(12) Translation of european patent specification

Transkript

1 (12) Translation of european patent specification (11) NO/EP B1 (19) NO NORWAY (1) Int Cl. C12P 21/06 ( ) C07H 21/04 ( ) Norwegian Industrial Property Office (21) Translation Published (80) Date of The European Patent Office Publication of the Granted Patent (86) European Application Nr (86) European Filing Date (87) The European Application s Publication Date (30) Priority , US, P (84) Designated Contracting States: Designated Extension States: AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LI LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO SE SI SK SM TR BA ME RS (73) Proprietor CMC ICOS Biologics, Inc., th Avenue SE, Bothell, WA 98021, US-USA (72) Inventor CLARKE, Howard, Robert, Grahame, Wilmington Way, Mukilteo WA 9827, US-USA (74) Agent or Attorney Murgitroyd & Company, Scotland Street, GB-G8PL GLASGOW, Storbritannia (4) Title METHODS FOR IMPROVING RECOMBINANT PROTEIN EXPRESSION (6) References Cited: EP-A WO-A1-2004/ US-A US-A US-A US-A KAUFMAN R J ET AL: "IMPROVED VECTORS FOR STABLE EXPRESSION OF FOREIGN GENES IN MAMMALIAN CELLS BY USE OF THE UNTRANSLATED LEADER SEQUENCE FROM EMC VIRUS", NUCLEIC ACIDS RESEARCH, OXFORD UNIVERSITY PRESS, SURREY, GB, vol. 19, no. 16, 1 January 1991 ( ), pages , XP , ISSN: DAVID CARLINI ET AL: "In Vivo Introduction of Unpreferred Synonymous Codons Into the Drosophila Adh Gene Results in Reduced Levels of ADH Protein", GENETICS, vol. 163, no. 1, 1 January 2003 ( ), pages , XP , MESBAH ET AL.: 'Precise Measurement of the G+C Content of Deoxyribonucleic Acid by High- Performance Liquid Chromatography.' INTERN. J SYSTEM CTERIOL. vol. 39, no. 2, 1989, pages , XP MUELLER ET AL.: 'Reduction of the Rate of Poliovirus Protein Synthesis through Large-Scale Codon Deoptimization Causes Attenuation of Viral Virulence by Lowering Specific Infectivity.' J. VIROL. vol. 80, no. 19, 2006, pages , XP WESTWOOD ET AL.: 'Improved recombinant protein yield using a codon deoptimized DHFR selectable marker in a CHEF1 expression plasmid.' BIOTECHNOL PROG. 2 August 2010, XP001766

2 Enclosed is a translation of the patent claims in Norwegian. Please note that as per the Norwegian Patents Acts, section 66i the patent will receive protection in Norway only as far as there is agreement between the translation and the language of the application/patent granted at the EPO. In matters concerning the validity of the patent, language of the application/patent granted at the EPO will be used as the basis for the decision. The patent documents published by the EPO are available through Espacenet ( or via the search engine on our website here: NO/EP

3 1 PATENTKRAV Fremgangsmåte for å øke heterolog proteinekspresjon i en vertscelle, hvilken fremgangsmåte omfatter trinnene av å dyrke vertscellen, som omfatter en første heterolog polynukleotidisekvens som koder for nevnte heterologe protein under betingelser som tillater proteinekspresjon, idet nevnte vertscelle videre omfatter en andre polynukleotidsekvens som har en proteinkodende sekvens for et selekterbart markørprotein, idet nevnte andre polynukleotid har en sekvensmodifikasjon sammenlignet med et villtype-polynukleotid som koder for nevnte selekterbare markørprotein, idet nevnte sekvensmodifikasjon reduserer translasjonseffektiviteten av mrna som kodes av nevnte andre polynukleotid, idet nevnte andre polynukleotid har nevnte sekvensmodifikasjon og nevnte villtype-polynukleotid som koder for identiske aminosyresekvenser for nevnte selekterbare markørprotein; idet nevnte første polynukleotid og nevnte andre polynukleotid er kodet på en enkelt CHEF1 (Chinese Hamster Elongation Factor 1)-ekspresjonsvektor, hvor det første polynukleotid og det andre polynukleotid står under transkripsjonskontroll av forskjellige promotorer Fremgangsmåte ifølge krav 1, hvor modifikasjonen er i en utranslatert region av nevnte andre polynukleotid som koder for nevnte selekterbare markørprotein. 3. Fremgangsmåte ifølge krav 2, hvor modifikasjonen er i en '-utranslatert region og eller i en 3'-utranslatert region Fremgangsmåte ifølge krav 1, hvor modifikasjonen er i en proteinkodende region av genet som koder for det selekterbare markørprotein Fremgangsmåte ifølge krav 4, hvor modifikasjonen er innenfor 2, 20, 1, 10 eller kodoner av et initieringskodon av den proteinkodende region for det selekterbare markørgen. 6. Fremgangsmåte ifølge krav 1, hvor nevnte proteinkodende sekvens i nevnte andre polynukleotidsekvens omfatter i det minste ett modifisert kodon som ikke er et villtypekodon i et villtype-polynukleotid som koder for nevnte selekterbare markørprotein, idet nevnte modifiserte kodon er et kodon som ikke er et foretrukket kodon eller er et minst foretrukket kodon for den kodende aminosyre for vertscellen. 7. Fremgangsmåte ifølge krav 1, hvor nevnte proteinkodende sekvens i nevnte andre polynukleotidsekvens omfatter i det minste ett modifisert kodon som ikke er et villtype-

4 2 kodon i et villtype-polynukleotid som koder for nevnte selekterbare markørprotein, og nevnte modifikasjon introduserer en endring i sekundærstruktur av nevnte mrna som reduserer translasjonseffektivitet av nevnte mrna, øker kodonparingen i nevnte mrna, øker nevnte mrna's G+C-innhold eller modifiserer nevnte mrna's A+Tinnhold Fremgangsmåte ifølge krav 6, hvor i det minste 1%, i det minste 2%, i det minste 3%, i det minste 4%, i det minste %, i det minste 6%, i det minste 7%, i det minste 8%, i det minste 9%, i det minste 10%, i det minste 11%, i det minste 12%, i det minste 13%, i det minste 14%, i det minste 1%, i det minste 16%, i det minste 17%, i det minste 18%, i det minste 19%, i det minste 20%, i det minste 21%, i det minste 22%, i det minste 23%, i det minste 24%, i det minste 2%, i det minste 26%, i det minste 27%, i det minste 28%, i det minste 29%, i det minste 30%, i det minste 31%, i det minste 32%, i det minste 33%, i det minste 34%, i det minste 3%, i det minste 36%, i det minste 37%, i det minste 38%, i det minste 39%, i det minste 40%, i det minste 41%, i det minste 42%, i det minste 43%, i det minste 44%, i det minste 4%, i det minste 46%, i det minste 47%, i det minste 48%, i det minste 49%, i det minste 0%, i det minste 1%, i det minste 2%, i det minste 3%, i det minste 4%, i det minste %, i det minste 6%, i det minste 7%, i det minste 8%, i det minste 9%, i det minste 60%, i det minste 61%, i det minste 62%, i det minste 63%, i det minste 64%, i det minste 6%, i det minste 66%, i det minste 67%, i det minste 68%, i det minste 69%, i det minste 70%, i det minste 71%, i det minste 72%, i det minste 73%, i det minste 74%, i det minste 7%, i det minste 76%, i det minste 77%, i det minste 78%, i det minste 79%, i det minste 80%, i det minste 81%, i det minste 82%, i det minste 83%, i det minste 84%, i det minste 8%, i det minste 86%, i det minste 87%, i det minste 88%, i det minste 89%, i det minste 90%, i det minste 91%, i det minste 92%, i det minste 93%, i det minste 94%, i det minste 9%, i det minste 96%, i det minste 97%, i det minste 98%, i det minste 99% eller 100% av kodoner i nevnte andre polynukleotids proteinkodende sekvens er modifiserte kodoner. 9. Fremgangsmåte ifølge krav 1, hvor vertscellen velges blant en eukaryot celle, en prokaryot celle, en Escherichia coli-celle, en gjærcelle, en Saccharomyces cerevisiaecelle, en Pichia pastoris-celle, en insektcelle, en Spodoptera frugiperda-celle, en plantecelle, en protozoisk celle, en pattedyrscelle, en menneskecelle, en celle fra en kinesisk hamster og en ovariecelle fra en kinesisk hamster. 10. Fremgangsmåte ifølge krav 1, hvor det andre polynukleotid omfatter det i figur 2 presenterte polynukleotid.

5 11. Fremgangsmåte ifølge krav 1, hvor det selekterbare markørprotein er dihydrofolatreduktase Fremgangsmåte ifølge krav 11, hvor det andre polynukleotid omfatter den i figur 2 presenterte forkrøplede (cr) dihydrofolatreduktasesekvens. 13. Fremgangsmåte ifølge krav 11, hvor det andre polynukleotid omfatter den i figur 2 presenterte dårligste (wst) dihydrofolatreduktasesekvens. MURG * 12318