40833 BAD72126 VHSV, G IV VHSV G III, Storfjord Novirhabdovirus AAD56771 NP Snakehead rhabdovirus CAA61500 NP IHNV Hirame rhabdovirus BAA24082 Rabies YP97 Bat Lyssavirus 98 YP Mokola virus YP Tupaia rhabdovirus YP SC rhabdovirus 99 NP Bovine ephemeral fever virus ABF06664 ABW24037 ABD67436 AAK NP CAC51337 Spring viremia os carp virus AAA48441 CAM84182 CAH17548 Isfahan virus Vesicular stomatitis virus 0.1

14 Gen organisering

15 N protein gene G protein gene 82 Hvitting, Norsjøen, 1997 Torsk, Nordsjøen,, 1993 Piggvar, Irland, 1997 Øyepål, Nordsjøen, Hyse, Nordsjøen 1995 VHSV III Sild, Skagerrak Regnbueørret, Storfjorden Ål, Frankrike Piggvar, Skottland 1994 VHU28798 AF Utgruppe AY

16 98 82 AY AY AY AY Sild Skagerrak VHSV III, 1997 VHSV Regnbueørret 2008 Hvitting Nordsjøen VHSV III, 1997 Ål Frankrike VHSV III, Piggvar Skottland, VHSV III VHU VHSV Ib Regnbueørret Kattegatt, 2000 VHSV Sild MR 2008 VHSV torsk MR, 2008 VHSV Ib Sild Kattegatt, 2000 AY AY VHU28800 AY AY AF345859

17 Einer-Jensen et al 2004 Substitusjonsrate til VHS virus i sjø basert på 1524 nt fra G protein genet: 7,06 ± 10-4 (4,51 ± 10-5 ) per kodon/år Støtte for molekylær klokke Denne raten tilsvarer 0,36 nt/år i dette genet

18 G protein genet Frankrike (isolat: FR-07-71) 1971 Frankrike (isolat: 23.88) år kun 3 nt i forskjell (1074 nt), (forventet: 4,4 nt) Finland , G + NV protein genene 2000 (Ac.no: AM086354) 2002 (Ac.no: AM086366, AM086370, AM086376) NB: Ingen forskjeller i sekvens. Opshaugvik - Overåneset N P protein gener (1050 nt) (NB: ikke samme gen) 3 nukleotider i forskjell Disse kan ha skilt lag 12 år tidligere (hvis molekylær klokke)

19 Regnbueørret Naturlig populasjon VHSV III

20 Regnbueørret Naturlig populasjon VHSV III

21 Regnbueørret Naturlig populasjon VHSV III

22 VHS virus type III, smitteforsøk Henrik Duesund 2008 V = ip smittet regnbueørret (10 9 v/ml) KV = ko-habitant smitte (kontroll) BV = badsmitte (2,0 x 10 6 v/ml) BK = Bad kontroll (cellekulturmedium) H = Bad med homogenat Ikke dyrkbar mengde VHS virus

23 % Dødelighet V = 48,4 % BV = 44,1 % H = 41,0 % KV = 30,0 % K = 2,9 %

24 % Dødelighet justert Kun VHS virus positive BV = 44,1 % V = 41,9 % H = 36,1 % KV = 23,3 % K = 0,0 %

25 Dødelighet justert: Ct verdi < H = 21,3 % KV = 13,3 %

26 VHS virus ved terminering Dag 53 etter smitte V (N = 11) Alle negative KV (N =16) Alle negative H (N = 37) 3 svakt positive (Ct > 37) BV (N = 33) 2 svakt positive ELF = 15, VHSV = 30 BK (N = 28) ELF = 18, VHSV = 38 Alle negative

27 Kontroll fisk Ventrikkel

28 Nyre Kontroll fisk

29

30 Badsmittet, BV16 Ct: ELF = 16, VHSV = 19

31 Badsmittet Ct: ELF = 15,2 VHSV = 15,3

32 Badsmittet, BV28, Ct: Elf =20, VHSV = 37, IPNV = 28

33 Badsmittet Lever

34 Homogenat, Badsmitte, H9 Ct: ELF = 16 VHSV = 31 IPNV = 30

35 Ko-habitant smittet, KV2 Ct: ELF = 14 VHSV = Neg IPNV = 32

36 Bakterier Vibrio splendidus Aliivibrio wodanis Moritella viscosa Aliivibrio spp.

37 Konklusjon Flere mulige årsaker til dødelighet i både anlegg og i smitteforsøk VHS virus er en av årsakene Hudskader (bakterier), gjellebetennelse, IPN virus, parasitter, +++ er andre faktorer som er av betydning. Prosentvis fordeling (betydning) er ikke klar.

38 VHS virus kontroll Utslakting av VHS fisk Overvåking av VHSV smittet fisk i sjøanlegg Kontroll med stressfaktorer i produksjon Separate generasjoner Minimum avstand mellom sjøanlegg (x meter) Seleksjon av VHSV fri stamfisk Kontroll av smolt før sjøsetting/flytting Vaksine nødvendig naturlige reservoar i sjø

39 Marint reservoar Sjøanlegg B Marint reservoar? Sjøanlegg A