Antitrombin i laboratoriet Carola Henriksson, Seksjonsoverlege, hematologiseksjonen, avdeling for medisinsk biokjemi, Oslo Universitetssykehus, Ullevål Hurdalsjøen, 8. juni
Oslo Universitetssykehus (OUS) Nå-situasjonen på Ullevål Hematologisk forskningslaboratorie Avdeling for Blodsykdommer, Ullevål Spesialkoagulasjonsanalyser, kl. 08.00-15.00 Omfattende prøvevolum som hovedsakelig (90%) kommer fra eksterne rekvirenter, og i liten grad fra inneliggende pasienter og hematologisk poliklinikk på Ullevål Hematologisk seksjon Avdeling for medisinsk biokjemi, Ullevål Rutinekoagulasjonsanalyser: PT-INR, APTT, Fibrinogen, D-dimer, Seksjonen er bemannet 24 t i døgnet Stort volum av rutinekoagulasjonsanalyser, hvor cirka 90% er fra Ullevåls inneliggende pasienter
Analysering av koagulasjonsanalyser i OUS Rutineoppgavene ved Hematologisk forskningslaboratorium ved Avdeling for Blodsykdommer (Ullevål) er vedtatt overført til Avdeling for Medisinsk Biokjemi. I denne forbindelse blir det etablert en egen seksjon for koagulasjonsanalyser i Avdeling for Medisinsk Biokjemi sine laboratorier på Rikshospitalet.
Analysering av koagulasjonsanalyser i OUS Hematologisk forskningslaboratorie Avdeling for Blodsykdommer, Ullevål Spesialkoagulasjonsanalyser, kl. 08.00-15.00 Restaktivitet hematologisk poliklinikk, Ullevål 150-200 utredninger for hereditær trombofili/år Hematologisk seksjon Avdeling for medisinsk biokjemi, Ullevål Rutinekoagulasjonsanalyser: PT-INR, APTT, Fibrinogen, D-dimer, Seksjonen er bemannet 24 t i døgnet I forbindelse med flytting av hematologisk forskningslaboratorie til Rikshospitalet, tas anti-fxa aktivitet (mål for heparineffekt) og Antitrombin (AT) opp på døgnsbasis ved avdeling for medisinsk biokjemi, Ullevål
Antitrombin (AT) - Agenda Syntese/Eliminasjon Funksjon Tilstander med lav AT aktivitet (erhvervete, arvelige) Metoder
AT Syntese/Eliminasjon Glykoprotein produseres/elimineres i leveren MW 58 kd Gen på kromosom 1, 432 aminosyrer Halveringstid (T 1/2 ) = 2 3 døgn hos frisk person Referansegrense AT aktivitet: 0,8 1,2 kie/l (80-120%) Det er kun redusert AT aktivitet som er interessant! AT aktivitet når voksent nivå ved 6 måneders alder
Antitrombin i koagulasjonskaskaden PT-INR APTT
Mekanisme for inhibering av koagulasjonen Heparin Serinproteaset Faktor IXa Serinproteasehemmeren AT AT danner et inaktivt kompleks med serinproteaset, og prosessen er irreversibel. Antitrombin (AT) er en serinproteasehemmer Serinproteaser er en gruppe enzymer som spalter peptidbindinger, og som alle har aminosyren serin i det aktive sete.
AT - Funksjon Høy affinitet til negativt ladete glycosaminoglykaner (GAGs) såsom: hepariner endogent heparin (heparan sulfat proteoglykaner på endothelceller)
AT - Funksjon I nærvar av heparin øker inhiberingshastigheten til AT (500X)
Antitrombin (AT) - Agenda Syntese/Eliminasjon Funksjon Tilstander med lav AT aktivitet (erhvervete, arvelige) Metoder
Redusert Antitrombin aktivitet, erhvervet Nedsatt syntese: - leversykdom Økt forbruk (konsumsjon): - sepsis - disseminerad intravaskulær koagulasjon - store tromboser - langtidsbehandling med ufraksjonert heparin (medikamentindusert) Økt utskillelse: - nefrotisk syndrom - enteralt tap av protein
Analysering av AT i OUS Ullevål Rikshospitalet Erhvervet redusert AT aktivitet Inneliggende Erhvervet redusert AT aktivitet Tilsendte Arvelig trombofili APC resistens/fv-leiden mutasjonen Protrombinmutasjonen (FII G20210A) Protein C (aktivitet) Protein S (fritt protein) Antitrombin (aktivitet) Lupus STA-R Evolution Stago STA-R Evolution Stago ACL TOP Stachrom AT III, Stago Stachrom AT III, Stago Liquid antithrombin, IL
Redusert AT aktivitet, arvelig Olav Egeberg (1916 77) påviste i 1965, som den første, hvorledes en arvelig svikt i kontrollen av blodets koagulasjon kan føre til sykdom.
AT arvelig mangel Subtypes of AT Lokalisasjon deficiences Type I Type II RS Type II HBS Type II PE RS = reactive site HBS = heparin binding site PE = pleiotrop n = normal av mutasjonen Varierer Reaktive sitet Heparinbindende sitet Det finnes to subtyper av arvelig AT mangel (type I og type II) Type I (kvantitativ) Redusert syntese av en biologisk normal molekyle Redusert AT konsentrasjon og redusert funksjonell AT aktivitet I nærheten av reaktive sitet Type II (kvalitativ) Normal syntese av en biologisk forandret molekyle Normal AT konsentrasjon men redusert funksjonell AT aktivitet Prevalens arvelig AT mangel i populasjonen: 0.1% I trombosepopulasjon: 1-2%
AT arvelig mangel Subtypes of AT Lokalisasjon deficiences av mutasjonen Type I Varierer Type II RS Reaktive sitet Type II HBS Heparinbindende sitet Type II PE I nærheten av reaktive sitet RS = reactive site Et stort antall ulike mutasjoner (>127) årsaker medfødt arvelig AT mangel, og lokalisasjonen av mutasjonene er spredde over hele genet. Laboratoriediagnostikken av arvelig AT mangel er basert på funksjonelle metoder (AT aktivitet) HBS = heparin binding site PE = pleiotrop n = normal
Metoder i laboratoriet og klassifisering av AT mangel Subtypes of AT Heparin cofactor Progressiv AT antigen deficiences AT assay AT assay assay Type I Type IIa RS n Type IIb HBS n n Type IIc PE heparin. n or subnormal RS = reactive site HBS = heparin binding site PE = pleiotrop n = normal Ved utredning av pasienter for arvelig AT mangel, skal første valget være et funksjonelt De fleste Type kromogent I og Type assay, II og defekter det skal detekteres inneholde ved hjelp av et funksjonelt kromogent assay
Testprinsipp: Antitrombin heparin cofactor metode med kromogent substrat AT (pasientplasma) + Heparin + FIIa (i overskudd) AT-Heparin-FIIa + FIIa gjenværende FIIa gjenværende + Kromogent substrat Para nitro anilidgruppe (PNA) frigjøres 18 (gul farge leses av ved 405 nm)
Testprinsipp: Antitrombin heparin cofactor metode med kromogent substrat AT (pasientplasma) + Heparin + FXa (i overskudd) AT-Heparin-FXa + FXa gjenværende FXa gjenværende + Kromogent substrat Para nitro anilidgruppe (PNA) frigjøres 19 (gul farge leses av ved 405 nm)
Funksjonelle AT aktivitets assay Sammenligning mellom FIIa og FXa Funksjonell AT aktivitet assay Fordeler Bakdeler Heparin cofactor AT aktivitet De fleste type I og II Trombinhemmer påvirker med bovint FIIa defekter detekteres AT Budapest missas Heparin cofactor AT aktivitet De fleste type I og II FXa hemmer påvirker med bovint FXa defekter detekteres AT Cambridge II missas
Analysering av AT i OUS Ullevål Rikshospitalet Inneliggende Tilsendte Erhvervet redusert AT aktivitet STA-R Evolution Stago Erhvervet redusert AT aktivitet STA-R Evolution Stago Arvelig redusert AT aktivitet APC resistens/fv-leiden mutasjonen Protrombinmutasjonen (FII G20210A) Protein C (aktivitet) Protein S (fritt protein) Antitrombin (aktivitet) Lupus ACL TOP FIIa (Trombin) FIIa (Trombin) FXa Stachrom AT III, Stago Stachrom AT III, Stago Liquid antithrombin, IL
Test of the month Falskt forhøyet? Falskt For lavt? Khor B, Am J Hematology 2010
AT- Konklusjon AT hemmer serinproteaser Den inhibitoriske aktiviteten av AT aksentueres av heparin Erhvervet og arvelig mangel av AT er assosiert med økt risiko for trombose Funksjonell AT aktivitetsmetode med heparin er førstehåndsvalg ved familiær utredning av trombose